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PRÁCTICA N° 6.
“ESTABLECIMIENTO DE EMBRIONES VEGETALES”
1María Isabel Peña Mora – 1610958; 2María Gabriela Mora Contreras – 1610851;
3Camilo Andrés Peña Pinilla – 1610934.
Universidad Francisco de Paula Santander

Facultad de Ciencias Agrarias y del Medio Ambiente
Ingeniería Biotecnológica
Biotecnología Vegetal
Diciembre-2018
Dirigido a: Alina Sigarroa Rieche
INTRODUCCIÓN
En la reproducción sexual las plantas se reproducen en mayor parte mediante semillas,
recurriendo este método de reproducción para garantizar la dispersión y perpetuación, en la
reproducción sexual las plantas dan lugar a individuos que comparten características genéticas
procedentes de ambos progenitores, lo que suministra la viabilidad genética necesaria para la
adaptación continua de una especie a su medio ambiente, dentro de ello se clasifican sus divisiones
en las cuales están en su totalidad a especies de interés forestal y son Gimnospermas y
Angiospermas. Una vez producida la fecundación comienza el desarrollo del embrión a partir del
zigoto que es un complejo bastante complejo la semillas de la mayor parte de especies se
encuentran encerradas en el interior de los frutos hasta llegar a la madurez. La semilla tiene 3
partes básicas embrión, endospermo y perispermo.
 Embrión: elemento esencial de la semilla ya que es el germen de la planta, en el se
diferencia el primordio de la raíz “radícula” y el meristemo apical “plúmula o epicotilo” y
los cotiledones fijados en el eje embrionario “hipocotilo”

 Endospermo: tejido de almacenamiento de sustancias nutritivas representándose en forma
de un tejido organizado (semillas endospermicas albuminosas) o es sustituido por
cotiledones como órganos de reserva.
 Perispermo: tejido diploide procedente de la nucela que se presenta en diversas cantidades
en las semillas de algunas especies. (Navarro R, 2012)
La embriogénesis somática consiste en la producción de embriones a partir de células
puramente somáticas cultivadas in vitro y en total ausencia del proceso de fecundación. La
aplicación más inmediata de la embriogénesis somática en las plantas es debida a su enorme
capacidad de regeneración de plantas, de lo cual se deriva su potencial para la propagación in vitro.
Constituyendo una excelente herramienta para el estudio del proceso de formación de los
embriones y para el desarrollo de aplicaciones enfocadas a la mejora genética de las plantas. (Rey
M, 2015)
OBJETIVOS
 Continuar desarrollando habilidades en el trabajo de cultivo de tejidos, especialmente en
la disección y siembra en área estéril.
 Desarrollar la regeneración de plantas vía embriogénesis somática (etapa 1) y cigotica.
MATERIALES Y MÉTODOS
 Kit básico de laboratorio.
 Material vegetal
 Semillas de tomate, frijol y maíz tierno.
 Materiales
 Gasa estéril (6 fragmentos).
 Hipoclorito de sodio.
 Probetas de 25 ml, 250 ml.
 Alcohol al 70%.
 Frascos de vidrio estéril (3/grupo).
 Beakers 250ml (2/grupo).
 Frascos de agua destilada estéril (12/grupo).
 Detergente.
 Medios de cultivos preparados MD – MH – MS – MZ.
 Instrumentos de disección [pinzas, escalpelos, agujas, etc.(3 juegos estériles)].
 Estereomicroscopio.
 Erlenmeyer de 100 ml.
 Bureta graduada.
 Pipeta de 1ml.
 Almidón al 1%.
 KI.
 Tiosulfato de sodio al 0,1N
 Ácido acético glacial o Ácido sulfúrico al 0.5 N.

METODOLOGÍA
Preparar semillas por especie (tomate-maíz-

FASE PREPARATIVA
frijol). Preparar 15-20/especie/estudiantes
SOLUCIONES DE DESINFECCIÓN
 Solución jabonosa.
 50 ml alcohol al 70%.
 50 ml de hipoclorito de sodio al 3%.
ÁREA NO ESTERIL.
PROCESO DE Dejar los embriones 5 minutos en solución
PREDESINFECCIÓN Y jabonosa (2 enjuagues con agua de grifo).
DESINFECCIÓN PARA Después, enjuagar 3 veces con agua destilada
SEMILLAS DE estéril. Seguidamente, dejar por 5 minutos en
TOMATE solución de alcohol al 70%.
PASAR AL ÁREA ESTERIL

Enjuagar 3 veces con agua destilada estéril,
adicionar 3 gotas de tween 80° al hipoclorito de
sodio al 2% y dejar los explantes por 10 minutos
en esta solución.
PASAR AL FLUJO LAMINAR

