ESTUDIO DIRIJIDO

JOSÉ MANUEL CUEVAS TORRES

MICROBIOLOGIA GENERAL

MARYORIS SOTO LOPEZ

UNIVERSIDAD DE CORDOBA

INGENIERIA DE ALIMENTOS

BERASTEGUI

2022
1. Describe some of the destructive and beneficial actions of microbes.
Los beneficiosos son aquellos que viven en nuestro cuerpo y lo protegen. los
utilizamos para elaborar alimentos como el queso, el yogurt, el vino, el pan o la
cerveza. El yogur es un producto lácteo que se obtiene mediante la fermentación de
microorganismos específicos de la leche (bacterias de los géneros lactobacillus y
streptococcus). ambas bacterias tienen una compleja interacción positiva que aún
no es muy bien entendida a nivel molecular. l. delbrueckii ssp. bulgaricus y s.
salivarius ssp. thermophilus se estimulan mutuamente y dan lugar a una rápida
acidificación de la leche como resultado de la producción de ácido láctico. las
levaduras son hongos unicelulares presentes en las superficies de las uvas y son
las responsables de transformar el jugo de uva en vino, metabolizando los azúcares
en alcohol en un proceso llamado fermentación.
en este proceso se suceden diferentes microorganismos, ya que el jugo de uva tiene
sus propias levaduras y bacterias. además, en las bodegas suelen adicionarse
levaduras comerciales para acelerar el proceso de fermentación. durante la
vinificación, se producen situaciones microbianas complejas, donde diferentes
factores determinan qué tipo de microorganismo se desarrollará y las consecuencias
de su metabolismo sobre la composición final de un vino. estos factores pueden
incluir el origen y la sanidad de la uva, la temperatura de fermentación, la acidez del
mosto-vino y la higiene de la bodega, entre las más importantes.

2. describe and differentiate between prokaryotic, archaea and eukaryotes

cells.
Procariota, es el superreino o dominio que incluye los microorganismos constituidos
por células procariotas, es decir, células que presentan un adn disperso en el
citoplasma, ya que no hay núcleo celular.
Arqueas, son un gran grupo de microorganismos procariotas unicelulares que, al
igual que las bacterias, no presentan núcleo ni orgánulos membranosos internos,
pero son fundamentalmente diferentes a estas, de tal manera que conforman su
propio dominio o reino.
Eucariotas, es el dominio que incluye los organismos formados por células con
núcleo verdadero. la castellanización adecuada del término es eucariota o
eucarionte.
la diferencia principal entre células eucariotas y procariotas es que las células
eucariotas tienen un núcleo . el núcleo es donde las células almacenan su adn, que
es su material genético. el núcleo está rodeado por una membrana. las células
procariotas no tienen un núcleo, la membrana celular de las arqueas es distinta a la
de bacterias y eucariotas, teniendo una composición química única. sus flagelos
(orgánulos que los organismos unicelulares emplean para desplazarse en medios
líquidos) también son diferentes.

3. what important functions do the following play in a cell: cytoplasmic

membrane, ribosomes, cell wall?
La membrana plasmática, membrana celular, membrana citoplasmática o
plasmalema es una capa o bicapa lipídica de fosfolípidos y otras sustancias que
delimita toda la célula, dividiendo el medio extracelular del intracelular.
Los ribosomas son orgánulos citoplasmáticos no delimitados por la membrana del
ácido ribonucleico y proteínas ribosómicas, que constituyen una máquina molecular
presente en todas las células. son los centros celulares de traducción que hacen
posible la expresión de los genes.
La pared celular es una capa resistente y rígida que se localiza en el exterior de la
membrana plasmática en las células de plantas, hongos, algas, bacterias y arqueas.

4. what type of cells have a nucleus? nucleoid? what is a cell’s genome and
why is it important?
En las células procariotas el adn es una molécula única, generalmente circular y
filiforme , multiforme (cerrada) y de doble filamento, que se encuentra ubicada en un
sector de la célula que se conoce con el nombre de nucleoide (que significa "similar
al núcleo"), que no implica la presencia de membrana nuclear.
Nucleoide
nucleoide, región nuclear o cuerpo nuclear es la región que en los procariotas
contiene el adn. esta región es de forma irregular. el conjunto completo de adn
(material genético) en un organismo. en los seres humanos, casi cada célula
contiene una copia completa del genoma. el genoma contiene toda la información
necesaria para que una persona pueda crecer y desarrollarse.

5. what do the terms “growth” and “motility” mean in microbiology?

El crecimiento microbiano se define por tanto como el incremento en el número de
células microbianas de una población. la velocidad de crecimiento es el incremento
en el número de células o en la masa celular por unidad de tiempo.
La motilidad es un término de la biología para expresar la habilidad de moverse
espontánea e independientemente. está referida tanto a organismos unicelulares
como multicelulares. también es un término común para referirse a la motilidad
gastrointestinal.

6. name and describe the three domains of life.

Toda la vida puede ser dividida en tres dominios, basados en el tipo de célula del
organismo: bacteria : las células no contienen un núcleo. archaea : las células no
contienen un núcleo; tienen una pared celular distinta de las bacterias. eucariota :
las células contienen un núcleo.
Bacterias y Archaea.
los dominios archaea y bacteria ambos están compuestos completamente de
pequeños, organismos unicelulares y parecen muy similares, pero también tienen
diferencias significativas. ambos están compuestos por células procariotas , que son
células sin núcleos. además, ambos dominios están compuestos por especies que
se reproducen asexualmente ( reproducción asexual ) dividiéndose en dos. ambos
dominios también tienen especies con células rodeadas por una pared celular , sin
embargo, las paredes de las células están hechas de diferentes materiales. la pared
celular bacteriana contiene el polisacárido peptidoglicano . finalmente, las archaea a
menudo viven en ambientes extremos incluyendo aguas termales, géiseres, y
salinas. las bacterias no viven en estos ambientes.
Eucariotas.
todas las células en el dominio eucariota mantienen su material genético, o adn , al
interior del núcleo . el dominio eucariota está hecho de cuatro reinos:

7. list two ways in which microorganisms are important in the food and
agricultural industries.
los microorganismos más utilizados son las levaduras y las bacterias. las levaduras
más frecuentes pertenecen a los géneros saccharomyces, candida y
kluyveromyces. las bacterias más representativas son de los géneros lactobacillus,
streptococcus, lactococcus y acetobacter, los microorganismos se pueden usar en la
industria alimentaria uno, para cortasr la leche en el proceso de hacer el queso, dos,
para la elaboracion de yogures, tres para la fermentacion de vinos.
los principales grupos utilizados son las micorrizas, las rizobacterias y las
trichodermas. estas interrelaciones entre microorganismos inciden en la interacción
suelo-planta-microorganismos y repercuten, de forma directa, en el crecimiento y en
el desarrollo de las especies vegetales, los microorganismos se pueden utilizar en la
agricultura uno, las micorrizas son uno de los tipos de simbiosis más abundante de
la biosfera, que mejoran la absorción de agua y nutrientes de la raíz, permitiendo
que colonicen los suelos más pobres, dos, las rizobacterias promotoras del
crecimiento vegetal (rpcv), desempeñan funciones importantes para las plantas
como es la producción de reguladores del crecimiento vegetal y disminuir o prevenir
los efectos de microorganismos f itopatógenos.

8. what advantages do solid media offer for the isolation of microorganisms?

medios sólidos: se utilizan para obtener bacterias aisladas por la formación de
colonias sobre la superficie del medio de cultivo y para el estudio de la morfología
de las colonias, lo que no permiten los medios líquidos. se diferencian porque tienen
una sustancia de sostén, que puede ser agar-agar.

