roturas

Instituto Pedagógico Nacional

Informe de laboratorio
“Práctica de laboratorio de cultivo
In Vitro de semillas de Lulo y Uchuva”

Biotecnología

Dayana Milena Bejarano Muñoz

Grupo 3
Kelly Juliana Aragón Acuña
Luna Camila Correa Vélez
Valentina Gonzales Acero
Valentina Silva Mora
Juan Pablo Zambrano Chacón
1004

Martes 18 de Agosto 2015

Objetivo

 Preparar medios de cultivo In Vitro donde podamos sembrar semillas de

lulo y uchuva e identificar los beneficios y perjuicios de este

Introducción
El cultivo in vitro (término que literalmente significa en vidrio), incluye muchas
técnicas destinadas a introducir, multiplicar y regenerar, entre otros recursos,
material vegetal o animal en condiciones controladas y asépticas. Los medios de
cultivo están constituidos por sustancias minerales, vitaminas, aminoácidos,
azúcares, reguladores del crecimiento y otros elementos.

El cultivo de células, tejidos y órganos de la plantas in vitro se realiza en medios

de cultivos artificiales. El cultivo in vitro, constituye un paso fundamental en la
obtención y regeneración de plantas genéticamente modificadas, o transgénicas,
mediante técnicas de ingeniería genética. Es decir que existe una estrecha
relación entre el cultivo de tejidos vegetales y la biotecnología moderna.
Lo que hicimos en esta práctica de laboratorio fue sembrar semillas de Lulo y
Uchuva con estricto protocolo tanto de asepsia como de procedimiento para el
crecimiento de estas semillas

Pregunta problema:
¿Es posible cultivar semillas sin necesidad de tener tierra y pesticidas para evitar
que se contamine?

Hipótesis
Es posible cultivar material vegetal en un medio de cultivo artificial con condiciones
asépticas, es decir, en un cultivo In Vitro.
Referencias teóricas
Características biológicas del microorganismo objeto de trabajo
Lulo

Reino: Plantae

División: Magnoliophyta

Clase: Magnoliopsida

Subclase: Asteridae

Orden: Solanales

Familia: Solanaceae

Subfamilia: Solanoideae

Tribu: Solaneae

Género: Solanum

Subgénero: Leptostemonum

Sección: Lasiocarpa

Especie: S. quitoense

Uchuva:

Reino: Plantae

División: Magnoliophyta

Clase: Magnoliopsida

Orden: Solanales

Familia: Solanaceae

Subfamilia: Solanoideae

Tribu: Physaleae

Subtribu: Physalinae

Género: Physalis

Especie: Physalis peruviana

Características medios de cultivo utilizado

Características para su crecimiento y desarrollo en condiciones de

laboratorio
Una serie de experimentos demostró que la variación de los niveles de estos
nutrientes mejorada crecimiento sustancialmente en las formulaciones existentes.

Sales Principales (macronutrientes)

Nitrato de amonio (NH4NO3) 1650 mg / l
El cloruro de calcio (CaCl2 · 2H2O) 440 mg / l
El sulfato de magnesio (MgSO4 · 7H2O) 370 mg / l
Fosfato de potasio (KH2PO4) 170 mg / l
El nitrato de potasio (KNO3) 1900 mg / l

Sales de Menores ( micronutrientes )

El ácido bórico ( H3BO3 ) 6,2 mg / l
Cloruro de cobalto ( CoCl2 · 6H2O ) 0.025 mg / l
Sulfato cúprico ( CuSO4 · 5H2O ) 0.025 mg / l
Sulfato ferroso ( FeSO4 7H2O ) 27,8 mg / l
Sulfato de manganeso ( MnSO4 · 4H2O ) 22,3 mg / l
El yoduro de potasio (KI) 0,83 mg / l
Molibdato de sodio ( Na2MoO4 2H2O) doce y veinticinco mg / l
Sulfato de zinc ( ZnSO4 · 7H2O ) 8,6 mg / l
Na2EDTA 2H2O 37,2 mg / l
Desarrollo práctico:

Protocolo de desinfección
Antes de realizar cualquier proceso en el laboratorio es necesario:

 Despejar el medio donde se va a trabajar.

 Limpiar adecuadamente el lugar de trabajo con alcohol antiséptico o
hipoclorito de sodio (cloro).
 Retirar excesos con una toalla.