Enjuagar 3 veces con agua esteral. Luego
proceder a sembrar en el medio de cultivo
correspondiente.
PROCESO DE ÁREA NO ESTERIL.
PREDESINFECCIÓN Y
Dejar las semillas por 5 minutos en solución
DESINFECCIÓN PARA
jabonosa (2 enjuagues con agua de grifo).
EMBRIONES DE FRIJOL Y
Después, enjuagar 3 veces con agua destilada
MAÍZ Y FRIJOL
estéril. Seguidamente, dejar por 3 minutos en
solución de alcohol al 70%.
PASAR AL ÁREA ESTERIL

Enjuagar 3 veces con área destilada estéril,
adicionar 3 gotas de tween 80° al hipoclorito de
sodio al 2% y dejar los explantes por 3 minutos
en esta solución.
PASAR AL FLUJO LAMINAR

Enjuagar 3 veces con agua esteral. Luego
proceder a sembrar los embriones en el medio
de cultivo correspondiente.
FASE DE Dentro de la cabina de flujo laminar con

ESTABLECIMIENTO ayuda de la pinzas se deben sembrar 4
PARA SEMILLAS DE explantes/frasco en el medio de cultivo que
TOMATE Y EMBRIONES corresponda a cada especie sembrando 2
DE FRIJOL Y MAIZ frascos por persona. Proceder a cerrar los
frascos con envoplast.
Salir de la cabina y rotular de la siguiente
manera: MEDIO DE CULTIVO, FECHA DE
LA SIEMBRA Y NOMBRE
Ubicar los explantes sembrados de frijol en el

cuarto de incubación y crecimiento dentro de la
caja envuelta previamente en aluminio, y dejar
los embriones sembrados de maíz y tomate en
los stands, dándole condiciones adecuadas de
crecimiento y desarrollo al explante.
REVISIÓN DE LA SIEMBRA
Después del sembrado se deben evaluar los resultados de manera semanal hasta completar
30 días, es decir, 4 semanas de evaluación. Seguir las instrucciones del docente.
RESULTADOS
Tabla 1. Evaluación general de semillas de tomate (30 días).
DÍ CONTAMINACIÓN MUERTE CRECIMIENTO

AS DEL
Endógena Exógena EXPLANTE Caulogénesis Rizogénesis
(%) (%) (%)
Brotació Longitu N° de N° de Longitu
n (%) d (cm) hojas raíces d (cm)
7 0 0 0 0 0 0 0 0.05
14 16.6 16.6 0 62.5 1.8 2 2 2.4
21 16.6 16.6 0 90 3.5 3 6 5
30 16.6 16.6 0 100 6.6 6 9 7.6
Se aprecia en la tabla 1 los resultados generales de la fase de establecimiento que confieren al tipo
de contaminación, muerte del explante y tipo de crecimiento que se obtuvo de la siembra en
medios de cultivo que contenían semillas de tomate.
Se pueden observar valores de contaminación endógena y exógena, siendo la contaminación
endógena a los 7 días del 0%, aumentando a los 14 días al 16,6 % manteniéndose en ese rango
hasta terminar su evaluación. En cuanto a la contaminación exógena, los porcentajes de
contaminación fueron iguales que los de la contaminación endógena en los mismos periodos de
tiempo. Lo anterior establece que hubo un manejo del material relativamente estable al igual que
esterilización del lugar donde se efectuó la práctica, pero que por presencia de otros cultivos cuya
procedencia y estado fitosanitario se desconoce en el cuarto de siembra ajena a los cultivos
nombrados, posiblemente fueron la causa de la contaminación del medio de cultivo.
Además, se observa que los diferentes explantes tuvieron una formación caulinar que fue
aumentando relativamente semana a semana hasta crecer un 100% del total de brotes sembrados,
con una longitud de 6 cm aproximadamente; obteniendo un promedio final de 4 hojas por brote.
Así como se obtuvo crecimiento caulinar, los explantes presentaron Rizogénesis, con una longitud
aproximada de 5 cm y un número de raíces considerable.

Tabla 2. Evaluación general de embriones de maíz (30 días).
DÍ CONTAMINACIÓN MUERTE CRECIMIENTO

