Métodos de purificación de proteínas

La purificación de proteínas es una secuencia de procesos que nos permite

aislar un tipo específico de proteína de una mezcla compleja, por ejemplo, de
una enzima. El material biológico es un tejido biológico o un cultivo microbiano
valioso, para este tipo de proceso. El objetivo es lograr una concentración
diferencial de la proteína o molécula de interés, cuyas condiciones generales a
evaluar son: calidad, cantidad y costos.
Por otro lado, se podría decir, que para la determinar la estructura de la
proteína se debe realizar el proceso de purificación y separación. Dentro de la
purificación se requiere de una serie de pasos a seguir: a) identificación de un
ensayo específico para la determinación de una proteína (actividad biológica)
(específico, sensible, rápido y económico), b) selección de la fuente (sustrato
biológico), c) extracción de proteínas de la fuente (proteínas intracelular o
extracelular), d) estabilización molecular, e) separación y concentración
(separación), f) determinar la pureza y calidad del producto final, y de métodos.
Los métodos de purificación de proteínas buscan maximizar la eficiencia de
extracción, minimizar la oxidación, evitar la desautorización y el incremento del
porcentaje de proteína recuperada. Los métodos de purificación de proteínas
más usados son:
Métodos de separación por filtración
a) Microfiltración y Ultrafiltración:
 Microfiltración, es el proceso de separación de participación de
tamaño inferior a 10 µm en un fluido, mediante el uso de membranas
poliméricas, termoplásticas o tipo matiz. Para ello se debe tomar en
cuenta características como: selección del diámetro del poro de la
membrana, el flujo de alimentación (velocidad) y el tamaño de la
partícula a separar y temperatura.
 Ultrafiltración, se utiliza cuando se quiere detener fragmentos de
partículas de tamaño menor a 0,1 µm. Hay una diferencia de presión
entre la microfiltración, puesto que la ultrafiltración solamente utiliza
presiones de entre 4 y 8 atm.
b) Cromatografía
 La centrifugación, es un conjunto de técnicas que separa mezclas
de diferentes capacidades de la interacción de cada componente
en otra sustancia, separa las muestras girándolas a gran
velocidad. Con este proceso, las proteínas pueden aislarse
habitualmente en una única capa. Las centrífugas de pequeño
volumen son capaces de procesar sólo unos pocos litros cada
vez. Los grandes reactores pueden producir cientos o miles de
litros del extracto que debe procesarse. La centrifugación a escala
industrial se logra habitualmente mediante centrífugas de flujo
continuo que permiten el procesamiento continuo del extracto
procedente del biorreactor.