UNIVERSIDAD MAYOR DE “SAN ANDRES”

FACULTAD DE INGENIERIA

INFORME EXPERIMENTAL DE LABORATORIO Nº 4

ANALISIS MICROBIOLOGICO DE AGUAS
Estudiante: Univ. Flores Santos Ayrton Tadeo
Docente: M.Sc. Ing. Virginia Rojas Mercado
Docente: Aux. Guadalupe Alvarez Velasco
Carrera: Ingeniería Química
Materia: Laboratorio de Microbiología Industrial (PRQ-301L)
Grupo: “A”
Fecha de Entrega: 24 de Julio de 2020
 Universidad Mayor de San Andrés
Facultad de Ingeniería
Ingeniería Química, Ambiental, Alimentos y Petroquímica
Análisis Microbiológico de Aguas

1. OBJETIVOS.
✓ Familiarizar al estudiante en el uso de diferentes instrumentos,
materiales y equipos utilizados en el laboratorio de microbiología para
el análisis microbiológico de aguas.

✓ Aprender el análisis microbiológico de aguas por el método del Número

Más Probable.

✓ Determinar la presencia de coliformes totales en muestras de aguas

representativas.

2. DIAGRAMA DE FLUJO.
2.1. Prueba Presuntiva.

INICIO

Recepción de
la muestra

No

La muestra de
agua ya agitada
Si

Tres series de tubo Inocular

10 ml de caldo
con campana asépticamente la
lactosado
Durham muestra de agua

Temperatura 1º serie de tres tubos 10 ml

de 35ºC Incubar 2º serie de tres tubos 1 ml
Tiempo 24-48 los tubos 3º serie de tres tubos 0,1 ml
horas

No Si Presencia de gases
No presenta gas Series de en tubos
tubos

FIN

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2.2. Prueba confirmatoria para coliformes totales.

INICIO

Tubos positivos con

pruebas presuntivas

Caldo Verde Brillante Tubos con campanas

Bills Durham

Temperatura
de 35ºC Incubar
Tiempo 24-48 los tubos
horas

Presencia de gases
No presenta gas Series de en tubos
tubos

FIN

3. MATERIAL Y REACTIVOS

Materiales
1 Frasco de tapa rosca 250 ml
Tubos de ensayo con tapa
18 x 150 mm
rosca
Campanas Durham
1 Pipetas graduadas 10 ml
1 Pipetas graduadas 1 ml
1 Pipetas graduadas 0,1 ml
1 Asa de platino
1 Mechero Bunsen

1 Hornilla

1 Gradilla para tubos

1 Varilla de vidrio
1 Piceta
1 Probeta 250 ml

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1 Probeta 100 ml
1 Vaso de precipitado 500 ml
1 Vaso de precipitado 250 ml
1 Vaso de precipitado 100 ml
3.1. Materiales.

3.2. Medios de cultivo.

Medios de cultivo
1 Agar Plate Count
2 Agar Sabourand
3 Agar Patata Dextrosa
4 Agar Mac Conkey
5 Medio TSI
6 Medio SIM
7 Medio LIA
8 Medio CITRATO SIMONS
9 Medio VOGES PROSKAWER
4. TOXICOLOGIA DE MEDIOS DE CULTIVO
4.1. Caldo Lauril Sulfato Triptosa
Toxicidad aguda

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No nos constan datos Cuantitativos sobre la toxicidad de este producto.

Informaciones adicionales sobre toxicidad
No pueden excluirse características peligrosas, pero son poco probables si su
manipulación es adecuada.
Información complementaria
El producto debe manejarse con las precauciones apropiadas para los productos
químicos.

4.2. Caldo Lactosado

Toxicidad aguda
Bajo nivel de toxicidad aguda.
Irritación de la piel y membranas mucosas
Puede causar ligera irritación transitoria.
Irritación ocular
Puede causar ligera irritación transitoria.