AS DEL
Endógena Exógena EXPLANTE Caulogénesis Rizogénesis
(%) (%) (%)
Brotació Longitu N° de N° de Longitu
n (%) d (cm) hojas raíces d (cm)
7 0 0 0 100 1.2 0 1 1.1
14 0 16.6 0 100 3.6 1 1 2.4
21 5 16.6 0 100 4.5 2 2 4.1
30 5 16.6 0 100 7.6 2 4 7.2
En la tabla 1 se establecieron los resultados generales de la fase de establecimiento que se
obtuvo de la siembra en medios de cultivo que contenían embriones de maíz.
Se pueden observar valores de contaminación endógena y exógena. Para la contaminación
endógena en sus dos primeras semanas este tipo de contaminación fue del 0%, aumentando a los
21 días al 5 % manteniéndose en ese rango hasta terminar su evaluación. En cuanto a la
contaminación exógena, los porcentajes fueron del 0% a los 7 días y los días posteriores fueron
del 16.6%. Lo anterior establece que hubo un manejo del material relativamente estable al igual
que esterilización del lugar donde se efectuó la práctica, pero que por presencia de otros cultivos
cuya procedencia y estado fitosanitario se desconoce en el cuarto de siembra ajena a los cultivos
nombrados, posiblemente fueron la causa de la contaminación del medio de cultivo.
También, se observa que los diferentes explantes tuvieron una formación caulinar que desde la
primera semana hasta la última fue del 100% explantes sembrados, con una longitud de 4.5 cm
aproximadamente; obteniendo un promedio final de 2 hojas por brote. Así como se obtuvo
crecimiento caulinar, los explantes presentaron Rizogénesis, con una longitud aproximada de 5 cm
y 3 raíces promedio por explante.
Tabla 3. Evaluación general de embriones de frijol (30 días).
DÍAS CONTAMINACIÓN MUERTE CALLOGÉNESIS

DEL
Endógena (%) Exógena (%) EXPLANTE (%)
7 4.1 16.6 0 0
14 12.5 16.6 0 66.6
21 12.5 16.6 0 100
30 12.5 16.6 0 100
En esta tabla se puede observar los resultados generales de la fase de establecimiento que
confieren a la contaminación, muerte del explante y Callogénesis que se obtuvo de la siembra de
un medio de cultivo que contenían embriones de frijol, donde representa valores de contaminación
endógena y exógena, siendo la contaminación endógena del 4.1% a los 7 días y posteriormente
aumentó al 12.5% en hasta terminar su evaluación. En cuanto a la contaminación exógena se
estableció un porcentaje de 16.6% en todas las semanas de evaluación.
Con respecto a la formación de callos, en la primera semana no se observó ninguna formación
de los mismos. A partir de la segunda semana vio un 66.6% de formación aumentando al 100% en
la semana 3 y manteniéndose así hasta terminar su evaluación. Los callos que proliferaron tenían
una textura friable, es decir, se obtuvo la textura esperada en este tipo de siembra.
DISCUSIONES
Según los resultados obtenidos se puede observar que para el caso de la tomate se encontró
contaminación endógena procedente del material vegetal en esta caso obteniendo como resultado
una contaminación endógena del 16,6%, en cuanto a la contaminación exógena se obtuvieron los
mismos resultados lo que indica que en la siembra se manejó de manera aceptable todos los
parámetros establecidos para llevarla a cabo, evitando así, que estos tipos de contaminación
aumentaran significativamente. Lo anterior pudo ser debido a causas externas como material
contaminado de otros cultivos o también cuarto de siembra que se manifestó hasta esa fecha.
En cuanto a los embriones de maíz, sus resultados finales de contaminación endógena y
exógena fueron del 5% y 16.6% respectivamente. Al igual que el tomate, se considera que las
causas de estos agentes contaminantes son las mismas.
En los embriones de frijol, se presenció un porcentaje final de contaminación endógena del
12.5% que pudo ser debido a diferentes causas como la mala manipulación del material vegetal
antes de llegar al laboratorio y/o el proceso de desinfección que se realizó no se empleó de manera
adecuada. Cabe resaltar que no se estableció un gran número de explantes contaminados, que a
pesar de que se deben mejorar los factores de desinfección, fueron favorables para que estos
agentes contaminantes no se proliferaran de manera masiva.
La formación de callos presente en este laboratorio obtuvo un porcentaje final alto (100%),
esto, gracias a que los explantes eran de un tamaño adecuado y así lograron absorber los macro y
micronutrientes, al igual que las hormonas que favorecen este tipo de crecimiento presentes en el
medio de cultivo. Así como se obtuvo los callos esperados, su textura fue friable.
Para evitar estos tipos de contaminación se debe: conocer el material vegetal que se trabaja y
los posibles contaminantes específicos, realizar una adecuada preparación de planta donadora y
proceder a la desinfección superficial de los explantes mediante el uso de compuestos químicos
con el fin de eliminar los microorganismos con el menor daño a los explantes, emplear medios e
instrumentos de cultivos esterilizados, es decir, liberados de cualquier microorganismos para su
esterilización en la mayoría de los casos se hace uso de calor en diferentes formas “llama directa,
calor húmedo, calor seco”. Cultivar los explantes en una cámara de transferencia con área estéril
(gabinete de flujo laminar) localizado en un ambiente limpio y no expuesto a corrientes de aire,
incubar los cultivos en cámaras o cuartos de cultivo cerrados libres de corrientes de aire y bien
higienizadas, restringiendo la circulación de personas y los recipientes con cultivados
contaminados deben ser rápidamente eliminados de este sector. (Levitus G, Echenique V, et al,
2009).
CONCLUSIONES
 Se siguieron adquirieron las habilidades para llevar a cabo la siembra de manera asertiva
viendo los resultados obtenidos durante la práctica, ya que se observaron porcentajes de
contaminación aceptables, obteniendo un bajo resultado de contaminación endógena y
exógena para los explantes trabajados, donde no se tiene muerte celular.
 Se desarrolló correctamente la regeneración de plantas en la etapa de establecimiento de
embriones vegetales ya que se observó crecimiento caulinar con porcentajes favorables,
así como el enraizamiento para tomate y maíz, al igual que una óptima formación de callos
para frijol con una textura friable.

