UNIVERSIDAD DEL VALLE FECHA D/M/A

DEPARTAMENTO DE QUÍMICA 17/10/20

PREPARADO POR:
LABORATORIO DE QUÍMICA ORGÁNICA Mauricio Caicedo Reina

REVISADO POR: Luz Marina Jaramillo

AMINOÁCIDOS Y PROTEÍNAS

OBJETIVOS

Realizar algunas reacciones de los aminoácidos y proteínas.

Comprobar de una forma visual, qué efectos parciales o definitivos pueden causar la
temperatura y sustancias químicas como ácidos o sales en aminoácidos y proteínas.

INTRODUCCIÓN

Las proteínas poseen una importancia extraordinaria dentro del campo de la bioquímica.
Constituyen los materiales estructurales y de sostén más importante de los organismos humano
y animal; el citoplasma de casi todos los organismos vivos está compuesto en gran parte por
proteínas y otras sustancias de tipo proteínico. Como unidades estructurales de los
nucleoproteídos ocupan un lugar clave en la reproducción de los organismos vivos así como en
la herencia, y como componentes de las enzimas regulan el metabolismo de todos los seres vivos.
La vida no puede comprenderse de ninguna forma sin la existencia de las proteínas.

La determinación de la masa molecular de las proteínas conduce a valores elevados; varían desde
aproximadamente 40.000 45.000 para la albúmina de huevo y la gelatina, hasta 400000 para el
virus del mosaico del tabaco. La hidrólisis de las proteínas conduce a una mezcla compleja de -
aminoácidos cuya composición varía de una a otra proteína. Puesto que a partir de las proteínas
ordinarias no se obtiene otros productos de hidrólisis, puede deducirse que se trata de sustancias
macromoleculares formadas exclusivamente por -aminoácidos. Una sola molécula proteínica
contiene cientos, e incluso miles, de unidades de aminoácidos, que pueden ser de unos 20 tipos
diferentes. El número de combinaciones distintas, es decir, el número de moléculas proteínicas
diferentes que pueden existir, es casi infinito. Es probable que se necesiten decenas de miles de
proteínas diferentes para formar y hacer funcionar un organismo animal.

Los -aminoácidos exhiben propiedades no comunes. Por ejemplo, poseen puntos de fusión
superiores a los 200 C, mientras que la mayoría de los compuestos orgánicos de peso molecular
similar son líquidos a temperatura ambiente. Los -aminoácidos son solubles en disolventes
polares y tienen momentos dipolares grandes. También son menos ácidos que la mayoría de los
 ácidos carboxílicos y menos básicos que la mayoría de las aminas.

La razón está en que un -aminoácido contiene un grupo amino básico y un grupo carboxilo
ácido en la misma molécula. El -aminoácido da una reacción interna ácido-base para formar un
-
aminoácido tiene muchas propiedades de una sal. El pKa de un - aminoácido es el del grupo
NH + y no el del grupo COOH, el3 pKb no es el del grupo amino básico, sino el del grupo COO-
.

PREINFORME

I. ¿En qué consiste la prueba de Millón? ¿Cuáles proteínas dan positiva esta prueba? ¿Cuál es la
reacción química que acompaña esta prueba?
II. ¿Qué es una proteína globular?
III. ¿Qué es el punto isoeléctrico de una proteína?
IV. Escriba las fórmulas de los siguientes aminoácidos: alanina, leucina, valina, prolina, fenilalanina,
triptófano, cisteína, arginina, histidina, tirosina.

PROCEDIMIENTO VIRTUAL

El procedimiento virtual de la práctica se llevará a cabo utilizando la plataforma virtual que se

encuentra en el siguiente enlace
https://vlab.amrita.edu/?sub=3&brch=63&sim=1094&cnt=2142, al cual, usted debe ingresar y
seguir los pasos que se muestran a continuación.

Paso 1: Al ingresar al enlace encontrará la siguiente ventana, en la cual, debe dar click en el
botón free Sign-Up.
Paso 2: En la columna de la izquierda denominada
datos encerrados en el recuadro rojo para registrarse en la plataforma y poder acceder al recurso
virtual.

Nota: Si su registro se ha llevado a cabo de manera satisfactoria, debe observar un aviso como
el siguiente.
Paso 3: Ingrese al enlace https://vlab.amrita.edu/?sub=3&brch=63&sim=1094&cnt=2142 y de
click en el botón Login. En la ventana que aparece después (ver imagen) ingresar el E-mail y la
contraseña con las cuales hizo el registro y finalmente, dar click en Login.

Paso 4: Para poder continuar es necesario otorgar el permiso para que la extensión de Adobe
Flash Player permita ejecutar la aplicación. En la barra del navegador en el botón rojo
puede otorgar el permiso dando click en permitir (cuadro rojo), como se ve en la
siguiente imagen y vuelva a recargar el navegador.
Nota: Debe observar la siguiente ventana. En caso de no tener la extensión del Adobe Flash
Player puede descargarlo en el siguiente enlace https://get.adobe.com/es/flashplayer/. Recuerde
que, una vez instalado, debe asegurarse de conceder los permisos para que se ejecute en su
navegador, recuerde recargar el navegador tras conceder los permisos (ver paso 4).

A partir de ahora, podrá ver cada una de las pruebas cualitativas que se realizan a los
carbohidratos para analizar sus propiedades tras presionar en el botón start.

Inicialmente encontrará una ventana en la cual puede observar algunos de los materiales y
reactivos que serán usados en la práctica. Al presionar el botón podrá acceder al
primer test cualitativo.

