Evaluación del uso de fotobiorreactor para el crecimiento y cosecha de Scenedesmus

acutus, en condiciones de laboratorio

Pereda Cerna Iris

INTRODUCCIÓN

Las microalgas son microorganismos fotosintéticos procariotas y eucariotas (Hamed,

2016). En los organismos eucariotas, la unidad fotosintética se organiza en orgánulos
especiales, los cloroplastos, que contienen capas alternas de membranas lipoproteicas
(tilacoides) y fases acuosas, el estroma (Hamed, 2016). Las microalgas producen
antioxidantes como alcaloides, terpenoides, fenoles, tocoferoles, carotenoides, ficobilinas y
otros pigmentos y enzimas, que intervienen en tratamientos antioxidantes activos por sus
actividades antiinflamatorias, antibacterianas, anticancerígenas y de peroxidación lipídica
(López-Hernández et al., 2020).

En general, el género Scenedesmus es comúnmente de naturaleza unicelular, pero

responde morfológicamente mediante la formación de colonias protectoras a algunos
factores abióticos y bióticos (Yang et al., 2014). Este género bajo diferentes fotoperiodos,
es capaz de mantener su productividad de biomasa, tasa de crecimiento y tasa de fijación de
dióxido de carbono hasta 2 h en la oscuridad (Maroneze et al., 2019). Además, la tasa de
fotosíntesis de las microalgas incrementa con el aumento de la intensidad de la luz en
condiciones de baja intensidad de luz, en lo que se denomina región de luz limitada (Zhang
et al., 2015). Por lo tanto, la regulación de la capacidad de captación de luz es crucial para
que las células puedan equilibrar las reacciones lumínicas y los eventos bioquímicos
posteriores de la fotosíntesis (Benedetti et al., 2018).

El rendimiento fotosintético depende del acoplamiento cinético adecuado entre los

procesos de absorción de luz, transporte de electrones y fijación de carbono (Leonardi et
al., 2019). Además, el suministro de CO2 y nutrientes maximiza la tasa de crecimiento, y
esto afecta significativamente al equilibrio económico (Benedetti et al., 2018). Por lo tanto,
La alta concentración de biomasa en los estanques de algas de alta tasa afecta la cantidad de
luz que llega al fondo del estanque, a menudo con hasta un tercio de la columna de agua lo
que recibe luz insuficiente para soportar la fotosíntesis neta (Sutherland et al., 2015).

1
 Los cultivos de microalgas sintetizan una variedad de productos biológicos y
potencialmente superar a los cultivos agrícolas en términos de productividad por área
(Eriksen, 2009). El crecimiento del cultivo de microalgas depende de varios factores
abióticos, como la temperatura, el nivel de nutrientes y la luz disponible (Maroneze et al.,
2019). Debido a ello, los cultivos de microalgas proporcionan una elevación gradual de las
condiciones de pH hacia la fase final del crecimiento (Difusa et al., 2015). Además, los
cultivos de microalgas proporcionan productos químicos finos de alto valor, pero hasta
ahora solo una gama limitada de productos de microalgas de alto valor no se obtiene de
fuentes alternativas (Eriksen 2008).

Para desarrollar microalgas como materia prima de próxima generación o como

plataformas de producción, se necesita un cultivo intensivo en sistemas de cultivo cerrados
o abiertos, según la escala, el tipo y el valor del producto (Fu et al., 2019). Es por ello que
las microalgas se cultivan principalmente en estanques abiertos, que son más baratos de
construir y más fáciles de operar y ampliar que los sistemas cerrados (Benedetti et al.,
2018). Sin embargo, algunos fotobiorreactores son iluminados internamente con lámparas
fluorescentes ya que están equipados con impulsores para agitar el cultivo de algas (Hamed,
2016). Además, gestiona por sí mismo todos los problemas de transferencia de masa,
distribución de la luz, bombeo de agua e incluso separación de sólido/líquido (Posten,
2009).

Los fotobiorreactores a escala de laboratorio incluyen reactores planos, reactores

tubulares o bolsas de plástico verticales, con más control sobre el entorno de crecimiento,
en los que la biomasa se mezcla por elevación de aire o por bombeo (Benedetti et al.,
2018). Sin embargo, el funcionamiento inadecuado de los sistemas provoca una
contaminación ambiental problemática con nutrientes no digeridos debido a que se
alimentan con una carga de nutrientes desequilibrada (Dębowski et al., 2020). Por otro
lado, en un biorreactor de elevación de gas, las células de las algas aprovechan la
iluminación intermitente al recorrer las zonas claras y oscuras y, por lo tanto, reducir
potencialmente el daño oxidativo de la exposición prolongada a las intensidades de luz de
la superficie (Hosseini et al., 2015). En consecuencia, existe la necesidad de evaluar el uso
de fotobiorreactor para el crecimiento y cosecha de Scenedesmus acutus, en condiciones de
laboratorio.