CUESTIONARIO
1. Señale la composición del medio de cultivo utilizado. Justifique por qué se usaron estas
hormonas.
Tabla 4. Medio de cultivo para embriones de frijol (etapa de establecimiento).
MEDIO DE ESTABLECIMIENTO DE FRIJOL
SOLUCIÓN CANTIDAD (L)
Macronutrientes 25 ml
Micronutrientes 1 ml
CaCl2 3 ml
IK 1 ml
Vitaminas 1 ml
Fe-EDTA 5 ml
Sacarosa 30 gr
Myo-Inositol 100 mg
Ácido ascórbico 25 mg
2,4 D 3 ml
TDZ 0.5 ml
pH 6.2
Agar 8.5 g/L
De acuerdo a los explantes usados y a la composición de este medio de cultivo para la siembra
de embriones de frijol, se debe obtener una formación de callos.

Estas hormonas se usan, debido a que el 2,4 D en bajas concentraciones, estimula la formación
de callos en los explantes y el TDZ tiene como función principal producir embriones somáticos.
Tabla 5. Medio de cultivo para embriones de maíz (etapa de establecimiento).
MEDIO DE ESTABLECIMIENTO DE MAÍZ
CaCl2 3 ml
IK 1 ml
Vitaminas 1 ml
Fe-EDTA 5 ml
Sacarosa 30 gr
Myo-Inositol 100 mg
AG 3 2 ml
pH 6.2
Agar 8.5 g/L

Tabla 6. Medio de cultivo para semillas de tomate (etapa de establecimiento).
MEDIO DE ESTABLECIMIENTO DE TOMATE
CaCl2 3 ml
IK 1 ml
Vitaminas 1 ml
Fe-EDTA 5 ml
Sacarosa 30 gr
Myo-Inositol 100 mg
AG 3 2 ml
pH 6.2
Agar 8.5 g/L
De acuerdo a los explantes usados y a la composición de este medio de cultivo para la siembra
de embriones de maíz y semillas de tomate, su crecimiento debe ser caulinar y se debe presenciar
la formación de raíces.
Estas hormonas se usan, debido a que las giberelinas (AG 3) estimulan el crecimiento entre
nudos (altura) de las plantas y el ácido ascórbico inhibe paulatinamente el crecimiento de la planta,
permitiendo que se conserve en este medio por un periodo de tiempo considerable.
2. A partir de este tipo de explante, ¿qué tipo de crecimiento o formación se debe desarrollar?
Al utilizar embriones de frijol y establecerlos en medios de cultivo con un balance hormonal
adecuado (auxinas/citoquininas) su formación es en forma de callo. Ya que este tipo de embrión
posee CSNE y su tipo de regeneración requiere varias divisiones mitóticas (embriogénesis
somática indirecta)
Para los explantes de tomate y maíz, su embrión o semilla posee CSDPE junto con el balance
hormonal correspondiente, su crecimiento fue caulinar y rizogénico (embriogénesis somática
directa).
3. ¿Por qué considera usted que se escogió como explante el tejido seleccionado? ¿Se puede
considerar este proceso como embriogénesis somática? Justifique su respuesta en cada
caso.
Estos explantes se escogieron ya que para llevar a cabo el proceso regenerativo de embriogénesis
somática se necesitan embriones que se vayan desarrollando desde su fase cero para completar el
crecimiento total de la vitroplanta, y debido a la poca disponibilidad de tiempo en el laboratorio,
se buscaron embriones completos de manera natural para poder apreciar cómo se debe llevar a
cabo la etapa de establecimiento en este método de regeneración.
Si establecemos el concepto de embriogénesis somática desde su fase cero, no se puede considerar
este proceso efectivo, ya que el embrión somático se debe desarrollar en el laboratorio en una
cápsula sintética. Ahora bien, si consideramos que se omite las diferentes fases de desarrollo de
un embrión de este tipo, se puede considerar que se llevó a cabo un proceso de regeneración de
embriogénesis somática aplicada a los explantes usados, ya que la composición del medio de
cultivo y las condiciones “in vitro” fueron las mismas establecidas teóricamente.
4. Los individuos resultantes serán libres de patógenos? Justifique su respuesta.

