UNIVERSIDAD AUTÓNOMA DE CIUDAD JUÁREZ

INSTITUTO DE CIENCIAS BIOMÉDICAS

Práctica #3: Estudio microscópico de las bacterias
Laboratorio de Microbiología 1
M.C. Juan Carlos Badillo Terrazas
Alumna: Daizeth Hernández Carreón
Matrícula: 202685

Objetivo
Saber desarrollar las técnicas microscópicas que son comunes para poder teñir, observar y medir las
bacterias, y sus respectivas estructuras.

Introducción
Las bacterias tienen un tamaño promedio entre 0.5 y 2.0 micrómetros, lo cual no permite que se pueden
observar a simple vista y se agrupan dependiendo de su forma en tres tipos principales que son cocos,
bacilos, curvos o helocoidales. Las bacterias cocos pueden estar solas, en pares, en tetradas, en cadenas
o en racimos y los bacilos pueden agruparse en en pares o en cadenas. El estudio de las bacterias
microscopicamente se puede facilitar considerablemente al tratarlas con colorantes o tintes, lo cual permite
observar su forma y tamaño. Existen dos preparados, uno es en fresco y el otro en gota suspendida, la
preparación en fresco permite observar la movilidad, color, tamaño, forma y la agrupación en su forma
natural viva sin alteraciones, en los microorganismos y la preparación en gota suspendida se utiliza un
portaobjetos excaavdo y un cubreobjetos. Asimismo, existen técnicas de tinción, las cuales son la simple o
directa, compuesta o diferencial y negativas. La tinción simple o directa tiñe de manera homogénea y
unicamente utiliza un colorante, que puede ser cristal violeta, azulde metileno o safranina. La tinción
compuesta o diferencial permite observar cápsulas, flagelos o esporas y requiere de dos o más colorantes,
como en la ténica de gram. Por último las tinciones negativas se depositan en el campo del rededor de los
organismos, ocasionando que las células esten delimitadas.
Metodología
Resultados

Es una tinción negativa de bacilos Es una candida con un patrón tincional de

klebsiella pneumoniae que estan teñidos gram positivo, con una forma ovalada. Por
con tinta china. Se pueden observar las lo tanto, fija el cristal violeta.
capsulas que se encuentran alrededor de
los bacilos que estan teñidos de un color
rosado, este color significa que los
son gram negativos

klebsiella pneumoniae con la tinción gram.

Se encuentran bacilos delgados y cortos que
Tienen un patrón tincional gram negativo por
que fijan safranina

Discusión
Para diagnosticar enfermedades en microbiología, se utilizan las tinciones. Existe una amplia variedad de
funciones que se han desarrollando para poder detectar los distintos agentes infecciosos, en los cuales se
incluyen bacterias, parásitos y hongos. La tinción de gram se considera básica en la valoración inicial de
muestras para análisis bacteriológico. Asimismo, existen técnicas tintoriales específicas qué son de Gram
utilidad como la tinción de Ziehl-Neelsen la tinción azul de lactofenol. (López, 2014)

Conclusión
Es importante conocer como los colorantes permiten identificar propiedades microscopicas de las
bacterias para poderlas clasificar, también es importante saber que dependiendo de la bacteria se debe de
utilizar cierto colorante por los componentes de la misma, como la capsula, pared celular y membrana
externa. Asimismo, es importante conocer los distintos tipos de tinciones que existen, ya que permiten
identificar que causa cierta enfermedad infecciosa.
Cuestionario 

1.- Explicar el fundamento de las tinciones:  

a) Gram: su fundamento se basa en 4 pasos escenciales que son la tinción, fijación con el mordiente,
decoloración y contratinción. Esta técnica aparte de colorear las bacterias, también permite diferenciarlas.
Se utiliza como primer colorante el cristal violeta, el cual tiene una afinidad por el peptidoglicano y teñira de
morado a todas la bacterias presentes, después se coloca el lugol, el cual actua como mordiente.
Las bacterias gram positivas forman más complejos cristal violeta-yodo debido a que tienen una pared
gruesa de peptidoglicano y por lo tanto retienen el colorante. También influye que la pared de las bacterias
Gram positivas tienen una cantidad mayor de ácidos no saturados y estos muestran una gran afinidad por
los agentes oxidantes. Las bacterias gram negativas tienen una capa delgada de peptidoglicano, lo que
ocasiona que formen menos complejos que las gram positivas. Posteriormente sigue el paso de la
decoloración. Las Gram negativas poseen una membrana externa que es rica en lipopolisacárido, los
cuales forman parte de la pared celular. Todas las grasas se destruyen debido al contacto que hay con el
alcohol acetona, ocasionando que la membrana externa de desestabilize, siendo liberado el cristal violeta.
Es así como después es contrateñida con la safranina o fucsina básica, tomando el color rojo. En las
bacterias Gram positivas son resistentes a la decoloración porque el decolorante cierra los poros, lo cual
no permite que el complejo cristal violeta/yodo pueda salirse. Por lo tanto, la coloración con el cristal
violeta se mantiene estable y no hay cabidad para la safranina o la fucsina y es por ello que las bacterias
se tiñen de azul muy fuerte o morado.
 