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MATERIALES Y MÉTODOS

Localización del experimento

El trabajo se desarrolló en el Laboratorio de Cultivo de especies auxiliares I y II de la

Escuela Académica Profesional de Biología en Acuicultura de la Universidad Nacional del
Santa, localizada en el Distrito de Nuevo Chimbote, Provincia del Santa, Región Ancash,
Perú.

Procedencia de las muestras

La cepa de Scenedesmus acutus fue proporcionada por el laboratorio, con un inicial

de 400 mL.

Preparación del Agua tratada

Para la preparación del agua se realizó una mezcla de 1 mL de lejía y 1 L de agua

potable, luego se le añadió 1 mL de tiosulfato. Para ello, se trató 83 L de agua en
recipientes de 3, 7, 10 y 20 L y se les añadió 1 mL de lejía por cada L de agua. Se dejó
airear por dos días y para neutralizar la concentración de la lejía se le agregó 1 mL de
tiosulfato por cada L de agua.

Cultivo de la microalga Scenedesmus acutus

Para levantar el cultivo se utilizó 400 mL de cepa de S. acutus, luego se agregó en

una tina donde se añadió 1.6 L de agua tratada y se obtuvo 2 L de cultivo inicial.

Los cultivos fueron dosificados con medio HM enriquecido con silicatos para
favorecer la formación de los frústulos y propiciar el crecimiento de las diatomeas. Se
agregó 1.6 mL de medio HM (urea, sol. Fe). Luego con una probeta se midió 1 L del
cultivo y se agregó en dos botellas de 3L las cuales fueron aireadas con una bomba de
doble entrada. Se utilizó un fluorescente para simular la luz solar y realizar la fotosíntesis y
su reproducción.

Luego de 3 días, la concentración del cultivo aumentó por lo que se utilizó los 2 L
como cepa para el doblaje del cultivo. Se colocaron los 2 L de microalga en una tina y se
añadió 8 L de agua tratada, con 8 mL de medio HM. Luego, se vertieron en 5 botellas de

3
3L, 4 de ellas contenían 1.5 L y una 2 L. Los cuales se dejó concentrar por 4 días para
realizar el doblado del cultivo.

Para los 10 L de microalgas se utilizó 40 L de agua tratada, con 40 mL de medio HM,

se vertió el cultivo en 10 botellas de 3 L y tres de 7 L. Para el doblado final se utilizó 10 L
de cultivo con 40 L de agua tratada y 32 mL de medio HM. Se generó un total de 80 L de
cultivo, los cuales se colocaron en botellas de 3 y 7 L, y un balde de 20 y 10 L. La aireación
del cultivo se realizó con 4 bombas de doble entrada y 4 con una sola entrada.

Diseño del fotobiorreactor

El diseño del fotobiorreactor consistió en una instalación tubular de 1.30 m de largo y

20 cm de diámetro. Se colocó un tubo de 1,40 m de largo, al cual se realizó perforaciones
cada 10 cm alrededor del tubo, para que permita la circulación del aire cuando se
introdujeran las 4 mangueras conectadas a las bombas de aire, las mangueras fueron
colocados a distintas distancias, a este sistema se le llama “Airlift”

El nuevo diseño del fotoerizo consistió en colocar un tubo central con pelos, “erizo”,
con la finalidad de incrementar el área de sustrato para las diatomeas y aprovechar sus
características bentónicas. Empíricamente se estimó que los pelos representaban
aproximadamente 196.250 cm de acuerdo a los siguientes datos:

Tabla 1.
N° de manojos: 250 con 25 pelos
Total de pelos: 250 x 25 = 6250
Tamaño del pelo: 10 x 1mm

Donde:
LC=2 π . R
LC=2 (3.14 ) .0.5
LC=3.14 mm

Área del pelo: largo x L.C.