Si se sigue adecuadamente el proceso de desinfección y como operarios dentro del laboratorio,
se acatan las reglas propuestas en las zonas de siembra (esterilización y/o lavado de material y
extremidades corporales (manos)), estos explantes quedarán libres de cualquier agente
vitropatógeno.
5. ¿Los individuos resultantes serán idénticos genéticamente entre sí? Justifique su repuesta.
Hay una alta probabilidad de que estos individuos sean genéticamente iguales, ya que la
embriogénesis somática permite tener una estabilidad genética entre planta madre y vitroplantas
aisladas.
Pueden existir casos en donde por mal manejo de la metodología y/o propagación masiva con altos
índices de multiplicación de la planta madre se presenten alteraciones genéticas o una variación
somaclonal. De esta manera los individuos no serían genéticamente iguales.
6. ¿Los individuos resultantes serán idénticos genéticamente al que le dio origen (planta
madre)? Justifique su respuesta.
La embriogénesis somática permite mantener a los explantes una estabilidad genética
procedente de la planta madre, por ende, los individuos que crecieron gracias a la implementación
de este método de regeneración son idénticos genéticamente al que le dio origen, de acuerdo a
cada especie.
BIBLIOGRAFÍA
 Navarro R, 2012. Biología y descripción de semillas forestales. Reproducción sexual.
Semilla de especies forestales. Recuperado de:
http://www.juntadeandalucia.es/medioambiente/consolidado/publicacionesdigitales/80-
402_MATERIAL_VEGETAL_DE_REPRODUCCION__MANEJO_CONSERVACION
_Y_TRATAMIENTO/80-402/1_BIOLOGIA_Y_DESCRIPCION_DE_SEMILLAS.PDF
 Rey M, 2015. La embriogénesis somática, una herramienta para comprender la biología de
la vid. Recuperado de: http://www.campogalego.com/es/vina-es/la-embriogenesis-
somatica-una-herramienta-para-comprender-la-biologia-de-la-vid/
 Levitus G, Echenique V, et al, 2009. Establecimiento de cultivos de tejidos vegetales.
Asepcia. Cap 1.Biotecnologia y mejoramiento vegetal II. Recuperado de:
https://www.agroindustria.gob.ar/sitio/areas/escuelagro/_archivos//000011_INTA%20Bi
otecnologia/000000_Inta%20-%20B%C3%ADotecnolog%C3%ADa.pdf
ANEXOS
Lectura N° 1.
 Especie: Tomate- Maíz- Frijol.
 Etapa: Establecimiento.
 Método de regeneración: Embriogénesis Somática.
 Evaluadores: Gabriela Mora, Isabel Peña, Camilo Peña.
 Fecha de siembra: 2/Noviembre/2018.
 Fecha de evaluación: 8/Noviembre/2018.
 Temperatura: 19 °C
Tabla 7. Lectura N° 1 para la especie de tomate.
CONTAMI CRECIMIENTO
OBSERVACIONES
NACION Caulogénesis Rizogénesis
# FRASCO
MUERTE DEL
EXPLANTE
coloración
de
de brote
Endógena
Longitud
Longitud
Exógena
N° hojas
raíces
V. Cl
(cm)
(cm)
V.M
V.O
N°
1 - - - - - - - -- - - - - - - - - - - -
- - - - - - - - - - - - - - - - - -
2 - - - - - - - - - - - - - - - - - - -
- - - - - - - - - - - - - - - - - - -
3 - - - - - - - - - - - - - - - - - - -
- - - - - - - - - - - - - - - - - - -
4 - - - - - - - - - - - - - - - - - - -
- - - - - - - - - - - - - - - - - - -
5 - - - - - - - - - - - - - - - - - - -
- - - - - - - - - - - - - - - - - - -
6 - - - - - - - - - - - - - - 1 - 1 - -
- - - - - - - - - - - - - - - - - - -
Tabla 8. Lectura N° 1 para la especie de maíz.
CONTAMI CRECIMIENTO
OBSERVACIONES
# FRASCO
MUERTE DEL
EXPLANTE
coloración
Endógena
Longitud
Longitud
Exógena
N° hojas
de brote
N° de
raíces
(cm)
(cm)
V. Cl
V.M
V.O
1 - - - - 1.5 1 - - + + - - - - 0.8 1 1 1 -
- - - - - 1 2 - - + + - - - - - 1 - 1
2 - - - - 2 1.5 - - + + - - - - 1 2.5 1 1 -
- - - - - 2 0.8 - - + + - - - - 0.8 - 1 1
3 - - - - - 1 1 - - + + - - - - 0.5 1 1 1 -
- - - - 0.7 1 - - + + - - - - 1 1 1 1
4 - - - - - 2 1 - - + + - - - - 0.5 1 1 1 -
- - - - 1.5 2 - - + + - - - - 1.5 2 1 1
5 - - - - - 2.5 1 1 2 + + - - - - 1 1 1 1 -
- - - - 1 0.8 1 1 + + - - - - 2 1 1 1
6 - - - - - 1 0.8 - - + + - - - - 1.5 1.5 1 1 -
- - - - 0.8 0.8 - - + + - - - - 1.5 1 1 1