Protocolo de asepsia
Antes de ingresar al laboratorio es necesario contar con los implementos de
asepsia y cuidado personal como lo son:

 Bata de laboratorio
 Guantes de látex
 Gorro de laboratorio
 Tapabocas

Para la realización de este medio de cultivo artificial se necesitan los siguientes

materiales:

 Frascos de compota
 Semillas de Lulo y uchuva
 Papel vinipel
 Papel aluminio
 Erlenmeyer
 Agar nutritivo
 Pinzas
 Balanza
 Mechero
 Vidrio de reloj
 Espátula
 Agua destilada
 Medidor de pH
 Autoclave
 Cámara de flujo laminar
 Caja de Petri
 Soluciones Stock (A-I)
Ahora, teniendo estos materiales, se procede a iniciar con la práctica:

Preparación del agar

Primero procedimos a limpiar nuestro lugar de trabajo con cloro. Ahora se necesita
saber cuánto agar nutritivo debe ir en cada compota, teníamos en total 14 tarros
de compota, entonces con una regla de tres hicimos el cálculo:

1000ml---------20gr 20x280/1000
280gr-------------x X = 5,6ml

Este volumen era el que debía de ir cada tarro de compota, pero le falta agregarle
micro y macro nutrientes, entonces mediante las soluciones stock se las
agregamos
Sales Concentración Concentración en F Cantidad en Stock

MgSO4 7 H2O 1.72ml 370ml

MnSO 4 H2O 1.72ml 22.3ml 5 = 2,5 ml
ZnSO 7 H2O 0.86ml 8,6ml
CuSO4 5 H2O 0.03ml 0.025ml

Esterilización de los medios de cultivo

Teniendo ya cuanto necesitamos para la preparación del agar, se dispensa en el
elenmeyer y se mezcla. Ya homogénea la mezcla se pone al mechero hasta hervir
y se dispone a auto clavar junto con los tarros de compota para que queden
totalmente esterilizados sin ningún agente contaminante.

Después de auto clavarse se dispensa la mezcla del Erlenmeyer a los tarros de

compota según el volumen de los cálculos (5.6ml de solución de agar nutritivo
para cada tarro). Después de dispensarlos en cada tarro de compota, se tapa con
papel aluminio y se auto clava otra vez, pues al momento de dispensarlos se
pudieron contaminar.

Después de auto clavar los tarros de compota con la solución de agar nutritivo se
lleva al congelador, para que se solidifique y poder plantar las semillas
Para la siembra de las semillas, estas deben de pasar por un protocolo de
desinfección para su plantación:

 Primero se sacan de la fruta y se colocan en las cajas de Petri con agua

destilada para quitarle los restos vegetales (Pulpa de fruta)

 Lavar con isodine solución durante un minuto y después lavar otra vez con
agua destilada

 Lavar con isodine espuma y después volver a lavarlo con agua destilada

 Después se lava con hipoclorito al 3% durante tres minutos para quitarles

su membrana protectora y poder romper la testa (Enraizar) y lavar con agua
destilada 4 veces.

 Terminado el procedimiento de desinfección, se colocan en una caja de

Petri y se tapan.

Siembra de las semillas

Después de esterilizar la semilla, se dispone a sembrarlas en la cámara de flujo en

los tarros de compota totalmente esterilizados y con el medio en su fondo ya
congelado

 Lo primero que hacemos para la siembre es esterilizar las pinzas

utilizando alcohol y calor.

 Después de la esterilización nos preparamos para la siembra antes

de tocar las semillas toca enfriar las pinzas con el agua destilada.

 Lo siguiente es coger las semillas de lulo o de uchuva y colocarlas

en el agar.

 Por último después de tener 5 semillas en cada frasco se forran en

papel vinipel y se pasan al están.
Seguimiento y resultados

Después de 4 semanas de haber realizado el sembrado de las semillas en el

medio de cultivo in vitro, se observó que no había cambio alguno en el medio de
cultivo ni en el tarro de compota, pero en algunos casos se observa rotura de testa
en algunos cultivos de Lulo y Uchuva y se observa presencia de agentes
contaminantes en forma de levadura de color rojo debajo de una semilla de Lulo
con rotura de testa en uno de los cultivos.

Conclusiones de la práctica

Mediante este proceso de siembra en medio de cultivo in vitro se evidenció que si

es posible hacer una siembra de tejidos vegetales en un medio de cultivo sintético
en donde el individuo puede crecer y desarrollarse totalmente libre de agentes
contaminantes y sin necesidad de tener tierra y gastar recursos en su crecimiento.

Bibliografía

 https://es.wikipedia.org/wiki/Solanum_quitoense
 https://es.wikipedia.org/wiki/Physalis_peruviana
 https://en.wikipedia.org/wiki/Murashige_and_Skoog_medium