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Perspectiva
Basado  en  células  madre  pluripotentes
Terapia  celular:  promesas  y  desafíos
Shinya  Yamanaka1,2,3,  *  
1Centro  de  Investigación  y  Aplicación  de  Células  iPS  (CiRA),  Universidad  de  Kyoto,  Kyoto  606­8507,  
Japón  2Gladstone  Institute  of  Cardiovascular  Disease,  San  Francisco,  CA  94158,  EE.  
UU.  3Contacto  
principal  *Correspondencia:  yamanaka@cira.  kyoto­
u.ac.jp  https://doi.org/10.1016/j.stem.2020.09.014

RESUMEN

Las  células  madre  pluripotentes  humanas,  como  las  células  madre  embrionarias  (ESC)  y  las  células  madre  pluripotentes  
inducidas  (iPSC),  brindan  oportunidades  sin  precedentes  para  las  terapias  celulares  contra  enfermedades  y  lesiones  intratables.
Tanto  ESC  como  iPSC  ya  se  están  utilizando  en  ensayos  clínicos.  Sin  embargo,  seguimos  encontrando  problemas  prácticos  
que  limitan  su  uso,  incluidas  sus  propiedades  inherentes  de  tumorigenicidad,  inmunogenicidad  y  heterogeneidad.  Aquí,  
reviso  dos  décadas  de  investigación  destinadas  a  superar  estas  tres  dificultades.

INTRODUCCIÓN pluripotencia  en  fibroblastos  fetales  y  adultos  de  ratón  (Takahashi  y  Yamanaka,  
2006).  Designamos  este  nuevo  tipo  de  célula  madre  pluripotencial  como  células  
Las  células  madre  pluripotentes  (PSC)  proliferan  infinitamente  y  se  diferencian   madre  pluripotentes  inducidas  (iPSC).
en  células  de  las  tres  capas  germinales.  Estas  dos  propiedades  hacen  que  las   Las  iPSC  humanas  (hiPSC)  se  generaron  en  2007  (Takahashi  et  al.,  2007;  
PSC  sean  fuentes  atractivas  para  terapias  celulares  para  diversas  enfermedades   Yu  et  al.,  2007),  y  la  progresión  de  iPSC  de  ratón  a  humano  se  logró  en  el  breve  
y  lesiones.  Se  están  explorando  dos  tipos  de  PSC  humanas  (hPSC)  para  uso   período  de  un  año  debido  al  conocimiento  acumulado  de  la  investigación  de  
clínico:  células  madre  embrionarias  (ESC)  y  células  madre  pluripotentes   hESC.  Desde  entonces,  muchos  grupos  han  intentado  acercar  las  iPSC  a  los  
inducidas  (iPSC).  Los  ESC  humanos  (hESC)  fueron  informados  por  primera  vez   pacientes,  y  algunas  de  ellas  ya  se  están  probando  en  ensayos  clínicos  (Figura  
por  el  grupo  de  James  Thomson  en  1998  (Thomson  et  al.,  1998),  diecisiete  años   1)
después  de  la  generación  de  ESC  de  ratón.
Este  lapso  de  tiempo  prolongado  entre  la  creación  de  ESC  de  ratón  y  humano   Las  expectativas  actuales  para  la  realización  de  la  promesa  de  los  PSC  están  
se  debió  a  diferencias  sustanciales  en  la  morfología  y  las  condiciones  de  cultivo,   en  su  punto  más  alto.  Sin  embargo,  hay  muchos  desafíos  que  deben  abordarse  
como  se  describe  más  adelante.  Las  hESC  se  han  estado  explorando  en   para  que  la  tecnología  de  PSC  esté  al  alcance  de  muchos  más  pacientes.  En  
terapias  celulares  para  diversas  enfermedades  y  lesiones,  como  lesión  de  la   esta  Perspectiva,  me  gustaría  centrarme  en  los  tres  principales  desafíos:  
médula  espinal,  degeneración  macular  relacionada  con  la  edad  y  diabetes  tipo  1   tumorigenicidad,  inmunogenicidad  y  heterogeneidad.  Espero  acelerar  el  
( Figura  1)  (Ilic  y  Ogilvie,  2017). desarrollo  de  terapias  celulares  usando  hPSCs  discutiendo  estos  desafíos  y  
Con  respecto  al  uso  clínico,  existen  dos  preocupaciones  sobre  las  hESC:   brindando  posibles  soluciones.
cuestiones  éticas  relacionadas  con  el  uso  de  embriones  humanos  y  el  rechazo  
inmunitario  después  del  trasplante.  Para  superar  estos  problemas,  varios  grupos  
han  intentado  generar  hESC  a  partir  de  las  propias  células  somáticas  del   Tumorigenicidad  Una  
paciente  mediante  transferencia  nuclear. ventaja  importante  de  las  PSC  es  su  potencial  de  proliferación  infinita,  gracias  a  
Esta  estrategia  se  popularizó  en  1996  con  la  creación  de  la  oveja  Dolly  mediante   lo  cual  hemos  podido  preparar  miles  de  millones  de  diversos  tipos  de  células  
transferencia  nuclear  (Campbell  et  al.,  1996).  Aunque  un  informe  de  2004  afirmó   humanas  para  trasplante.
de  manera  fraudulenta  la  generación  exitosa  de  hESC  de  transferencia  nuclear   Sin  embargo,  esta  propiedad  es  un  arma  de  doble  filo,  porque  si  las  células  
(Hwang  et  al.,  2004),  otros  grupos  han  tenido  éxito  en  la  producción  de  estas   siguen  proliferando  incluso  después  del  trasplante,  pueden  dar  lugar  a  tumores.  
células  (Tachibana  et  al.,  2013). Se  pueden  considerar  tres  escenarios  tumorigénicos.  Primero,  si  se  retienen  
La  generación  de  ESC  de  transferencia  nuclear  humana  sigue  siendo  un   células  indiferenciadas  y/o  inmaduras  en  el
desafío  técnico. Los  productos  celulares  que  se  han  diferenciado  de  las  CEP,  los  teratomas  o  los  
Tomamos  un  enfoque  diferente  para  la  generación  de  células  madre   tumores  humanos  pueden  surgir  debido  a  un  patrón  incorrecto.
pluripotentes  a  partir  de  células  somáticas.  Nos  sentimos  alentados  por  el  éxito   En  segundo  lugar,  si  los  factores  de  reprogramación  permanecen  activos  en  las  
de  la  clonación  somática  en  ovejas,  así  como  por  la  reprogramación  exitosa   células  iPS,  pueden  promover  la  tumorigénesis.  En  tercer  lugar,  la  tumorigenicidad  
mediante  la  fusión  celular  entre  células  somáticas  y  ESC  de  ratón  (Tada  et  al.,   puede  deberse  a  mutaciones  genéticas  que  se  han  producido  durante  el  cultivo  
2001).  Presumimos  que  la  pluripotencia  puede  ser  inducida  en  células  somáticas   in  vitro  de  las  CEP.
por  factores  definidos  que  existían  en  ESC  y  buscamos  factores  de   Teratoma  y  otros  tumores  debidos  a  patrones  incorrectos  La  formación  de  
reprogramación  de  ESC  de  ratón  basados  en  esta  hipótesis.  De  hecho,   teratomas  es  el  problema  más  grave  para  el  trasplante  de  células  hiPSC  y  hESC.  
identificamos  cuatro  factores  (Oct3/4,  Sox2,  Klf4  y  cMyc)  que  pudieron  inducir Incluso  unas  pocas  PSC  residuales  podrían  dar  lugar  a  la  formación  de  
teratomas.  Además,  si  es  específico  del  linaje

Cell  Stem  Cell  27,  1  de  octubre  de  2020  ª  2020  Elsevier  Inc.  523
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métodos  que  podrían  prevenir  la  aparición  de  teratomas  y  otros  tumores  
debido  a  un  patrón  incorrecto.
El  primer  paso  para  reducir  el  riesgo  de  teratoma  es  establecer  
métodos  eficientes  de  diferenciación  dirigida  in  vitro .  takahashi
y  sus  colegas  lograron  una  pureza  de  >95  %  en  el  primer  esfuerzo  de  
trasplante  clínico  en  el  que  se  administró  epitelio  pigmentado  de  la  retina  
derivado  de  hiPSC  a  pacientes  con  degeneración  macular  relacionada  
con  la  edad,  y  pocas  células  restantes  dieron  positivo  para  marcadores  
de  células  indiferenciadas  (Mandai  et  al . .,  2017).  Se  requirió  una  
cantidad  relativamente  pequeña  de  células,  y  esto,  junto  con  el  hecho  de  
que  el  sitio  de  trasplante  era  de  fácil  acceso,  condujo  a  un  ensayo  clínico  
en  2014,  solo  siete  años  después  del  primer  informe  de  hiPSC.
Por  el  contrario,  en  muchos  otros  casos,  se  necesitan  procedimientos  
de  purificación  más  estrictos  para  cumplir  con  los  estándares  de  
seguridad  establecidos  para  los  ensayos  clínicos.  Por  ejemplo,  un  ensayo  
clínico  que  administra  hiPSC  para  la  enfermedad  de  Parkinson  utiliza  un  
método  de  selección  positiva  de  neuronas  dopaminérgicas  con  
Figura  1.  Ensayos  clínicos  para  terapias  celulares  que  usan   anticuerpos  anti­Chorin  (Kikuchi  et  al.,  2017).  El  desarrollo  de  sistemas  
PSC  Se  muestran  los  ensayos  clínicos  que  usan  hiPSC  o  hESC  y  se   de  clasificación  de  células  compatibles  con  buenas  prácticas  de  
encuentran  en  el  Registro  de  ensayos  clínicos  de  UMIN  (https://
fabricación  (GMP)  permitió  la  purificación  de  células  diferenciadas  
www.umin.ac.jp/ctr/index.htm)  o  ClinicalTrials.gov  (https://clinicaltrials.gov/
ct2/ maduras  con  anticuerpos  en  su  estudio.  En  otro  ensayo  clínico  para  
home)  a  septiembre  de  2020.  Los  enlaces  web  son  los   insuficiencia  cardíaca  realizado  por  Sawa  y  colegas  en  2019,  se  determinó  
siguientes:  (1)  https://
que  CD30  se  expresaba  en  iPSC  no  diferenciadas,  pero  no  en  miocitos  
upload.umin.ac.jp/cgi­open­bin/ctr/ctr_view.cgi?  
recptno=R000038278   cardíacos  diferenciados  (Sougawa  et  al.,  2018).  Para  eliminar  las  iPSC  
(2)  https://upload.umin.ac.jp/cgi­open­bin/ctr/ctr_view.cgi?   residuales,  utilizaron  Brentuximab  ve  dotin,  un  anticuerpo  anti­CD30  
recptno=R000013279,   conjugado  con  el  agente  antimitótico  monometil  auristatina  E,  que  ha  
https://upload.umin.ac.jp/cgi­open­bin/ctr/
ctr_view.cgi?  recptno=R000029894,  https:// sido  aprobado  para  el  tratamiento  de  linfomas  positivos  para  CD30.  En  
ClinicalTrials.gov/show/NCT04339764,  https://ClinicalTrials.gov/ un  estudio  clínico  para  el  síndrome  de  agotamiento  de  las  células  madre  
show/NCT02464956  (3)  https://jrct.niph.go.jp/en­latest­detail/ epiteliales  de  la  córnea,  Nishida  y  sus  colegas  realizaron  selecciones  
jRCTa050200027  (4)  https://jrct.niph.go.jp/en­latest­detail/
negativas  y  positivas  para  purificar  las  células  epiteliales  de  la  córnea  
jRCTa050190084  (5)  https://jrct.niph.go.jp/en­
latest­detail/jRCT2053190081,  https:// (Hayashi  et  al.,  2017).  Primero  eliminaron  las  hiPSC  no  diferenciadas  y  
ClinicalTrials.gov/show/NCT04396899,  https://ClinicalTrials.gov/ otras  células  no  deseadas  con  anticuerpos  que  reconocían  CD200,  que  
show/NCT03763136  (6)  https://jrct.niph.go.jp/en­latest­detail/ descubrieron  que  es  un  marcador  negativo  eficaz  para  las  células  
jRCTa031190228  (7)  https://jrct.niph.go.jp/en­latest­
detail/jRCTa050190117  (8)  https://ClinicalTrials.gov/show/ epiteliales  de  la  córnea  (Hayashi  et  al.,  2018).  Después  de  esta  selección  
NCT02923375  (9)  https://jrct.niph.go.jp/en­latest­ negativa,  realizaron  selecciones  positivas  con  anticuerpos  que  reconocen  ITGB4  y  SSEA­
detail/jRCTa050190104  (10)  https:// Además  de  las  CEP  residuales,  los  tumores  también  pueden  surgir  
ClinicalTrials.gov/show/NCT03407040,  https://
de  una  progenie  diferenciada  que  todavía  prolifera.  Este  es  un  tema  
ClinicalTrials.gov/show/NCT04106167,  https://ClinicalTrials.gov/show/NCT03841110,  https://jrct.niph.go.jp/en­latest­detail/jRCT2033200116
(11)  https://ClinicalTrials.gov/show/NCT03119636,   importante  en  el  estudio  clínico  para  la  lesión  de  la  médula  espinal,  en  el  
https://ClinicalTrials.gov/show/NCT02452723   que  se  trasplantarán  células  progenitoras  neurales  derivadas  de  hiPSC  
(12)  https://ClinicalTrials.gov/show/NCT02286089,   (Figura  1).  Okano  y  sus  colegas  han  demostrado  que  este  enfoque  
https://ClinicalTrials.gov/show/NCT03305029,  
https://ClinicalTrials.gov/show/NCT02590692,   provocó  la  recuperación  funcional  en  modelos  de  lesiones  de  la  médula  
https://ClinicalTrials.gov/show/NCT01469832,   espinal  en  roedores  y  monos  (Nakamura  y  Okano,  2013).  Sin  embargo,  
https://ClinicalTrials.gov/show/NCT02941991,   con  algunas  líneas  hiPSC,  la  parálisis  resurgió  debido  a  la  proliferación  
https://ClinicalTrials.gov/show/NCT03046407  
(13)  https://ClinicalTrials.gov/show/NCT03944239   de  células  progenitoras  neurales  positivas  para  nestina  después  del  
(14)  https://ClinicalTrials.gov/show/NCT03482050   trasplante,  mientras  que  tal  tumorigenicidad  no  se  observó  con  otras  líneas  hiPSC.
(15)  https://clinicalTrials.gov/show/NCT01217008,   Por  lo  tanto,  la  selección  cuidadosa  de  las  líneas  iPSC  es  crucial  para  
https://clinicalTrials.gov/show/NCT02302157  
un  trasplante  seguro.  Además,  el  mismo  grupo  ha  ideado  otra  medida  
(16)  https://ClinicalTrials.gov/show/NCT02239354  
(17)  https://dbcentre3.jmacct.med.or.jp/jmactr/App/JMACTRS06/ para  suprimir  la  tumorigenicidad  de  las  células  progenitoras  neurales  
JMACTRS06.aspx?seqno=9141   inmaduras  (Okubo  et  al.,  2016).  Se  ha  demostrado  que  la  señalización  
(18)  https://ClinicalTrials.gov/show/NCT04232592 de  muesca  es  crucial  para  la  autorrenovación  de  las  células  progenitoras  neurales.
Al  inhibir  esta  vía  con  el  inhibidor  de  la  g­secretasa,  lograron  inhibir  la  
expansión  de  las  células  progenitoras  neurales  inmaduras.  Para  garantizar  
existen  células  madre  dentro  del  trasplante,  pueden  formar  tumores   aún  más  la  seguridad,  planean  hacer  coincidir  intencionalmente  los  alelos  
debido  a  patrones  incorrectos  o  incompletos.  Por  ejemplo,  en  el  sistema   HLA  entre  los  receptores  y  las  hiPSC  trasplantadas  en  el  estudio  clínico  
nervioso,  el  patrón  hacia  la  corteza  produce  una  célula  altamente   inicial  para  que  las  células  trasplantadas  puedan  eliminarse  mediante  la  
proliferativa  que  puede  producir  "rosetas  neurales",  que  crecen  de  forma   interrupción  del  inmunosupresor  si  se  observa  una  proliferación  celular  
similar  a  un  tumor  si  se  inyectan  in  vivo  (Malchenko  et  al.,  2014 ) . no  deseada.  También  están  considerando  un  enfoque  de  gen  suicida  
Por  lo  tanto,  los  investigadores  que  intentan  iniciar  terapias  celulares  con   como  una  salvaguardia  adicional  (Kojima  et  al.,  2019).
hPSC  han  dedicado  mucho  tiempo  y  esfuerzo  para  diseñar