4.3. Caldo Verde Brillante Bilis Lactosa

Toxicidad aguda
Toxicidad oral/LD50: 7 mg/Kg (Rata).
Irritación de la piel y membranas mucosas
Puede causar irritación transitoria.
Irritación ocular
Puede causar irritación transitoria

4.4. Caldo Mac Cockey

Toxicidad aguda
Bajo nivel.
Irritación de la piel y membranas mucosas
Puede causar irritación transitoria.
Irritación ocular
Puede causar irritación transitoria

5. VARIANTES DEL PROCESO.

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6. RESULTADOS.
𝑁𝑀𝑃 𝑙𝑒𝑖𝑑𝑜 𝑒𝑛 𝑡𝑎𝑏𝑙𝑎𝑠
𝑁𝑀𝑃 𝑑𝑒 𝐶𝑜𝑙𝑖𝑓𝑜𝑟𝑚𝑒𝑠 𝑇𝑜𝑡𝑎𝑙𝑒𝑠 =
𝑉𝑜𝑙𝑢𝑚𝑒𝑛 𝑟𝑒𝑎𝑙 𝑑𝑒 𝑚𝑢𝑒𝑠𝑡𝑟𝑎𝑠 (𝑚𝑙)

6.1. E. Coli.
11 𝑁𝑀𝑃
𝑁𝑀𝑃 𝑑𝑒 𝐸. 𝐶𝑜𝑙𝑖 =
225 𝑚𝑙

6.2. Coliformes.
3 𝑁𝑀𝑃
𝑁𝑀𝑃 𝑑𝑒 𝐶𝑜𝑙𝑖𝑓𝑜𝑟𝑚𝑒𝑠 =
225 𝑚𝑙
6.3. Coliformes Totales.
0 𝑁𝑀𝑃
𝑁𝑀𝑃 𝑑𝑒 𝐶𝑜𝑙𝑖𝑓𝑜𝑟𝑚𝑒𝑠 𝑇𝑜𝑡𝑎𝑙𝑒𝑠 =
225 𝑚𝑙

7. INTERPRETACION DE RESULTADOS.
• Al hacer el análisis de E. Coli, vemos el NMP:
11 𝑁𝑀𝑃
= 4,8 ∗ 10−2 𝑁𝑀𝑃⁄𝑚𝑙
225 𝑚𝑙

Expresamos el resultado con dos cifras

significativas como establece en la NB
32003.

El agua no es para consumo humano por la presencia de E. Coli.

• Al hacer el análisis de Coliformes, vemos el NMP:

3 𝑁𝑀𝑃
= 1,3 ∗ 10−2 𝑁𝑀𝑃⁄𝑚𝑙
225 𝑚𝑙
El agua no es para consumo humano por la presencia de Coliformes.

• Al hacer el análisis de Coliformes Totales, vemos el NMP:

0 𝑁𝑀𝑃
= 0 𝑁𝑀𝑃⁄𝑚𝑙
225 𝑚𝑙

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En la tabla no se muestras los NMP se considera 0 por la ausencia de coliformes

totales, el agua es para consumo humano.

8. CONCLUSIONES Y RECOMENDACIONES.
➢ Nos familiarizamos virtualmente con el manejo de instrumentos y
equipos que se realizan en laboratorio, cabe recalcar que los
instrumentos se manejan esterilizado para evitar los contaminantes
presentes.
➢ Se observó el análisis que se hace para el muestro de agua donde se
debe trabajar con materiales esterilizados y a la vez desinfectar.
➢ Al determinar los números más probables se observó el proceso de
como cuantificar la muestra con el agregado de medios de cultivos.
➢ Se determinó la presencia de coliformes y E. Coli en la muestra de
aguas, y se concluyó que no es apto para consumo humano.
➢ En coliformes totales se observó que en tablas no hay la presencia de
los dígitos NMP y se dedujo que el agua es para consumo humano.

✓ Se recomienda trabajar siempre con limpieza u esterilización a cada

momento para evitar errores en los cálculos.
✓ Se recomienda trabajar con paciencia en el laboratorio, y tener un
conocimiento de cuidados con los medios de cultivos.

