UNIVERSIDAD NACIONAL AGRARIA LA MOLINA

FACULTAD DE AGRONOMA
DEPARTAMENTO ACADMICO DE HORTICULTURA

Curso: Floricultura II
Prctica N 3
Cultivo In Vitro de semillas de Orqudeas

Docente: Ing. Agr. Mg. Sc. Jaulis Cancho, Juan Carlos

Estudiantes:
Alcantara Lobo, Claudia
Basaldua Jauregui, Pamela
Cueva Gonzales, Mayra
Huaraca Ramrez, Wilson
Javier Silva, Jacquelyn
Grupo: A*
La Molina, abril del 2015

1. INTRODUCCION.
La familia Orchidaceae es una de las ms abundantes del mundo, la elegancia
y belleza de sus flores representa un gran potencial para la industria
ornamental.
Son las plantas ms evolucionadas del reino vegetal adems son la familia de
plantas ms abundantes del mundo. Los bosques donde encontramos
abundancia de orqudeas nos proporcionan una idea del ndice de
conservacin que tiene el lugar.
Muchas de las especies de orqudeas estn gravemente amenazadas debido a
la indiscriminacin deforestacin, los incendios forestales y los saqueos de
dichas especies para fines comerciales; esto ha provocado que numerosas
especies de orqudeas estn desapareciendo de los bosques naturales. La
idea de propagar orqudeas, surge con la necesidad de recuperar especies
nativas en peligro de extincin ya que la incursin indebida del hombre en los
medios naturales a generado desequilibrio tanto en las orqudeas como en
otras especies nativas, por tal motivo, la propagacin in vitro permite dar
posibles soluciones y ayudar a evitar la prdida masiva del material biolgico.
Al utilizar la tcnica del cultivo in vitro se obtienen plantas libres de virus, que
luego pueden ser propagadas masivamente, ya que se obtienen individuos
genticamente idnticos de la planta madre.

2. OBJETIVOS.
2.1.
Conocer las tcnicas y el mtodo de propagacin in vitro de orqudeas.
2.2.
Constatar la importancia de propagar orqudeas mediante cultivo invitro.
2.3.
Complementar el curso llevando a cabo una prctica donde nosotros los
alumnos podamos realizar micro propagacin de orqudeas.

3. REVISION BIBLIOGRAFICA:

Para la propagacin in vitro de orqudeas se deben tener en cuenta diversos

pasos para lograr una adecuada instalacin.

Planta madre: se elige aquella planta madre que se quiere

propagar in vitro, en este caso se utilizara una orqudea.

Medio de cultivo: se elige un medio de cultivo en donde mejor

pueda desarrollarse la orqudea.
La preparacin de los medios exige una serie de cuidados en el
momento de pesado de los reactivos y evitar que se contaminen,
para lo cual es indispensable su esterilizacin antes de la siembra.
Es posible preparar medios de cultivo sustituyendo las sales
minerales y los reguladores de crecimiento como medios en base a
extractos de banano, tomate, agua de tomate, que den los
nutrientes principales para la germinacin del embrin y el
desarrollo de la planta.
En este caso se us Murashige y Skoog, donde tambin se adiciona
pltano verde y carbn activado (para capturar los fenoles que
hacen dao a la semilla). Si se desea ms cantidad de brotes en la
orqudea se puede usar harina de pltano.

Ex plante: puede usarse diferente tipos de ex plantes, como meristemas, hojas,

tallos, races, embriones. En el caso de la orqudea se utiliz las
semillas.
Las flores polinizadas originan unas capsulas que maduran en uno
o dos meses por lo general, formando entre miles y millones de
semillas que apenas superan los 2 mm. La semilla est constituida
por un embrin envuelto por una testa y todo ello por una fina capa
que le da apariencia globosa, lo que facilita su dispersin por el
viento.
Al no poseer o ser muy escaso el endospermo, es necesario en
condiciones in vitro la germinacin mediante micorriza ion
(asociacin simbitica). Generalmente son hongos del genero
Rhizoctonia. Los valores de germinacin obtenidos en medios
naturales son del 5% de los que muy pocas alcanzan la madurez.

Desinfeccin: Se puede utilizar alcohol, leja, o bicloruro

mercurio.

de

Siembra: Puede ser en un tubo o en un frasco. Las semillas de

orqudea se colocan dentro de un frasco que contiene el medio de
cultivo elegido. Esto se hace en un lugar libre de aire contaminado.

Incubacin: Este frasco se deja en una cmara de incubacin

donde tienen un fotoperiodo de 16 h luz y 8 de oscuridad, y una
temperatura de 26 C. Con estos factores la semilla empieza a
desarrollarse.
3.1.