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Tumorigenicidad  causada  por  factores  de  reprogramación  Este  riesgo   A  pesar  del  rápido  progreso  de  la  tecnología,  sigue  siendo  un  desafío  
es  específico  de  las  iPSC.  Los  cuatro  factores  de  reprogramación  se  han   secuenciar  partes  significativas  de  nuestro  genoma,  incluidos  los  elementos  
asociado  con  la  tumorigenicidad,  especialmente  c­Myc,  que  es  uno  de  los   repetitivos.  Se  pasarán  por  alto  las  mutaciones  que  conducen  al  cáncer  en  
genes  mutados  con  mayor  frecuencia  en  los  cánceres  humanos  y,  a  menudo,   estas  regiones  repetitivas.  Además,  los  cambios  genéticos  con  frecuencias  
funciona  como  una  mutación  conductora.  De  hecho,  hemos  demostrado  que  los   alélicas  bajas  pueden  pasarse  por  alto  fácilmente  incluso  en  regiones  no  
ratones  quiméricos  fabricados  con  iPSC  creadas  por  la  inducción  de  la   repetitivas.  Las  alteraciones  genéticas  en  las  PSC  se  pueden  clasificar  en  dos  
transfección  mediada  por  retrovirus  de  los  cuatro  factores  de  reprogramación   tipos:  las  que  existen  antes  de  la  derivación  de  líneas  celulares  y  las  que  surgen  
a  menudo  desarrollan  tumores  (Okita  et  al.,  2007).  Detectamos  la  reactivación   después  de  la  derivación.  La  frecuencia  alélica  del  primero  es  50  o  100%.  La  
del  retrovirus  c­Myc  en  estos  tumores. mayoría,  si  no  todos,  de  estos  cambios  pueden  ser  detectados  por  WGS.  Por  el  
Ratones  quiméricos  con  iPSC  que  no  habían  sido  inducidos  con  c contrario,  la  frecuencia  alélica  de  este  último  es  más  baja  y  puede  pasarse  por  
El  retrovirus  Myc  no  mostró  tales  tumores.  Además  de  los  cuatro  factores  de   alto  fácilmente.  Al  cambiar  los  algoritmos  utilizados  en  los  análisis  de  datos,  
reprogramación  originales,  a  veces  se  utilizan  otros  factores,  como  un  mutante   estos  cambios  menores  pueden  detectarse,  pero  tales  condiciones  de  
negativo  dominante  de  p53,  para  aumentar  la  eficiencia  de  la  reprogramación   detección  han  reducido  la  rigurosidad  y  darían  como  resultado  numerosos  falsos  
(Hong  et  al.,  2009).  En  las  iPSC  generadas  con  el  uso  de  plásmidos,  EBNA1  se   positivos.
usa  para  mantener  la  expresión  episomal  de  los  factores  de  reprogramación   La  interpretación  es  otro  tema  importante.  Si  se  detecta  una  mutación  en  
(Okita  et  al.,  2008).  Este  es  un  riesgo,  ya  que  las  funciones  de  EBNA1  en  el   un  gen  del  cáncer,  la  pregunta  principal  es  si  la  mutación  dada  aumenta  
cáncer  están  bien  documentadas.  Por  lo  tanto,  se  debe  tener  cuidado  de   sustancialmente  el  riesgo  de  cáncer  y,  por  lo  tanto,  evita  el  uso  de  las  PSC  en  
descartar  la  integración  de  estos  transgenes  causantes  de  cáncer  en  hiPSC   la  terapia  celular.  Esta  es  una  pregunta  muy  difícil  de  responder.  En  primer  
previsto  para  su  uso  en  terapias  celulares  clínicas. lugar,  no  se  ha  establecido  una  definición  consensuada  de  los  genes  del  cáncer.  
Tumorigenicidad  causada  por  anomalías  genéticas  Este  riesgo  es   COSMIC  proporciona  una  lista  de  genes  que  se  han  implicado  causalmente  en  
común  para  las  hiPSC,  las  hESC  y  cualquier  otra  célula  que  se  expanda  in  vitro   el  cáncer,  pero  los  genes  enumerados  en  Census  cambian  constantemente  
antes  del  trasplante.  El  cultivo  de  las  células  para  la  expansión  in  vitro  provoca   (Sondka  et  al.,  2018).  Esta  fluctuación  constante  es  un  desafío  desde  el  punto  
inevitablemente  alteraciones  genéticas,  como  anomalías  cromosómicas,   de  vista  de  GMP.  En  segundo  lugar,  no  todas  las  mutaciones  no  sinónimas  de  
variación  del  número  de  copias  y  mutaciones  de  un  solo  nucleótido.   los  genes  del  cáncer  son  patógenas.  Por  ejemplo,  BRCA1  es  uno  de  los  genes  
Tradicionalmente,  las  anomalías  cromosómicas  se  controlaban  mediante   del  cáncer  más  famosos  y  se  han  detectado  numerosas  mutaciones  en  el  gen  
cariotipo,  y  las  células  con  anomalías,  como  deleción,  duplicación  o   BRCA1  mediante  pruebas  genéticas  (Peshkin  et  al.,  2001).  Se  cree  que  muchos  
reordenamiento  cromosómico,  se  descartaban  para  su  uso  en  terapias  celulares   de  ellos  son  benignos  y  no  son  compatibles  con  la  mastectomía  profiláctica.  
y  otras  aplicaciones  posteriores.  En  hESC  y  hiPSC,  a  menudo  se  han   Esta  clasificación  ha  sido  una  tarea  formidable  que  requiere  múltiples  
observado  duplicaciones  de  los  cromosomas  1,  12,  17  y  20  después  de  una   consideraciones,  como  pedigrí  familiar,  conservación  entre  especies  y  evidencia  
expansión  a  largo  plazo  (Amps  et  al.,  2011).  Las  líneas  de  PSC  con  dichas   en  la  literatura  (Eggington  et  al.,  2014).  A  pesar  de  los  esfuerzos  en  curso  para  
anomalías  cromosómicas  están  excluidas  de  las  aplicaciones  de  terapia   predecir  el  potencial  tumorigénico  de  una  mutación  dada,  muchas  mutaciones  
celular.  En  algunos  casos,  la  subclonación  se  realiza  para  seleccionar  células   en  los  genes  del  cáncer  se  clasifican  como  "variación  de  significado  
sin  anomalías. desconocido".  Otro  factor  que  complica  un  análisis  de  riesgo  claro  es  que  
Lo  que  es  más  difícil  de  evaluar,  y  en  ocasiones  puede  resultar  controvertido,   incluso  las  personas  sanas  tienen  múltiples  mutaciones  en  
son  las  alteraciones  genéticas  más  pequeñas,  como  la  variación  de  un  solo   genes  del  cáncer  Pueden  ocurrir  mutaciones  de  la  línea  germinal  y  somáticas,  
nucleótido  (SNV)  y  la  variación  del  número  de  copias  (CNV),  que  pueden   y  la  primera  se  hereda  del  espermatozoide  o  del  óvulo  y,  por  lo  tanto,  existe  en  
detectarse  mediante  secuenciación  de  próxima  generación  y  tecnologías   todas  las  células  del  cuerpo.  En  comparación  con  el  genoma  humano  estándar,  
relacionadas.  Rouhani  et  al.  mostró  que  las  células  somáticas  tienen  una  tasa   cualquier  individuo  puede  poseer  mutaciones  raras  no  sinónimas  en  50  genes  
de  mutación  de  14  SNV  por  célula  por  generación,  mientras  que  las  iPSC  y  las   del  cáncer,  que  no  se  informan  en  las  bases  de  datos  de  SNP.  Las  mutaciones  
ESC  exhibieron  una  tasa  diez  veces  menor  (Rouhani  et  al.,  2016). somáticas  son  aquellas  que  surgen  después  de  la  fecundación.
Sin  embargo,  las  hPSC  acumulan  SNV  en  genes  relacionados  con  el  cáncer,  
incluido  el  gen  supresor  de  tumores  TP53  (Merkle  et  al.,  2017).
En  el  primer  estudio  clínico  para  la  degeneración  macular  en  2014,  realizamos   De  relevancia  para  esta  discusión,  estudios  recientes  han  demostrado  que  
la  secuenciación  del  genoma  completo  (WGS)  de  iPSC  y  células  epiteliales   incluso  las  personas  sanas  desarrollan  mutaciones  somáticas  en  múltiples  
pigmentadas  de  la  retina  derivadas  de  hiPSC  a  pedido  del  gobierno  japonés   genes  cancerosos  en  tejidos  no  cancerosos  como  la  piel  facial  (Martincorena  
(Mandai  et  al.,  2017) .  No  detectamos  SNV  no  sinónimos,  pequeñas  inserciones   et  al.,  2015)  y  el  esófago  (Yokoyama  et  al.,  2019).
o  deleciones  (Indels)  o  CNV  en  600  genes  relacionados  con  el  cáncer,  según  lo   Otros  dos  problemas  complican  aún  más  la  interpretación  de  los  análisis  del  
definido  por  la  lista  del  censo  COSMIC,  así  como  una  lista  generada  por  la   genoma.  En  primer  lugar,  incluso  las  mutaciones  sinónimas  pueden  ser  
Agencia  de  Dispositivos  Médicos  y  Farmacéuticos  (PMDA)  (https : // patógenas  (Supek  et  al.,  2014).  Las  mutaciones  de  un  solo  nucleótido  que  no  
www.pmda.go.jp/files/  000155730.pdf,  en  japonés),  y  así  se  les  concedió   cambian  las  secuencias  de  aminoácidos  se  consideran  silenciosas,  pero  pueden  
permiso  del  gobierno  para  realizar  el  primer  ensayo  en  humanos.  El  gobierno   no  ser  inocuas.  Las  mutaciones  sinónimas  podrían  cambiar  la  estructura  y  las  
japonés  también  exigió  análisis  de  la  secuencia  del  genoma  completo  en  los   funciones  del  ADN,  especialmente  el  empalme,  y  potencialmente  podrían  alterar  
estudios  clínicos  con  células  retinianas  alogénicas  y  células  epiteliales  de  la   las  proteínas  codificadas.  En  segundo  lugar,  las  mutaciones  en  regiones  
córnea.  En  marcado  contraste,  en  los  ensayos  clínicos  para  la  enfermedad  de   intergénicas  pueden  ser  patogénicas  (Mosquera  Orgueira  et  al.,  2020).
Parkinson  y  la  insuficiencia  cardíaca,  el  PMDA  no  requirió  análisis  WGS.  La   Las  regiones  no  codificantes  ocupan  el  98%  del  genoma  y  se  denominaron  
razón  detrás  de  esta  discrepancia  es  que  los  datos  WGS  no  se  pueden  aplicar   ADN  "basura".  Sin  embargo,  se  han  asignado  funciones  importantes  a  esas  
fácilmente  para  predecir  el  riesgo  de  cáncer  de  las  células  por  dos  razones:   regiones,  como  la  unión  a  factores  de  transcripción  y  la  codificación  de  ARN  
adquisición  e  interpretación  de  datos. no  codificantes.  Por  lo  tanto,  las  mutaciones  en  estas  regiones  podrían  alterar  
la  transcripción  de  los  genes  del  cáncer.  Evaluación  de

