Universidad Tecnolgica

del Usumacinta
Divisin Acadmica de Procesos Alimentarios, Biotecnolgicos y Paramdico

PRESENTA
T.S.U. Rebeca Daz Cruz
T.S.U. Amairani Cristel Prez Cambrano
T.S.U. Karla Fabiola Garca Garca
T.S.U. Griselda Azcuaga
T.S.U. Juan Carlos Madariaga Jimnez
T.S.U. Nicols reyes peralta
T.S.U. Romn Correa Reyes

9 Cuatrimestre de Ingeniera en Procesos Biotecnolgicos

Practica de cultivo in vitro de

semilla de naranjo agrio

Catedrtico
MT. Sergio Ramos

Unidad IV: Cultivo de anteras y polen

28 de junio de 2016
Emiliano Zapata, Tabasco
 Introduccin

El propsito de la biotecnologa verde es mejorar cultivares, de tal manera

que se adapten a condiciones climticas extremas, manipulando
(tecnolgicamente) especies vegetales para generar conocimiento, bienes y
servicios.

Es importante saber que mediante la utilizacin de la tcnica cultivo in

vitro se permite el crecimiento y desarrollo de material vegetal de tal manera
que los separan del ambiente exterior y los mantienen en condiciones
controladas y aspticas. En el caso de los ctricos la biotecnologa vegetal
mediante esta tcnica realiza un mejoramiento gentico in vitro, permitido as la
produccin de naranjas agrias con mejor vigor gentico y resistencia a plagas y
enfermedades. Para ello las plantas son utilizadas en esta rea ya que son los
grandes fabricantes de oxgeno, componentes clave de los ciclos biolgicos
bsicos (ciclo del agua, formacin del suelo) as como tambin son la fuente
principal de energa y material orgnico en los ecosistemas.

Mediante esta tcnica la gran produccin de nuevas plantas se ve

favorecida gracias al rpido crecimiento del material vegetal in vitro y a la
proliferacin de tallos. La naranja agria es originaria de China y su rbol es el
ms cultivado en el mundo, tanto as que su produccin representa cerca del
60% del total de la produccin de ctricos a nivel global. Mxico ocupa el sexto
lugar mundial en produccin, proporcionando fruta para consumo local y para
exportacin. Sin embargo, las enfermedades de los ctricos causadas por virus,
vroides, micoplasmas y otros patgenos ocasionan una disminucin
vegetativa, productiva y duracin de la planta, representan una grave limitante
para la citricultura mexicana, produciendo graves prdidas econmicas.

En el presente trabajo se desarroll la metodologa para la regeneracin

in vitro de naranja a partir de la organognesis directa (embriones de semillas
de la naranja).
 Objetivos

Preparar medios de cultivo para la realizacin de siembra de semillas

naranja agria.
Conocer las tcnicas de micropropagacin de tejidos vegetales.

Materiales

MATERIALES DE
EQUIPO MEDIOS DE CULTIVOS
LABORATORIO
Vaso precipitado de 500
Balanza Analtica. Medio Agar.
ml.
Medio MS (Murashige y
1 probeta de 150 ml. Potencimetro.
Skoog)
2 Mecheros. Placa de Calentamiento. Sacarosa.
10 Frascos de vidrio
estriles.
2 Cuchillos.
1 Agitador magntico.
1 Matraz Erlenmeyer de
250 ml.
2 Bisturs.
Egapack.
Ligas.
1 Jabn lquido.
1 Cloro de 250ml.
1 Perilla.
2 Pipetas de 25 ml.
5 Naranjas.
Papel estraza.
Bolsas de plstico.
2 pares de Guantes.
2 Cubre bocas.
 Metodologa