Multiplicacin:

Tambin llamada transferencia o repique. Se hace la

transferencia para darle ms espacio a la planta para que
siga desarrollando, sino la planta entra en latencia y se
demora en crecer. Se realiza cuando la planta ya tiene unas
cuantas hojas grandes.
Se llaman sub cultivos cuando de las mismas plantas que
se encuentran en un frasco se siembran en otro.
Para dicotiledneas se multiplica por esquejes, para
monocotiledneas se multiplica por hijuelos.

3.2.

Enraizamiento:

Luego de la transferencia se debe dejar que crezca la parte radicular de la planta,

as soportara mejor la fase de aclimatacin.
Es una prctica corriente realizar in vitro el enraizamiento, pero esto produce
problemas en muchas ocasiones. As, Grout y Aston [Hort. Res., 17, 1 (1977)]
observaron cmo tras el enraizamiento in vitro de sus plantas la zona de transicin
entre la raz y el tallo era anormal, con unas conexiones vasculares dbiles y
malformadas, lo que produca problemas en la absorcin y circulacin de agua
desde las races al tallo. Esta disfuncin se corrige, al menos parcialmente, tras
una adecuada aclimatacin. En otras ocasiones el problema estriba en que las
races que crecen en agar son defectuosas, carecen de pelos radicales y suelen
necrosarse al trasplantar las plntulas, lo que provoca una parada en el
crecimiento de la planta [(Deberg y Maene, Scientia Hort., 14, 335 (1981)].
Tambin se ha observado como las races formadas in vitro eran gruesas y con
pelos radicales engrosados y anormales, siendo sus sistemas vasculares
anmalos, en comparacin con races formadas en un sustrato arenoso. En las
races que no mueren durante el proceso de trasplante se producen nuevas races
laterales y adventicias normales durante el proceso de aclimatacin y estas ya
crecen activamente. Por ello la razn raz: tallo siempre es ms alta en plantas
enraizadas ex vitro que in vitro.

3.3.

Aclimatacin:

En la fase de aclimatacin se pretende que las plantas que han crecido in vitro y
por lo tanto slo han estado expuestas a un microambiente escogido por ofrecer
unas condiciones mnimas de estrs y cuasi ptimas condiciones para la
multiplicacin de las plantas, se adapten a condiciones ex vitro donde las
condiciones no son aspticas, ni la luz, temperatura y humedad estn controladas,
y donde el crecimiento a ser autotrfico y no heterotrfico como in vitro.
Es pues necesario reconstruir y desarrollar los sistemas que por adaptacin a la
condiciones in vitro, es el caso de la lignificacin, cubiertas cuticulares, estomas y
estructuras fotosintticas.
Todas estas deficiencias o disfunciones
provocadas por o durante la incubacin in
vitro es necesario corregirlas de forma
gradual, e incluso como ya hemos citados
comenzar la adaptacin en condiciones in
vitro, incluso induciendo fotoautotrofa in
vitro mediante incrementos de la tasa de
CO2 y de irridancia en los contenedores de
cultivo, al objeto de mejorar la calidad de la
planta, los niveles de produccin y los
costes del proceso de micro propagacin.
Para esta fase debe tener al menos 3 hojas completamente desarrolladas y 3
raicillas bien desarrolladas. Se traslada la planta a un invernadero que presenta
unas estructuras que parecen tneles, que se encuentran forrados con un plstico
blanco, donde se las coloca en bandejas con musgo blanco.
Los tneles permiten mantener la Humedad relativa alta y temperatura, as se
aclimata al medio ambiente.

4. MATERIALES:

Explante: cpsula cerrada (en verde) de Vainilla spp.

Cmara de flujo laminar
Bistur, pinzas y bandeja metlicas
Papel blanco esterilizado
Mechero de alcohol
Alcohol al 70%
Frascos de vidrio
Leja
Medios de cultivo con Harina de pltano.

5. MTODOS Y PROCEDIMIENTO:
Para vainilla (Vainilla spp):
La ventaja es que no se requirio de la esterilizacin de las semillas, ya que la cpsla
se encuentra cerrada, lo que evito su deterioro, pero se desinfecto la cubierta con
lejia.

5.1.

Procedimiento de introduccion:

Se introdujo la capsula en un frasco con lejia al 100%. Este

proceso se deberia de repitir dos veces.

Se introdujo la cpsula por 10

minutos aproximadamente en la

Se transfiri la cpsula sumergida

en la solucin de cloro a la cmara
de flujo laminar.
Se retir la cpsula de la solucin de cloro y se sumergi en
alcohol al 100%, luego de unos minutos se flame,
esto con dos propsitos, eliminar patgenos y hacer
una breve termoterapia. Luego se paso por agua
destilada 3 veces .

Luego se procedi a cortar longitudinalmente la

cpsula, se realiza varios cortes transversales.

