Ciencias de la Salud

Lic. en Nutrición
PRÁCTICA 15. Tinción de Gram
1.- OBJETIVO GENERAL:

•Que el alumno aprenda a diferenciar entre una bacteria gran positiva de una gran negativa.

Introducción:
La tinción de Gram es una de las más comúnmente usadas en microbiología, el mecanismo de
reacción de los colorantes de Gram, actúan en la estructura y composición de la pared celular.

Las bacterias Gramnegativas contienen un porcentaje más alto de lípidos que las bacterias
Grampositivas, la pared celular de las Gramnegativas es también más delgada que las
Grampositivas por lo que no retienen el colorante inicial cuando se les agrega el alcohol acetona.

Está tinción utiliza cuatro reactivos que son: Cristal Violeta, lugol o yodo de Gram, etanol –
acetona al 95% y safranina.

El cristal violeta que es el colorante inicial tiñe a todos los microorganismos, a que es un colorante
básico, en segundo lugar, está el yodo que actúa como mordiente para aumentar la afinidad entre el
colorante inicial y la célula. El etanol actúa como decolorante sobre el microorganismo, lavando el
colorante inicial en caso de que no se afín con este. La safranina es el colorante usado como contraste
que teñirá a los microorganismos que no se colorean con el cristal violeta.

Los microorganismos que retienen el colorante de cristal violeta después de la decoloración y

se ven de color violeta se conocen como microorganismos Grampositivos. Los Gramnegativos no
son capaces de retener el cristal violeta después de la decoloración y se contratiñen de rojo con el
colorante de safranina.

2.- MATERIALES:

• Portaobjetos
• Cubreobjetos
• Asa bacteriológica
• Mechero Bunsen
• Microscopio
• Puente de tinción

3.-REACTIVOS:

• Desinfectante
• Solución salina
• Metano
• Cristal violeta
• Lugol de Gram
• Alcohol-acetona 95%
• Safranina
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4.-MATERIAL BIOLÓGICO

• Cultivos bacterianos en caja Petri.

5.-METODOLOGÍA :

1.- Se preparan frotis de las cepas proporcionadas.

2.- Fijar las muestras biológicas en el mechero.

3.- Añadir a los frotis cristal violeta y dejarlos actuar durante un minuto.

4.- Lavar con agua destilada.

5.- Teñir con lugol durante 30 segundos.

6.- Lavar con agua destilada.

7.- Decolorar con alcohol – acetona al 95% durante 30 segundos.

8.- Lavar con agua destilada.

9.- Teñir con safranina de 25 a 30 segundos.

10.- Lavar con agua destilada y dejar secar.

11.- Observar con objetivo 10X para identificar el campo, e inmediatamente pasar al objetivo de
40x y 100x colocando una gota muy pequeña de aceite de inmersión.

Reporte de práctica:

Tomar fotografías de los pasos realizados y de lo observado a los objetivos de 40 y 100x

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CONCLUSIONES:

Explica si se alcanzaron los objetivos de la práctica.

Pudimos aprender a diferenciar entre una bacteria gran positiva de una gran negativa y
observarlas en el microscopios y como se comportan entre sí.