Facultad de Zootecnia

Departamento académico de Ciencia Pecuarias

“BIOSINTESIS DE LA CLOROFILA Y SU
DETERMINACION CUANTITATIVA”

Curso : Fisiología Vegetal

Docente : Ing. Gonzales Huiman; Fernando

Alumnos : Olivera Ysminio; William G.

Panduro Vargas William.

Ponce Gómez; Wilson.

Robles Condori; Javier.

Tingo María – Perú

2008 – I
 I. INTRODUCION

La fotosíntesis es un proceso por el cual las plantas verdes convierten a

energía potencial de compuestos de carbono reducidos, desprendiendo
simultáneamente oxigeno molecular. Este proceso es indudablemente, el proceso
más importante sobre la tierra, pues suministra directa o indirectamente las
substancias nutritivas esenciales para la mayoría de las formas de vida. La
fotosíntesis, consiste en la reducción de C02 atmosférico por medio de los
protones del agua obtenidos con la energía proveniente del sol. Así la planta
almacena energía electromagnética como energía potencial en los compuestos
orgánicos. Los compuestos carbonados ricos en energía, obtenidos de esta
manera, son usados después como fuente de energía por la propia planta y por
otros organismos que son incapaces de fabricar sus propios alimentos, pero que
si pueden aprovechar la materia vegetal.

Los organismos fotosintéticos atrapan la luz solar formando ATP y NADH,

que utilizan como fuente de energía para formar lúcidos y otros componentes
orgánicos a partir de bióxido de carbono y agua de forma simultánea liberan
oxigeno molecular. El bióxido de carbono formado en la respiración de los
heterótrofos regresa a la atmósfera para volver a ser utilizado por los organismos
fotosintéticos. De este modo la energía solar proporciona la fuerza motriz para la
circulación continua del bióxido de carbono y oxigeno molecular atmosféricos a
través de la biosfera y proporciona los substratos reducidos (combustible).

Objetivos:

 Estudiar una técnica para la determinación total, clorofila “a” y clorofila “b”
presente en las hojas.
 Realizar el espectro de absorción de la clorofila extraída de las hojas.
 II. REVISION LITERARIA

2.1. Clorofila

Pigmento que da el color verde a los vegetales y que se encarga de

absorber la luz necesaria para realizar la fotosíntesis, proceso que transforma
la energía luminosa en energía química. La clorofila absorbe sobre todo la luz
roja, violeta y azul, y refleja la verde. La gran concentración de clorofila en las
hojas y su presencia ocasional en otros tejidos vegetales, como los tallos,
tiñen de verde estas partes de las plantas. En algunas hojas, la clorofila está
enmascarada por otros pigmentos. En otoño, la clorofila de las hojas de los
árboles se descompone, y ocupan su lugar otros pigmentos.

La molécula de clorofila es grande y está formada en su mayor parte

por carbono e hidrógeno; ocupa el centro de la molécula un único átomo de
magnesio rodeado por un grupo de átomos que contienen nitrógeno y se llama
anillo de porfirinas. La estructura recuerda a la del componente activo de la
hemoglobina de la sangre. De este núcleo central parte una larga cadena de
átomos de carbono e hidrógeno que une la molécula de clorofila a la
membrana interna del cloroplasto, el orgánulo celular donde tiene lugar la
fotosíntesis. Cuando la molécula de clorofila absorbe un fotón, sus electrones
se excitan y saltan a un nivel de energía superior (véase fotoquímica) esto
inicia en el cloroplasto una compleja serie de reacciones que dan lugar al
almacenamiento de energía en forma de enlaces químicos.

Hay varios tipos de clorofilas que se diferencian en detalles de su

estructura molecular y que absorben longitudes de onda luminosas algo
distintas. El tipo más común es la clorofila A, que constituye aproximadamente
el 75% de toda la clorofila de las plantas verdes. Se encuentra también en las
algas verdeazuladas y en células fotosintéticas más complejas. La clorofila B
es un pigmento accesorio presente en vegetales y otras células fotosintéticas
complejas; absorbe luz de una longitud de onda diferente y transfiere la
energía a la clorofila A, que se encarga de transformarla en energía química.
Algunas bacterias presentan otras clorofilas de menor importancia.
 III. MATERIALES Y METODOS

3.1. Lugar y fecha

La presente práctica se desarrollo en el laboratorio de semillas en le area de

fisiología vegetal de La Universidad Nacional Agraria de la Selva el día miercoles
18 de junio del presente año a horas 2.00 a 4.00 p.m., en la ciudad de Tingo
María, Provincia de Leoncio Prado, Departamento de Huanuco a coordenadas
geográficas: Latitud Sur: 9º17’08”, Longitud Oeste: 75º59’52”, a 660m s n m, con
un temperatura promedia de 22º C aproximadamente

3.2. Materiales

 Hojas de maní forrajero (Arachis pintoe).