9. what is a pure culture?

un cultivo puro es aquel que permite obtener colonias separadas con individuos que
proceden de una única célula, es decir, poblaciones de un solo tipo de
microrganismo.

10. what is meant by the term “enrichment culture”?

un medio de enriquecimiento es un medio de cultivo que contiene los nutrientes
necesarios para apoyar el crecimiento de una amplia variedad de microorganismos,
entre ellos algunos de los más exigentes. se utilizan comúnmente para la cosecha
de diferentes tipos de microbios que están presentes en la muestra.
11. what is meant by the term “chemolithotrophy”? in what way are
chemolithotrophs like plants?
la quimiolitotrofía es un tipo de metabolismo en la cual la energía se obtiene de la
oxidación de compuestos inorgánicos. la mayoría de los organismos quimiolitotrofos
son también autótrofos.
al igual que las plantas este tipo de metabolismo imbolucra el oxigeno en su proceso

12. what color will a gram-negative cell be after gram staining by the
conventional method?
después de la coloración de contraste las células gram negativas son rojas,
mientras que las gram positivas permanecen violetas.

13. describe in detail the composition and structure of the peptidoglycan, and
from the cell wall of gram bacteria positive and gram negative.
las bacterias gram positivas tienen una capa gruesa de peptidoglicano y no tienen
una membrana lipídica externa, mientras que las bacterias gram negativas tienen
una capa delgada de peptidoglicano y tienen una membrana lipídica externa.
el peptidoglicano está formado por una secuencia alternante de dos azúcares, n-
acetil-glucosamina (nag) y el ácido n-acetilmurámico (nam), unidos por enlaces
β(1→4), entre el c1 de nam y el c4 de nag*. nam es un derivado de nag al que se le
ha añadido una molécula de ácido láctico en el c3.

14. what characteristic forms can bacteria take? describe the ways that
bacterial cells can group.
formas: todas las bacterias se pueden clasificar en una de las tres formas básicas:
esferas (cocos), los cocos son bacterias que tienen forma esférica, bastones
(bacilos), estas tiene forma de barra o vara y espirales o hélices (espiroquetas),
estas son un filo de bacterias gram-negativas que tienen células alargadas y
enrolladas helicoidalmente. necesidad de oxígeno: las bacterias también se
clasifican en dos grupos, según si necesitan oxígeno para vivir y crecer o no les es
necesario.

15. draw the basic structure of a lipid bilayer and label the hydrophilic and
hydrophobic regions.
( las cabezas son hidofiliicas “ les gusta el agua ” y las colas son hidrofobicas “no les
gusta el agua” )

16. why do bacterial cells need cell walls? do all bacteria have cell walls?
la pared celular bacteriana (pcb) es una estructura dinámica que recubre la
membrana celular y mantiene la integridad de la célula. además, desempeña un
importante papel en la resistencia a los antibióticos.
la mayoría de las bacterias tienen una pared celular que es químicamente gram
negativa. este tipo de pared celular gram-negativa, consta de tres estructuras: una
membrana interna, una capa de peptidoglicano, y una membrana externa.

17. why is peptidoglycan such a strong molecule?

el peptidoglucano o mureína es un copolímero formado por una secuencia
alternante de n-acetil-glucosamina y el ácido n-acetilmurámico unidos mediante
enlaces β-1,4. el peptidoglucano es muy resistente y protege a las bacterias de una
ruptura osmótica en ambientes acuáticos y da a los tipos diferentes de bacterias sus
formas. la cadena es recta y no ramificada.

18.why does alcohol readily decolorize gram-negative but not gram-positive

bacteria?
Ethyl alcohol is a nonpolar solvent, and thus penetrates the cell walls of Gram
negative cells more readily and removes the crystal violet-iodine complex. However,
caution must be used since applying the decolorizer too long will remove dye
complexes from the Gram positive cells as well.

19. could a bacterial cell dispense with a cell wall if it had a capsule? why or
why not?
It cannot be easily dispensed as the capsule holds cells to surfaces due to its sticky
nature (slime layer).

20. how do fimbriae differ from pili, both structurally and functionally?
los términos pili y fimbria son a menudo intercambiables, pero fimbria se suele
reservar para los pelos cortos que utilizan las bacterias para adherirse a las
superficies, en tanto que pilus suele referir a los pelos ligeramente más largos que
se utilizan en la conjugación bacteriana para transferir material genético.

21. differentiate between “trace elements” and “growth factors.”

los elementos traza u oligoelementos son aquellos elementos que, aunque
presentes en cantidades muy pequeñas, en los tejidos corporales, son nutrientes
esenciales por desempeñar una serie de funciones indispensables para mantener la
vida.
los factores de crecimiento son moléculas orgánicas específicas que, en muy
pequeña cantidad, algunas bacterias necesitan para crecer. salvo excepciones no
tienen función plástica (no son sillares de macromoléculas) ni sirven como fuente de
energía.
los elemsntos traza son importantes para mantener la vida, mientras que los
factores de crecimientos nisiquiera aportan energia.

22. what is meant by the word sterile? why is aseptic technique necessary for
successful cultivation of pure cultures in the laboratory?
el término estéril se usa para designar a todo aquel objeto o sustancia que está libre
de microorganismos y que es incapaz de producir cualquier forma de vida.
uso adecuado de técnicas asépticas reduce la posibilidad de contaminación
bacteriana y fúngica de reactivos, medios de cultivo y muestras ambientales y
también evita la contaminación cruzada entre muestras.

23. what is an amino acid family?

Una familia de aminoacidos es el conjunto de varios aminoacidos.
The oxaloacetate/aspartate family of amino acids is composed of lysine, asparagine,
methionine, threonine, and isoleucine. Aspartate can be converted into lysine,
asparagine, methionine and threonine. Threonine also gives rise to isoleucine.

24. which nitrogen bases are purines and which are pyrimidines?
Las bases nitrogenadas son parte fundamental de los nucleótidos. Son compuestos
en forma de anillo; pueden ser púricas o pirimidínicas. Las bases pirimidínicas son
derivadas de la pirimidina: son la citosina, timina y uracilo. Las bases púricas
derivan de la purina: son la adenina y la guanina.

