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INFORME DE PROPAGACION IN VITRO DE LA ESPECIE: Stevia

rebaudiana EN EL LABRATORIO DE BIOTENCOLOGIA DE LA FCA.

I. INTRODUCCION

Para el cultivo in vitro de células, tejidos u órganos hay una serie de factores que hay
que tener en cuenta. El medio de cultivo debe tener los nutrientes necesarios para que
las células vegetales puedan desarrollarse con normalidad: sales inorgánicas, una fuente
de carbono en el caso de no poder realizar fotosíntesis, vitaminas en algunos casos y
fitohormonas.

La biotecnología es la aplicación de los principios científicos y de ingeniera al


tratamiento de los materiales, por agentes biológicos, para producir bienes y servicios,
utilizando moléculas obtenidos biológicamente , estructuras, células u organismos para
llevar procesos específicas.

Uno de las aplicaciones de la biotecnología es la micropropagacion, lo cual sirve para la


multiplicación de plantas libres de enfermedades, lo cual es uno de los factores para
incrementar la producción y la productividad de un determinado cultivo.

Para este fin necesitamos de un protocolo de los principales procesos para la


preparación de los medios y unas reglas imprescindibles como es hacer todo manipuleo
y en todo momento en condiciones de asepsia.

Para el cultivo in vitro de células, tejidos u órganos hay una serie de factores que hay
que tener en cuenta. El medio de cultivo debe tener los nutrientes necesarios para que
las células vegetales puedan desarrollarse con normalidad: sales inorgánicas, una fuente
de carbono en el caso de no poder realizar fotosíntesis, vitaminas en algunos casos y
fitohormonas.

Todo el trabajo depende de que medios estamos preparando, en que porcentajes, en


condiciones y mucho depende de la habilidad de la persona en manipular como el corte
la disección, la trasplantada en medio de cultivo y la asepsia.

En el presente informe se presenta todo el proceso de multiplicación a partir de la planta


madre, hasta trasferir a la cámara de incubación donde va permanecer más tiempo y en
condiciones controlados.
OBJETIVOS:
 Conocer, describir y realizar todo el proceso de multiplicación y propagación,
así como la siembra in vitro de plantas libres de enfermedades y en condiciones
de asepsia total.
 Poner en práctica los pasos y especificaciones técnicas que se aprendió en el
curso de Biotecnología Agrícola para el proceso de cultivo de tejidos in vitro.
 Familiarizare con los materiales, reactivos, y equipos que han de usarse en esta
práctica.

II. REVISION DE LITERATURA

 RÍOS RODRIGUEZ (1996). Sugiere que el término “cultivo de tejidos”


vegetales o de plantas se refiere al cultivo “in vitro” de cualquier estructura viva
de una planta, sean éstas una célula, un tejido o un órgano, bajo condiciones
asépticas.
El principio de cultivo de tejidos es simple: primer, es necesario asilar una parte
de la planta (explanta); segundo, proveer a la explanta de un medio ambiente
apropiado (medio de cultivo adecuado y condiciones físicas propias de la
especie) en el cual puede expresar su potencial intrínseco o inducido y, tercero,
se realiza el trabajo en condiciones asépticas.

 MURASHIGE ha establecido para la propagación “in vitro” una secuencia de


tres estados de cultivo:
Estado I
Llamado también estado de establecimiento, donde parte de la planta (explanta)
es desinfectado y cultivada asépticamente en un medio de cultivo,
produciéndose el crecimiento de la plántula o la proliferación de callos.
Estado II
Estado de multiplicación o micropropagación, caracterizado por el rápido
incremento del propágulo (plántulas). Plántulas obtenidas en este estado pueden
ser recicladas varias veces hasta obtener el número de plántulas requeridas.
Estado III
Estado de “maduración”, de endurecimiento o de preparación de la plántula
para el ambiente natural. En este estado se induce el enraizamiento de las
plántulas, es decir, la conversión de plántulas, al estado autotrófico.
 UNIOVI (2009). Menciona que el cultivo in vitro permite el crecimiento y
desarrollo de material vegetal en recipientes que lo separan del ambiente
exterior y lo mantienen en condiciones controladas y asépticas. Entre las
diversas técnicas de cultivo in vitro, la micropropagación consiste en la
producción clonal de vegetales a partir, generalmente, de ápices o explantos
nodales de una planta madre. La gran producción de nuevas plantas se ve
favorecida gracias al rápido crecimiento del material vegetal in vitro y a la
proliferación de tallos durante los subcultivos.