 Acetona al 80% (v/v)

 Licuadora

 Mortero de porcelana con su brazo

 Embudo
  Papel filtro Whatman N°1

 Espectrofotómetro.

 Balanza.

3.3. Procedimiento

A)- Extracción de la clorofila.- Colocar 200 mg (peso fresco) de hojas en un

mortero limpio. Añadir 25 ml de acetona al 80% y triturar en un mortero o en una
licuadora, filtre y recoja el extracto de acetona en un cilindro graduado. Complete
el volumen 25 ml con acetona al 80% mida los extractos graduados en el
espectrofotómetro y anote las densidades ópticas a 645, 663, 652 nm. Lea contra
un blanco de 80% de acetona. Calcule la cantidad de clorofila presente en el
extracto en base a miligramos de clorofila por gramo de peso fresco de tejido.

B)- determinación de la clorofila.-el procedimiento para la determinación de la

clorofila esta basado en el trabajo de Mac Kinney, sobre la absorción de la luz por
los extractos de clorofila en acetona al 80%. Las concentraciones de clorofila “a”
y “b” se determinaron midiendo la densidad óptica de extractos de clorofila en
acetona 80% con un espectrofotómetro a 663 y 645 nm y resolviendo ecuaciones
simultaneas, utilizando los coeficientes de absorción específicos para la clorofila a
y b.

1)- D663 = 82.04 Ca +9.7 Cb

2)- D645 = 16.75 Ca + 45.6Cb

Donde Ca yCb, son los gramos por litro de clorofila a y b respectivamente, y de

las densidades ópticas en las longitudes de onda respectivamente obtenidas con
el espectrofotómetro.

De la ecuación (2) tenemos:

3)- Ca = D645 -45.6 Cb/ 16.75 , sustituyendo en (1) y resolviendo para Cb
obtenemos.

4)- Cb = 0.0229 D645 -0.00468 D663; sustituyendo esta expresión por Cb en (2)
resolviendo para Ca.

5)- Ca = 0.0127 D663 – 0.00269 D645

Entonces tenemos la clorofila total, C, en gramos por litro es:

6)- C = Ca + Cb =0.02 D645 + 0.00802 D663.

O expresado la clorofila total, C, en miligramos por litro.

7)- C = 20.2 D645 + 8.02 D663.

Para chequear la determinación de la clorofila total, se grafica los datos para la

absorción de la clorofila “a” y “b” se encontró que la curva interceptó en 6.2 nm.
Extrapolando, se encontró que el valor del coeficiente de absorción específica
para esta longitud de onda fue de 34.5.

Se planteó otra ecuación para obtener la clorofila total.

8). D645 = 34.5Ca + 34.5 Cb = 34.5(Ca+ Cb).

Entonces:

9)- (Ca + Cb) = D652 /34.5 o expresado en miligramos pro litro.

10)- C = D652 x 1000 / 34.5

 IV. RESULTADOS

Datos:

Peso de la muestra 0.2 gr.

Densidad optica a 645nm = 0.373

Densidad optica a 652nm = 0.500

Densidad optica a 663nm = 0.758

Calculo:

C = (20.2 x 0.081 + 8.02 x 0.648) x 25/1000 x0.5

Entonces C = 0.085 mg de clorofila /cc

Sustituyendo la densidad en la ecuación (10)

C = 0.500 x 1000 x 25 = 181159.42mg. de clorofila / cc

34.5 x 1000 x 0.5

V. CONCLUSIÓN

De los resultados obtenidos podemos concluir que la hoja del maní forrajero
tiene 181159.42 mg de clorofila por cc.

VI. BIBLIOGRAFIA

SALISBURY, B. FRANK .Fisiología Vegetal, Ed. Iberoamerican1994.MATHEWS, C.

K. Y VAN HOLDE, K. E.