Cell  Stem  Cell  27,  1  de  octubre  de  2020  525
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Perspectiva

cada  mutación  en  regiones  no  codificantes  sería  una  tarea  abrumadora. nicidad  de  células  diferenciadas  derivadas  de  iPSC  singénicas  in  vitro  e  in  
vivo  (Guha  et  al.,  2013).
Incluso  cuando  se  detectan  mutaciones  impulsoras  bien  establecidas,   Las  iPSC  autólogas  y  los  injertos  derivados  pueden  proporcionar  una  
podría  haber  argumentos  sobre  si  la  mutación  impide  las  aplicaciones  de   opción  ideal  para  el  trasplante  en  términos  de  eludir  una  respuesta  inmunitaria.  
terapia  celular.  Por  ejemplo,  las  personas  con  mutaciones  patogénicas  en   En  el  primer  estudio  clínico  para  la  regeneración  macular  relacionada  con  la  
BRCA1  tienen  una  mayor  incidencia  de  formación  de  tumores  en  tejidos  como   edad,  se  detectó  evidencia  de  células  trasplantadas  mediante  análisis  de  
la  mama  y  el  ovario.  Incluso  con  la  mutación,  los  tumores  no  se  detectan  en   imágenes  más  de  2  años  después  de  la  cirugía,  sin  signos  evidentes  de  
la  infancia.  Además,  no  hay  evidencia  de  que  estos  individuos  tengan  un   rechazo  (Mandai  et  al.,  2017).  Por  lo  tanto,  ahora  es  seguro  decir  que  las  
mayor  riesgo  de  desarrollar  tumores  en  tejidos  como  el  cerebro  y  el  corazón   iPSC  autólogas  brindan  una  oportunidad  para  la  terapia  celular  libre  de  
(Dullens  et  al.,  2020). rechazo  utilizando  PSC.  Otro  estudio  sugiere  que  el  trasplante  de  epitelio  
Por  lo  tanto,  una  pregunta  importante  es  si  la  misma  mutación  afecta  el  uso   pigmentario  retiniano  derivado  de  iPSC  autólogo  da  como  resultado  una  mejor  
terapéutico  de  células  pluripotentes  para  diversas  enfermedades,  como  la   visión  en  modelos  animales  de  degeneración  macular  relacionada  con  la  
enfermedad  de  Parkinson,  la  lesión  de  la  médula  espinal  y  la  insuficiencia  cardíaca.
edad,  y  actualmente  se  está  probando  en  humanos  (Sharma  et  al.,  2019) .  
Esta  pregunta  amerita  más  discusión. Sin  embargo,  en  la  actualidad,  se  prefieren  los  enfoques  de  aloinjerto  a  las  
Otro  tema  crítico  es  si  la  reprogramación  de  iPSC  es  en  sí  misma   modalidades  autólogas  debido  a  consideraciones  de  costo  de  producción  
mutagénica.  Gore  et  al.  realizó  la  secuenciación  del  exoma  completo  de   tanto  en  términos  de  valor  monetario  como  de  tiempo.  En  indicaciones  graves  
líneas  iPSC  humanas  e  identificó  10  SNV  nuevos  no  sinónimos  en  cada  clon   que  incluyen  insuficiencia  cardíaca  y  lesión  de  la  médula  espinal,  el  tiempo  
(Gore  et  al.,  2011).  Argumentaron  que  la  reprogramación  de  iPSC  es   prolongado  que  lleva  la  producción  de  productos  de  células  autólogas  de  
mutagénica.  Otros  informaron  resultados  similares  (Ji  et  al.,  2012).  Otro   grado  clínico  no  sería  adecuado  para  el  tratamiento  exitoso  de  estas  
estudio  reciente  de  Araki  et  al.  informó  que  la  reprogramación  de  células   afecciones  agudas.
endoteliales  fetales  fue  menos  mutagénica  porque  las  iPSC  resultantes   Tradicionalmente,  el  rechazo  en  los  aloinjertos  se  ha  superado  mediante  el  
contenían  menos  cantidades  de  SNV  nuevas  (Araki  et  al.,  2020).  Sin  embargo,   uso  de  inmunosupresores.  En  el  trasplante  de  órganos,  los  pacientes  
otros  estudios  atribuyeron  estos  SNV  "novedosos"  a  mutaciones  somáticas   necesitan  una  inmunosupresión  de  por  vida.  A  pesar  del  progreso  sustancial  
raras  que  preexistían  en  las  células  originales  antes  de  la  reprogramación   en  el  diseño  de  protocolos  y  combinaciones  de  medicamentos,  los  pacientes  
(Young  et  al.,  2012).  En  consonancia  con  esto,  el  número  de  SNV  aumenta   aún  pueden  sufrir  efectos  secundarios  graves,  como  infecciones.
con  la  edad  de  los  donantes  (Lo  Sardo  et  al.,  2017).  El  resultado  obtenido  por   Sin  embargo,  en  tejidos  inmunoprivilegiados,  como  el  sistema  nervioso  central  
Araki  et  al.  podría  explicarse  por  el  aumento  dependiente  de  la  edad  de  las   (Carson  et  al.,  2006)  y  los  ojos  (Taylor,  2016),  la  duración  del  inmunosupresor  
mutaciones  somáticas  en  las  células  originales. puede  acortarse  en  casos  específicos.
Esta  controversia  puede  surgir  de  la  dificultad  para  detectar  mutaciones  muy   De  hecho,  se  ha  informado  de  un  injerto  a  largo  plazo  en  un  paciente  con  
raras  en  las  células  somáticas  originales.  Para  superar  este  problema,  Kwon   enfermedad  de  Parkinson  que  recibió  células  madre  neurales  de  un  feto  
et  al.  iPSC  establecidas  y  fibroblastos  expandidos  clonalmente  de  los  mismos   abortado  hace  24  años  (Li  et  al.,  2016).  En  este  paciente,  el  tratamiento  
fibroblastos  parentales  (Kwon  et  al.,  2017).  Observaron  cantidades   inmunosupresor  (prednisolona,  azatioprina  y  ciclosporina)  se  redujo  
comparables  de  SNV  e  indeles  entre  las  iPSC  hermanas  y  los  fibroblastos,  lo   lentamente  y  luego  se  suspendió  64  meses  después  del  trasplante.  Asimismo,  
que  sugiere  que  las  SNV  se  pueden  atribuir  en  gran  medida  a  mutaciones   se  han  informado  injertos  a  largo  plazo  de  hasta  dos  décadas  en  otros  
raras  que  habían  existido  en  los  fibroblastos  parentales. pacientes  con  enfermedad  de  Parkinson  en  múltiples  estudios  (Li  et  al.,  
2016).  De  manera  similar,  los  inmunosupresores  se  administran  de  forma  
transitoria  en  ensayos  clínicos  relacionados  con  lesiones  de  la  médula  espinal,  
Inmunogenicidad  El   la  enfermedad  de  Parkinson  y  el  síndrome  de  agotamiento  de  las  células  
rechazo  inmunológico  es  otro  tema  crítico  en  la  terapia  celular.  Las  iPSC   madre  del  epitelio  corneal  con  hESC  o  hiPSC.
creadas  a  partir  de  las  propias  células  de  los  pacientes  brindan  una   Sin  embargo,  el  privilegio  inmunitario  puede  romperse  por  daño,  trauma  o  
oportunidad  sin  precedentes  para  realizar  trasplantes  autólogos  con  células   enfermedad  y  puede  debilitarse  con  el  envejecimiento.  Además,  en  el  caso  
madre  pluripotentes.  Sin  embargo,  la  inmunogenicidad  de  las  iPSC  autólogas   de  trasplante  en  tejidos  no  inmunoprivilegiados,  puede  ser  necesaria  una  
ha  sido  controvertida.  En  2011,  Zhao  et  al.  informaron  que  las  iPSC  derivadas   inmunosupresión  de  por  vida.
de  ratones  C57/BL6  (B6)  a  menudo  no  producían  teratomas  cuando  se   Bancos  de  haplotipos  HLA  de  PSC  humanas  Otro  
trasplantaban  por  vía  subcutánea  a  ratones  B6  (Zhao  et  al.,  2011).  En  el  caso   método  utilizado  para  reducir  el  rechazo  es  el  emparejamiento  de  haplotipos  
de  que  se  formaran  teratomas,  los  autores  observaron  signos  de  rechazo,   HLA,  un  enfoque  que  actualmente  se  usa  ampliamente  en  el  trasplante  de  
como  la  filtración  de  células  T.  Por  el  contrario,  las  ESC  derivadas  de  B6   células  madre  hematopoyéticas.  Millones  de  donantes  están  registrados  en  
produjeron  teratomas  sin  infiltración  de  células  T  en  ratones  B6.  Los  autores bancos  de  médula  ósea  de  todo  el  mundo.  Las  muestras  de  sangre  del  
atribuyó  esta  aparente  inmunogenicidad  de  las  iPSC  autólogas  a  la  expresión   cordón  umbilical  también  están  disponibles  para  pacientes  que  sufren  de  
génica  anormal.  Más  recientemente,  se  propusieron  mutaciones  de  novo  en   leucemia  y  otros  trastornos  de  la  sangre.  Sin  embargo,  la  preparación  de  
las  mitocondrias  como  una  fuente  potencial  de  neoepítopos  de  iPSC  autólogas   líneas  hPSC  con  miles  de  haplotipos  HLA  únicos  no  es  práctica.  En  cambio,  
(Deuse  et  al.,  2019).  Sin  embargo,  la  inmunogenicidad  de  las  iPSC  autólogas   Taylor  et  al.  propusieron  que  10  líneas  hiPSC  homocigóticas  para  tipos  
no  ha  sido  respaldada  por  otras  publicaciones.  Araki  et  al.  generó  múltiples   comunes  de  HLA  seleccionados  de  10  000  donantes  proporcionaron  una  
líneas  ESC  e  iPSC  de  ratones  B6  y  las  diferenció  en  tejidos  de  piel  o  médula   compatibilidad  HLA­A,  HLA­B  y  HLA­DR  completa  para  el  37,7  %  de  los  
ósea receptores  y  una  compatibilidad  beneficiosa  para  el  67,4  %  en  la  población  
(Araki  et  al.,  2013).  Después  de  trasplantar  estas  células  diferenciadas  en   del  Reino  Unido  (Taylor  et  al . ,  2005)  (Figura  2).  La  misma  estrategia  debería  
ratones  B6,  no  observaron  diferencias  en  el  injerto  o  la  infiltración  de  células   funcionar  para  otras  poblaciones  étnicas.  El  desafío  es  cómo  identificar  los  
T  entre  las  ESC  y  las  iPSC.  Guha  y  sus  colegas  también  realizaron   embriones  homocigotos  HLA  de  los  conservados  en  clínicas  de  infertilidad.  
experimentos  similares  y  no  detectaron  inmunoge Con  la  llegada  de  la  tecnología  iPSC,  este  enfoque  se  ha  vuelto

