ANLISIS E IDENTIFICACIN DE BACTERIAS

aDaniela
Cumber Lozano bIsabella Cruz cMara Paula Manzano
adaniela-cumber@hotmail.com bisabcruz117@gmail.com cMariapaula4199@gmail.com

Laboratorio de Microbiologa
Facultad de Ciencias naturales
Qumica Farmacutica
Universidad ICESI
Santiago de Cali
Septiembre 19 2017

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Objetivos

Identificar microorganismos por medio de tinciones y creacin de cultivos con la ayuda de distintos

materiales.

1. Resultados

Resultados de la preparacin de los agares:

En la prctica 1 cada grupo prepar un tipo de agar o un caldo teniendo un total de 5 y 1,

respectivamente, con el objetivo de realizar un cultivo por cada preparacin. Se utilizaron diferente

marcas teniendo la mayora una elaboracin similar a excepcin del caldo, puesto que este se diluy

en ms agua que el resto de los agares. En nuestro caso hicimos uso del Agar EMB, el cual sirve

para el aislamiento selectivo de bacilos gram negativos de rpido desarrollo y escasas exigencias

nutricionales, adems, permite el desarrollo de todas las especies de la familia Enterobacteriaceae.

Los resultados obtenidos se encuentran en la tabla N1 y los clculos en anexo N1

Tabla 1. Resultados de las diluciones para la elaboracin de agar o caldo para la preparacin de un

cultivo segn cada grupo de clase.

Grupo Agar/Caldo Gramos Mililitros Resultados en g/L

1 agar Sabouraud 4,37 75 65

2 agar EMB 27 75 36

3 agar Chromocult 1,99 75 26,5

4 agar Mac Conkey 3,75 75 50

5 caldo LMX 1,7 100 17

6 agar Nutritivo 2,1 75 28

Fuente: elaboracin propia

Resultados de la realizacin de la coloracin de Gram a un frotis:

En la prctica 2 se realiz una coloracin de Gram a un frotis proveniente de un cultivo de

agar nutritivo con el fin de observar las bacterias en el microscopio y determinar su morfologa. Los

resultados obtenidos se encuentran en la tabla N2.

Tabla 2. Muestra de tincin de GRAM

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Cultivo Agar nutritivo

Reaccin color rosado-

de gram Gram negativo

Morfologa Bacilos

Arreglo no tiene
arreglo
Fuente: elaboracin propia

Resultados de la caracterizacin bioqumica de microorganismos por medio del

Sistema de identificacin rpida API 20E:

En la prctica 3 se hizo una caracterizacin bioqumica a un microorganismos desconocido

por medio del sistema de identificacin rpida API 20E y se obtuvieron los siguientes resultados que

se encuentran en la tabla N3.

Tabla 3. Resultado del test API 20E y enzima que se detecta en cada microtubo
Prueba Reaccin/Enzimas Negativo/ Positivo Color

ONPG beta-galactosidasa negativo sin color

ADH arginina deshidrolasa positivo naranja

LCD lisina descarboxilasa negativo amarillo

ODC ornitina descarboxilasa positivo rosa

CIT utilizacin del citrato positivo azul oscuro

H2S produccin de H2S positivo precipitado negro

URE ureasa positivo rosa

TDA triptfano desaminasa positivo marrn

IND produccin de indol negativo amarillo

VP produccin de acetona (voges - positivo rosa

proskauer)

GEL gelatinasa negativo sin difusin del

pigmento

GLU fermentacin/oxidacin de glucosa positivo amarillo

MAN fermentacin/oxidacin de manitol negativo azul

INO fermentacin/oxidacin de inositol negativo azul

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SOR fermentacin/oxidacin de sorbitol negativo azul

RHA fermentacin/oxidacin de negativo azul

ramnosa

SAC fermentacin / oxidasa de negativo azul

sacarosa

MEL fermentacin/oxidacin de negativo verde

melobiosa

AMY fermentacin/oxidacin de negativo azul

amigdalina

ARA fermentacin/oxidacin de negativo azul

arabinosa

OX citocromo oxidasa negativo sin cambio de color

Fuente: elaboracin propia

Los resultados finales de la prueba bioqumica se ley un da despus de haberla realizado.

Los resultados obtenidos se encuentran en la tabla N4.

Tabla 4. Resultados finales de la prueba bioqumica

Taxn Proteus
significativo mirabilis

Pruebas en contra VP 1% GEL 82%

Taxn siguiente Proteus

vulgaris

Pruebas en contra VP 1% SAC 89% CIT 12% ODC 1%

Fuente: elaboracin propia

Prueba de susceptibilidad a antibiticos:

En la prctica 4 se realiz una siembra masiva en superficie de un microorganismo,

proveniente del cultivo nmero 4, en el agar Mueller Hinton y se le agreg cuatro discos para

antibiograma con el fin de determinar si son sensible o no a diferentes antibiticos segn el dimetro

del halo que se forme alrededor del disco. Los resultados obtenidos se encuentran en la tabla N5.

Tabla 5. Resultado de los antibiticos en disco utilizados en el cultivo:

Discos para antibiograma Dimetro sensible/resistente

Ampicillin 29.5 sensible

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Ciprofloxacin 39.5 sensible

Ertapenem 34.5 sensible

Cefepime 37.5 sensible

Fuente: elaboracin propia

2. Anlisis de resultados

En la prctica 3 se hizo una caracterizacin bioqumica a un microorganismo desconocido

del cultivo #4 por medio del sistema de identificacin rpida API 20E. Primero se realiz la prueba de

oxidasa para determinar la presencia del citocromo C utilizando tiras de papel impregnadas con el

reactivo para-amino-N-dimetil-anilina que se oxida por la citocromo-oxidasa, y concluir si el

microorganismo es aerobio o no. Esta prueba se detecta como color azul pero fue negativa en este

caso.