b) Capsula: la cápsula es una estructura fuerte hecha de polisacáridos y se encarga de proteger a los
microorganismos de la fagocitosis y es por eso es que es una estructura difícil de penetrar. Esta tinción se
fundamenta en el contraste, en crear un contraste entre el fondo del preparado y la cápsula del
microorgaismo. El fondo se tiñe de un color oscuro y la cápsula queda incolora. Cabe mencionar que si el
microorganismo no tiene cápsula no podrá ser distinguible con este tipo de coloración, porque todo se va a
teñir delo mismo color.

        
c) Espora: las esporas no pueden ser teñidas con las coloraciones convencionales, ya que tienen una
pared muy gruesa y su compleja composición ocasiona que la mayoría de los colorantes no puedan entrar.
Las capas de la espora de afuera hacia adentro está primero el exosporium que está formado por
glicoproteínas, después está la cutícula que brinda resitencia a las altas temperaturas, luego está la pared
de la base que protege al protoplasto. La espora es una estructura que se encuentra deshidratada, la cual
contiene un 15% de calcio y de ácido dipicolínico, es por eso que la mayoría de las técnicas de coloración
de esporas estan basadas en la aplicación de calor, porque de esta manera el colorante puede penetrar la
gruesa estructura.
Cuando una vez que la espora queda teñida, la espora no puede eliminar el colorante. En la técnica de
Shaeffer-Fulton el verde de malaquita entra a las células vegetativas y al aplicar el calor este penetra en la
endospora. Después al lavar con agua el colorante queda eliminado de la célula vegetativa y esto se debe
a que el tinte verde de malaquita es ligeramente básico lo que ocasiona que se una débilmente a la célula
vegetativa. Este tinte no puede salirse de la espora y por último, se contratiñe el bacilo con safranina.

2.- Explicar cuál es la utilidad de las tinciones: 

a) Simple: esta tinción usa únicamente un colorante y se utiliza para aumentar el contraste, ya que todas
las celulas lo absorben y quedan teñidas del mismo color. Esta tinción mejora la obsenación de toda la
célula.

b) Compuesta: solo algunas de estas técnicas permiten que se demuestren estructuras específicas, así
como la cápsula, esporas o flagelos. Otras técnicas únicamente tiñen bacterias de un grupo específico.

c) Negativa: se va a utilizar una sustancia como medio de contraste para resaltar alguna característica de
alguna bacteria y se realiza con una bacteria que tenga cápsula. Se utiliza para que los microorganismos
puedan ser observados fácilmente como inclusiones claras que estan muy bien contrastadas contra el
medio oscuro que las está rodeando

3.- Mencionar otros tipos de tinciones bacterianas hay,  a parte de las mencionadas en la pregunta 2

 Tinción de Wright
 Tinción ácido resistente
 Tinción Rodamina-Auramina
 Tinción Naranja de Acridina
 Tinción de azul algodón de lactofenol
Bibliografías

Ormaechea, E. (2015). Tinción de Gram. Febrero 27, 2021, de MAPFRE Sitio web:
https://www.salud.mapfre.es/pruebas-diagnosticas/otras-pruebas-diagnosticas/tincion-de-gram/

Gil, M. (2020). Tinción negativa: fundamento, técnica, ventajas y desventajas. Febrero 27, 2021, de Lifeder
Sitio web: Recuperado de https://www.lifeder.com/tincion-negativa/

Rodríguez, P & Arenas, R. (2018). Hans Christian Gram y su tinción. Febrero 27, 2021, de Dermatología
Cosmética, Médica y Quirúrgica Sitio web: https://www.medigraphic.com/pdfs/cosmetica/dcm-
2018/dcm182n.pdf

López, L., Hernández, M., Colín, C., Ortega, S., Cerón, G., & Franco, R. (2014). Las tinciones básicas en
el
laboratorio de microbiología. Febrero 27, 2021, de Medigraphic Sitio web:
https://www.medigraphic.com/pdfs/invdis/ir-2014/ir141b.pdf

Gil, M. (2019). Tinción de esporas: fundamentos, técnicas y usos. Febrero 28, 2021, de Lifeder Sitio web:
https://www.lifeder.com/tincion-de-esporas/

Gil, M. (2019). Tinción de cápsula: fundamento y técnicas. Febrero 27, 2021, de Lifeder Sitio web:
https://www.lifeder.com/tincion-de-
capsula/#:~:text=Esta%20técnica%20utiliza%20nigrosina%20o,pone%20en%20evidencia
%20esta%20estr

Gil, M. (2019). Tinción de Gram: fundamento, materiales, técnica y usos. Febrero 27, 2021, de Lifeder Sitio
web: https://www.lifeder.com/tincion-de-gram/