526  Cell  Stem  Cell  27,  1  de  octubre  de  2020
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Figura  3.  Dos  enfoques  para  reducir  la  inmunogenicidad  de  los  aloinjertos  (A)  Enfoque  
Figura  2.  Ventaja  de  los  donantes  homocigóticos  HLA  Los  
celular  universal.  Todas  las  moléculas  del  MHC  de  clase  I  se  inactivan  mediante  la  
haplotipos  HLA  de  10  individuos  se  muestran  con  diferentes  combinaciones  de  colores  
deleción  del  gen  B2M.  A  continuación,  se  introduce  un  transgén  de  fusión  HLA­E/B2M  en  
(superior).  Ninguno  de  ellos  tiene  una  combinación  idéntica  o  ideal.  Las  líneas  iPSC  de  
iPSC  nulo  B2M  para  evitar  la  citotoxicidad  de  las  células  NK  endógenas.
un  donante  homocigoto  HLA  que  se  muestra  en  el  panel  inferior  proporcionarían  
(B)  Líneas  iPSC  homocigóticas  HLA  y  enfoque  solo  C.  Un  pequeño  número  de  líneas  iPSC  
compatibilidad  HLA  con  4  de  cada  10  individuos  que  se  muestran  en  el  panel  superior.
homocigóticas  HLA  puede  cubrir  una  gran  población.  La  interrupción  de  HLA­A  y  HLA­B,  
dejando  HLA­C,  cubriría  a  una  población  más  amplia.  HLA­C  funcionaría  en  la  presentación  
de  epítopos  derivados  de  tumores  y  virus,  si  se  requiere.
más  factible  ya  que  las  iPSC  pueden  generarse  a  partir  de  donantes  cuyos   HLA­C  también  suprimiría  la  activación  de  las  células  NK.

haplotipos  HLA  han  sido  determinados  (Nakatsuji  et  al.,  2008).
Al  colaborar  con  los  biobancos  existentes,  como  los  bancos  de  médula  ósea  y  los   Genes  MHC,  incluido  CIITA  (clase  II,  complejo  mayor  de  histocompatibilidad,  
bancos  de  sangre  del  cordón  umbilical,  los  donantes  homocigotos  HLA  pueden   transactivador).  Este  enfoque  se  conoce  como  encubrimiento  HLA.  Sin  embargo,  
identificarse  de  manera  efectiva  (Umekage  et  al.,  2019).  Una  vez  que  se  obtiene   la  falta  de  MHC  de  clase  I  daría  lugar  a  la  lisis  por  parte  de  las  células  asesinas  
el  consentimiento  informado,  se  pueden  recolectar  muestras  de  sangre  para  la   naturales  (NK),  un  fenómeno  conocido  como  "ausencia  de  reconocimiento  de  sí  
generación  de  iPSC.  En  el  caso  de  los  bancos  de  sangre  del  cordón  umbilical,  las   mismo" (Ichise  et  al.,  2017).  Las  células  NK  tienen  múltiples  receptores  
muestras  de  sangre  congelada  en  el  banco  se  pueden  utilizar  para  la  generación   inhibidores,  como  el  receptor  NKG2A  y  los  receptores  similares  a  inmunoglobulina  
de  iPSC.  Los  halotipos  raros  en  un  país  o  grupo  étnico  pueden  estar  cubiertos   de  células  asesinas  (KIR),  y  la  activación  de  estos  receptores  por  ligandos  suprime  
por  la  colaboración  internacional. la  actividad  de  lisis.  Las  moléculas  del  MHC  de  clase  I  funcionan  como  ligandos  
La  necesidad  de  compatibilidad  HLA  para  evitar  el  rechazo  varía  según  la   de  estos  receptores  y,  por  lo  tanto,  las  células  NK  no  atacan  a  las  células  que  
aplicación  final.  En  modelos  de  monos,  la  reactividad  inmunitaria  después  del   expresan  el  MHC  de  clase  I.  Por  el  contrario,  cuando  las  moléculas  MHC  de  clase  
trasplante  de  células  epiteliales  pigmentadas  de  la  retina  fue  mínima  cuando  se   I  están  encubiertas,  estas  células  son  el  objetivo  de  las  células  NK.
emparejaron  los  alelos  del  MHC  (Sugita  et  al.,  2016).  Esto  se  confirmó  en  un   Una  estrategia  para  superar  la  activación  de  NK  es  introducir  una  molécula  
estudio  clínico  en  el  que  se  trasplantaron  células  retinales  homocigóticas  HLA  a   quimérica  que  consta  de  HLA­E  y  B2M  (Gornalusse  et  al.,  2017).  HLA­E  es  una  
pacientes  con  HLA  compatible  (Sugita  et  al.,  2020).  En  los  cinco  casos,  la   molécula  MHC  de  clase  I  no  clásica  con  polimorfismos  limitados,  que  se  une  y  
supervivencia  de  las  células  trasplantadas  se  observó  un  año  después,  sin  la   activa  NKG2A.  Por  lo  tanto,  una  línea  hESC  o  hiPSC,  en  la  que  se  elimina  B2M  
aplicación  sistémica  de  inmunosupresores.  Sin  embargo,  los  resultados  del   (y  CIITA  si  es  necesario)  y  se  ha  introducido  HLA­E­B2M,  podría  funcionar  como  
trasplante  de  cerebro  son  contradictorios.  Morizane  et  al.  informó  que  la   una  línea  celular  universal  para  todos  los  receptores  (Figura  3A ) .  Xu  et  al.  
combinación  de  MHC  de  trasplantes  de  neuronas  dopaminérgicas  derivadas  de   propuso  otra  estrategia  para  el  encubrimiento  de  HLA  (Xu  et  al.,  2019).  Eliminaron  
iPSC  y  monos  receptores  redujo  significativamente  las  reacciones  inmunitarias   ambos  alelos  HLA­A,  ambos  alelos  HLA­B  y  un  alelo  HLA­C,  dejando  un  HLA­C  
y  aumentó  el  injerto  (Morizane  et  al.,  2017).  Por  el  contrario,  Aron  Badin  et  al.  no   intacto.  Se  ha  demostrado  que  entre  las  moléculas  MHC  de  clase  I,  HLA­A  y  
observó  una  mejora  significativa  en  el  injerto  de  células  neurales  en  el  cerebro  de   HLA­B  son  fundamentales  para  el  rechazo  inmunitario.  Por  lo  tanto,  la  eliminación  
mono  como  resultado  de  la  coincidencia  de  MHC  solo  (Aron  Badin  et  al.,  2019).   de  los  alelos  HLA­A  y  HLA­B  debería  suprimir  la  activación  de  las  células  T  
En  el  trasplante  de  miocitos  cardíacos,  la  coincidencia  de  MHC  disminuyó  la   asesinas  CD8+.
respuesta  inmunitaria,  pero  también  se  requirió  inmunosupresión  para  asegurar  
el  injerto  (Kawamura  et  al.,  2016). Por  el  contrario,  el  HLA­C  sobrante  debería  unirse  a  KIR  y  suprimir  las  células  
NK.  Si  es  necesario,  también  se  elimina  CIITA  para  suprimir  el  MHC  de  clase  II.  
Por  lo  tanto,  incluso  con  compatibilidad  HLA,  parece  que  seguirá  siendo  necesaria   Dado  que  los  haplotipos  HLA­C  son  menos  diversos  que  los  haplotipos  HLA­A  o  
la  inmunosupresión.  Sin  embargo,  se  puede  esperar  reducir  la  dosis  y  la  duración   HLA­B,  los  autores  estiman  que  tan  solo  10  líneas  con  varios  haplotipos  HLA­C  
de  la  inmunosupresión  al  igualar  el  HLA,  lo  que  sería  una  ventaja  significativa   pueden  cubrir  la  mayor  parte  de  la  población  mundial.  Este  enfoque  de  solo  C  
para  los  pacientes. se  puede  generar  de  manera  efectiva  mediante  la  utilización  de  líneas  
Enfoque  de  ocultación  de  HLA   homocigóticas  HLA,  ya  que  solo  se  requieren  dos  ARN  guía,  uno  para  HLA­A  y  
Más  recientemente,  ha  surgido  otro  enfoque  con  el  advenimiento  de  las   otro  para  HLA­B  (Figura  3B ) .
tecnologías  de  edición  de  genes,  especialmente  la  tecnología  CRISPR  (Lanza  et   Banco  de  haplotipos  versus  encubrimiento  Los  
al.,  2019).  Los  genes  HLA  se  pueden  inactivar  en  células  madre  pluripotentes   dos  enfoques,  el  banco  de  haplotipos  HLA  y  el  encubrimiento  HLA,  tienen  ventajas  
(Figura  3).  Todos  los  MHC  de  clase  I,  incluidos  HLA­A,  HLA­B  y  HLA­C,  se  pueden   y  desventajas.  Un  haplobanco  HLA  no  requiere  la  edición  del  genoma.  A  pesar  
inactivar  eliminando  su  gen  beta  2­microglobluin  (B2M)  del  componente  común.   del  rápido  progreso  de  la  tecnología  CRISPR,  los  efectos  fuera  del  objetivo  siguen  
Asimismo,  la  expresión  de  HLA­DP,  HLA­DQ  y  HLA­DR  puede  suprimirse   siendo  motivo  de  preocupación  (Kosicki  et  al.,  2018).  Múltiples  rondas  de  
eliminando  uno  de  los  cuatro  transactivadores  esenciales  para  la  transcripción  de   modificaciones  genéticas  van  acompañadas  de  un  aumento  significativo  en  las  
clase  II. divisiones  celulares;  por  lo  tanto,  una  acumulación  de