25. define the concepts of fixation, colorant, chromophore, basic stain, acid
stain, simple stain, stain differential, mordant, negative staining, and acid-
alcohol resistance staining.
+ Se entiende por fijación toda manipulación sobre un ser vivo, o bien sobre parte
de él, que tiene por objeto mantener toda su arquitectura tanto estructural como
química lo más inalterada posible, de tal forma que sus componentes celulares
mantengan las mismas características que cuando dicho ser o tejido estaban vivos.
es claro que la mayoría de la estructura celular se debe a la presencia de proteínas
y por tanto todo proceso de fijación debe tener en cuenta la naturaleza química de
éstas, de forma que el fijador no reacciona con las mismas. Es cierto que existen
componentes muy distintos más o menos lábiles que también se encuentran
formando parte de la estructura celular, pero son las proteínas las que nos van a
reflejar fundamentalmente si un fijador es bueno o no bueno. Por otra parte, un
fijador prepara también de alguna forma el tejido o la célula para la posterior
manipulación, bien en el proceso de inclusión, actuando como mordiente o como
fijador del colorante dependiendo de su naturaleza, por eso es importante la
elección del fijador.
Hay razones por las que los tejidos vegetales no deben fijarse como los animales.
Muchas veces las plantas están cubiertas de sustancias céreas en sus cutículas que
son hidrófobas e impiden la penetración del fijador. Por otra parte el bajo contenido
proteico de las células vegetales, en comparación con ls animales, vuelve al
glutaraldehido (un componente de un fijador que se tratará más adelante), menos
efectivo en sus enlaces curzados con la proteína. Así mismo la pared de las células
vegetales supone una barrera parcial a la penetración del mismo.
Por otra parte hay que distinguir bien entre fijador y conservador, ya que con
frecuencia, y sobre todo en histología vegetal, se tienen conceptos erróneos al
respecto. Un conservador es aquella sustancia, o bien fenómeno físico, que evita la
autolisis cadavérica, pero que una vez eliminada su accion, la muestra o la célula,
quedan a merced de sus propios enzimas lisógenos y son por tanto susceptible de
autodestrucción. son conservadores: frío, ciertos líquidos como los de Petit, de
Ripert, etc. Así pues, una pieza que se ha mantenido durante un tiempo en un
conservador debe ser fijada rápidamente antes de cualquier manipulación, ya que
de no hacerse corre el peligro de que sufra graves alteraciones. un fijador por el
contrario inmoviliza y estabiliza los elementos celulares, bien sea por precipitación
de las proteínas y demás sustancias celulares activas, ya sea mediante un bloqueo
químico de su actividad, siendo estos fenómenos permanentes.
En resumen, un fijador tiene como misión:
+ Evitar la autolisis debida a los propios enzimas.
+ Proteger el corte o la pieza del ataque bacteriano.
+ Insolubilizar los componentes celulares que se desean estudiar.
+ Preparar a las distintas estructuras para posteriores tratamientos.
+ Evitar la disolución de determinados compuestos en el fijador.
+ Conservar o provocar determinadas reacciones químicas.
+ Mantener las propiedades físicas.

Para la elección de un fijador, hay que tener en cuenta, además de lo señalado

anteriormente, unas características que son intrínsecas al mismo, como son la
velocidad de penetración, la velocidad de fijación y el coeficiente de endurecimiento,
así como el efecto de la retracción. Estos factores son de gran importancia a la hora
de elegir un fijador; sobre todo, en histología vegetal. Es muy importante el
coeficiente de endurecimiento y el efecto de retracción, ya que de por sí los tejidos
vegetales son frecuentemente duros y estos dos fenómenos contribuyen a una
mayor elasticidad de los tejidos, con el consiguiente posible perjuicio a la hora de
manipularlos para obtener los cortes. Menor importancia tiene quizás el poder de
penetración y la velocidad de fijación, ya que como se ha indicado anteriormente los
procesos de lisis en los tejidos vegetales son más lentos en términos generales que
en los tejidos animales; en cuanto a la velocidad de penetración y de fijación, son
muy distintas, ya que un fijador puede tener una gran velocidad de fijación y un bajo
poder o velocidad de penetración o viceversa. Por tanto la elección de un fijador es
un problema de suma importancia en histología vegetal. un fijador ideal sería aquel
que tuviera una gran velocidad de penetración y fijación y unos coeficientes de
retracción y endurecimiento lo más bajos posibles.
Los fijadores que se usan para el tratamiento de los tejidos vegetales son
prácticamente los mismos que se utilizan en histología animal; las células vegetales
presenta, sobre todo en la pared celular, una estructura celulósica o bien una
impregnación o sustitución de estas por compuestos distintos como la lignina,
suberina, etc., que diferencia totalmente a los vegetales de los animales. El
comportamiento de los fijadores, al menos a niveles muy distintos; si a ello le
unimos que los estudios de los efectos sobre las estructuras celulares vegetales son
prácticamente nulos, nos encontramos con un problema serio a la hora de elegir un
fijador. En histología animal se saben que la mayoría de los efectos de retracción,
endurecimiento, etc., que presentan cada uno de los fijadores utilizados, cosa que
no se conocen cuando de tejidos vegetales se trata. Unicamente la experiencia y los
ligeros conocimientos de química permiten al histólogo vegetal poder elegir un
fijador que le ofrezca ciertas garantías; desgraciadamente, estos conocimientos no
están reflejados en los textos de técnicas histológicas ni en los de histología vegetal.
Por ello trataremos de ir incorporando a medida que avancen nuestros estudios y el
acceso a la información las técnicas particulares de las que nos hagamos eco.
Vamos a dar un listado de los fijadores más frecuentes y a discutir bervemente sus
distintas características. Los fijadores se pueden clasificar en dos grupos: fijadores
físicos y fijadores químicos.

Fijadores físicos.
Son varios los fijadores físicos que usualmente se utilizan en histología, sobre todo
por su simplicidad, pero la mayoría de ellos debemos desecharlos, porque alteran
gravemente la estrucutra de los vegetales.

El calor.
Es el más antiguo y más utilizado de estos fijadores. Tanto en microbiología, como
en el frotis de células animales, la fijación se hace a la llama, con lo que se obtiene
una coagulación rápida de las proteínas y por tanto su estabilización. Esta técnica
no es recomendable cuando se trata de tejidos vegetales, puesto que produce
alteraciones importantes y muy desiguales en las paredes celulares.

El frío.
Como anteriormente hemos mencionado, el frío (congelación), se ha tenido y se
tiene como agente de fijación, pero es realmente un agente conservador y por tanto
no debe utilizarse como tal.

La criodesecación (liofilización).
Se trata de congelar a una temperatura inferior a -50ºC y eliminar el agua a una
presión baja. este método puede ser muy efectivo, si después la pieza se incluye en
parafina o en plástico, pero es bastante complejo y excesivamente caro; no produce
deformaciones ni retracciones, ni tampoco endurecimiento de las muestras. Su
inconveniente es el precio y lo engorroso que puede resultar el que, al manipular la
muestra, no se rehidrate posteriormente.
Fijadores químicos.- Existen numerosos fijadores químicos, unos simples, y otros
que son mezcla de varias sustancias. los más reseñados en la bibliografía son:

+ Acetato mercúrico
+ Acido acético
+ Acetico-ósmico-dicromato
+ Acido acético
+ Acido crómico
+ Acroleina
+ Carnoy
+ Carmín acético hidrato de cloral
+ Etanol
+ Etanol-Glicerina-Agua (G.A.W)
+ Fijador de Chamberlain
+ Fijador de Bouin
+ Fijador de Farmer
+ Fijación fase partida
+ Fijador de Zirkle
+ Fijadores Navashin
+ Fluido de Regaud
+ Formaldehido
+ Formalina-calcio de Baker
+ Formol-Acético-Alcohol (F.A.A)
+ Formaldehido-Alcohol
+ Formaldehido-Alcohol-Propiónico (F.P.A.)
+ Glutaraldehid
+ Karnosky
+ Metanol-ácido acético
+ Mezcla Cromo-Acética
+ Mezcla Cromo-Acético-Formaldehido (C.R.A.F.)
+ Paraformaldehido
+ Solución de Allen
+ Solución de Bouin
+ Solución de Flemming
+ Tetróxido de osmio

+ La fijación se hace en recipientes con la muestra y el fijador poniendo cantidades

muy superiores de fijador frente al volumen de la muestra y se deja un tiempo de
infiltración. Este proceso debe realizarse lo más pronto que se pueda después de la
recolección de material.
Ciertos tejidos requiren infiltración a vacío para facilitar la penetración del fijador. Si
el tejido flota, se requiere infirltración a vacío. Tejidos con espacios aéreos son los
más difíciles de fijar, ya que el aire impedirá la entrada del fijador. Las hojas
(especialmente el aerénquima), Meristemos del tallo, y órganos hirsutos son
notablemente difíciles y necesitarán ciertamente infiltración a vacío.
Una bomba de vacío de aceite conectada a una campana o desecador permite un
vacío más fuerte que el típico vaciador. Tener cuidado de no generar un vacío
demasiado fuerte, puede hacer que el fijador llege a hervir y dañar el tejido. Poner el
vial destapado en el desecador y haz ciclos que crezcan poco a poco en vacío.
Como el aire residual es empujado del tejido, llegará a la superfiice. Una vez
completado el proceso las muestras deberán hundirse. continúa los ciclos de vacío
sólo hasta que las muestras de tejido se hundan. Es mejor usar vacíos débiles y
prolongado en el tiempo que al revés, para no dañar los tejidos.