1. Preparar el medio de cultivo (El medio de cultivo utilizado para la

germinacin consisti de las sales del M.S. adicionado con 3% de
sacarosa, fue solidificado con agar al 0.75% y ajustado el pH a 5.7 antes
de esterilizar en la autoclave).
2. Esterilizar los materiales.
3. Dejar los medios de cultivo en refrigeracin.
4. Una vez listo los materiales para la siembra, desinfectar la naranja con
una solucin de hipoclorito de sodio al 10% por 15 minutos.
5. Limpiar la campana de flujo laminar con etanol al 70%, dejarlo reposar
por 10 minutos, posteriormente limpiar con una solucin de hipoclorito
de sodio al 1% por 15 minutos.
6. Prender la UV visible de la campana de flujo laminar por 10 minutos.
7. Transcurrido este tiempo, en la campana de flujo laminar, cortar la
naranja y se lavar las semillas con hipoclorito al 10% por 10 minutos
antes de la siembra asptica.
8. Abrir las semillas para obtener los embriones.
9. Sembrar aspticamente los embriones en los botes contenidos con 20
ml de medio de cultivo M.S. slido, 3 semillas por frasco.
10. Llevar al cuarto de incubacin y mantener en completa oscuridad.
 Resultados

Ilustracin 1.- Crecimiento de las plntulas de naranja agria (Citrus

aurantium) en medio Murashige & Skoog (MS)

Como se muestra en las imgenes anteriores, la germinacin de los

embriones de naranja agria es un xito, al utilizar la metodologa antes descrita
con el medio adecuado, los componentes necesarios y las condiciones
climticas y de luz se puede observar crecimiento de las plntulas a la semana
de ser sembradas, y a las dos semanas de su siembra las plntulas tienen un
tamao de 2-4 cm de largo.
 Ilustracin 2.- Enraizamiento de las plntulas de naranja agria (Citrus
aurantium) en el medio Murashige & Skoog (MS)

En la imagen antes observada se puede notar que hay crecimiento de

races de las plnulas estas miden aproximadamente 2-3 cm de largo, en el
medio Murashige & Skoog (MS) se puede lograr la germinacin de los
embriones y el enraizamiento de las plntulas de Naranja agria (Citrus
aurantium).
 Conclusin

En este trabajo se emplearon semillas de naranjo agrio Citrus aurantium

para establecer una metodologa para cultivo in vitro. La principal dificultad
reside es en la obtencin del explantes, debido que se debe abrir
cuidadosamente las semillas para extraer el embrin.

Para obtener un crecimiento sano de las semillas de naranjo agrio Citrus

aurantium, la prctica se llev bajo una rigurosa serie de reglas para
mantener las condiciones aspticas y evitar las contaminaciones, como el
limpiar tanto con alcohol etlico e hipoclorito de sodio la campana de flujo
laminar, as como el uso del UV Visible. Tambin se puede concluir que el
lavado de las semillas con hipoclorito de sodio al 10% logro su supervivencia y
evitar cualquier contaminante que pudiera generarse durante el periodo de
incubacin.

Adems, se comprob que para la germinacin de los embriones no

fue necesaria la adicin de reguladores del crecimiento en el medio de
cultivo.
 Anexos

Ilustracin 1. Preparacin del material a utilizar en el cultivo in vitro.

Ilustracin 2. Preparacin del Ilustracin 3. Preparacin del

material vegetativo. material vegetativo. Extraccin
del embrin.
Ilustracin 4 y 5. Proceso de siembre del embrin de naranja agria en el
medio de cultivo.

Ilustracin 6 y 7. Guardado y etiquetado para dejarlo en la sala de

incubacin por dos semanas, hasta que obtengan races.
 Bibliografa

- Vega, J. (enero, 1997). Regeneracin in vitro de naranjo agrio (Citrus

mrantium Linn). Universidad Autonoma de Nuevo Len. San Nicols
de los Garza, Nuevo Len, Mxico.

- Dolce, N., Scocchi, A. & Mroginski, L. (2003). Regeneracin in vitro de plantas

citricas. Universidad Nacional del Noroeste. Corrientes, Argentina.
Recuperado en:
http://www.unne.edu.ar/unnevieja/Web/cyt/cyt/2003/comunicaciones/
05-Agrarias/A-040.pdf