A=10 cm x 3.14 mm
A=100 mm x 3.14 mm
A=314 mm2
Área total del pelo:

4
 AT =6250 x 314 mm 2
1962500 mm2
196. 250 cm
1.9625 m

Aplicación de microalgas al fotobiorreactor

Los 80 L de cultivo preparados previamente fueron añadidos en el tubo, luego se

colocaron dos fluorescentes verticalmente a espaldas del tubo y se mantuvo con aireación
constante. Se sacó una muestra y se colocó en un frasco de penicilina rotulado con el
nombre de tratamiento control (Tc). Luego de un día se procedió a sacar otra muestra del
tratamiento 0 (T0). Al día siguiente se retiró la aireación y se colocó el fotoerizo, para luego
sacar muestras del cultivo y colocarlas en frascos de penicilina (T1, T2, T3 y T4) cada hora
durante 4 horas. Para observar el descenso de las microalgas se dejó sedimentar por 2 días y
luego ser observados como este se adherían a los pelos del fotoerizo. La realización del
conteo fue por cuadrantes desde tratamiento control al tratamiento 4.

RESULTADOS

La biomasa microalgal disminuía conforme pasaban las horas. El TC representó al

cultivo inicial. El T0 fue el cultivo cuando se retiró la aireación y se colocó el fotoerizo. El
T1 representa al primer conteo luego de esperar una hora de sedimentación el cual fue a las
11:00 am. El T2 fue el segundo conteo realizado a las 12:00 pm. El T3 fue el tercer conteo
realizado a las 1:00 pm y el T4 fue el último conteo realizado a las 2:00 pm.

Tabla 2. Concentración de la biomasa microalgal por tratamientos.

Tratamiento Número de microalgas

TC 190.600 cel/mL
T0 195.200 cel/mL
T1 188.100 cel/mL
T2 185.150 cel/mL
T3 183.200 cel/mL
T4 179.100 cel/mL

La población de microalgas disminuía conforme transcurría el tiempo, y ocurrió así la

sedimentación, también se observó que la gran parte de microalgas sedimentadas en el
fondo.

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DISCUSIÓN

Los cultivos microalgales dependen de las condiciones de cultivo, principalmente

temperatura, pH, intensidad de luz, salinidad, nutrientes y entre otros. Debido a ello, la
biomasa microalgal se vio afectada desde el tratamiento cero hasta el tratamiento 4. Esto
podría ocurrir cuando el período de iluminación es insuficiente y las microalgas no generan
suficiente energía a través de la fotosíntesis para cumplir con sus requisitos metabólicos, lo
que resulta en bajas tasas de eliminación de nitrógeno y fósforo (Zhang et al., 2015).
Además, la limitación de nitrógeno o fósforo puede tener un impacto negativo en la
productividad primaria de las microalgas (Sutherland et al., 2015).

El único incremento de la biomasa de S. acutus fue de 4. 600 cel/mL, desde el

tratamiento control al tratamiento cero. Este resultado indica que la hidrodinámica tiene una
influencia positiva significativa sobre la tasa de crecimiento general y la productividad de
la biomasa de S. acutus en el fotobiorreactor (Chandra et al., 2017). La razón plausible de
este fenómeno es que la absorción de fósforo por las algas no siempre fue estequiométrica;
por lo que afecta la fisiología de las algas, así como por la concentración de fósforo y sus
formas químicas, la intensidad de la luz, el pH, la temperatura, etc (Choi 2014).

La variación de la biomasa de S. acutus podría deberse a los parámetros físicos y

químicos. La mayoría de las especies de microalgas tienen un rango de temperatura óptimo
entre 15 y 25 ºC, y a temperaturas por encima o por debajo de este rango, los rendimientos
de biomasa se ven afectados negativamente (Sutherland et al., 2015). Por otro lado, la
intensidad de la luz representa uno de los factores clave que afectan la eficiencia de la
fijación de dióxido de carbono, el crecimiento y la acumulación de lípidos en las algas
oleaginosas (Trivedi et al., 2019). Además, el pH alto en los fotobiorreactores afecta
negativamente las tasas de fotosíntesis de las microalgas de varias maneras (Sutherland et
al., 2015).

CONCLUSIONES:

6
 El crecimiento de la biomasa microalgal se evaluó con el uso del biorreactor y se
observó que disminuía conforme transcurría el tiempo. Además, se observó la
sedimentación de la microalga en el fotobiorreactor debido a su diseño con pelos en sus
paredes y se logró incrementar el cultivo a partir de 400 ml de cepa de Scenedesmus
acutus.

REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS

Chandra, T., Aditi, S., Kumar, M., Mukherji, S., Modak, J., Chauhan, V., Sarada, R., &
Mudliar, S. (2017). Growth and biochemical characteristics of an indigenous
freshwater microalga, Scenedesmus obtusus, cultivated in an airlift photobioreactor:
effect of reactor hydrodynamics, light intensity, and photoperiod. Bioprocess and
biosystems engineering, 40(7), 1057-1068. https://doi.org/10.1007/s00449-017-1768-
0

Choi, H. (2015). Intensified production of microalgae and removal of nutrient using a

microalgae membrane bioreactor (MMBR). Applied biochemistry and biotechnology,
175(4), 2195-2205. https://doi.org/10.1007/s12010-014-1365-5

Difusa, A., Talukdar, J., Chandra, M., Mohanty, K. & Vaibhav, V. Goud (2015): Effect of
light intensity and pH condition on the growth, biomass and lipid content of
microalgae Scenedesmus species. Biofuels, 6(1-2), 37-44.
http://dx.doi.org/10.1080/17597269.2015.1045274

Dębowski, M., Zieliński, M., Kazimierowicz, J., Kujawska, N., & Talbierz, S. (2020).
Microalgae cultivation technologies as an opportunity for bioenergetic system
Development-Advantages and limitations. Sustainability, 12(23), 9980.
https://doi.org/10.3390/su12239980

Eriksen, N. (2008). The technology of microalgal culturing. Biotechnology letters, 30(9),

1525-1536. https://doi.org/10.1007/s10529-008-9740-3

Fu, W., Nelson, D., Mystikou, A., Daakour, S. & Salehi-Ashtiani, K. (2019). Advances in
microalgal research and engineering development. Current opinion in biotechnology,
59, 157-164. https://doi.org/10.1016/j.copbio.2019.05.013

7
Hamed, I. (2016). The evolution and versatility of microalgal biotechnology: A review.
Comprehensive Reviews in Food Science and Food Safety, 15(6), 1104-1123.
https://doi.org/10.1111/1541-4337.12227

Hosseini, N., Shang, H., Ross, G., & Scott, J. (2015). Microalgae cultivation in a novel top-
lit gas-lift open bioreactor. Bioresource technology, 192, 432-440.
https://doi.org/10.1016/j.biortech.2015.05.092

Leonardi, R., Ibañez, M., Morelli, M., Irazoqui, H., & Heinrich, J. (2019). Influence of light
stratification on the growth of Scenedesmus quadricauda. Biochemical Engineering
Journal, 148, 97-107. https://doi.org/10.1016/j.bej.2019.04.022

López-Hernández, J., García-Alamilla, P., Palma-Ramírez, D., Álvarez-González, C.,

Paredes-Rojas, J. & Márquez-Rocha, F. (2020). Continuous microalgal cultivation for
antioxidants production. Molecules, 25(18), 4171.
https://doi.org/10.3390/molecules25184171

Maroneze, M., Deprá, M., Zepka, L. & Jacob-Lopes, E. (2019). Artificial lighting strategies
in photobioreactors for bioenergy production by Scenedesmus obliquus CPCC05. SN
Applied Sciences, 1(12), 1-12. https://doi.org/10.1007/s42452-019-1761-0

Posten, C. (2009). Design principles of photo‐bioreactors for cultivation of microalgae.

Engineering in Life Sciences, 9(3), 165-177. https://doi.org/10.1002/elsc.200900003

Sutherland, D., Howard-Williams, C., Turnbull, M., Broady, P., & Craggs, R. (2015).
Enhancing microalgal photosynthesis and productivity in wastewater treatment high
rate algal ponds for biofuel production. Bioresource technology, 184, 222-229.
http://dx.doi.org/10.1016/j.biortech.2014.10.074

Trivedi, J., Singh, J., Atray, N., Ray, S. & Agrawal, D. (2019). Development of a non-
linear growth model for predicting temporal evolution of Scenedesmus obliquus with
varying irradiance. Bioprocess and biosystems engineering, 42(12), 2047-2054.
https://doi.org/10.1007/s00449-019-02194-7

8
Yang, S., Liu, G., Meng, Y., Wang, P., Zhou, S., & Shang, H. (2014). Utilization of xylose
as a carbon source for mixotrophic growth of Scenedesmus obliquus. Bioresource
technology, 172, 180-185. http://dx.doi.org/10.1016/j.biortech.2014.08.122

Zhang, S., Kim, T., Han, T., & Hwang, S. (2015). Influence of light conditions of a mixture
of red and blue light sources on nitrogen and phosphorus removal in advanced
wastewater treatment using Scenedesmus dimorphus. Biotechnology and bioprocess
engineering, 20(4), 760-765. https://doi.org/10.1007/s12257-015-0066-4