+ El término cromóforo es un concepto que se comenzó a utilizar en la industria de

tintes y colorantes para referirse a la parte de una molécula orgánica responsable de
su color. Esa parte de la molécula puede ser un átomo o un grupo de átomos dentro
de la molécula y por eso también es frecuente de hablar de grupos cromóforos.

El color percibido por el ojo humano es aquel correspondiente con las longitudes de
onda no absorbidas por un objeto al ser iluminado, es decir, el color se debe a la
radiación electromagnética reflejada o transmitida. El cromóforo es, en este
contexto, la parte de la molécula responsable de la absorción de longitudes de onda
dentro del rango visible, lo que determinará las longitudes de onda reflejadas y así el
color del objeto.

Por ejemplo, si un objeto opaco se ve de color verde es porque refleja las longitudes
de onda del color verde y absorbe las demás. Esto es lo que ocurre en la clorofila, la
cual presenta un patrón de absorción mínimo en las longitudes de onda del verde y
máximo en la región del azul y el rojo:

Espectro de absorción de la clorofila en el rango visible

En química, el concepto de cromóforo es más amplio y se refiere a la parte de una
molécula que es responsable de la absorción de radiación elctromagnética mediante
transición electrónica extendiéndose tanto a la luz visible como a radiación
ultravioleta y a radiación infrarroja que no son visibles por el ojo humano. En otras
palabras, el cromóforo es la parte de la molécula en la cual se produce la transición
electrónica responsable de una determinada banda del espectro de absorción de
una sustancia.
En bioquímica se suele utilizar el concepto de cromóforo para referirse a las
sustancias responsables de la absorción de energía lumínica y que participan en
reacciones fotoquímicas. Por ejemplo, la clorofila sería el cromóforo que capta la
energía de la radiación solar para la fotosíntesis en los vegetales.
Índice de contenido

Mecanismo
La radiación electromagnética a nivel atómico se absorbe mediante transición
electrónica entre dos orbitales de distinto nivel energético. En estado de reposo, los
electrones se encuentran en un determinado orbital; al absorber energía, los
electrones suben a un orbital de mayor energía y la molécula pasa a un estado
excitado. La diferencia de energía entre ambos orbitales se corresponde con las
longitudes de onda absorbidas.

pi-pi excitado por absorción de luz

La energía absorbida en la transición electrónica suele ser liberada rápidamente y el
electrón excitado vuelve al estado original. La energía puede ser liberada de varias
formas. Una de las más comunes es en forma de calor.
También se puede liberar energía mediante la emisión de radiación
electromagnética. esto es lo que ocurre en fenómenos de luminiscencia como la
fosforescencia y la fluorescencia; una molécula es iluminada y absorbe energía
electromagnética pasando a un estado excitado, Cuando vuelve al estado basal se
libera energía mediante la emisión de fotones, es decir, emitiendo luz.
Cromóforos de orbitales pi conjugados. Ejemplo: β-caroteno
Los grupos cromóforos más comunes en compuestos orgánicos son dobles y triples
enlaces carbono-carbono, grupos iminio (C=N), diazo (N=N), sistemas aromáticos y
complejos metálicos de coordinación en los que se forman sistemas de enlaces pi
conjugados.
En estas moléculas se alternan enlaces dobles y enlaces simples a lo largo de una
cadena de átomos, principalmente átomos de carbono, enlazados mediante
orbitales hibridados sp2. Cada uno de estos átomos presenta un orbital p con un
solo electrón y todos estos orbitales p se combinan y quedan deslocalizados a lo
largo de toda la molécula.

Por ejemplo, el β-caroteno es una sustancia fuertemente coloreada de naranja-rojo

que se puede encontrar en grandes cantidades en algunos vegetales como la
zanahoria o la calabaza. Su estructura presenta 22 orbitales p conjugados:

Los 11 dobles enlaces del β-caroteno forma el grupo cromóforo

La cadena de once dobles enlaces alternos es el grupo cromóforo del β-caroteno.
Esta parte de la molécula absorbe longitudes de onda situadas en el verde y por ese
motivo la luz transmitida produce la percepción de color naranja y rojo en el ojo
humano.
Cromóforos y fotobioquímica
Muchas e importantes reacciones biológicas se basan en la absorción de energía de
radiación electromagnética, por ejemplo de la energía contenida en la radiación
solar. En estas fotoreacciones, los cromóforos son las sustancias que absorben la
energía lumínica y la ceden a la reacción para hacerla posible.
Cada fotoreacción requiere un determinado rango de longitudes de ondas que suele
coincidir con las longitudes de onda que el cromóforo participante es capaz de
absorber. Una vez absorbida la energía, el cromóforo la cede a la reacción
principalmente de dos formas, lo que da lugar a los dos tipos principales de
fotoreacciones, el tipo I y el tipo II.
Fotoreacciones tipo I
Los cromóforos en estado excitado suelen ser más reactivos que en estado
fundamental. En las fotoreacciones tipo I, el cromóforo absorbe la energía de los
fotones, pasa a estado excitado y reacciona con otra sustancia para formar otra
sustancia diferente, el fotoproducto. En las fotoreacciones tipo I el cromóforo forma
parte del fotoproducto final:

Dónde:
+ c es el cromóforo en estado fundamental o basal
+ hv representa la energía del fotón (h es la constante de Planck y v la frecuencia).
+ C es el cromóforo en estado excitado
+ b es el otro reactante
+ cb es el fotoproducto

Fotoreacciones tipo II
En la fotoreacciones tipo II, el cromóforo excitado cede la energía absorbida a otra
sustancia y vuelve a su estado basal. La otra sustancia en estado excitado
reacciona con una tercera sustancia para forma el fotoproducto. En las reacciones
tipo II el cromóforo no forma parte del fotoproducto sino que queda libre y puede
comenzar de nuevo el proceso.

+ Las tinciones en microbiología son las primeras herramientas que se utilizan en el

laboratorio para el diagnóstico de las enfermedades infecciosas. Desde hace más
de un siglo han ayudado a resolver problemas de etiología microbiana.

+ Tinción Ácido Resistente.

Esta tinción sirve principalmente para clasificar micro bacterias y actinomicetos, que
tienen un alto contenido en lipídico y en ácidos micólicos y que no pueden ser
clasificadas por la tinción de gram.
Una vez teñidos, conservan su color resistiendo al lavado con ácido mineral
reducido. En esta tinción las bacterias ácido resistentes conservan el colorante
primario color rosa o rojo, los demás microorganismos son decolorados por el ácido
y toman el color azul.

+ Tinción simple:
La tincion simple se lleva acabo cuando en la misma se utiliza un solo colorante o
cuando el colorante utilizado sirve solo para denotar la morfología celular.