Cell  Stem  Cell  27,  1  de  octubre  de  2020  527
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mutaciones  somáticas  es  inevitable.  La  presencia  de  grupo  de  MHC  de  clase  I   convertir  las  células  en  el  estado  "base".  La  conversión  se  logra  tratando  las  
apoyaría  la  inmunogenicidad  contra  antígenos  tumorales  y  antígenos  virales.  Así,   células  con  inhibidores  de  dos  quinasas,  el  llamado  tratamiento  2i,  a  saber,  
si  las  células  trasplantadas  se  vuelven  tumorigénicas  o  se  infectan  por  virus,   inhibidores  de  MEK  y  GSK3  (Ying  et  al.,  2008).  Después  del  tratamiento  2i,  129  
estas  células  pueden  ser  eliminadas  por  las  células  T  asesinas  CD8+.  La   ESC  alcanzan  un  "estado  fundamental"  que  se  caracteriza  por  una  morfología  
presencia  del  grupo  MHC  de  clase  I  intacto,  incluidos  HLA­C  y  HLA­E,  también   indiferenciada,  un  menor  contenido  de  metilación  del  ADN  y  un  mayor  potencial  
es  ventajosa  en  términos  de  supresión  de  la  actividad  de  las  células  NK. para  producir  eficientemente  ratones  quiméricos  y  transmisión  de  línea  germinal.  
El  tratamiento  2i  permite  la  generación  de  ESC  competentes  en  la  línea  germinal  
Sin  embargo,  cabe  señalar  que  la  coincidencia  de  HLA  con  donantes   incluso  a  partir  de  cepas  que  no  son  129.  Esto  probablemente  se  deba  al  borrado  
homocigóticos  no  garantiza  necesariamente  el  privilegio  del  ataque  de  células   de  la  variación  epigenética  por  el  tratamiento  2i.
NK.  Hay  dos  grupos  de  HLA­C,  a  saber,  HLA­C1  y  HLA­C2,  donde  cada  uno  se  
une  a  KIR2DL3  y  KIR2DL1,  respectivamente  (Ichise  et  al.,  2017).  Cuando  se   Heterogeneidad  en  PSC  humanas  También  
utilizan  líneas  iPSC  homocigóticas  HLA,  ya  sea  C1/C1  o  C2/C2,  para  pacientes   se  ha  informado  heterogeneidad  en  líneas  hESC.  Osafune  et  al.  examinó  17  
con  C1/C2,  se  produciría  una  autoactivación  faltante  de  las  células  NK.  Dado   líneas  hESC  por  sus  potenciales  de  diferenciación  (Osafune  et  al.,  2008).  
que  las  frecuencias  de  alotipos  de  C1  frente  a  C2  en  las  poblaciones  japonesas   Detectaron  diferencias  >100  veces  en  los  niveles  de  expresión  de  genes  
son  92,7:7,3,  este  desajuste  sería  raro.  Sin  embargo,  en  otras  poblaciones  en  las   específicos  de  linaje  entre  múltiples  líneas.  Debido  a  estas  variaciones,  algunas  
que  la  frecuencia  de  C2  es  mayor,  este  problema  sería  más  significativo.  Por   líneas  fueron  óptimas  para  la  diferenciación  pancreática,  mientras  que  otras  
ejemplo,  en  poblaciones  polacas,  la  relación  C1­C2  en  6:4  (Ichise  et  al.,  2017).   líneas  fueron  buenas  para  la  generación  de  cardiomiocito.  Keller  y  sus  colegas  
Sin  embargo,  es  probable  que  el  enfoque  de  coincidencia  de  HLA  sea  menos   también  informaron  variaciones  significativas  entre  las  CMP  de  ratones  y  
sensible  al  ataque  de  las  células  NK  que  el  enfoque  de  encubrimiento  de  HLA   humanos  en  sus  protocolos  de  diferenciación  cardíaca  (Kattman  et  al.,  2011).  Su  
que  se  basa  solo  en  un  solo  ligando,  como  HLA­C  o  HLA­E. protocolo  incluye  el  uso  de  proteína  morfogenética  ósea  4  (BMP4)  y  activina/
nodal  para  la  diferenciación  cardiaca  dirigida  in  vitro,  y  observaron  que  la  
La  mayor  ventaja  del  enfoque  de  encubrimiento  HLA  es  el  pequeño  número   concertación  de  estos  dos  factores  de  crecimiento  tenía  que  optimizarse  para  
de  líneas  necesarias  para  cubrir  a  toda  la  población  mundial.  Es  posible  que   líneas  celulares  individuales.
una  sola  línea  hiPSC  sirva  como  fuente  universal  de  células.  Esto  es  
extremadamente  atractivo  en  términos  de  producción  terapéutica  por  varias   La  heterogeneidad  también  es  un  problema  importante  con  las  iPSC.  Estudios  
razones.  En  primer  lugar,  es  rentable.  Por  el  momento,  se  requiere  un  gasto  de   anteriores  que  compararon  un  número  limitado  de  líneas  hESC  e  hiPSC  
al  menos  doscientos  mil  dólares  para  generar  una  línea  hESC  o  hiPSC  de  grado   argumentaron  que  había  diferencias  significativas  en  la  expresión  génica,  el  
GMP.  Además,  las  autoridades  reguladoras  exigirían  datos  preclínicos  rigurosos   estado  epigenético  y  los  potenciales  de  diferenciación  entre  dos  líneas  hPSC  
para  cada  línea  celular  individual. (Yamanaka,  2012).  Sin  embargo,  estudios  posteriores  que  utilizaron  un  mayor  
número  de  muestras  argumentaron  en  contra  de  los  estudios  anteriores.  La  
Además,  como  se  analiza  a  continuación,  la  heterogeneidad  entre  líneas   comparación  de  veinte  o  más  líneas  hESC  e  hiPSC  demostró  que  tanto  ESC  
celulares  es  un  obstáculo  para  el  uso  de  múltiples  líneas  para  terapias  celulares. como  PSC  tienen  variaciones  superpuestas.  Un  estudio  cuidadosamente  
diseñado  por  Hochedlinger  y  sus  colegas  demostró  que  las  hESC  y  las  hiPSC  
Las  PSC  de   genéticamente  coincidentes  son  indistinguibles  (Choi  et  al.,  2015).  Demostraron  
heterogeneidad  comparten  las  mismas  dos  propiedades:  pluripotencia  y   que  los  antecedentes  genéticos  son  el  factor  más  importante  para  determinar  la  
proliferación  infinita.  Sin  embargo,  cada  línea  de  PSC  no  es  idéntica  a  otra. heterogeneidad  en  la  expresión  génica.  Otro  estudio  demostró  la  importancia  de  
Cada  línea  es  diferente  en  morfología,  curva  de  crecimiento,  expresión  génica   los  antecedentes  genéticos  al  medir  las  diferencias  clonales  en  la  diferenciación  
y  propensión  a  diferenciarse  en  varios  linajes  celulares. hepática  de  las  hiPSC  (Kajiwara  et  al.,  2012).
Esta  "heterogeneidad"  es  un  obstáculo  para  las  aplicaciones  posteriores,  incluidas  
las  terapias  celulares. Sin  embargo,  algunas  líneas  iPSC  muestran  defectos  en  la  capacidad  de  
Heterogeneidad  en  PSC  de  ratón  La   diferenciación.  En  la  diferenciación  neuronal,  la  mayoría  de  las  líneas  hiPSC  
heterogeneidad  se  reconoció  por  primera  vez  en  ESC  de  ratón.  Es  bien  sabido   fueron  comparables  a  las  ESC  y  se  diferenciaron  en  células  positivas  para  Pax6  
que  la  capacidad  de  las  mESC  para  producir  ratones  quiméricos  y  experimentar   con  una  eficiencia  de  más  del  95  %  (Koyanagi­Aoi  et  al.,  2013).  Sin  embargo,  
la  transmisión  de  la  línea  germinal  depende  de  la  especie  de  ratón;  solo  las   algunas  líneas  de  iPSC  mostraron  una  eficiencia  de  diferenciación  neuronal  del  
mESC  derivadas  de  129  cepas  tienen  esta  capacidad  (Bradley  et  al.,  1984).  En   80  %,  con  un  número  apreciable  de  células  residuales  no  diferenciadas.  El  
consecuencia,  se  han  generado  ratones  knockout  de  miles  de  genes  utilizando   trasplante  de  estas  células  en  cerebros  de  ratones  inmunodeficientes  resultó  en  
ESC  derivados  de  129.  Por  el  contrario,  las  células  ES  de  otras  cepas  de  ratón   la  formación  de  teratomas.  En  estos  clones  tumorigénicos  se  detectó  una  
muestran  un  quimerismo  y  una  transmisión  de  línea  germinal  deficientes.  Esto   expresión  anormal  de  retrovirus  endógenos,  debido  a  la  hipometilación  del  ADN.  
sugiere  que  los  antecedentes  genéticos  parecen  ser  la  causa  principal  de  la   Un  resultado  similar  se  obtuvo  en  experimentos  relacionados  con  la  diferenciación  
heterogeneidad  de  las  ESC  de  ratón.  Sin  embargo,  múltiples  líneas  ESC  de  la   hematopoyética  (Nishizawa  et  al.,  2016).  Algunas  líneas  iPSC  mostraron  un  
misma  cepa  129  también  muestran  variación  en  su  capacidad  para  hacer   potencial  de  diferenciación  más  bajo,  acompañado  de  un  estado  epigenético  
quimeras,  lo  que  sugiere  un  papel  para  los  factores  epigenéticos.  Después  de   anormal.  Por  lo  tanto,  las  variaciones  epigenéticas  también  contribuyen  a  la  
cada  ronda  de  manipulación  de  genes,  es  necesario  seleccionar  clones  que   heterogeneidad.
puedan  transmitirse  por  línea  germinal  para  establecer  una  línea  de  ratones   PSC  humanas  ingenuas
modificados  genéticamente.  Por  lo  tanto,  la  combinación  de  variación  genética   Para  superar  la  heterogeneidad,  algunos  investigadores  han  intentado  convertir  
y  modificación  epigenética  es  responsable  de  la  heterogeneidad  de  las  líneas   un  estado  "preparado"  de  hPSC  en  un  estado  "ingenuo".  En  la  condición  de  
ESC  de  ratón. cultivo  convencional  con  factor  de  crecimiento  de  fibroblastos  2  (FGF2),  las  hPSC  
Smith  y  sus  colegas  han  demostrado  que  esta  heterogeneidad  entre  especies   se  asemejan  al  epiblasto  posterior  a  la  implantación  en  la  expresión  génica  y  el  
y  dentro  de  las  especies  de  ESC  de  ratón  puede  neutralizarse  mediante estado  epigenético.  Este  estado  se  designa

528  Cell  Stem  Cell  27,  1  de  octubre  de  2020
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Perspectiva

preparado  Por  el  contrario,  las  ESC  y  las  iPSC  de  ratón  se  parecen  a  la  masa  celular   ensayos  clínicos  (Figura  1).  Las  aplicaciones  más  sofisticadas  de  la  tecnología  hPSC  
interna  del  blastocisto  o  al  epiblasto  de  preimplantación.  Este  estado  se  denomina  ingenuo.   también  están  progresando  constantemente:  estas  incluyen  la  diferenciación  de  células  
También  se  establecieron  células  madre  de  ratón  cebadas  a  partir  del  epiblasto  tardío  y   madre  hematopoyéticas  de  PCS  para  la  leucemia  y  otros  trastornos  sanguíneos,  la  
células  madre  del  epiblasto  designadas  (EpiSC),  que  se  asemejan  a  ESC  e  iPSC  humanas   creación  de  organoides  hepáticos  para  tratar  la  insuficiencia  hepática  y,  de  manera  similar,  
en  morfología,  expresión  génica  y  condiciones  de  cultivo  (Brons  et  al.,  2007,  Tesar  et  al.,   la  creación  de  organoides  renales  para  la  insuficiencia  renal.  Si  bien  he  discutido  los  
2007 ) .  El  potencial  de  diferenciación  de  las  EpiSC  es  limitado  en  comparación  con  las   principales  desafíos  para  llevar  los  productos  derivados  de  hPSC  al  paciente  en  esta  
ESC  y  las  iPSC  de  ratón  ingenuo,  ya  que  no  producen  quimeras  cuando  se  inyectan  en  el   Perspectiva,  ha  habido  varias  historias  de  éxito  alentadoras  que  nos  impulsaron  a  la  
blastocisto  de  ratón.  La  inducción  del  estado  fundamental  por  los  inhibidores  2i  mejora  aún   actividad  y  cientos  de  científicos  continúan  trabajando  con  gran  habilidad  para  superar  los  
más  el  potencial  de  diferenciación  de  las  PSC  de  ratón.  Estos  hallazgos  pueden  sugerir   obstáculos  restantes.  Por  ejemplo,  se  están  desarrollando  sistemas  in  vitro  sensibles ,  
que  la  capacidad  de  diferenciación  de  las  hPSC  puede  mejorarse  al  convertirlas  en  estados   como  los  modelos  de  órgano  en  un  chip,  para  predecir  la  tumorigenicidad  (Sato  et  al.,  2019)  
ingenuos  y  fundamentales. y  se  han  identificado  factores  que  pueden  reducir  la  heterogeneidad  (Kunitomi  et  al.,  
2016). ).  Estoy  seguro  de  que  podemos  traer  las  tecnologías  PCS  como  una  opción  viable  
para  el  tratamiento  de  pacientes  a  nivel  mundial,  en  un  futuro  no  muy  lejano.
Se  han  informado  múltiples  enfoques  sobre  cómo  inducir  pluripotencialidad  ingenua  o  
de  estado  fundamental  en  hPSC.  Un  enfoque  es  utilizar  una  combinación  de  inhibidores  
químicos  de  los  factores  de  crecimiento  (The  unissen  et  al.,  2014).  En  humanos,  los  
inhibidores  de  MEK  y  GSK3  más  LIF  (2iL)  solos  no  indujeron  la  conversión  ingenua,  sino  
que  causaron  la  diferenciación  en  el  linaje  neuronal.  Sin  embargo,  al  agregar  inhibidores   EXPRESIONES  DE  GRATITUD
de  tres  quinasas,  ROCK,  BRAF  y  SRC,  en  presencia  de  activina  y  hLIF,  Jaenisch  y  sus  
colegas  lograron  la  conversión  de  ESC  humanos  al  estado  ingenuo  (Theunissen  et  al.,   Agradezco  a  la  Sra.  Miho  Saito  por  su  generoso  apoyo  en  la  preparación  de  este  manuscrito.  
2014) .  En  un  protocolo  alternativo,  Takashima  et  al.  indujo  el  estado  ingenuo  al   También  agradezco  a  los  Dres.  Toru  Kawamura,  Jun  Takahashi,  Yasuhiro  Taka  shima,  Masayo  
Takahashi,  Koji  Nishida,  Yoshiki  Sawa,  Shigeru  Miyagawa,  Keiichi  Fukuda,  Masaya  Nakamura  y  
sobreexpresar  dos  factores  de  transcripción,  NANOG  y  KLF2,  en  presencia  de  2iL  
Hideyuki  Okano  por  brindarme  información  útil.  Nuestros  trabajos  en  iPSC  cuentan  con  el  apoyo  
(Takashima  et  al.,  2014).  Una  vez  establecido,  el  estado  ingenuo  se  mantuvo  en  presencia  
del  Core  Center  for  iPS  Cell  Research  (19bm0104001h0007),  la  Red  del  Centro  de  Investigación  
de  un  inhibidor  de  la  proteína  quinasa  C  (PKC),  sin  expresión  transgénica. para  la  Realización  de  la  Medicina  Regenerativa  de  AMED  (Agencia  Japonesa  para  la  Investigación  
y  el  Desarrollo  Médico)  y  el  Fondo  de  Investigación  de  Células  iPS  del  Centro  de  Investigación  y  
Aplicación  de  Células  iPS,  Universidad  de  Kioto.