Tabla 9. Lectura N° 1 para la especie de frijol.
N° CONTAMINACIÓN MUERTE CALLOGÉN TEXTURA OBSERVACION

FRAS DEL ESIS ES
COS Endógena Exógena EXPLAN
TE
1 - - + - - - - - - Una semana más
- - - - - - en observación.
2 - - - - - - - - -
- - - - - - - -
3 - - - - - - - - -
- - - - - - - -
4 - - - - - - - - - Una semana más
- + - - - - - - en observación.
5 - - - - - - - - -
- - - - - - - -
6 - - - - - - - - -
- - - - - - - -
Lectura N° 2.

CONTA CRECIMIENTO
OBSERVACIONES
MUERTE DEL
MINACI Caulogénesis Rizogénesis

N° FRASCO
EXPLANTE
ÓN
Coloración
Longitud
Longitud
Endógen
Exógena
# hojas
N° de
raíces
raíces
(cm)
a
V.
V.
V.
Cl
O
1 + + + - - 2,5 - 2 - - - - - + - 1 - 3 - Descarte
+ + - - - 2 - 2 - - - + - - - 1 - 2
2 - - - - - 1 - 2 - - - + - - - 1 - 3 - -
- - - - 4 2 4 2 - - - + + - 8 1 5 3
3 - - - - - 2,5 4 2 4 - - + + - - 1 5 3 4 -
- - - - - - - - - - - - - - - - - -
4 - - - - - 2 2 2 2 - - + + - - 1 1 3 4 -
- - - - 3 3,5 2 2 - - + + - - 5 4 4 4
5 - - - - - 2,5 3,5 2 2 - - + + - - 1 7 4 4 -
- - - - - 2,5 - 2 - - - + - - - 3 - 3
6 - - - - - 4 - 3 - - - + - - - 12 - 5 - -
- - - - - 3 - 2 - - - + - - - 4 - 4
N° FRASCO
Endógena
Exógena
NACION
CONTAMI
MUERTE DEL
EXPLANTE
Longitud
de brote
(cm)
N° hojas

V. Cl
Caulogénesis
V.M
coloración
V.O
CRECIMIENTO
Longitud
(cm)
N° de
Rizogénesis
raíces
OBSERVACIONES
1 - - - - 4 5 - - + + - - - - 1 2.5 1 1 Descart
- - + - - 3 6 2 2 + + - - - - 2 2 1 1 e
2 - - - - 6 3 2 - - + + - - - 3 5 3 2 -
- - - - - 2 2 1 - - + + - - - 1 1 2 1
3 - - - - 3 4.5 1 - + + - - - - 1 2 1 1 -
- - - - - 1.5 4 - 1 + + - - - - 3 2.5 1 1
4 - - - - 2.5 2.5 - - + + - - - - 2 1.5 1 1 -
- - - - - 5 5.5 2 2 + + - - - - 3 3 1 1
5 - - - - 6 5 1 1 - + + - - - 1.5 2 1 1 -
- - - - - 4 2 1 - + + - - - - 5 3 1 1
6 - - - - 3.5 3 1 - + + - - - - 3 2 1 1 -
- - - - - 2 2.5 - 3 + + - - - - 3 3 1 1

FRAS DEL ESIS ES
TE
1 - - + - - + - - - Dejar una semana
- - - + + - - más en
evaluación por
inicio de
formación de
callo.
2 - + - - - + - - - Descarte.
- + - - + - - -
3 - - - - - - + - - Inicio de
- - - - + + - - formación de
callo.
4 - - - - - - - - - Descarte.
- + - - - - - -
5 - - - - - + + - - Inicio de
- - - - + + - - formación de
callo.
6 - - - - - + + - - Inicio de
- - - - + + - - formación de
callo.
Lectura N° 3.