+ Tinción diferencial: Método ácido resistente (ZIEHL-NEELSEN) Las paredes

celulares de ciertos parásitos y bacterias contienen ácidos grasos (ácidos micólicos)
de cadena larga (50 a 90 átomos de carbono) que les confieren la propiedad de
resistir la decoloracíón con alcohol-ácido, después de la tinción con colorantes
básicos. Por esto se denominan ácido-alcohol resistentes. El frotis se tiñe durante
unos 5 min con Fucsina fenicada aplicando calor suave. Lavar con agua. Decolorar
con alcohol etílico 95% con un 3% de ClH concentrado. Lavar y teñir durante 30-60
seg con Azul de Metileno (color de contraste). Lavar y secar.

+ Tinción diferencial para revelar estructuras celulares. Método de Wirtz. Algunos

géneros bacterianos, entre los que destacan Clostridium y Bacillus, producen en su
interior formas de resistencia denominadas esporas. Se producen cuando las
condiciones ambientales son desfavorables (agotamiento de los nutrientes,
temperaturas extremas, radiaciones, compuestos tóxicos, etc.) formándose una
espora por cada forma vegetativa. Al finalizar el proceso de esporogénesis, la célula
vegetativa se lisa y libera la espora al exterior. Cuando el ambiente es favorable, la
espora germina generando una nueva forma vegetativa. La capacidad de germinar
perdura durante años. La tinción específica de esporas requiere dos colorantes: 1.-
Verde malaquita: capaz de teñir las esporas en caliente. 2.- Safranina: colorante de
contraste que tiñe las formas vegetativas. Las endosporas, tras la primera tinción,
no perderán el colorante en el lavado con agua, y sí lo harán las formas vegetativas,
que quedarán teñidas con el segundo colorante.

+ Los mordientes, aunque no son colorantes, tienen gran importancia en algunas

técnicas de tinción. Los mordientes intensifican la tinción porque aumentan la
afinidad de la célula por el colorante. También se pueden utilizar para producir un
engrosamiento de ciertas estructuras celulares externas, como los flagelos, que
debido a su delgadez no podrían ser visualizados de otra forma, La función del
mordiente es favorecer la fijación del colorante en las fibras.
La tinción requiere cuatro soluciones un colorante o tinte básico, un mordiente
(sustancia que incrementa la afinidad entre la célula y el tinte), un decolorante
(elimina el tinte de una célula teñida) y un segundo tinte o colorante de contraste
(tinte de color diferente al inicial).

+ La muestra directa comúnmente utilizada para aplicar tinción negativa es el líquido

cefalorraquídeo. Esta técnica representa una alternativa rápida para el diagnóstico
presuntivo de meningitis, especialmente por Cryptococcus neoformans.

Tinción negativa.
Cryptococcus neoformans var gatti débilmente encapsulado como aparece en la
naturaleza, usando nigrosina. Cryptococcus neoformans var gatti con una cápsula
gruesa como se encuentra en su forma parasitaria, usando nigrosina. Cryptococcus
neoformans con tinta china ligeramente diluida. Así mismo, esta tinción puede ser
aplicada sobre esputo y líquidos estériles en general, así como también sobre cepas
obtenidas de cultivos puros jóvenes.

Claro está, el laboratorio debe contar con un personal competente, capaz de

reconocer las levaduras del Cryptococcus neoformans aislado o en gemación y
diferenciarlas de leucocitos y artefactos que pueda presentar la muestra.

+ Esta técnica recibe el nombre de tinción negativa porque actúa de forma contraria
al resto de las técnicas de coloración. Por lo tanto, la coloración se basa en teñir el
fondo del frotis en un color oscuro. Por lo general las levaduras se observan
refringentes, rodeadas por un halo claro que corresponde a la cápsula. Esto ocurre
porque la tinta china y la nigrosina son sustancias incapaces de penetrar el
polisacárido que conforma la cápsula de los microorganismos vivos.

Ahora bien, si los microorganismos están muertos, la tintura puede penetrar dentro
de los mismos, de tal manera que esta tinción también es útil para evaluar la
viabilidad de los microorganismos.

+ La tinción de Ziehl-Neelsen en una técnica de coloración para identificar

microorganismos alcohol-ácido resistentes . La tinción de Ziehl-Neelsen sirve para
identificar ciertos tipos de microorganismos. Algunos de estos microorganismos son
micobacterias , nocardias y algunos parásitos unicelulares . Muchas de las bacterias
pueden clasificarse a través de una técnica común llamada tinción de Gram.

Técnicas como la tinción de Ziehl-Neelsen requieren combinaciones de colorantes

con calor para fijar el primero a la pared celular.

+ Las células que resisten esta decoloración se llaman ácido-resistentes. Solo las
células decoloradas absorben el segundo colorante y toman su color, mientras que
las células ácido-resistentes conservan el color rojo. Este procedimiento se usa
frecuentemente para la identificación de Mycobacterium tuberculosis y
Mycobacterium leprae, las cuales son llamadas bacilos ácido-alcohol resistentes.

+ Solución decolorante
En este paso se pueden emplear soluciones de ácido alcohol al 3 % o ácido
sulfúrico al 25 %.

+ Calentar la muestra
Se puede hacer una fijación con alcohol cuando el frotis no se ha preparado con
esputo y si no se va a teñir inmediatamente. tuberculosis se elimina con lejía y
durante el proceso de tinción.
+ Calentar la mancha
Solo se debe aplicar una pequeña llama debajo de los portaobjetos usando un
hisopo encendido previamente humedecido con unas gotas de alcohol ácido,
metanol o etanol al 70 %.

+ Cubrir el frotis con alcohol ácido

Este alcohol ácido debe estar al 3 %. La cobertura se lleva a cabo durante 5 minutos
o hasta que el frotis esté lo suficientemente decolorado, es decir, de color rosa
pálido.

+ Examinar el frotis en el microscopio

Escanear el frotis sistemáticamente y anotar las observaciones pertinentes.

+ Interpretar los resultados

Al contrario, si los microorganismos se tiñen de azul o verde, dependiendo del
colorante utilizado como contra-colorante, se consideran ácido alcohol resistente
negativos .

26. describe the gram stain method and how it works.

The Gram stain is a differential method of staining used to assign bacteria to one of
two groups (gram-positive and gram-negative) based on the properties of their cell
walls. It is also known as Gram staining or Gram's method. The procedure is named
for the person who developed the technique, Danish bacteriologist Hans Christian
Gram.
How the Gram Stain Works
The procedure is based on the reaction between peptidoglycan in the cell walls of
some bacteria. The Gram stain involves staining bacteria, fixing the color with a
mordant, decolorizing the cells, and applying a counterstain.