9. CUESTIONARIO.
1) ¿Cuáles son los límites máximos permisibles para asegurar la calidad
microbiológica del agua?
R.-

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2) ¿Dónde se encuentran normalmente las bacterias coliformes?

R.- Los coliformes se introducen en gran número al medio ambiente por

las heces de humanos y animales. Por tal motivo suele deducirse la mayoría de los
coliformes que se encuentran en el ambiente son de origen fecal. Sin embargo, aún
existen muchos coliformes de vida libre.
3) ¿Por qué se investiga las bacterias coliformes?
R.- Puesto que a las bacterias coliformes les gusta vivir cerca de la superficie de la
tierra y prefieren temperaturas cálidas, es razonable que las bacterias podrían ser
más probables que infecten pozos de agua subterránea durante fechas más cálidas,
o condiciones climáticas más húmedas cuando el agua superficial está recargando
los acuíferos subterráneos.
4) ¿A qué microorganismos incluye el grupo coliformes?

R.- El grupo de los coliformes incluye bacterias en forma de bacilo, gram negativos,
con las siguientes propiedades bioquímicas: oxidasa negativo y capacidad
de fermentar lactosa, con producción de gas en 48 horas a una temperatura de
37 °C.
El grupo coliforme está formado por los siguientes géneros:

1. Escherichia
2. Klebsiella
3. Enterobacter
4. Citrobacter
5) ¿Qué cantidad de agua mínima se debe recepcionar en laboratorio para su
respectivo análisis microbiológico?
R.- Se debe recepcionar tres cuartos de su capacidad para luego realizar una
agitación y decloración si se obtuvo de una pila de grifo para después llevar a
analizar en el laboratorio.
6) ¿Cómo es realiza la toma de muestra para aguas de ríos?
R.- En ríos o cursos de agua será preciso considerar diversos factores, tales como:
profundidad, caudal, distancia a la orilla, etc. La muestra se tomará lo más lejos

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posible de la orilla, procurando no remover el fondo y evitando los remansos o

zonas de estancamiento. Para tomar una muestra del agua de un lago o de un río
se sujetará el frasco por el fondo en posición invertida, sumergiéndolo
completamente y dándole la vuelta en sentido contrario a la corriente (río) o
desplazándolo horizontalmente en la dirección de la boca del frasco (lago).
7) ¿Dónde se deben tomar muestras de agua para los exámenes bacteriológico
en una planta de tratamiento y potabilización de aguas?
R.- Una vez retirados filtros u otros accesorios se procederá a una cuidadosa
limpieza con agua o alcohol. Con el grifo cerrado se flameará el extremo del mismo,
mediante la llama obtenida con un poco de algodón empapado de alcohol y
sostenido con unas pinzas. Se abrirá el grifo para que el agua fluya
abundantemente y se renueve la contenida en la tubería que la alimenta. Se
destapará el frasco esterilizado sin tocar la boca del mismo ni el interior del tapón.
Todos los movimientos deberán realizarse sin interrupciones, al abrigo de
corrientes de aire y con las máximas precauciones de asepsia.

8) ¿Cuál es tiempo máximo transcurrido entre la toma de muestra y el examen

bacteriológico del agua?
R.- Entre la toma de muestras y el análisis debe transcurrir el
menor tiempo posible y en ningún caso más de 72 h, debiendo mantenerse la
temperatura de la muestra durante el transporte (sólo para análisis físico-químico
de muestras de agua).
9) ¿Cómo se puede identificar realmente el tipo de microorganismos
coliformes?
R.- Los Coliformes Fecales son un subgrupo de los Coliformes totales, capaces de
fermentar la lactosa a 44º C en vez de 37 ºC como lo hacen los totales.
10) ¿En qué consisten las pruebas IMVIC?
R.- Pruebas del IMVIC. Son cuatro pruebas bioquímicas. Se emplean
fundamentalmente para la identificación de las Enterobacterias (bacilos Gram
negativos, anaerobios facultativos con metabolismo fermentador).

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