CONTA CRECIMIENTO
OBSERVACIONES
MUERTE DEL
N° FRASCO
EXPLANTE
ÓN
coloración
N° de raíces
Longitud de
brote (cm)
Endógena
Longitud
Exógena
N° hojas
(cm)
V. Cl
V. M
V. O
2 - - - - - 4 0 4 0 - + + - - - 6 1 6 1 -
- - - - 5 3 8 4 + - - + + - 10 5 5 5
3 - - - - - 4 5,5 4 6 - - + + - - 5 9 3 6 -
- - - - 4 0 2 0 - - + + - - 4 0 5 0
4 - - + - - 3,5 5 2 - - + + - - 7 5 5 3 -
- - - - 4 4 4 - - + + - - 6 5 5 5
4
4
5 - - - - - 2.5 2 6 - - - - + + 3 10 6 8 -
- - - - 4 0 4 - - - - + + 1 4 3 10
2
3,5
6 - - - - - 8 3 6 0 - - + + - - 12 5 10 4 -
- - - - 2,5 3 5 - - + + - - 10 8 7 11
6
CRECIMIENTO
OS
FR
FR
EL
TE
TE
XP
AS
AS
BS
N°
LO
O
C
EC
R
E
M
U
A
N
E
CONTAMI Caulogénesis Rizogénesis
NACION
coloración
Endógena
Longitud
Longitud
Exógena
N° hojas
de brote
N° de
raíces
(cm)
(cm)
V. Cl
V.M
V.O
2 - - - - 6 3 2 1 - + + - - - 3 6 7 3 -
- - - - - 2.5 4.5 2 1 - + + - - - 3 2 4 3
3 - - - - 4 5 1 1 - - + + - - 5 6 1 1 -
- - - - - 3.5 4 1 1 - - + + - - 3 7.5 1 1
4 - - - - 7 6 2 2 - - + + - - 3 1.5 4 2 -
- - - - - 3 5.5 3 2 - - + + - - 3 3 3 4
5 - - - - 6 5 1 2 - - + + - - 6 5 2 1 -
- + - - - 8 4 2 1 - - + + - - 10 5 1 1
6 - - - - 4 3.5 1 2 - - - - + + 4.5 3 2 1 -
- - - - - 4 3 1 3 - - - + + - 3 3 1 1

FRAS DEL ESIS ES
TE
1 - - + - - + + - - Dejar una semana
- - - - + + - - más en
evaluación por
formación de
callo.
3 - - - - - + + - - Formación de
- - - - + + - - callo.
5 - - - - - + + - - Formación de
- - - - + + - - callo.
6 - - - - - + + - - Formación de
- - - - + + - - callo.
Lectura N° 4.

CONTA CRECIMIENTO
OBSERVACIONES
MUERTE DEL
N° FRASCO
EXPLANTE
ÓN
Coloración
N° de raíces
Longitud de
brote (cm)
Longitud
N° hojas
Endógena
(cm)
Exógena
V. Cl
V.M
V.O
2 - - - - - 9.5 5 8 1 - - - - + + 10 2.5 6 3 -
- - - - 7 6 5 4 - - - - + + 10 5 15 5
3 - - - - - 10 7 5 6 - - - - + + 5 9 5 12 -
- - - - 8 4 4 0 - - - - + + 4 0 7 0
4 - - + - - 9 7.5 5 2 - - - - + + 7 5 10 9 descarte
- - - - 4.5 8 4 4 - - - - + + 6 8 8 12
5 - - - - - 3 5.7 10 4 - - - - + + 12 9 15 10 -
- - - - 4 6.5 9 12 - - - - + + 6,5 13 6 10
6 - - - - - 10.5 8 10 15 - - - - + + 12 7.5 17 8 -
- - - - 4,5 6 5 5 - - - - + + 10 12 13 11
CONTAMI CRECIMIENTO
OBSERVACIONES
N° FRASCOS

MUERTE DEL
FRASCO
EXPLANTE
coloración
Endógena
Longitud
Longitud
Exógena
N° hojas
de brote
N° de
raíces
(cm)
(cm)
V. Cl
V.M
V.O
2 - - - - 10 7.5 2 1 - + + - - - 5 8 10 5 -
- - - - - 5 8 4 1 - + + - - - 4 3 8 3
3 - - - - 7.8 10 2 2 - - + + - - 8 10 1 1 -
- - - - - 4.5 6 2 2 - - + + - - 7.5 9 2 1
4 - - - - 11 8 3 2 - - + + - - 4 3 6 3 -
- - - - - 5 7 3 3 - - + + - - 7 5 7 8
5 - - - - 10 9 2 2 - - + + - - 10 10 4 2 -
- + - - - 12 7.5 2 1 - - + + - - 18 7 2 2
6 - - - - 5 6 1 2 - - - - + + 9 5 5 2 -
- - - - - 8 5 1 3 - - - + + - 8 4 1 3
Tabla 18 Lectura N° 4 para la especie de frijol.