How to Remove Rust Stains From a Bathroom

The primary stain (crystal violet) binds to peptidoglycan, coloring cells purple. Both
gram-positive and gram-negative cells have peptidoglycan in their cell walls, so
initially, all bacteria stain violet.
Gram's iodine (iodine and potassium iodide) is applied as a mordant or fixative.
Gram-positive cells form a crystal violet-iodine complex.
Alcohol or acetone is used to decolorize the cells. Gram-negative bacteria have
much less peptidoglycan in their cell walls, so this step essentially renders them
colorless, while only some of the color is removed from gram-positive cells, which
have more peptidoglycan (60-90% of the cell wall). The thick cell wall of gram-
positive cells is dehydrated by the decolorizing step, causing them to shrink and
trapping the stain-iodine complex inside.
After the decolorizing step, a counterstain is applied (usually safranin, but sometimes
fuchsine) to color the bacteria pink. Both gram-positive and gram-negative bacteria
pick up the pink stain, but it is not visible over the darker purple of the gram-positive
bacteria. If the staining procedure is performed correctly, gram-positive bacteria will
be purple, while gram-negative bacteria will be pink.
Purpose of the Gram Staining Technique
The results of the Gram stain are viewed using light microscopy. Because the
bacteria are colored, not only is their Gram stain group identified, but their shape,
size, and clumping pattern may be observed. This makes the Gram stain a valuable
diagnostic tool for a medical clinic or lab. While the stain may not definitely identify
bacteria, often knowing whether they are gram-positive or gram-negative is sufficient
for prescribing an effective antibiotic.
Limitations of the Technique
Some bacteria may be gram-variable or gram-indeterminate. However, even this
information may be useful in narrowing down bacterial identity. The technique is
most reliable when cultures are less than 24 hours old. While it can be used on broth
cultures, it's best to centrifuge them first. The primary limitation of the technique is
that it yields erroneous results if mistakes are made in the technique. Practice and
skill are needed to produce a reliable result. Also, an infectious agent may not be
bacterial. Eukaryotic pathogens stain gram-negative. However, most eukaryotic cells
except fungi (including yeast) fail to stick to the slide during the process.
Gram Staining Procedure
Materials
Crystal violet (primary stain)
Gram's iodine (mordant, to fix crystal violet in the cell wall)
Ethanol or Acetone (decolorizer)
Safranin (secondary stain or counterstain)
Water in a squirt bottle or dropper bottle
Microscope slides
Compound microscope
Steps
Place a small drop of bacterial sample on a slide. Heat fix the bacteria to the slide by
passing it through the flame of a Bunsen burner three times. Applying too much heat
or for too long can melt the bacteria cell walls, distorting their shape and leading to
an inaccurate result. If too little heat is applied, the bacteria will wash off the slide
during staining.
Use a dropper to apply the primary stain (crystal violet) to the slide and allow it to sit
for 1 minute. Gently rinse the slide with water no longer than 5 seconds to remove
excess stain. Rinsing too long can remove too much color, while not rinsing long
enough may allow too much stain to remain on gram-negative cells.
Use a dropper to apply Gram's iodine to the slide to fix the crystal violet to the cell
wall. Let it sit for 1 minute.
Rinse the slide with alcohol or acetone about 3 seconds, followed immediately with a
gentle rinse using water. The gram-negative cells will lose color, while the gram-
positive cells will remain violet or blue. However, if the decolorizer is left on too long,
all cells will lose color!
Apply the secondary stain, safranin, and allow it to sit for 1 minute. Gently rinse with
water no longer than 5 seconds. The gram-negative cells should be stained red or
pink, while the gram-positive cells will still appear purple or blue.
View the slide using a compound microscope. A magnification of 500x to 1000x may
be needed to distinguish cell shape and arrangement.
Examples of Gram-Positive and Gram-Negative Pathogens
Not all bacteria identified by the Gram stain are associated with diseases, but a few
important examples include:
Gram-positive cocci (round): Staphylococcus aureus
Gram-negative cocci: Neisseria meningitidis
Gram-positive bacilli (rods): Bacillus anthracis
Gram-negative bacilli: Escherichia coli

27. how can capsules be viewed, endospores and flagella?

Algunas de estas características se pueden observar mediante la tinción y la
microscopía de luz. Tres técnicas de tinción útiles para observar estas
características son la tinción de Gram, tinción de cápsulas y tinción de endospora.
Endospores appear bluish-green; other structures appear pink to red. Used to view
and study flagella in bacteria that have them. Used to distinguish cells with capsules
from those without. Capsules appear clear or as halos if present.

+ Las cápsulas son claramente visibles al microscopio óptico pero debido a que
tienen un índice de refracción muy bajo y son además muy difíciles de teñir para su
observación se utilizan tinciones negativas o especiales para cápsulas.

+ Durante el lavado con agua, el verde de malaquita se elimina de las células

vegetativas, pero no de la endospora, en los resultados de la tincion Algunas células
vegetativas contendrán esporas; las células se mancharán de color rojo, mientras
que las endosporas se mancharán de color verde.

+ El microscopio de contraste de fases logra visualizar los penachos densos de

flagelos de ciertas bacterias. En cambio, la microscopía óptica de alta intensidad en
campo oscuro, así como la microscopía fluorescente sí logra discernir los flagelos.
La tinción de flagelos de Leifson se realiza según la siguiente técnica: - Se fija
químicamente la suspensión bacteriana, mediante formol, y se hace la extensión en
un portaobjetos. - Se deja secar al aire, sin calentamiento alguno.

28. describe the following types of media and their uses: defined or synthetic,
complex, general purpose, enriched, selective and differential. give an
example of each.
Medios de cultivo
Un medio de cultivo es un sustrato o solución de nutrientes en los que crece y se
multiplican los microorganismos en el laboratorio, con el objeto de aislar diferentes
especies bacterianas, con el din de identificarlas y realizar estudios
complementarios.

Clasificación
Pueden clasificarse según su:
+ Consistencia
+ Origen
+ Composición
+ Utilización
Consistencia.
+ Líquidos: contienen nutrientes a los cuales se les adicionan sustancias con la
capacidad de mantener estables un pH, entre ellos podemos encontrar el caldo
nutritivo y caldo peptona.

+ Solidos: se obtienen agregando agar (sustancia de tipo polisacárido que se

obtiene de algas marinas) a un medio liquido determinado. Al tener un medio sólido,
nos facilita obtener colonias bacterianas aisladas.
+ Semisólidos: similares a los medios sólidos, la única diferencia es que a estos se
les disminuye la cantidad de agar, lo que permite conservar cepas bacterianas y la
observación y registro de bacterias móviles.
Origen
Según su origen los medios de cultivo se dividen en medios sintéticos y medios
naturales.
+ Los medios sintéticos o químicamente definidos son medios compuestos por
productos químicos conocidos y se utilizan para realizar estudios metabólicos, por
ejemplo: agar blando, caldo nutritivo, agar eosina azul de metileno, etc.
+ Los medios naturales o químicamente no definidos son aquellos medios que se
preparan a partir de sustancias naturales animales o vegetales, por ejemplo: suero,
leche, papa, etc.
Composición y utilización
Según su utilización y su composición los medios de cultivo se pueden clasificar en:
+ Simples
+ Enriquecidos
+ Selectivos
+ Diferenciales
+ Enriquecimiento

Medios Simples
Poseen los requisitos nutricionales para permitir el desarrollo bacteriano general,
ejemplos: agar nutritivo, caldo nutritivo, entre otros.

Medios enriquecidos
Son medios simples o comunes, a los que se le añaden ciertos elementos como
sangre, suero, líquido ascítico, huevo, glucosa, vitaminas, etc. lo que permite el
aporte de factores de crecimiento o sustancias que neutralizan agentes inhibidores
del crecimiento en bacterias exigentes nutricionalmente, entre algunos ejemplos:
agar sangre, medio de Löwenstein-Jensen, enriquecido con huevo para facilitar el
crecimiento de Mycobacterium; agar desoxicolato-lactosa (DLA), enriquecido con
lactosa y desoxicolato.

Medios selectivos
+ Se consiguen añadiendo al agar nutritivo compuestos químicos nocivos para
algunas bacterias cuyo crecimiento no es de interés o también mediante una
alteración de las condiciones físicas del medio, entre algunos ejemplos tenemos
+ El agar Mac Conkey que contiene cristal violeta.
+ Thayer-Martin medio selectivo para Neissar, ya que este posee antibióticos como
la vancomicina colistina y nistatina.
+ Caldo lactosado bilis verde brillante en donde la bilis inhibe el crecimiento de
bacterias gran positivas.
+ Löwenstein-Jensen con verde de malaquita es selectivo para Mycobacterium.

