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produccion in vitro de violeta africana

produccion in vitro de violeta africana

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56

Zamorano
Carrera de Ciencia y Producción Agropecuaria Laboratorio de Cultivo de Tejidos y Micropropagación

Módulo de Biotecnología Aplicada Cultivo de Tejidos Vegetales y Propagación in vitro
5.5
Explante: Material Vegetal:

Organogénesis Directa
Porciones de Lámina Foliar Violeta Africana (Sainpaulia ionantha)

Introducción
En la micropropagación de violeta africana (Saintpaulia ionantha) y otras gesneriáceas (Episcia, Ajuga) dos tipos de explante han dado buenos resultados: tejido de pecíolo y de hojas. El propósito de esta práctica de laboratorio es familiarizar a los estudiantes con los procedimientos de extracción, esterilización, y establecimiento in vitro de explantes de violeta africana.

Materiales y Métodos
1. Hojas maduras de violeta africana (para la práctica de establecimiento) 2. Material establecido in vitro en etapas II ó III (para las prácticas de multiplicación y/o enraizamiento) 3. Material en etapa III, listo para salir al invernadero 4. Platos Petri estériles 5. Pinzas y bisturíes No. 11 6. Solución de 70% Ethanol 7. “Solución desinfectante” preparada con 2% Ca(OCl) (hipoclorito de Ca) más 2 gotas de tween 80 por cada 100 ml de solución. 8. Agua destilada estéril para los enjuages 9. 10 frascos / estudiante conteniendo medio para establecimiento de violeta (Etapa I) 10. 10 frascos / estudiante conteniendo medio para multiplicación / enraizamiento de violeta africana (Etapas II y III) 11. Bandejas multiceldas y microinvernaderos para la práctica de aclimatación (Etapa IV) 12. Macetas para la transferencia a contenedores individuales

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Procedimientos
1. Obtenga varias hojas maduras de violeta africana con aproximadamente 2 a 3 cm. de pecíolo. 2. Coloque las hojitas en un beaker, cubra con gasa y ajuste con una banda. 3. Remueva las partículas superficiales de polvo y rastros de suelo poniendo el beaker con los segmentos directamente bajo el chorro de agua de la llave durante 15 min. (usar agua fría). 4. Limpie la cámara de flujo laminar y el espacio donde va a trabajar con 70% ethanol. 5. Luego del enjuage bajo el agua de la llave, manipule las hojas solamente con las pinzas, no con las manos. Separe los pecíolos de las láminas y coloquelos en un beaker para proceder a su desinfección. 6. Coloque los explantes en una solución de 70% ethanol durante 15 segundos. 7. Transfiera los explantes a la “solución desinfectante” y mantenga los dos tipos de explante en esta solución durante15 minutos. 8. Transfiera el beaker con las hojas y los pecíolos en la “solución desinfectante” a la cámara de flujo laminar. Vacíe la solución desinfectante en otro recipiente. 9. Enjuague las hojas tres veces con agua destilada estéril. 10. Luego del último enjuage en agua destilada estéril, coloque las hojas en un plato petri estéril conteniendo papel filtro. 11. Con la ayuda de pinzas y bisturí proceda a cortar los explantes según demostración del instructor. 12. Coloque uno de los explantes de hoja en un tubo con medio. Repita para los otros tubos provistos. 13. Coloque uno de los explantes de pecíolo en un tubo con medio. Repita para los otros tubos provistos. 14. Sellar los tubos con parafilm y anotar la fecha y el nombre según instrucciones. 15. Colocar los cultivos en el cuarto de crecimiento (16 horas luz; 25oC).

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Violeta Africana Etapa I (Secciones de Hoja y Peciolo)
Componente ½ Macroelementos MS EDTAFeNa Microelementos MS Inositol Acido nicotinico Glicina Tiamina BAP Sacarosa Phytagel pH = 5.8

1 Litro 50 ml (Solución madre 10x) 50 mg (5 ml de Solución madre 200x) 1 ml (Solución madre 1000x) 100 mg 0.25 mg 1.0 mg 0.05 mg 0.5 mg 30 g 3.75 g

Referencia: protocolo desarrollado en el Laboratorio de Cultivo de Tejidos y Micropropagación, Zamorano

Etapa II (Secciones de Hoja y Peciolo)
Componente ½ Macroelementos MS EDTAFeNa Microelementos MS Inositol Tiamina AIA Sacarosa Phytagel pH = 5.8 1 Litro 50 ml (Solución madre 10x) 50 mg (5 ml de Solución madre 200x) 1 ml (Solución madre 1000x) 100 mg 0.4 mg 1.0 mg 15 g 3.75 g

Referencia: protocolo desarrollado en el Laboratorio de Cultivo de Tejidos y Micropropagación, Zamorano

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Violeta Africana Etapa I, II, III (Secciones de Hoja)
Componente ½ Macroelementos MS EDTAFeNa Microelementos MS NaH2PO4 Inositol Piridoxina Niacina Tiamina BAP AIA Sacarosa Phytagel pH = 5.5

1 Litro 50 ml (Solución madre 10x) 50 mg (5 ml de Solución madre 200x) 1 ml (Solución madre 1000x) 170 mg 100 mg 0.4 mg 0.4 mg 0.4 mg 0.08 mg 2.0 mg 30 g 3.75 g

Referencia: Kyte, L. Plants from test tubes. An introduction to micropropagation.

Etapa I,II,III (Secciones de Peciolo)
Componente ½ Macroelementos MS EDTAFeNa Microelementos MS NaH2PO4 BAP Sacarosa Phytagel pH = 5.5

1 Litro 50 ml (Solución madre 10x) 50 mg (5 ml de Solución madre 200x) 1 ml (Solución madre 1000x) 170 mg 0.01 mg 15 g 3.75 g

Referencia: Kyte, L. Plants from test tubes. An introduction to micropropagation.

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