Test 1. Prueba con Ninhidrina. Este ensayo cualitativo consiste en la formación del complejo
de Rhuemann, cuando reacciona ninhidrina con aminoácidos y péptidos con a un pH 4-8. Para
ello, a 1.0 mL de una solución de aminoácido se adicionan cinco gotas de ninhidrina, y se calienta
en un baño María por 5 minutos, se deja enfriar hasta temperatura ambiente y se observa el
cambio de coloración.

Test 2. Reacción xantoproteica. Esta prueba consiste en la reacción de nitración de anillos

aromáticos presentes en los aminoácidos y proteínas. Se lleva a cabo mediante el calentamiento
de 1.0 mL de solución de aminoácido con 10 gotas ácido nítrico concentrado, en un baño María
hirviente. Después de dejar enfriar la mezcla, se adiciona hidróxido de sodio hasta alcalinizar (al
papel indicador).

Test 3. Reacción de Pauly. Este ensayo permite la formación de un azocompuesto al reaccionar

el ácido sulfanílico con aminoácidos en presencia de nitrito de sodio y ácido clorhídrico. Para
ello se enfría en un baño de hielo 1.0 mL de ácido sulfanílico y se adicionan algunas gotas de
nitrito de sodio previamente enfriada y se agita la mezcla. Rápidamente, se adicionan unas gotas
de la solución de aminoácido previamente enfriada y se agita. Finalmente, se adiciona gota a gota
una solución de carbonato de sodio hasta aparición del color.

Test 4. Prueba de Millon. Consiste en la formación de un complejo de color rojo, tras la reacción
de aminoácidos fenólicos con el reactivo de Millón (mercurio y ácido nítrico). Consiste en
adicionar unas gotas del reactivo de Millón a 1.0 mL de solución de aminoácido, tras agitar la
mezcla, se calienta el tubo de ensayo en un mechero Bunsen por 3-5 minutos. Tras enfriar la
mezcla, se adicionan unas gotas una solución de nitrito de sodio.

Test 5. Prueba de histidina. En este ensayo se lleva a cabo la bromación de la histidina en medio
ácido. Para ello, a una solución de 1.0 mL de aminoácido se adicionan gotas de una solución al
5% de bormo en ácido acético hasta obtener una coloración amarilla. Aproximadamente 10
minutos después se adiciona 2 mL de una solución al 5% de carbonato de amonio, finalmente, la
mezcla se calienta en un baño María durante 10 minutos.

Test 6. Reacción de Hopkins-Cole. Se utiliza para detectar la presencia de triptófano mediante

la reacción de este aminoácido con ácido glioxílico en presencia de ácido sulfúrico concentrado.
Este ensayo se realiza mezclando 1.0 mL de solución de aminoácido con 1.0 mL del reactivo de
Hopkins-Cole (ácido glioxílico-ácido acético). Tras agitar la mezcla, se adiciona cuidadosamente
unas gotas de ácido sulfúrico hasta obtener una coloración púrpura.

Test 7. Prueba de Sakaguchi. Permite detectar cualitativamente la presencia de arginina en

proteínas, utilizando el reactivo de Sakaguchi (1-Naftol e hipobromito de sodio). Esta prueba se
realiza experimentalmente, mediante la adición a 1.0 mL de la solución (previamente enfriada)
de la muestra problema de unas pocas gotas de NaOH acuoso y dos gotas de 1-Naftol. Tras agitar
el contenido, se adiciona de 4-5 gotas de hipobromito de sodio y se observa la coloración
obtenida.

Test 8. Prueba de sulfuro de plomo. Mediante este ensayo se puede revelar la presencia de
cisteína, a través de la reacción con acetato de azufre en medio básico. Esta prueba se realiza
mediante la adición de 5-10 gotas de una solución al 40% de NaOH a 1.0 mL de solución de
aminoácido. Posteriormente, se calienta el tubo de ensayo por 5-10 minutos en un mechero
Bunsen, tras dejar alcanzar la temperatura ambiente, se agrega 5 gotas de una solución de acetato
de plomo al 10% y se observa el cambio de coloración.
 Test 9. Reacción de Sullivan. Permite la detección cualitativa y cuantitativa de metionina a
través de la formación con nitroprusiato de sodio en medio básico para la obtención de un
complejo de color rojo. Para ello se adiciona 10 gotas de una solución de NaOH (5M), 5 gotas
de una solución de glicina al 1% y 10 gotas de una solución de nitroprusiato de sodio al 10% a
1.0 mL de una solución de aminoácido. El tubo de ensayo se somete a calentamiento den un baño
de María a 40°C por 15 minutos. Posteriormente, se enfría el tubo en un baño de hielo y se
adiciona 0.5 mL de una solución de HCl al 6M. Finalmente, se agita el contenido y se deja
alcanzar la temperatura ambiente hasta la formación del color rojo.

Test 9. Prueba con isatina. Consiste en la formación de una coloración azul, tras la reacción de
isatina con imino ácidos como la prolina. Experimentalmente, esta prueba se realiza mediante la
adición de una gota de solución del imino ácido sobre un trozo de papel filtro, seguido de un
proceso de secado con una pistola de aire caliente o un horno. Posteriormente, u se aplica una
gota de isatina en el punto seco, se repite el procedimiento de secado y se observa.

Para la realización del informe, el docente le asignará una proteína conocida (albúmina o
caseína), con la cual, usted podrá representar mediante ecuaciones químicas simples (donde sea
posible), la reacción que tiene lugar entre el reactivo utilizado en la prueba y el aminoácido con
el que reaccionaría.

PREGUNTAS

1. Escriba las ecuaciones de las reacciones efectuadas durante el desarrollo de la práctica.

2. ¿Por qué el ácido nítrico colorea la piel de amarillo? ¿Qué sucede en esta reacción?

3. ¿Cómo se determina la presencia de azufre en las proteínas?