Las  células  humanas  ingenuas  establecidas  por  estos  dos  métodos  mostraron  una  
DECLARACIÓN  DE  INTERESES
desmetilación  global  del  ADN.  Por  lo  tanto,  utilizando  estos  procedimientos,  se  puede  
anular  la  heterogeneidad  causada  por  la  variación  epigenética.
SY  es  inventor  de  patentes  sobre  la  tecnología  iPSC.  SY  es  asesor  científico,  sin  salario,  de  iPS  
Una  preocupación  acerca  de  las  hPSC  ingenuas  es  su  integridad  genética.  En  las   Academia  Japan  Inc.,  que  maneja  las  licencias  de  las  patentes.
células  humanas  ingenuas  generadas  por  cinco  inhibidores  de  quinasa,  se  observaron  
repetidamente  anomalías  cromosómicas  (Theunissen  et  al.,  2014).  Además,  Avior  et  al.  
informaron  que  las  hESC  ingenuas  contenían  más  SNV  que  sus  contrapartes  preparadas   REFERENCIAS

(Avior  et  al.,  2019).  Esto  puede  deberse  al  aumento  de  la  tasa  de  división  celular  de  las  
células  vírgenes.  Alternativamente,  las  vías  involucradas  en  el  daño  y  la  reparación  del   Amps,  K.,  Andrews,  PW,  Anyfantis,  G.,  Armstrong,  L.,  Avery,  S.,  Baharvand,  H.,  Baker,  J.,  Baker,  
D.,  Muñoz,  MB,  Beil,  S.,  et  al. .;  Iniciativa  Internacional  de  Células  Madre  (2011).  El  cribado  de  
ADN  pueden  estar  reguladas  a  la  baja  en  el  estado  pluripotente  ingenuo  humano.  Más  
células  madre  embrionarias  humanas  étnicamente  diversas  identifica  un  amplicón  mínimo  del  
recientemente,  otro  protocolo  que  utilizó  una  concentración  reducida  del  inhibidor  de  MEK   cromosoma  20  que  confiere  una  ventaja  de  crecimiento.
Nat.  Biotecnología.  29,  1132–1144.
dio  como  resultado  una  mayor  tasa  de  proliferación  junto  con  menos  anomalías  
cromosómicas  (Di  Stefano  et  al.,  2018).  Se  requieren  más  estudios  para  comprender  este  
Araki,  R.,  Uda,  M.,  Hoki,  Y.,  Sunayama,  M.,  Nakamura,  M.,  Ando,  S.,  Sugiura,  M.,  Ideno,  
importante  tema.  Se  siguen  describiendo  estados  intermedios  adicionales  de  pluripotencia   H.,  Shimada,  A.,  Nifuji,  A.,  y  Abe,  M.  (2013).  Inmunogenicidad  insignificante  de  células  
diferenciadas  terminalmente  derivadas  de  células  madre  embrionarias  o  pluripotentes  
(Cornacchia  et  al.,  2019),  con  implicaciones  potenciales  para  la  discusión  anterior.
inducidas.  Naturaleza  494,  100–104.

Araki,  R.,  Hoki,  Y.,  Suga,  T.,  Obara,  C.,  Sunayama,  M.,  Imadome,  K.,  Fujita,  M.,  Kamimura,  S.,  
Nakamura,  M.,  Wakayama,  S. ,  et  al.  (2020).  Las  aberraciones  genéticas  en  las  iPSC  se  introducen  
por  una  deficiencia  transitoria  del  punto  de  control  del  ciclo  celular  G1/S.
Otra  preocupación  sobre  hPSC  ingenua  es  la  pérdida  de  impronta.  Como  se  mencionó   Nat.  común  11,  197.
anteriormente,  un  rasgo  característico  de  hPSC  ingenuo  es  la  hipometilación  global.  Tras  
Aron  Badin,  R.,  Bugi,  A.,  Williams,  S.,  Vadori,  M.,  Michael,  M.,  Jan,  C.,  Nassi,  A.,  Lecourtois,  S.,  
la  rediferenciación  al  estado  cebado,  la  mayoría  de  las  regiones  genómicas  se  vuelven  a   Blancher,  A.,  Cozzi,  E. ,  et  al.  (2019).  La  coincidencia  de  MHC  no  previene  el  rechazo  a  largo  plazo  
metilar.  Este  no  es  el  caso,  sin  embargo,  para  los  genes  impresos.  La  mayoría  de  los   de  las  neuronas  derivadas  de  iPSC  en  primates  no  humanos.
Nat.  común  10,  4357.
patrones  impresos  permanecen  borrados  en  las  celdas  preparadas  nuevamente  (Theunissen  
et  al.,  2016). Avior,  Y.,  Eggan,  K.  y  Benvenisty,  N.  (2019).  Mutaciones  relacionadas  con  el  cáncer  
identificadas  en  células  madre  pluripotentes  humanas  preparadas  e  ingenuas.  Célula  
La  impresión  anormal  puede  dificultar  las  aplicaciones  clínicas  de  las  hPSC  ingenuas.
Célula  Madre  25,  456–461.

Bradley,  A.,  Evans,  M.,  Kaufman,  MH  y  Robertson,  E.  (1984).  Formación  de  quimeras  de  línea  
CONCLUSIÓN germinal  a  partir  de  líneas  celulares  de  teratocarcinoma  derivadas  de  embriones.  Naturaleza  309,  
255–256.

El  potencial  de  las  células  madre  pluripotentes  humanas  en  terapias  celulares  y  otras   Brons,  IG,  Smithers,  LE,  Trotter,  MW,  Rugg­Gunn,  P.,  Sun,  B.,  Chuva  de  Sousa  Lopes,  SM,  Howlett,  
SK,  Clarkson,  A.,  Ahrlund­Richter,  L.,  Pedersen,  RA  y  Vallier,  L.  (2007).  Derivación  de  células  madre  
aplicaciones  es  enorme.  Las  terapias  celulares  para  más  de  14  enfermedades  y  lesiones  
epiblásticas  pluripotentes  a  partir  de  embriones  de  mamíferos.  Naturaleza  448,  191–195.
han  alcanzado  o  están  a  punto  de  alcanzar

Cell  Stem  Cell  27,  1  de  octubre  de  2020  529
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Campbell,  KH,  McWhir,  J.,  Ritchie,  WA  y  Wilmut,  I.  (1996).  Ovejas  clonadas  por   Kajiwara,  M.,  Aoi,  T.,  Okita,  K.,  Takahashi,  R.,  Inoue,  H.,  Takayama,  N.,  Endo,  H.,  Eto,  K.,  
transferencia  nuclear  a  partir  de  una  línea  celular  cultivada.  Naturaleza  380,  64–66. Toguchida ,  J.,  Uemoto,  S.,  y  Yamanaka,  S.  (2012).  Variaciones  dependientes  del  donante  en  la  
diferenciación  hepática  a  partir  de  células  madre  pluripotentes  inducidas  por  humanos.  proc.  
Carson,  MJ,  Doose,  JM,  Melchior,  B.,  Schmid,  CD  y  Ploix,  CC  (2006). nacional  Academia  ciencia  EE.  UU.  109,  12538–12543.
Privilegio  inmunológico  del  SNC:  escondido  a  simple  vista.  inmunol.  Rev.  213,  48–65.
Kattman,  SJ,  Witty,  AD,  Gagliardi,  M.,  Dubois,  NC,  Niapour,  M.,  Hotta,  A.,  Ellis,  J.  y  Keller,  G.  
Choi,  J.,  Lee,  S.,  Mallard,  W.,  Clement,  K.,  Tagliazucchi,  GM,  Lim,  H.,  Choi,  IY,  Ferrari,  F.,   (2011).  La  optimización  específica  de  la  etapa  de  la  señalización  de  activina/nodal  y  BMP  
Tsankov,  AM,  Pop,  R.,  et  al.  (2015).  Una  comparación  de  líneas  celulares  genéticamente   promueve  la  diferenciación  cardíaca  de  las  líneas  de  células  madre  pluripotentes  de  ratón  y  
emparejadas  revela  la  equivalencia  de  iPSC  y  ESC  humanos. humanos.  Célula  madre  celular  8,  228–240.
Nat.  Biotecnología.  33,  1173–1181.
Kawamura,  T.,  Miyagawa,  S.,  Fukushima,  S.,  Maeda,  A.,  Kashiyama,  N.,  Ka  wamura,  A.,  Miki,  
Cornacchia,  D.,  Zhang,  C.,  Zimmer,  B.,  Chung,  SY,  Fan,  Y.,  Soliman,  MA,  Tchieu,  J.,  Chambers,   K.,  Okita,  K.,  Yoshida,  Y.,  Shiina,  T. ,  et  al.  (2016).  Los  cardiomiocitos  derivados  de  células  madre  
SM,  Shah,  H.,  Paull,  D.,  et  al.  (2019).  La  privación  de  lípidos  induce  un  estado  intermedio  de   pluripotentes  inducidas  por  homocigotos  MHC  exhiben  inmunogenicidad  alogénica  reducida  en  
pluripotencialidad  estable,  naive­to­primed,  en  las  PSC  humanas.  Célula  madre  celular  25,  120– primates  no  humanos  emparejados  con  MHC.
136. Informes  de  células  madre  6,  312–320.

Deuse,  T.,  Hu,  X.,  Agbor­Enoh,  S.,  Koch,  M.,  Spitzer,  MH,  Gravina,  A.,  Alawi,  M.,  Marishta,  A.,   Kikuchi,  T.,  Morizane,  A.,  Doi,  D.,  Magotani,  H.,  Onoe,  H.,  Hayashi,  T.,  Mizuma,  H.,  Takara,  S.,  
Peters,  B.,  Kosaloglu­Yalcin,  Z.,  et  al.  (2019).  Las  mutaciones  de  novo  en  el  ADN  mitocondrial   Takahashi,  R.,  Inoue,  H.,  et  al.  (2017).  Las  neuronas  dopaminérgicas  derivadas  de  células  iPS  
de  las  iPSC  producen  neoepítopos  inmunogénicos  en  ratones  y  humanos.  Nat.  Biotecnología.  37,   humanas  funcionan  en  un  modelo  de  enfermedad  de  Parkinson  en  primates.  Nature  548,  592–
1137–1144. 596.