 CASTILLO ALICIA (S/F) refiere que la expresión cultivo in vitro de plantas,


significa cultivar plantas dentro de un frasco de vidrio en un ambiente artificial.
Esta forma de cultivar las plantas tiene dos características fundamentales: la
asepsia (ausencia de gérmenes, etc), y el control de los factores que afectan el
crecimiento. El avance alcanzado por las ciencias biológicas ha permitido en los
últimos años el estudio detallado de las plantas tanto a nivel celular como
molecular, y en condiciones de laboratorio es posible actualmente reproducir
todos los factores que puedan incidir en el crecimiento y desarrollo de las
plantas. Este principio general se aplica también al cultivo in vitro de plantas

 PEÑA(S/F) menciona que la micro propagación se basa en el concepto de


totipotencia celular y consiste de producir plantas por medio de las
estimulaciones de las capacidades naturales existentes, como el desarrollo de
brotes de yemas axilares o terminales (estacas).

 W.M. ROCA (S/F) afirma que el cultivo de tejidos, como técnica, consiste
esencialmente en aislar una porción de la planta (explante) y proporcionarle
artificialmente las condiciones físicas y químicas apropiadas para que las
células expresen su potencial intrínseco o inducido. Es necesario además
adoptar procedimientos de asepsia para mantener los cultivos libres de
contaminación microbiana.
III. MATERIALES Y METODOS
a. Ubicación: ubicado en el laboratorio de cultivos de tejidos invitro de la
Facultad de Ciencias Agrarias de la Universidad Nacional “Santiago
Antúnez de Mayolo” a 3100 msnm, en la ciudad de Huaraz.

b. Condiciones climáticas: como la práctica se realizó dentro del laboratorio


las condiciones ambientales son controladas que varían de 15 a 26 °C.
c. Materiales y equipos:
 Frascos con medio de cultivo
 Frasco con plantas madres
 Bisturí
 Pinzas
 Tijeras quirúrgicas
 Tachos
 Mechero
 Placas Petri
 Alcohol
 Algodones y/o franelas
 Bolsas y ligas para sellar los frascos

d. Procedimientos:

 Antes de empezar cualquier práctica en el laboratorio, y el proceso de


propagación, es obligatorio el uso de vestimenta apropiada para estas
prácticas: guardapolvo, mascarilla, guantes quirúrgicos (si fuese
necesario el caso).
 Posteriormente, desinfectarse las manos con agua, jabón, y concluir con
un poco de alcohol.
 Previamente se cuenta con un frasco de planta madres, de unos 40 días,
para realizar la micropropagación, previamente alistamos los materiales
necesarios y se enciende la cama
de flujo 15 minutos antes.
 Primer paso: elegir una planta
madre, con buenas características
físicas. En nuestro caso la especie
a propagar fue: Stevia rebaudiana.
 Se procede a desinfectar la pinza y el bisturí sumergiéndolo en alcohol
y pasándolo por el mechero de manera rápida y cuidadosa.
 Hacer uso de una pinza y extraer la planta madre del frasco con mucho
cuidado, cortando con una tijera en la base del tallo, Luego sacar con la
pinza, ponerlo en la placa petri sujetarlo y empezar a quitar las hojas
que estén de más; depositándolas en un tachito.

 Luego se sujeta del espacio entre yemas,


con la pinza y se procede a seccionar a la
planta madre extraído, en un tamaño de 2 a
3 mm, no menos porque el tallo forma callo
y por consecuencia ocasionará la muerte de
la yema.

