PRÁCTICA N° 34: HONGOS LEVADURIFORMES

Hongos Levaduriformes: Candida y Cryptococcus

OBJETIVO

Que el alumno de Medicina conozca las características morfológicas microscópicas y de cultivo

y las pruebas de identificación en el laboratorio de las especieds más importantes de los
géneros: Candida y Cryptococcus, que causan infecciones en el ser humano.

INTRODUCCIÓN

Entre las levaduras oportunistas, Candida albicans, es el agente etiológico de la Candidiasis,

capaz de producir infecciones agudas o crónicas en la piel o mucosas (muguet, onicomicosis,
vulvovaginitis, etc.) puede ser responsable de micosis sistémicas cuando se diseminan por vía
hemática, con localización preferencial en riñones, pulmones, corazón, cerebro e intestino, lo
cual puede producirse secundariamente a otras enfermedades o al uso indiscriminado de
antibióticos de amplio espectro o en la inmunosupresión.

Cryptococcus neoformans, es el agente etiológico de la Criptococosis, infección subaguda o

crónica, principalmente del sistema nervioso central, su puerta de entrada es pulmonar y rara
vez es vía subcutánea. Este hongo puede atacar el aparato respiratorio, piel, mucosa, ganglios
linfáticos, huesos, etc.

CANDIDIASIS
MATERIALES
- Secreción vaginal para examen directo.
- Cultivo de Candida albicans en agar Sabouraud-glucosado (ASG).
- Cultivo de Candida albicans en agar almidón-arroz (AAA) en lámina.
- Cultivo de Candida albicans en suero humano.
- Pipeta plástica.

PROCEDIMIENTO
- Examen directo: Depositar sobre una lámina portaobjetos una gota de secreción vaginal,
cubrir con una laminilla y observar al microscopio con objetivos de menor y mayor
aumento.
- Cultivo: Las colonias de Candida se pueden observar a las 24-48 hrs. de incubación a
temperatura ambiental ó 37°C (anotar las características de la colonia en el protocolo).
Para hacer la identificación de Candida albicans, uno de los métodos utilizados, es el cultivo de
la levadura aislada en agar almidón arroz, medio de cultivo que permite el desarrollo de
clamidosporas. Observar el cultivo con objetivos de menor y mayor aumento.

Otro método utilizado es el cultivo en suero humano. Colocar una gota en una lámina y cubrirla
con una laminilla, observar con objetivos de menor y mayor aumento los tubos germinativos.

Género: Candida

Colônias de Cândida sp. en ASG Candida albicans en AAA

A. Levaduras
B. Blastoconidias o yemas
C. Clamiconidias terminales

RESULTADOS

Anotar los resultados en el protocolo correspondiente.

CANDIDIASIS

Examen directo Características - Cultivo

MUESTRA
en fresco Colonia Microscopía

ASG + Antib.

Secreción
AAA en Lámina
Vaginal
Gota de suero
humano cultivado con
C. albicans
 CRIPTOCOCOSIS
MATERIALES
- Sedimento de líquido cefalorraquídeo (LCR), centrifugado a 2000-3000 rpm/15 min. para
examen directo con tinta china.
- Cultivo de C. neoformans en ASG más antibiótico.
- Cultivo de C. neoformans en agar urea.
- Frotices o cortes histopatológicos de cerebro de ratón infectados con C. neoformans.

PROCEDIMIENTO
- Examen directo: En una lámina portaobjetos que contiene una gota de tinta china con
mucha precaución depositar un inóculo de sedimento del LCR; luego cubrir con una
laminilla y observar al microscopio con objetivos de menor y mayor aumento.
- Lámina demostrativa de Cryptococcus en LCR, con la técnica de Tinta china y la técnica de
Tinta china modificada.
- Cultivo: Las colonias de C. neoformans se pueden observar a partir de las 48-72 hrs. de
incubación a 37°C en ASG (anotar las características de la colonia en el protocolo).
- C. neoformans se diferencia de otras especies levaduriformes por ser ureasa positivo. Su
patogenicidad se comprueba por inoculación intracraneal en ratones, causándole la
muerte al 3-7 días aproximadamente, según la virulencia de la cepa.

Género: Cryptococcus

Levaduras encapsuladas
Cultivo en ASG
Coloración con tinta china

RESULTADOS

Anotar los resultados en el protocolo correspondiente.

CRIPTOCOCOSIS
 Frotises o cortes
MUESTRA Examen directo Cultivo histopatológicos de
cerebro de ratón
Tinta china
Tinta china ASG + Antib.
modificada

L.C.R.
Agar Urea

CUESTIONARIO

1. ¿Cómo se diagnostica Candida albicans?

Se puede realizar un examen directo tomando muestras de exudado, secreciones, esputo,
centrifugado de orina, escamas o partículas de uñas. El cultivo se realiza con un tiempo de
incubación de 24-48 horas a 37°C. En AGS (agar Sabouraud glucosa) con antibiótico se
observan tubos germinativos y en agar almidón arroz se desarrollan clamiconidias.
2. ¿Cómo se diagnostica Cryptococcus neoformans a partir de muestra de LCR?
Se puede realizar un examen directo utilizando tinta china. El cultivo de LCR tiene un tiempo de
incubación de 48-72 horas a 37°C y se realiza en un medio de agar Sabouraud glucosa.

BIBLIOGRAFÍA

1. Manual de Prácticas y Atlas de Microbiología Médica a color, 2011. UNMSM. Facultad de

Medicina. EAP Medicina Humana. Departamento Académico de Microbiología Médica

2. Sherris: Microbiología Médica. Quinta edición 2010. Editorial Mc Graw Hill

3. R Zerpa, L Huicho, A Guillén: Modified India Ink Preparation for Cryptococcus neoformans
in Cerebrospinal Fluids. JOURNAL OF CLINICAL MICROBIOLOGY, Sept. 1996, p. 2290–2291

4. Rito Zerpa, Vilma Béjar y Roberto Rojas: AGENTES DE INFECCIONES POR HONGO
DIMORFICOS Y Cryptococcus neoformans. Rev Peru Med Exp Salud Publica.
2011;28(4):685- 87.