Di  Stefano,  B.,  Ueda,  M.,  Sabri,  S.,  Brumbaugh,  J.,  Huebner,  AJ,  Sahakyan,  A.,  Clement,  K.,   Kojima,  K.,  Miyoshi,  H.,  Nagoshi,  N.,  Kohyama,  J.,  Itakura,  G.,  Kawabata,  S.,  Ozaki,  M.,  Iida,  T.,  
Clowers,  KJ,  Erickson,  AR,  Shioda,  K.,  et  al. .  (2018). Sugai,  K.,  Ito,  S.,  et  al.  (2019).  Ablación  selectiva  de  células  tumorales  igénicas  después  del  
La  inhibición  reducida  de  MEK  preserva  la  estabilidad  genómica  en  células  madre  embrionarias   trasplante  de  células  madre/progenitoras  neurales  derivadas  de  células  madre  pluripotentes  
humanas  ingenuas.  Nat.  Métodos  15,  732–740. inducidas  por  humanos  en  lesiones  de  la  médula  espinal.  Traducción  de  células  madre.
Medicina.  8,  260–270.
Dullens,  B.,  de  Putter,  R.,  Lambertini,  M.,  Toss,  A.,  Han,  S.,  Van  Nieuwenhuy  sen,  E.,  Van  Gorp,  
T.,  Vanderstichele,  A.,  Van  Ongeval,  C.,  Keupers,  M.,  et  al. Kosicki,  M.,  Tomberg,  K.  y  Bradley,  A.  (2018).  La  reparación  de  roturas  de  doble  cadena  inducidas  
(2020).  Vigilancia  del  cáncer  en  portadores  sanos  de  variantes  patogénicas  de  la  línea  germinal   por  CRISPR­Cas9  conduce  a  grandes  deleciones  y  arreglos  posteriores  complejos.  Nat.  
en  BRCA1/2:  una  revisión  de  las  pautas  de  prevención  secundaria. Biotecnología.  36,  765–771.
J.  Oncol.  2020,  9873954.
Koyanagi­Aoi,  M.,  Ohnuki,  M.,  Takahashi,  K.,  Okita,  K.,  Noma,  H.,  Sawamura,  Y.,  Teramoto,  I.,  
Eggington,  JM,  Bowles,  KR,  Moyes,  K.,  Manley,  S.,  Esterling,  L.,  Sizemore,  S.,  Rosenthal,  E.,   Narita,  M.,  Sato,  Y.,  Ichisaka,  T. .,  et  al.  (2013).  Fenotipos  defectuosos  de  diferenciación  revelados  
Theisen,  A.,  Saam,  J.,  Arnell,  C.,  et  al. .  (2014).  Un  programa  integral  de  laboratorio  para  la   por  análisis  a  gran  escala  de  células  madre  pluripotentes  humanas.  proc.  nacional  Academia  
clasificación  de  variantes  de  significado  incierto  en  genes  de  cáncer  hereditario.  clin.  Gineta.  86,   ciencia  EE.  UU.  110,  20569–20574.
229–237.
Kunitomi,  A.,  Yuasa,  S.,  Sugiyama,  F.,  Saito,  Y.,  Seki,  T.,  Kusumoto,  D.,  Kashi  mura,  S.,  Takei,  
Gore,  A.,  Li,  Z.,  Fung,  HL,  Young,  JE,  Agarwal,  S.,  Antosiewicz­Bourget,  J.,  Canto,  I.,  Giorgetti,  A.,   M.,  Tohyama,  S.,  Hashimoto,  H. ,  et  al.  (2016).  H1foo  tiene  un  papel  fundamental  en  la  calificación  
Israel,  MA,  Kiskinis,  E.,  et  Alabama.  (2011).  Mutaciones  de  codificación  somáticas  en  células   de  células  madre  pluripotentes  inducidas.  Informes  de  células  madre  6,  825–833.
madre  pluripotentes  inducidas  por  humanos.  Naturaleza  471,  63–67.

Gornalusse,  GG,  Hirata,  RK,  Funk,  SE,  Riolobos,  L.,  Lopes,  VS,  Manske,  G.,  Prunkard,  D.,   Kwon,  EM,  Connelly,  JP,  Hansen,  NF,  Donovan,  FX,  Winkler,  T.,  Davis,  BW,  Alkadi,  H.,  
Colunga,  AG,  Hanafi,  LA,  Clegg,  DO,  et  al.  (2017).  Las  células  madre  pluripotentes  que  expresan   Chandrasekharappa,  SC,  Dunbar,  CE,  Mullikin,  JC  y  Liu,  P.  (2017) .  Los  iPSC  y  los  subclones  de  
HLA­E  escapan  a  las  respuestas  alogénicas  y  la  lisis  por  parte  de  las  células  NK.  Nat.   fibroblastos  de  la  misma  población  de  fibroblastos  contienen  niveles  comparables  de  variaciones  
Biotecnología.  35,  765–772. de  secuencia.  proc.  nacional  Academia  ciencia
Estados  Unidos  114,  1964–1969.
Guha,  P.,  Morgan,  JW,  Mostoslavsky,  G.,  Rodrigues,  NP  y  Boyd,  AS
(2013).  Falta  de  respuesta  inmune  a  células  diferenciadas  derivadas  de  células  madre  pluripotentes   Lanza,  R.,  Russell,  DW  y  Nagy,  A.  (2019).  Ingeniería  de  células  universales  que  evaden  la  
inducidas  singénicas.  Célula  madre  celular  12,  407–412. detección  inmunológica.  Nat.  Rev.  Inmunol.  19,  723–733.
€

Hayashi,  R.,  Ishikawa,  Y.,  Katori,  R.,  Sasamoto,  Y.,  Taniwaki,  Y.,  Takayanagi,  H.,  Tsujikawa,  M.,   Li,  W.,  Englund,  E.,  Widner,  H.,  Mattsson,  B.,  van  Westen,  D.,  Latt,  J.,  Rehncrona ,  S.,  Brundin,  
Sekiguchi,  K.,  Quantock,  AJ  y  Nishida,  K.  ( 2017).  Generación  coordinada  de  múltiples  linajes  de   P.,  Bjo¨  rklund,  A.,  Lindvall,  O.  y  Li,  JY  (2016).
células  de  tipo  ocular  y  fabricación  de  láminas  de  células  epiteliales  corneales  funcionales  a  partir   La  extensa  inervación  dopaminérgica  derivada  del  injerto  se  mantiene  24  años  después  del  
de  células  iPS  humanas.  Nat.  Protocolo  12,  683–696. trasplante  en  el  cerebro  parkinsoniano  en  degeneración.  proc.  nacional  Academia  ciencia
EE.  UU.  113,  6544–6549.

Hayashi,  R.,  Ishikawa,  Y.,  Katayama,  T.,  Quantock,  AJ  y  Nishida,  K. Lo  Sardo,  V.,  Ferguson,  W.,  Erikson,  GA,  Topol,  EJ,  Baldwin,  KK  y  Tor  kamani,  A.  (2017).  
(2018).  CD200  facilita  el  aislamiento  de  células  epiteliales  corneales  derivadas  de  células  madre   Influencia  de  la  edad  del  donante  en  las  células  madre  pluripotentes  inducidas.
pluripotentes  humanas.  ciencia  Rep.  8,  16550. Nat.  Biotecnología.  35,  69–74.

Hong,  H.,  Takahashi,  K.,  Ichisaka,  T.,  Aoi,  T.,  Kanagawa,  O.,  Nakagawa,  M.,  Okita,  K.  y  Yamanaka,   Malchenko,  S.,  Xie,  J.,  de  Fatima  Bonaldo,  M.,  Vanin,  EF,  Bhattacharyya,  BJ,  Belmadani,  A.,  Xi,  
S.  (2009).  Supresión  de  la  generación  inducida  de  células  madre  pluripotentes  por  la  vía  p53­p21.   G.,  Galat,  V.,  Goossens,  W.,  Seftor,  RE,  et  Alabama.
Naturaleza  460,  1132–1135. (2014).  Inicio  de  la  formación  de  rosetas  durante  la  diferenciación  neuronal  espontánea  de  
colonias  hESC  e  hiPSC.  Gen  534,  400–407.
Hwang,  WS,  Ryu,  YJ,  Park,  JH,  Park,  ES,  Lee,  EG,  Koo,  JM,  Jeon,  HY,  Lee,  BC,  Kang,  SK,  Kim,  
SJ,  et  al.  (2004).  Evidencia  de  una  línea  de  células  madre  embrionarias  humanas  pluripotentes   Mandai,  M.,  Watanabe,  A.,  Kurimoto,  Y.,  Hirami,  Y.,  Morinaga,  C.,  Daimon,  T.,  Fujihara,  M.,  
derivadas  de  un  blastocisto  clonado.  ciencia  303,  1669–1674. Akimaru,  H.,  Sakai,  N.,  Shibata,  Y.,  et  al.  (2017).  Células  retinales  derivadas  de  células  madre  
inducidas  autólogas  para  la  degeneración  macular.  N.  ingl.
J.Med.  376,  1038–1046.
Ichise,  H.,  Nagano,  S.,  Maeda,  T.,  Miyazaki,  M.,  Miyazaki,  Y.,  Kojima,  H.,  Ya  wata,  N.,  Yawata,  
M.,  Tanaka,  H.,  Saji,  H. ,  et  al.  (2017).  Aloreactividad  de  células  NK  frente  a  tejido  haploidéntico   Martincorena,  I.,  Roshan,  A.,  Gerstung,  M.,  Ellis,  P.,  Van  Loo,  P.,  McLaren,  S.,  Wedge,  DC,  
HLA  no  coincidente  con  ligando  KIR  derivado  de  iPSC  homocigóticas  con  haplotipo  HLA.  Informes   Fullam,  A.,  Alexandrov,  LB,  Tubio ,  JM,  et  al. .  (2015).  Evolución  tumoral .  Alta  carga  y  selección  
de  células  madre  9,  853–867. positiva  generalizada  de  mutaciones  somáticas  en  piel  humana  normal.  Ciencia  348,  880–886.

Ilic,  D.  y  Ogilvie,  C.  (2017).  Reseña  concisa:  Células  madre  embrionarias  humanas  ¿Qué  hemos  
hecho?  ¿Que  estamos  haciendo?  ¿A  dónde  vamos?  Células  madre  35,  17–25. Merkle,  FT,  Ghosh,  S.,  Kamitaki,  N.,  Mitchell,  J.,  Avior,  Y.,  Mello,  C.,  Kashin,  S.,  Mekhoubad,  S.,  
Ilic,  D.,  Charlton,  M.,  et  Alabama.  (2017).  Las  células  madre  pluripotentes  humanas  adquieren  y  
expanden  recurrentemente  mutaciones  negativas  dominantes  de  P53.  Naturaleza  545,  229–233.
Ji,  J.,  Ng,  SH,  Sharma,  V.,  Neculai,  D.,  Hussein,  S.,  Sam,  M.,  Trinh,  Q.,  Church,  GM,  McPherson,  
JD,  Nagy,  A.  y  Batada,  NN  (2012).  Tasa  de  mutación  de  codificación  elevada  durante  la  
reprogramación  de  células  somáticas  humanas  en  células  madre  pluripotentes  inducidas.  Células   Morizane,  A.,  Kikuchi,  T.,  Hayashi,  T.,  Mizuma,  H.,  Takara,  S.,  Doi,  H.,  Mawa  tari,  A.,  Glasser,  
madre  30,  435–440. MF,  Shiina,  T.,  Ishigaki,  H.,  et  al.  (2017).  coincidencia  de  MHC

530  Cell  Stem  Cell  27,  1  de  octubre  de  2020
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Perspectiva

mejora  el  injerto  de  neuronas  derivadas  de  iPSC  en  primates  no  humanos.  Nat. células  madre  embrionarias  humanas  obtenidas  por  transferencia  nuclear  de  células  somáticas.  celda  
común  8,  385. 153,  1228­1238.

Mosquera  Orgueira,  A.,  Rodrı´guez  Antelo,  B.,  Dı´az  Arias,  JA,  Dı´az  Varela,  N.,  Alonso  Vence,  N.,   Tada,  M.,  Takahama,  Y.,  Abe,  K.,  Nakatsuji,  N.  y  Tada,  T.  (2001).  Reprogramación  nuclear  de  células  
Gonza´  lez  Per´rez,  MS,  and  Bello  Lo´  pez,  JL  (2020).  Nuevos  puntos  críticos  de  mutación  dentro  de  las   somáticas  por  hibridación  in  vitro  con  células  ES.  actual
regiones  reguladoras  no  codificantes  del  genoma  de  la  leucemia  linfocítica  crónica.  ciencia  Rep.  10,   Biol.  11,  1553–1558.
2407.
Takahashi,  K.  y  Yamanaka,  S.  (2006).  Inducción  de  células  madre  pluripotentes  a  partir  de  cultivos  de  
Nakamura,  M.  y  Okano,  H.  (2013).  Terapias  de  trasplante  celular  para  la  lesión  de  la  médula  espinal   fibroblastos  adultos  y  embrionarios  de  ratón  mediante  factores  definidos.  Celúla  126,  663–676.
centradas  en  células  madre  pluripotentes  inducidas.  Resolución  celular  23,  70–80.