Finalmente se levant la
cpsula (cortes
transversales) con las pinzas y se deposito las
semillas en el medio de cultivo, que debe tener harina
de pltano.

leja.

5.2.

Procedimiento de separacion para Cymbidium:

Cuando los brotes necesitan mas espacio para poder desarrollarse, se realiza
un re trasplante. Usando el mismo medio MS (murahinge stook + harina de
platano).

Se desinfecta la camara de flujo laminar para iniciar el proceso.

Antes de coger el material se desinfectan las manos con alcohol.
Se retira el papel aluminio, se flamea la boca del frasco.
Se flamea los instrumentos, para proceder a realizar los cortes de los brotes.
Los cortes se introducen en un nuevo frasco los pequeos brotes usando las
pinzas para facilitar la labor.
Se flamea la entrada del frasco para luego colocar el papel aluminio y sellarlo,
se coloca la fecha de realizacion del proceso, con el nombre de la especie,
ademas las iniciales del que realizo el proceso.
Se colocan los frascos en la zona donde reciviran la temperatura y humedad
ideal para que se pueda desarrollar el cultivo.

6. DISCUSIONES
1. En la prctica de cultivo in vitro de orqudeas se pudo observar que algunos
alumnos no tuvieron los cuidados adecuados al momento de micropropagar la
semillas de orqudea, ya que no cumplieron con varias pautas como: no retirar
los frascos fuera de la cmara de flujo laminar, desinfectar y flamear los
materiales o no sellar de la mejor manera el frasco para que se conserve en un
medio adecuado y con la humedad necesaria.
2. Con los resultados que se observaron en el laboratorio se puede decir que la
germinacin y el desarrollo de la orqudea es ms eficiente en in vitro, que al
aire libre, debido a que la primera prctica se realiza en un ambiente
acondicionado, y sin competencia con hongos y bacterias.
3. La densidad a la que se siembran las orqudeas dependen de la proporcin de
las semillas viables y tambin de la especie de orqudea de que se trate, esto

es un punto muy importante a tomar en cuenta ya que en muchos laboratorios

el objetivo principal es obtener mayor cantidad de plntulas para generar un
mayor ingreso, y esto hace en parte que se descuide las condiciones
adecuadas que se le debe de dar a las orqudeas para que se desarrollen.
4. en el proceso de separacin de cymbidium realizados por los alumnos, algunos
daaron los brotes al momento de la separacin, daando as el explante que
generara una nueva planta por falta de prctica de algunos alumnos

7. CONCLUSIONES:
7.1.

Podemos concluir que el conocimiento y la prctica en el procedimiento del

Cultivo In vitro de semillas nos servir para obtener mejores resultados de ello;
y por ende, mayor cantidad de plantas de Orqudeas.

7.2.

De una manera general, podemos constatar al final del informe que el Cultivo
In Vitro de semillas de Orqudea aumenta el porcentaje de germinacin de las
semillas obteniendo un mayor nmero de plantas que pueden ser cultivadas en
un periodo de tiempo relativamente menor.

7.3.

Todos logramos completar y entender la importancia de propagar las orqudeas

mediante las tcnicas de in vitro, dndonos una mejor idea y as poder
conservar tantas especies de orqudeas que muchas son oriundas de nuestro
pas y que tienen una gran acogida en el mercado

8. RECOMENDACIONES:
Se dan algunas recomendaciones para futuros trabajos relacionados al tema:
8.1.
8.2.
8.3.
8.4.
8.5.

Trabajar con los materiales cuidadosamente esterilizados, ya sea con alcohol o

leja, para que no haya contaminacin al momento de la siembra.
Al momento de trabajar en la cmara de flujo laminar, se recomienda colocar
los materiales a 15 cm del borde de la mesa.
No hay que olvidar el uso de mascarillas y guantes nuevos a la hora de trabajar
en la cmara de flujo laminar.
Al trabajar en la cmara de flujo laminar, no hay que olvidar de flamear los
materiales antes de manipular la cpsula.
Despus de terminar la siembra, no hay que olvidar de colocar la etiqueta con
el nombre de la especie, la fecha y las iniciales del nombre de la persona.

9. BIBLIOGRAFIA.
9.1.
9.2.
9.3.

Menchaca, R. (2011). Manual para la propagacin de Orqudeas. (1 era ed.)..

Mxico: CONAFOR
FISCHER, A. (2007). Cultivo de Orqudeas (1era ed.). Buenos Aires: Grupo
Imaginador de Ediciones.
FREULER, M. (2006). Orqudeas (1era ed.). Buenos Aires: Albatros.

9.4.

RLLKER, F. (2002) Orqudeas: rpido y fcil. (2da ed.). Barcelona, Espaa:

Hispano Europa.

10. ANEXO: