TCNICAS DE COLORACION BACTERIANA

TINCIN SIMPLE
Laboratorio 3 de microbiologa
Camargo Jess Miguel, Ortiz Morales Paola Andrea y Ospina
Lisarazo Alix Aimeth
Lic. En biologa y qumica. Facultad: Ciencias de la educacin.
Universidad del Atlntico. Docente: Carlos Boom. Grupo 16b Barranquilla
20015

RESUMEN
En la prctica realizada se conocieron algunos de los mtodos de observacin
de las bacterias, en donde fue necesario la preparacin adecuada de un frotis y
la utilizacin de colorantes que permitieron una visualizacin de dichos
microorganismos , adems se pudo diferenciar las caractersticas morfolgicas
y de agrupacin de las bacterias observada en el microscopio.

OBEJTIVOS
1. Conocer algunos de los mtodos de observacin de las bacterias.
2 Diferenciar las formas de accin de los colorantes, sobre Ia clula, de
acuerdo al carcter qumico de stos (cidos o bsicos).
3 Diferenciar las caractersticas morfolgicas, de agrupacin y de tincin de las
bacterias observadas al microscopio.

una muestra, para obtener alguna

INTRODUCCION

informacin sobre su morfolgica y

Como las bacterias

son casi

cuantificar su concentracin.

incoloras, para su observacin es

Preparaciones coloreadas: Es una

necesaria

de

tcnica

imprescindible

muestras que permita diferenciar

estudio

microscpico

tres de las formas fundamentales de

muestras

las bacterias

microorganismos

la

preparacin

de acuerdo a su

para
de

el
las

los

propios

pues

permite

morfologa, como son los bacilos,

observar con detalle la morfologa

cocos y espirales. Los bacilos son

bacteriana

clulas con forma cilndrica recta

informacin

que

parecida a la de un bastn o una

diferenciacin,

barra con aprox 6 de longitud por

preparacin se puede visualizar la

1.5 de dimetro, estos se pueden

estructuras internas y externas de

agrupar en parejas (diplobacilos),

las bacterias , para ello se utilizan

raramente

cadenas

colorantes preferiblemente bsicos

(estreptobacilos), en empalizadas,

o nucleares derivados de la anilina

letras o presentarse individuales.

como fuscina, cristal violeta, azul de

Los cocos son clulas que poseen

metileno, violeta de genciana.

forma esfrica de tamao pequeo

Estos colorantes son compuestos

de 0.4 1.0 de dimetro se

orgnicos que contiene un anillo

agrupan en parejas (diplococos), en

bencnico

cadenas

largas

cromforo el cual se encuentra

racimos

coloreado y a un grupo auxcromo

(estafilococos) , en ttradas o en

que le da al cromforo la capacidad

paquetes cbicos (micrococos) y

de convertirse en una sal.

por

De acuerdo a la carga del ion

en

ms

(estreptococos)

ltimo

menos
en

los

espirilos

que

proporcionan
posibilita
mediante

unido

un

esta

grupo

presentan forma cilndrica curvada.

coloreado

Estas formas de bacterias descritas

colorantes pueden ser de dos tipos:

anteriormente pueden observarse

Colorantes

mediante las siguientes tcnicas:

color se encuentra en el ion positivo

Preparaciones no coloreadas: Es

(catin). (Tortora,G .2007)

una tcnica sencilla que se utiliza

para la detencin de bacterias en

(cromforo)

su

los

bsicos porque el

Entre los que se encuentra el violeta

esporas). Las utilizadas con ms

de genciana, el azul de metileno, el

frecuencia son la tincin con Gram y

verde de malaquita, etc.

la

Colorantes cidos

resistencia. (Rodrguez, E. 2005)

son aquellos

tincin

de

cido

alcohol

donde el color se encuentra en el

ion

negativo

(anin).

Como

la

fucsina acida, eosina, etc.

Los colorantes bsicos se utilizan

METODOLOGA EXPERIMENTAL
Preparacin de la muestra

los

se esterilizo el asa para

colorantes cidos estos ltimos no

tomar una muestra de s.

son atrados por la mayor parte de

aureus, antes de esto se

los tipos de bacterias porque la

limpian los cubreobjetos y

superficie

carga

portaobjetos evitando daar

negativa repele los iones negativos

la muestra, cuando estaban

del colorante.

limpios en el portaobjetos se

Para aplicar los colorantes cidos o

agrego 1 gota se solucin

bsicos los microbilogos emplean

salina, se tomo la muestra y

con

ms

frecuencia

bacteriana

que

con

dos clases de tcnicas de tincin:

tincin simple y tincin diferencial

se realizo una emulsin.

Despus se expuso

Tincin simple o sencilla: Es una

mechero

solucin acuosa o alcohlica de un

muestra completamente y se

colorante bsico nico, este tipo de

agrego 1 gota de azul de

tincin

se

presencia,
bacilos,

usa

para

observar

morfologa

(cocos,

espirilos)

agrupacin

bacteriana (clster, cadenas, pares)

Tincin diferencial: Se utilizan dos
tintes, estas reaccionan de modo
diferente con las distintas clases de
bacterias y por lo tanto pueden ser
empleadas

para

establecer

una

distincin entre ellas, taxonoma de

las bacterias y observacin de
estructuras

(flagelos,

capsula,

para

secar

al
la

metileno por 2 minutos.

La muestra se expuso al
agua de forma indirecta y se
dejo

secar

al

ambiente,

finalmente se procedi a la
observacin

en

el

microscopio en 4x, 10x, 40x.

Hasta ahora se han identificado 11

serotipos capsulares de S. aureus.

RESULTADOS

Los serotipos con las cpsulas ms

S. aureus es un coco inmvil, de 0,5

gruesas son el 1 y el 2, y forman

a 1 m de dimetro, que se divide

colonias mucoides, no obstante, no

en tres planos para formar grupos

se asocian con enfermedad. Los

de clulas irregulares semejantes a

serotipos 5 y 7 son los responsables

racimos de uvas. En extendidos de

de la mayor parte de las infecciones

pus los cocos aparecen solos, en

humanas

pares, en racimos o en cadenas

serotipo 5 engloba a la mayora de

cortas. Los racimos irregulares son

las cepas de S. aureus Resistente a

caractersticos

Meticilina.

tomados

de

de

desarrollan

extendidos

cultivos

en

que

medios

se

slidos,

mientras que en otros cultivos son

frecuentes las formas de diplococos
y en cadenas cortas. Unas pocas
cepas producen una cpsula o capa
de

baba

que

incrementa

la

virulencia del microorganismo. S.

aureus

es

un

microorganismo

grampositivo pero las clulas viejas

y los microorganismos fagocitados
se tien como gramnegativos.

especficamente

el

La capa polisacrida extracelular es

producida por algunas cepas de
S.aureus y les confiere la capacidad
de adherirse a las clulas husped
diferentes objetos protsicos, como
catteres,

injertos

prtesis

plsticas. Esta adherencia poco

comn se debe a la capa de
polisacrido extracelular, formada
por

monosacridos,

pptidos

protenas, que es producida por la

mayor parte de los estafilococos. La

Se han reportado cepas de S.

produccin de estos dos materiales

aureus

est influida por factores como la

que

recubiertas

se

por

polisacridos

una

externos,

encuentran
capa
la

de
cual

recibe el nombre de slime o cpsula

mucoide,

que

incrementa

su

capacidad de adherencia, evita que

sea reconocido, as como refuerza
el efecto antifagoctico.

composicin

del

medio

condiciones de desarrollo

las

observar protenas, las cuales en su

estructura

si

estn

cargadas

positivamente.
4x

2. Una tincin simple puede ser

usada para identificar algo mas
que

las

caractersticas

morfolgicas

de

un

microorganismo? Explique.
No, porque esta solo permite la

10x

observacin estructural, y funcional

de

las

bacterias

es

solo

una

coloracin que se agrega a la

muestra

para

mejorar

la

visualizacin de esta; si no se
conoce con que bacteria se esta
trabajando esta de acuerdo a las
caractersticas

obtenidas

nos

1.Por qu los colorantes bsicos

permitir llegar a la informacin que

son

ms

tinciones

efectivos

para

las

se necesita.

bacterianas

que

los

3. Si se te olvidara fijar la muestra

tintes cidos?

durante

Se utilizan estos colorantes bsicos

procedimiento de tincin simple,

porque las clulas bacterianas estn

Qu

dbilmente

encontraras al mirar tu muestra

cargadas

en

su

la

aplicacin

diferencias

crees

comparacin

que

superficie con cargas negativas, por

en

lo que estos bsicos actan de

correctamente fijada?

forma positiva, Por lo tanto si

La diferencia que encontrara es

utilizramos tintes cidos no servira

que en la muestra no fijada no

ya que estos actan negativamente

podra

y no se lograra la observacin

microrganismos, debido a que si no

morfolgica de las bacterias, esta

se realiza una correcta fijacin el

coloracin acida solo se utiliza para

colorante

realizar

podra

con

del

observacin

arrastrar

una

de

los

microorganismos del

portaobjeto,

mientras que en el otro si se podra

observar las bacterias. El proceso
de

fijacin

produce

la

muerte

simultnea de los microorganismos

y su adherencia al portaobjetos
tambin preserva diversas partes de
los microbios en su estado natural
con una distorsin mnima.

CONCLUSIN.
En base a la prctica realizada e
informacin

obtenida,

podemos

concluir la verdadera importancia de

las tinciones en microbiologa, ya
que son las que nos permiten el
estudio de microorganismos inertes.
En este caso la tincin simple, la
cual utilizamos en esta experiencia
de

laboratorio,

utiliza

un

solo

colorante que fue azul de metileno.

Se pudo observar que esta muestra
observada estaban se encontraron
cocos (S. aureus); estas clulas
bacterianas difieren desde el punto
de vista qumico de su medio
externo

por

eso

se

tien

contrastando con su alrededor.

Aunque las bacterias no aparecen
muy diferentes del medio que las
rodea, difieren mucho qumicamente
esta diferencia qumica es lo que
permite distinguir las bacterias por
tincin,

pues

generalmente,

el

colorante reacciona con la clula

bacteriana, pero no reacciona con
su medio exterior.

5. Lowy,

D.

(20

-agosto-1998).

BIBLIOGRAFIAS

Staphylococcus

1. Tortora,G.,Funke,B.,Case,C.2
007.

Franklin

Introduccin

la

aureus

infections (PDF). NEJM (en

ingls)

(Estados

Unidos:

Microbiologa. 9 ed . Buenos

Massachusetts

aires:

medica

Society) 339 (8): 520532.

Panamericana. 68-69. ISBN

doi:10.1056/NEJM199808203

Editorial

978-950-06-0740-7
2. Garcia, P., Fernandez,M.T &
Paredes,F.2004.Microbiologa
clnica prctica. 3 ed.Cadiz.
Universidad de Cadiz. 31-40.
3. Rodrguez, E.,Gamboa,M.A.,
Hernndez

&

Garca,

2005.Bacteriologa
principios

general

prcticas

laboratorio..San
Editorial

J.
de

Jose.

Universidad

Costa Rica. 63,64.

4. Murray,
Patrick

de
R.;

Rosenthal, Ken S.; Pfaller,

Michael A. (Abril de 2009).
Captulo 21:Staphylococcus
y

cocos

grampositivos

relacionados. En Patrick R.
Murray. Microbiologa Mdica
6 Ed (6a edicin). Espaa:
Elsevier-Mosby. pp. 209224.
ISBN

978-84-8086-465-7.

OCLC 733761359.

390806.

ISSN

Medical

0028-4793.

Versin impresa:ISSN 5334406