Nakatsuji,  N.,  Nakajima,  F.  y  Tokunaga,  K.  (2008).  Banco  de  haplotipos  HLA  y  células  iPS.  Nat.   Takahashi,  K.,  Tanabe,  K.,  Ohnuki,  M.,  Narita,  M.,  Ichisaka,  T.,  Tomoda,  K.  y  Yamanaka,  S.  (2007).  
Biotecnología.  26,  739–740.
Inducción  de  células  madre  pluripotentes  a  partir  de  fibroblastos  humanos  adultos  mediante  factores  
definidos.  Celda  131,  861–872.
Nishizawa,  M.,  Chonabayashi,  K.,  Nomura,  M.,  Tanaka,  A.,  Nakamura ,  M.,  Inagaki,  A.,  Nishikawa,  M.,  
Takei,  I.,  Oishi,  A.,  Tanabe,  K. ,  et  al.  (2016).  La  variación  epigenética  entre  líneas  de  células  madre  
Takashima,  Y.,  Guo,  G.,  Loos,  R.,  Nichols,  J.,  Ficz,  G.,  Krueger,  F.,  Oxley,  D.,  Santos,  F.,  Clarke,  J.,  
pluripotentes  inducidas  por  humanos  es  un  indicador  de  la  capacidad  de  diferenciación.  Célula  madre  
Mansfield,  W. ,  et  al.  (2014).  Restablecimiento  del  circuito  de  control  del  factor  de  transcripción  hacia  la  
celular  19,  341–354.
pluripotencialidad  del  estado  fundamental  en  humanos.  celda  158,  1254–1269.

Okita,  K.,  Ichisaka,  T.  y  Yamanaka,  S.  (2007).  Generación  de  células  madre  pluripotentes  inducidas  
competentes  de  la  línea  germinal.  Naturaleza  448,  313–317.
Taylor,  AW  (2016).  Privilegio  inmune  ocular  y  trasplante.  Frente.  Soy  Muñol.  7,  37.

Okita,  K.,  Nakagawa,  M.,  Hyenjong,  H.,  Ichisaka,  T.  y  Yamanaka,  S.  (2008).
Generación  de  células  madre  pluripotentes  inducidas  en  ratón  sin  vectores  virales.  Science  322,  949–
953. Taylor,  CJ,  Bolton,  EM,  Pocock,  S.,  Sharples,  LD,  Pedersen,  RA  y  Bradley,  JA  (2005).  Banco  de  células  
madre  embrionarias  humanas:  estimación  del  número  de  líneas  celulares  de  donantes  necesarias  para  
Okubo,  T.,  Iwanami,  A.,  Kohyama,  J.,  Itakura,  G.,  Kawabata,  S.,  Nishiyama,  Y.,  Sugai,  K.,  Ozaki,  M.,   la  compatibilidad  de  HLA.  lanceta  366,  2019–2025.
Iida,  T.,  Matsubayashi,  K.,  et  al.  (2016).  El  pretratamiento  con  un  inhibidor  de  g­secretasa  previene  el  
crecimiento  excesivo  similar  a  un  tumor  en  trasplantes  derivados  de  iPSC  humanos  para  lesiones  de  
la  médula  espinal.  Informes  de  células  madre  7,  649–663. Tesar,  PJ,  Chenoweth,  JG,  Brook,  FA,  Davies,  TJ,  Evans,  EP,  Mack,  DL,  Gardner,  RL  y  McKay,  RD  
(2007).  Las  nuevas  líneas  celulares  del  epiblasto  de  ratón  comparten  características  definitorias  con  las  
Osafune,  K.,  Caron,  L.,  Borowiak,  M.,  Martinez,  RJ,  Fitz­Gerald,  CS,  Sato,  Y.,  Cowan,  CA,  Chien,  KR  y   células  madre  embrionarias  humanas.  Naturaleza  448,  196–199.
Melton,  DA  (2008).  Marcadas  diferencias  en  la  propensión  a  la  diferenciación  entre  las  líneas  de  células  
madre  embrionarias  humanas.  Nat.  Biotecnología .  26,  313–315.
Theunissen,  TW,  Friedli,  M.,  He,  Y.,  Planet,  E.,  O'Neil,  RC,  Markoulaki,  S.,  Pontis,  J.,  Wang,  H.,  
Iouranova,  A.,  Imbeault,  M.,  et  al.  (2016).  Criterios  moleculares  para  definir  el  estado  pluripotente  
Peshkin,  BN,  DeMarco,  TA,  Brogan,  BM,  Lerman,  C.  e  Isaacs,  C. humano  ingenuo.  Célula  madre  celular  19,  502–515.
(2001).  Pruebas  BRCA1/2:  temas  complejos  en  la  interpretación  de  resultados.  J.  Clin.  en  la  col.  19,  
2555–2565.
Theunissen,  TW,  Powell,  BE,  Wang,  H.,  Mitalipova,  M.,  Faddah,  DA,  Reddy,  J.,  Fan,  ZP,  Maetzel,  D.,  
Rouhani,  FJ,  Nik­Zainal,  S.,  Wuster,  A.,  Li,  Y.,  Conte,  N.,  Koike­Yusa,  H.,  Ku  masaka,  N.,  Vallier,  L.,   Ganz,  K.,  Shi,  L.,  et  al.  (2014).  Identificación  sistemática  de  las  condiciones  de  cultivo  para  la  inducción  
Yusa,  K.  y  Bradley,  A.  (2016).  Historia  mutacional  de  un  linaje  celular  humano  desde  células  madre   y  el  mantenimiento  de  la  pluripotencialidad  humana  ingenua.  Célula  madre  celular  15,  471–487.
somáticas  hasta  pluripotentes  inducidas.  PLoS  Genet.  12,  e1005932.

Thomson,  JA,  Itskovitz­Eldor,  J.,  Shapiro,  SS,  Waknitz,  MA,  Swiergiel,  JJ,  Marshall,  VS  y  Jones,  JM  
Sato,  Y.,  Bando,  H.,  Di  Piazza,  M.,  Gowing,  G.,  Herberts,  C.,  Jackman,  S.,  Leoni,  G.,  Libertini,  S.,   (1998).  Líneas  de  células  madre  embrionarias  derivadas  de  blastocistos  humanos.  Ciencia  282,  1145–
MacLachlan,  T.,  McBlane,  JW,  et  al.  (2019).  Evaluación  de  la  tumorigenicidad  de  los  productos  de   1147.
terapia  celular:  la  necesidad  de  un  consenso  global  y  puntos  a  considerar.  Citoterapia  21,  1095–1111.
Umekage,  M.,  Sato,  Y.  y  Takasu,  N.  (2019).  Descripción  general:  un  inventario  de  células  iPS  en  CiRA.  
inflamacion  regeneración  39,  17.
Sharma,  R.,  Khristov,  V.,  Rising,  A.,  Jha,  BS,  Dejene,  R.,  Hotaling,  N.,  Li,  Y.,  Stoddard,  J.,  Stankewicz,  
C.,  Wan,  Q.,  et  Alabama.  (2019).  El  parche  de  grado  clínico  derivado  del  epitelio  pigmentario  de  la  
Xu,  H.,  Wang,  B.,  Ono,  M.,  Kagita,  A.,  Fujii,  K.,  Sasakawa,  N.,  Ueda,  T.,  Gee,  P.,  Nishikawa,  M.,  
retina  derivado  de  células  madre  rescata  la  degeneración  de  la  retina  en  roedores  y  cerdos.  ciencia  
Nomura,  M. ,  et  al.  (2019).  La  interrupción  dirigida  de  genes  HLA  a  través  de  CRISPR­Cas9  genera  
Traducir  Medicina.  11,  eaat5580.
iPSC  con  compatibilidad  inmunológica  mejorada.  Célula  madre  celular  24,  566–578.

Sondka,  Z.,  Bamford,  S.,  Cole,  CG,  Ward,  SA,  Dunham,  I.  y  Forbes,  SA
(2018).  El  censo  genético  del  cáncer  COSMIC:  describe  la  disfunción  genética  en  todos  los  cánceres  
Yamanaka,  S.  (2012).  Células  madre  pluripotentes  inducidas:  pasado,  presente  y  futuro.
humanos.  Nat.  Rev.  Cáncer  18,  696–705.
Célula  madre  celular  10,  678–684.

Sougawa,  N.,  Miyagawa,  S.,  Fukushima,  S.,  Kawamura,  A.,  Yokoyama,  J.,  Ito,  E.,  Harada,  A.,  Okimoto,  
Ying,  Q.­L.,  Wray,  J.,  Nichols,  J.,  Batlle­Morera,  L.,  Doble,  B.,  Woodgett,  J.,  Cohen,  P.  y  Smith,  A.  
K.,  Mochizuki­Oda,  N.,  Saito,  A .,  y  Sawa,  Y.  (2018).
(2008).  El  estado  fundamental  de  la  autorrenovación  de  células  madre  embrionarias .  Naturaleza  453,  
La  focalización  inmunológica  de  CD30  elimina  las  células  madre  pluripotentes  humanas  tumorigénicas ,  
519–523.
lo  que  permite  una  aplicación  clínica  más  segura  de  la  terapia  celular  basada  en  hiPSC.
ciencia  Rep.  8,  3726.
Yokoyama,  A.,  Kakiuchi,  N.,  Yoshizato,  T.,  Nannya,  Y.,  Suzuki,  H.,  Takeuchi,  Y.,  Shiozawa,  Y.,  Sato,  
Y.,  Aoki,  K.,  Kim,  SK,  et.  Alabama.  (2019).  Remodelación  relacionada  con  la  edad  del  epitelio  esofágico  
Sugita,  S.,  Iwasaki,  Y.,  Makabe,  K.,  Kamao,  H.,  Mandai,  M.,  Shiina,  T.,  Ogasa  wara,  K.,  Hirami,  Y.,  
Kurimoto,  Y.  y  Takahashi,  M.  (2016).  Trasplante  exitoso  de  células  epiteliales  del  pigmento  retinal  de   por  conductores  de  cáncer  mutados.  naturaleza  565,  312–317.

iPSC  homocigóticas  MHC  en  modelos  emparejados  con  MHC.  Informes  de  células  madre  7,  635–648.

Young,  MA,  Larson,  DE,  Sun,  CW,  George,  DR,  Ding,  L.,  Miller,  CA,  Lin,  L.,  Pawlik,  KM,  Chen,  K.,  Fan,  
Sugita,  S.,  Mandai,  M.,  Hirami,  Y.,  Takagi,  S.,  Maeda,  T.,  Fujihara,  M.,  Matsu  zaki,  M.,  Yamamoto,  M.,   X.,  et  al.  (2012).  Las  mutaciones  de  fondo  en  las  células  parentales  explican  la  mayor  parte  de  la  
Iseki,  K.,  Hayashi,  N. ,  et  al.  (2020).  Trasplante  de  RPE  derivado  de  células  iPS  alogénicas  HLA   heterogeneidad  genética  de  las  células  madre  pluripotentes  inducidas.  Célula  madre  celular  10,  570–
emparejadas  para  la  degeneración  macular. 582.
J.  Clin.  Medicina.  9,  2217.
Yu,  J.,  Vodyanik,  MA,  Smuga­Otto,  K.,  Antosiewicz­Bourget,  J.,  Frane,  JL,  Tian,  S.,  Nie,  J.,  Jonsdottir,  
Supek,  F.,  Min˜ana,  B.,  Valca´rcel,  J.,  Gabaldo´n,  T.  y  Lehner,  B.  (2014).  Las  mutaciones  sinónimas   GA,  Ruotti,  V.,  Stewart,  R. ,  et  al.  (2007).  Líneas  de  células  madre  pluripotentes  inducidas  derivadas  de  
actúan  con  frecuencia  como  mutaciones  impulsoras  en  los  cánceres  humanos.  Celúla  156,  1324–1335. células  somáticas  humanas.  ciencia  318,  1917–1920.

Tachibana,  M.,  Amato,  P.,  Sparman,  M.,  Gutierrez,  NM,  Tippner­Hedges,  R.,  Ma,  H.,  Kang,  E.,  Fulati,   Zhao,  T.,  Zhang,  ZN,  Rong,  Z.  y  Xu,  Y.  (2011).  Inmunogenicidad  de  células  madre  pluripotentes  
A.,  Lee,  HS,  Sritanaudomchai,  H.,  et  al.  (2013).  Hu inducidas.  Naturaleza  474,  212–215.

Cell  Stem  Cell  27,  1  de  octubre  de  2020  531