Medios diferenciales
A estos medios se le adiciona sustancias para que solo crezcan ciertas bacterias y
estas, al actuar sobre alguna de las sustancias adicionadas, permiten observar
macroscópicamente ciertas propiedades de crecimiento que ayudan a diferenciar
sus colonas de otras especies diferentes, entre algunos ejemplos encontramos:

+ Agar eosina azul de metileno (EMB), diferencia E. coli (color verde metálico
brillante) de colonias de Enterobacter aerogenes (color rosado, consistencia mucosa
y crecimiento abundante).
+ Agar sangre, diferencia variedades de Streptococcus pyogenes en Streptococcus
betahemolíticos de Streptococcus alfa hemolítico y gama hemolítica.
+ Agar Salmonella-Shigella tiene lactosa y un indicador de pH que permite
diferenciar las colonias de bacterias fermentadoras de este disacárido.

Medios de enriquecimiento
Son medios líquidos que favorecen o permiten la multiplicación de las bacterias
cuando la muestra obtenida es muy pobre, por ejemplo:

+ Caldo tioglicolate, favorece el crecimiento de las bacterias anaeróbicas.

+ Caldo tetrationato favorece crecimiento de bacterias microaerófilas.
+ Los caldos bilis y de Muller-Kauffman, favorecen el crecimiento del género
Salmonella.
+ Caldo o agua peptonada se utiliza para el crecimenot de Vibrio Cholerade.

29. what are pure cultures and why are they so important? how are plate
cultures prepared by seeding by extension, in stretch marks, and in depth?
Un cultivo puro es aquel que contiene una sola clase de microorganismo. En la
práctica los cultivos puros son útiles por diferentes razones: mantienen los
organismos viables, permiten hacer subcultivos para someterlos a diferentes
análisis. Para obtener lo anterior es necesario recurrir a las técnicas de recuento
odos los microbiólogos saben que han de trabajar con cultivos axénicos (puros) para
que sus experimentos sean significativos. Pero incluso los microbiólogos más
experimentados han cometido errores alguna vez. Esto le sucedió a Ralph Wolfe,
uno de los microbiólogos americanos más distinguidos.
En 1960 Wolfe obtuvo un cultivo puro de la bacteria Methanobacillus omelianskii.
Este microorganismo es anaerobio estricto, capaz de producir metano (gas natural).
Wolfe quería conocer de qué manera M. omelianskií producía gas metano a partir
de etanol y anhídrido carbónico. El procedimiento estaba claro; tenía que lisar la
bacteria y aislar las enzimas que catalizan la reacción, en un tubo de ensayo. Esto,
aunque suena bastante simple, había sido intentado previamente por otros
investigadores y todos habían fracasado. Wolfe lo intentó durante todo un año y
tampoco tuvo éxito. De repente lo consiguió: una solución de enzima. sintetizaba
metano en un tubo de ensayo! Se trataba de un descubrimiento espectacular, hasta
que un colega se preguntó si el cultivo era axénico.
Wolfe decidió volver a aislar el culfivo, pero en vez de añadir etanol yanhídrido
carbónico al mismo, añadió hidrógeno y anhídrido carbónico. En el nuevo medio se
desarrollaron colonias, pero cuando se transfirieron al medio con etanol y anhídrido
carbónico no crecieron. ¿Qué había sucedido? Un colega, M.J. Wolin, se dio
cuenta de lo que estaba sucediendo. Aunque M. omelianskii originaba colonias
uniformes y aisladas en el medio original, se trataba de una mezcla de dos
bacterias. Una, designada cepa S, convertía el etanol en hidrógeno gas. La otra,
designada cepa M, convertía el hidrógeno gas y el anhídrido carbónico en metano.
Ninguna de las dos podía crecer sola con etanol y anhídrido carbónico. Todos los
experimentos de Wolfe se habían realizado con un cultivo mixto y tuvieron que
repetirse para averiguar qué enzimas pertenecían a la cepa S y cuáles a la cepa M.
¿Qué lección puede aprenderse de la historia de Wolfe? Primero, que los problemas
técnicos (tales como obtener un cultivo axénico), aunque son tan básicos que se
explican en los textos introductorios, son reales e importunan a los más prestigiosos
investigadores. Segundo, que incluso un buen microbiólogo puede equivocarse.
Algunas especies pueden crecer juntas (para formar un consorcio) y parecer un
cultivo axénico cuando realmente no lo son.
El recuento en placa por siembra en profundidad: que consiste en añadir medio de
cultivo fundido y enfriado a 50ºC sobre placa de Petri que contiene una cantidad
determinada de la muestra diluida. Se tapa la placa y se rota para mezclar la
muestra en el agar. Cuando el agar solidifica se incuban las placas.
Método de siembra por estría en placa
Es el método más fácil y el más usado para obtener cultivos axénicos. Para ello,
con un asa de siembra se tomauna muestra de la población mixta y a continuación
se hacen estrías sobre la superficie de un medio sólidopreparado en una placa Petri
(a las placas Petri también se les denomina simplemente placas). Conforme se van
haciendo estrías en zigzag con el asa, cada vez se van depositando en la superficie
del medio menosmicroorganismos. A continuación, se flamea el asa, se toca en la
región donde se han realizado las últimasestrías y se continúa la siembra con la
misma técnica, en la superficie de medio sin sembrar aún. Repitiendo esteproceso
varias veces se logra separar células individuales. A continuación, las placas se
incuban en un lugar adecuado, permitiendo que las células aisladas experimenten
un número suficiente de divisiones para formar colonias visibles. Aunque cada
colonia posiblemente representa un clon derivado de una sola célula, no podemos
asegurarlo. Quizás, dos células quedaron depositadas tan juntas que han originado
una única colonia mixta. Por tanto, para asegurarnos de que hemos obtenido un
cultivo axénico, conviene repetir el procedimiento a partir deuna colonia bien aislada
en la primera placa. Las colonias que se desarrollen la segunda vez, serán, casi con
todaseguridad, cultivos axénicos.