El resultado de la prueba API 20E para un determinado cultivo fue: Como taxn significativo:

Proteus mirabilis. Como taxn siguiente: Proteus vulgaris. No hubo porcentaje claro pues, se cree

que la muestra qued muy contaminada por errores humanos, pero, segn los datos analizados se

puede aseverar que el gnero es Proteus y con ms probabilidad de que sea mirabilis, puesto que,

tiene menos pruebas en contra. La cepa se pudo contaminar al hacer la siembra o que el cultivo era

muy joven y hubo un error aleatorio debido a que no se pudo divisar colonias concretas. Tambin

cabe la posibilidad de que las bacterias siempre estuvieron en el medio de cultivo, sin aparente

cultivo previo, y por ende se desarrollaron cuando tuvieron las condiciones necesarias. (Adolfo

Prez-Miravete, 2001) (Mayra Castillo, 2012) (Http://www.ucv.ve, 2017).

Al cultivo previo tambin se le realiz una prueba de sensibilidad a antibiticos. Se

colocaron 4 discos con diferentes tipos de frmacos a la cepa; CIP 5, SAM 20, ETP 10 y FEP 30.

Para que se considere a una bacteria sensible a un determinado frmaco, el dimetro del halo

que forma el disco debe ser mayor a 20mm Por tanto, se puede concluir que la bacteria presente

en el cultivo es sensible a todos los antibiticos por el tamao del crculo formado en el cultivo.

Se sabe que Proteus es una bacteria Gram negativa que no forma esporas y es la

bacteria a analizar en este informe. Proteus mirabilis es sensibles a Cefepime, Ertapenem y a

Ampicillin. Proteus vulgaris es sensible a Ciprofloxacin y a Ertapenem . Por lo tanto se puede

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confirmar mucho ms la presencia de ambas especies en el cultivo #4. (Vetter, N; 2002)

3. Anexos

Clculos realizados para la preparacin del agar:

Para preparar 5 cajas de 75 mL agar EMB (27g) se necesita:

X= (1000mL * 27g) / 75mL

X= 36g de agar EMB + 75 mL de H2O desmineralizada

Para preparar 5 cajas de 75mL agar Sabouraud (4,37g) se necesita:

X= (1000mL * 4,37g)/ 75mL

X= 65g de agar Sabouraud+ 75 mL de H2O desmineralizada

Para preparar 5 cajas de 75mL agar Chromocult (1,99g) se necesita:

X=(1000mL * 1,99g)/ 75mL

X=26,5g de agar Chromocult + 75 mL de H2O desmineralizada

Para preparar 5 cajas de 75mL agar Mac Conkey (3,75g) se necesita:

X=(1000mL * 3,75g)/ 75mL

X=50g de agar Mac Conkey + 75 mL de H2O desmineralizada

Para preparar 5 tubos de 100mL caldo LMX (1,7g) se necesita:

X=(1000mL * 1,7g)/ 100mL

X=17g de caldo LMX + 100 mL de H2O desmineralizada

Para preparar 5 cajas de 75mL agar Nutritivo (2,1g) se necesita:

X=(1000mL * 2,1g)/ 75mL

X=28g de agar Nutritivo + 75mL de H2O desmineralizada

4. Conclusin

Se entendi la importancia de usar tcnicas que conjuntamente ayudan a la determinacin a nivel

taxonmico de bacterias gracias a su actividad metablica y caractersticas morfolgicas.

Se pudo reconocer la importancia de las tcnicas de coloracin de Gram, puesto que se pudo

observar mucho mejor la morfologa celular que en muestras en la que no se utiliza colorante.

Se logr identificar e interpretar las diferentes pruebas bioqumicas empleadas para la

caracterizacin de una bacteria, llevando a la identificacin del gnero de bacterias Proteus y a dos

especies: P. mirabilis y P. vulgaris.

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Se conocieron nuevas tecnologas prcticas y sencillas para la determinacin de bacterias como lo

son el mtodo de API 20E, un mtodo estandarizado con sustratos para ciertas reacciones

bioqumicas.

5. Bibliografa

Adolfo Prez-Miravete, Y. J.-T.-L. (2001). Los gneros Pseudomonas, Xanthomonas y

similares dentro de la patologa de un hospital peditrico. Red de Revistas Cientficas

de Amrica Latina, el Caribe, Espaa y Portugal, Vol 26-4.

Mayra Castillo, A. L. (2012). Aislamiento de cepas de Pseudomona spp. En neonatos: serie

de casos*. Rev. Cuerpo mdico.

MICROBIOLOGA CLNICA. (12 de Marzo de 2017). Obtenido de

http://www.unavarra.es/genmic/microclinica/tema01.pdf

No Manuel Montao Arias, A. L. (12 de Marzo de 2017). Elementos. Obtenido de

http://www.elementos.buap.mx/num77/pdf/15.pdf

Trivio, A. R. (12 de Marzo de 2017). Conceptos y Prctica de Microbiologa General.

Obtenido de http://www.bdigital.unal.edu.co/4999/1/albertorojastrivino.2011.pdf

www.microinmuno.com. (12 de Marzo de 2017). Obtenido de

http://www.microinmuno.qb.fcen.uba.ar/SeminarioMedios.htm

Vetter, N. et al. A prospective, randomized, double-blind, multicenter

comparison of parenteral ertapenem vs ceftriaxone for treatment of hospitalized

adults with community-acquired pneumonia. Clinical Therapeutics 2002. 24,

77085.