 Posteriormente se procede a la siembra, previa desinfección de la


pinza y el bisturí sumergiéndolo en alcohol y pasarlo por el mechero,
para luego continuar con la siembra en el medio de cultivo.
 Pinchar con la punta del bisturí
la parte seccionada y colocarlo en el frasco
con agar, sumergirlo no todo y retirar el
bisturí, poner la planta tomando en cuenta la
dirección de las yemas. Este proceso se hace
con el frasco a u a
inclinación de 45º
para facilitar el
proceso de siembra.
 Colocar en el frasco o
sembrar 05 plantas por frasco con un
distanciamiento apropiado entre plantas para
el éxito del proceso de propagación. El
distanciamiento nos lo da la encargada del
laboratorio. Evitar la siembra muy tupida y
seleccionar si son tallos y meristemos para la
uniformidad.

 Repetir la operación en un segundo frasco


hasta completar la cantidad de plantas
requeridas (10 plantas por persona).
 Posteriormente sellar el frasco de manera
hermética con algún plástico y una liga para
ejercer presión.
 Después, anotar en el frasco la especie
propagada, nombre del practicante y fecha.

 Luego se procede a pasar en el área de incubación


donde va permanecer por 40 días en un ambiente
controlado; entre ellos: c la temperatura, humedad
relativa, flujo de aire y la intensidad de luz.

c. Evaluación
Se va evaluar el porcentaje de prendimiento de los 10 micro estacas obtenidos
mediante la disección hecho y puestos para cada frasco cada cierto tiempo (15
días aproximadamente), visitando el laboratorio de biotecnología, y ver la
evolución y éxito de nuestra práctica.

IV. CONCLUSIONES

 Se logró aprender satisfactoriamente y realizar personalmente todo el


procedimiento y pasos que se ha de usar para el proceso de multiplicación y
propagación, así como la siembra in vitro de plantas de Stevia rebaudiana;
libre de enfermedades y en condiciones de asepsia total.
 Se puso en práctica y se desarrolló todos los pasos y especificaciones
técnicas que se aprendió en el curso de Biotecnología Agrícola para el
proceso de cultivo de tejidos in vitro.
 Después de realizar ésta práctica, nos familiarizamos e identificamos de
manera más sencilla y científica con los materiales y equipos presentes y
que conforman el laboratorio de cultivo de tejidos in vitro de la FCA.

V. RECOMENDACIONES

 En cuanto al proceso de siembra, se recomienda inclinar siempre el frasco con


el medio de cultivo para facilitar este proceso, además de no emitir mucha
presión, porque se estaría dañando la textura y estructura del medio de cultivo.
 Se recomienda realizar todos los pasos de acuerdo a las indicaciones exactas y
precisas de la encargada de orientación del laboratorio.
 También es recomendable, antes de realizar cualquier trabajo en el laboratorio,
desinfectarse las manos con agua y jabón, y colocarle los implementos y la
indumentaria necesaria y obligatoria para realizar prácticas de esta naturaleza y
especialidad.
 Es recomendable, hacer uso de los materiales y equipos con sumo cuidado, para
así evitar problemas o accidentes; producto de un mal manejo y administración
de algún equipo.
VI. BIBLIOGRAFIA

 JORGE ALBERTO RÍOS RODRÍGUEZ (1996). Biotecnología - micro


propagación de la Ananas comosus “piña” familia: Bromeliaceae. Plan de
negocios acorde a la realidad peruana

 Mejía Anaya (1988). Utilización de tecnología local y foránea para la micro


propagación.

 Roca, W.M., L.A. Moroginski (Ed.) 1991. Cultivo de tejidos en la agricultura:


fundamentos y aplicaciones CIAT-Colombia.

 Organización de las Naciones Unidas para la Agricultura y la Alimentación


(FAO). 1996. Técnicas convencionales y biotecnológicas para la propagación
de plantas de zonas áricas. Editores, Juan Izquierdo, Oficial Regional de
Producción Vegetal - Oficina Regional de la FAO para América Latina.
Santiago de Chile. Chile.

 W.M.ROCA (S/F). Principios básicos, metodologías y técnicas del cultivo de


tejidos vegetales