FRAS DEL ESIS ES
TE
1 - - + - - + + - - Descarte.
- - - - + + - -
3 - - - - - + + - - Formación de
- - - - + + - - callo.
5 - - - - - + + - - Formación de
- - - - + + - - callo.
6 - - - - - + + - - Formación de
- - - - + + - - callo.

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PRÁCTICA N° 6.

“ESTABLECIMIENTO DE EMBRIONES VEGETALES”

Universidad Francisco de Paula Santander

En la reproducción sexual las plantas se reproducen en mayor parte mediante semillas,

recurriendo este método de reproducción para garantizar la dispersión y perpetuación, en la

procedentes de ambos progenitores, lo que suministra la viabilidad genética necesaria para la

en las cuales están en su totalidad a especies de interés forestal y son Gimnospermas y

zigoto que es un complejo bastante complejo la semillas de la mayor parte de especies se

partes básicas embrión, endospermo y perispermo.

 Embrión: elemento esencial de la semilla ya que es el germen de la planta, en el se

diferencia el primordio de la raíz “radícula” y el meristemo apical “plúmula o epicotilo” y

los cotiledones fijados en el eje embrionario “hipocotilo”

de un tejido organizado (semillas endospermicas albuminosas) o es sustituido por

cotiledones como órganos de reserva.

 Perispermo: tejido diploide procedente de la nucela que se presenta en diversas cantidades

en las semillas de algunas especies. (Navarro R, 2012)

La embriogénesis somática consiste en la producción de embriones a partir de células

puramente somáticas cultivadas in vitro y en total ausencia del proceso de fecundación. La

aplicación más inmediata de la embriogénesis somática en las plantas es debida a su enorme

capacidad de regeneración de plantas, de lo cual se deriva su potencial para la propagación in vitro.

 Continuar desarrollando habilidades en el trabajo de cultivo de tejidos, especialmente en

la disección y siembra en área estéril.

 Desarrollar la regeneración de plantas vía embriogénesis somática (etapa 1) y cigotica.

 Kit básico de laboratorio.

 Semillas de tomate, frijol y maíz tierno.

 Probetas de 25 ml, 250 ml.

 Frascos de vidrio estéril (3/grupo).

 Beakers 250ml (2/grupo).

 Frascos de agua destilada estéril (12/grupo).

 Medios de cultivos preparados MD – MH – MS – MZ.

 Instrumentos de disección [pinzas, escalpelos, agujas, etc.(3 juegos estériles)].

 Erlenmeyer de 100 ml.

 Tiosulfato de sodio al 0,1N

 Ácido acético glacial o Ácido sulfúrico al 0.5 N.

Preparar semillas por especie (tomate-maíz-

PASAR AL ÁREA ESTERIL

PASAR AL FLUJO LAMINAR

PASAR AL ÁREA ESTERIL

PASAR AL FLUJO LAMINAR

FASE DE Dentro de la cabina de flujo laminar con

Ubicar los explantes sembrados de frijol en el

Tabla 1. Evaluación general de semillas de tomate (30 días).

DÍ CONTAMINACIÓN MUERTE CRECIMIENTO

21 16.6 16.6 0 90 3.5 3 6 5

30 16.6 16.6 0 100 6.6 6 9 7.6

de contaminación, muerte del explante y tipo de crecimiento que se obtuvo de la siembra en

medios de cultivo que contenían semillas de tomate.

Se pueden observar valores de contaminación endógena y exógena, siendo la contaminación

hasta terminar su evaluación. En cuanto a la contaminación exógena, los porcentajes de

procedencia y estado fitosanitario se desconoce en el cuarto de siembra ajena a los cultivos

nombrados, posiblemente fueron la causa de la contaminación del medio de cultivo.

aproximada de 5 cm y un número de raíces considerable.

DÍ CONTAMINACIÓN MUERTE CRECIMIENTO

7 0 0 0 100 1.2 0 1 1.1

14 0 16.6 0 100 3.6 1 1 2.4

21 5 16.6 0 100 4.5 2 2 4.1

30 5 16.6 0 100 7.6 2 4 7.2

En la tabla 1 se establecieron los resultados generales de la fase de establecimiento que se

obtuvo de la siembra en medios de cultivo que contenían embriones de maíz.

Se pueden observar valores de contaminación endógena y exógena. Para la contaminación

21 días al 5 % manteniéndose en ese rango hasta terminar su evaluación. En cuanto a la

nombrados, posiblemente fueron la causa de la contaminación del medio de cultivo.

y 3 raíces promedio por explante.