Métodos de vertido en placa y extensión en placa

En estos métodos, las suspensiones de células microbianas se diluyen antes de su
siembra en placa. Se siguenestas técnicas cuando la muestra contiene tantos
microorganismos, que la dilución no se puede realizar en una sola etapa. Por
ejemplo, una suspensión con mil millones de células por mililitro debe ser diluida 10
veces paraobtener una suspensión con un centenar de células por mililitro, Por
tanto, se realizan diluciones seriadas (envarias etapas), normalmente de diez en
diez, pero a veces de cien en cien.
Para realizar diluciones de diez endiez, se añade 1 ml de la suspensión bacteriana a
9 ml (de medio estéril o solución salina, igualmente estéril. Se agita vigorosamente
para diluir las células y el proceso se repite cuantas veces sea necesario. A
continuación, sepuede proceder de dos maneras diferentes.
En el método de vertido en placa, las muestras diluidas se mezclan con agar
fundido y se vierten en placa. Algunas colonias quedarán embebidas en el agar y
otras crecerán en la superficie. Las colonias superficiales se extenderán y serán
más grandes.
En el segundo método (extensión en placa), las muestras diluidas se
siembrandirectamente en la superficie de la placa de agar, extendiéndolas con
avuda de un asa de Diralsky de cristal estéril. La suspensión se absorbe en el agar,
dejando las células microbianas sobre la superficie. En ambas técnicas las placas
se incuban hasta la aparición de las colonias. Como en el método de siembra por
estría, no existe la seguridad de que las colonias que aparecen en las placas
sembradas por extensión o en el agar solidificado sembrado por el método del
vertido en placas sean cultivos axénicos hasta que se repita el proceso. Las dos
técnicas de siembra por dilución presentan la ventaja de que permiten obtener un
mayor número decolonias aisladas que el método de siembra por estría, por tanto
se eligen cuando se ha de seleccionar una cepa a partir de una mezcla con varios
tipos de microorganismos. Para obtener un cultivo axénico mediante este método:
(a) Hacer diluciones seriadas de la suspensión bacteriana hasta obtener una
muestra con sólo unos pocoscientos de bacterias-
(b) verter la muestra en un tubo con agar a sobrefusión, mezclar y verter el
contenido en una placa Petri.
(c) Después de la incubación, se desarrollan colonias en el agar (más pequeñas) y
en su superficie (más grandes).
Método de aislamiento por siembra por estría en placa: Para obtener un cultivo
axénico:
(a) esterilizar un asa de siembra por flameado en la llama de un mechero.
(b) introducirla en la suspensión bacteriana para recoger una muestra.
(c) sembrar haciendo estrías sobre la superficie de un medio sólido en una placa
Petri, y
(d) volver a esterilizar el asa, tocar en la zona de la placa ya sembrada y hacer un
segundo grupo de estrías enuna región nueva de la placa. Repetir el proceso una
tercera y una cuarta vez, hasta conseguir que los grupos de células se diluyan y se
separen células aisladas.
(e) Después de la incubación, se desarrollan colonias aisladas. Para estar seguro
de que el cultivo es puro, repetir el proceso entero; para ello tomar una colonia
aislada y sembrar por estrías una segunda placa.
conforme se van haciendo estrías en zigzag con el asa, cada vez se van
depositando en la superficie del medio menos microorganismos. a continuación, se
flamea el asa, se toca en la región donde se han realizado las últimas estrías y se
continúa la siembra con la misma técnica, en la superficie de medio sin sembrar
aún.

30. how do dna and rna differ?

el adn está formado por dos cadenas largas que se enrollan entre sí en una espiral,
en cambio el arn está compuesto por una única cadena con estructura lineal y de
menor longitud.
El azúcar que lo componen es diferente. En el ADN es la desoxirribosa y en el ARN
la ribosa.
En las bases nitrogenadas del ARN la Timina se sustituye por Uracilo, siendo
entonces Adenina, Guanina, Citosina y
El peso molecular del ARN es menor que el del ADN
Blibiografia.

+https://repository.unilibre.edu.co/bitstream/handle/10901/17610/1.An%C3%A1lisis
%20de%20recuentro.pdf?sequence=1&isAllowed=y
+https://conalepfelixtovar.wordpress.com/2012/09/26/tecnicas-y-metodos-de-
aislamiento-y-seleccion-de-microorganismos/
+https://revistas.unilibre.edu.co/index.php/mente_joven/article/view/3665#:~:text=Un
%20cultivo%20puro%20es%20aquel,a%20las%20t%C3%A9cnicas%20de
%20recuento.
+http://portal.ucv.ve/fileadmin/user_upload/facultad_farmacia/catedraMicro/
10_Obtenci%C3%B3n_de_cultivos_puros.pdf
+https://www.google.com/search?q=why+does+alcohol+readily+decolorize+gram-
negative+but+not+gram-positive+bacteria
%3F&oq=why+does+alcohol+readily+decolorize+gram-negative+but+not+gram-
positive+bacteria
%3F&aqs=chrome..69i57j69i60.555j0j7&sourceid=chrome&ie=UTF-8
+https://quizlet.com/428899330/microbiology-mini-quiz-ch-2-flash-cards/
#:~:text=2.7%3A%20Could%20a%20bacterial%20cell,sticky%20nature%20(slime
%20layer).
+https://www.universidadviu.com/co/actualidad/nuestros-expertos/adn-y-arn-
concepto-diferencias-y-funciones
+ https://edulabc.com.mx/medios-de-cultivo/
+ https://opentextbc.ca/microbiologyopenstax/chapter/staining-microscopic-
specimens/#:~:text=Endospores%20appear%20bluish%2Dgreen%3B%20other
%20structures%20appear%20pink%20to%20red.&text=Used%20to%20view
%20and%20study%20flagella%20in%20bacteria%20that%20have
%20them.&text=Used%20to%20distinguish%20cells%20with,or%20as%20halos
%20if%20present.
+ https://es.linkedin.com/pulse/la-c%C3%A1psula-bacteriana-david-garc%C3%ADa-
pertierra-m%C3%A9ndez
+ https://www.jove.com/es/v/10513/microscopy-and-staining-gram-capsule-and-
endospore-staining?language=Spanish#:~:text=Algunas%20de%20estas
%20caracter%C3%ADsticas%20se,c%C3%A1psulas%20y%20tinci%C3%B3n
%20de%20endospora.
+ https://www.ugr.es/~pomif/pom-bac/pb-iii/pb-iii-3-esporas.htm
+ https://www.ceaonline.es/download/TEMA%2020(2).pdf
+https://www.ugr.es/~eianez/Microbiologia/08flagelos.htm#:~:text=El
%20microscopio%20de%20contraste%20de,s%C3%AD%20logra%20discernir
%20los%20flagelos. + https://www.thoughtco.com/gram-stain-procedure-
4147683#:~:text=The%20procedure%20is%20based%20on,to%20peptidoglycan
%2C%20coloring%20cells%20purple.
+https://www.uv.es/lagida/histologia/documentos/fijacion.html#:~:text=%2D%20Se
%20entiende%20por%20fijaci%C3%B3n%20toda,dicho%20ser%20o%20tejido
%20estaban
+ https://curiosoando.com/grupo-cromoforo
+ medigraphic.com/pdfs/invdis/ir-2014/ir141b.pdf
+ https://labdemicrobiologia.wixsite.com/scientist-site/t-cnicas-y-tipos-de-tinci-
n#:~:text=Tinci%C3%B3n%20%C3%81cido%20Resistente.,lavado%20con
%20%C3%A1cido%20mineral%20reducido.
+ https://www2.ulpgc.es/hege/almacen/download/35/35696/tincion_de_gram.pdf
+http://aulacidta5.usal.es/aulavirtual/Demos/microbiologia/unidades/documen/
uni_02/56/cap305.htm#:~:text=Los%20mordientes%20intensifican%20la%20tinci
%C3%B3n,ser%20visualizados%20de%20otra%20forma.
+ https://www.lifeder.com/tincion-negativa/
+ https://www.lifeder.com/tincion-ziehl-neelsen/
+ https://www.juntadeandalucia.es/averroes/centros-tic/14002996/helvia/aula/
archivos/repositorio/250/282/html/genetica/glosario/b/basesnitrogenadas.htm
+https://en.wikipedia.org/wiki/Amino_acid_synthesis#:~:text=The%20oxaloacetate
%2Faspartate%20family%20of,also%20gives%20rise%20to%20isoleucine.
+ https://www.aeped.es/sites/default/files/anales/44-4-12.pdf
+ https://quizlet.com/428899330/microbiology-mini-quiz-ch-2-flash-cards/
#:~:text=2.7%3A%20Could%20a%20bacterial%20cell,sticky%20nature%20(slime
%20layer).