MÉTODOS DE DETERMINACIÓN DE PROTEÍNAS

Métodos químicos:

Método de Biuret es un método mucho más rápido y menos engorros que el método de
Lowry, la reacción se deriva de su nombre de Biuret, una molécula que se encuentra
formada a partir de dos ureas como son (H2N-CO-NH-CO-NH2), es la más sencilla de
todos los métodos y las que da positiva a la reacción. Bajo estas condiciones que son
alcalinas, estas son sustancias que contienen dos o más uniones peptídicas lo que
forman un complejo de color purpura con sales de cobre, por lo que ocurre lo mismo
que en la primera etapa del método de Lowry. Este método tiene pocos agentes que
interfieren ya que uno de ellos es el sulfato de amonio, por lo que se hace menos
sensible que el método de Lowry por lo que requiere más cantidad de muestra: su rango
adecuado que se usa es 1 ml de 0,1 a 1 de proteínas.(Dra. Dante Maugeri, 2016)

Método de Lowry este proceso es de terminación cuantitativa derivada a las

concentraciones de proteínas que es una de las pruebas más frecuentes que se deben
hacer en un laboratorio, por lo que la cantidad de las proteínas se la debe de evaluar ya
sea midiendo las cantidades totales de nitrógenos proteicos por lo que ayuda a las
cantidades totales de nitrógeno por lo que representa el 26 % de todo el peso de una
proteína. La reacción previa de las proteínas se encuentra en medio de los alcalinos con
iones como el Cu2 en lo que es en la presencia del tartrato lo que ayuda a evitar las
precipitaciones por lo que es esencial identificar la reacción del Biuret, formándose un
complejo de coordinaciones entre lo que es el cobre y el nitrógeno peptídico. Dado que
este método da resultados muy variables que requieren de una curva de calibración lo
que hace partir de seroalbúmina bovina.(Amaral et al., 2018)

Método de Bradford este método consiste en la determinación de la cuantificación por

la unión de un colorante de color azul de Coomaasie G-250por lo que sirve para
comparar la proteína por eso esta unión es una de las diferentes cantidades de las
proteínas estándares en (Albúmina de Suero Bovino). En la cuantificación se puede
hacer midiéndolo que es la absorbencia en los espectrofotómetros a 595 nm y también
graficándolos por medio de la absorción vs las concentraciones de las proteínas, por lo
que se obtiene una curva de calibración de las proteínas. Esta curva de calibración va a
ayudar a que se pueda interpolar las concentraciones de las proteínas de las muestras
que se muestran al momento de medir la absorción de 595nm. Este método es
sencillamente muy fácil y rápido por lo que se puede trabajar en un rango entre 1 a 25
microgramos para la cantidad de 1 ml, por lo que interfiere en un ensayo detergente y en
las soluciones como las alcalinas.(Torres, 2019)

Los métodos radioquímicas se encuentran dos activaciones una es activación

neutrónica que es irradiar las cantidades que pesen las muestras con los neutrones lo
que produce con el paso de 14 N a 13N. Tiene una vida media de 10 minutos por lo que
emite las radiaciones gamma las que se registran en un contador de centello. Una de sus
ventajas es rápido, sencillo, sin problemas de contaminaciones., mientras que su
desventaja el costo de infraestructura es muy elevado. Activación protónica es muy
similar a la variante de la muestra irradia con los protones por lo que se efectúa las
conversiones de 14N a 14 O, lo que decae en las emisiones de los protones y las
radiaciones gammas las que se registran con el contenido de la muestra. (Dra. Dante
Maugeri, 2016)
 https://www.achipia.gob.cl/wp-content/uploads/2016/06/4-M--todos-
Proteina-Lic.-Q.-Marcela-Torres.pdf
https://www.cromtek.cl/2020/07/04/metodos-de-cuantificacion-de-proteinas-y-ley-de-
etiquetados/
https://es.calameo.com/read/00244633964fafd241c85

Amaral, G., Bushee, J., Cordani, U. G., KAWASHITA, K., Reynolds, J. H.,
ALMEIDA, F. F. M. D. E., de Almeida, F. F. M., Hasui, Y., de Brito Neves, B. B.,
Fuck, R. A., Oldenzaal, Z., Guida, A., Tchalenko, J. S., Peacock, D. C. P.,
Sanderson, D. J., Rotevatn, A., Nixon, C. W., Rotevatn, A., Sanderson, D. J., …
Junho, M. do C. B. (2018). DETERMINACION DE PROTEINAS POR EL
METODO DE LOWRY. Journal of Petrology.
https://acasti.webs.ull.es/docencia/practicas/4.pdf

Dra. Dante Maugeri. (2016). QUÍMICA BIOLÓGICA TRABAJO DE LABORATORIO

No 1: DETERMINACIÓN DE PROTEÍNAS DOCENTES: Dante Maugeri y Paula
Iribarren Introducción. 1–9.
http://www.iib.unsam.edu.ar/archivos/docencia/licenciatura/biotecnologia/2017/Qu
imicaBiol/1489768358.pdf

Torres, M. (2019). MÉTODOS PARA ANALISIS DE PROTEINA ( Ley 20606) Marcela

Torres-Eurofins.