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UNIVERSIDAD NACIONAL JORGE BASADRE GROHMANN

FACULTAD DE INGENIERÍA
ESCUELA PROFESIONAL DE INGENIERÍA QUÍMICA

LABORATORIO DE INGENIERÍA BIOQUÍMICA

PROCESOS DE SEPARACIÓN,
PURIFICACIÓN Y CONSERVACIÓN
DR. RAÚL PAREDES MEDINA
TACNA – PERÚ
2017
PROCESOS DE SEPARACIÓN

La separación y purificación de un producto biotecnológico es una


parte crítica del proceso de producción. Las operaciones de
separación (downstream processing), constituyen una parte
importante del costo del producto y, en algunos casos, son el costo
principal.
Los caldos de fermentación son mezclas acuosas complejas de células
(insolubles) productos extracelulares solubles, productos intracelulares
y sustratos no convertidos. Las operaciones de separación para la
recuperación del producto dependen de la localización del producto
(intracelular, extracelular), de las propiedades del mismo (tamaño,
carga, solubilidad, así como de la escala del proceso y el valor del
producto.
Secuencia de separación y purificación
Continuación …
Explicación del Esquema
En el esquema se ha diferenciado entre productos intra y extracelulares,
incluyendo la disrupción celular para liberar el producto al medio.

Las operaciones más utilizadas para la separación de insolubles incluyendo la


filtración y la centrifugación, aunque la sedimentación (y la floculación)
tienen una amplia aplicación, especialmente en instalaciones de tratamiento
biológico de aguas residuales.

La etapa de separación o concentración tiene como objetivo principal el


aumento de concentración del producto de interés respecto del resto de
componentes. Se utilizan operaciones relativamente específicas, con la
intención de separar el producto deseado de sustancias que poseen
propiedades distintas (por ejemplo, extracción líquido-líquido o adsorción).
Continuación …
La purificación subsiguiente del producto implica el uso de
operaciones altamente selectivas para separarlo de las
impurezas de propiedades físicas y funcionalidad química
similares. Como ejemplos de operaciones empleadas
pueden citarse la precipitación, la cromatografía y la
electroforesis.
La última etapa del proceso de separación viene
determinada por el uso final del producto. En muchos
casos, es necesario obtener una preparación final
mediante cristalización y secado.
PRODUCCIÓN EN PROCESOS
BIOTECNOLÓGICOS

Existen diferentes tipos de procesos de producción:


1. BATCH:
 No hay interacción con los alrededores
 El flujo de gases por lo general es continuo
2. SEMIBATCH:
 Una de las corrientes es alimentada continuamente
 No hay salida de producto continuamente
3. CONTINUO:
 La alimentación es continua
 La producción es continua
 Estado estacionario en el cultivo de microorganismos
PROCESOS DE SEPARACIÓN
1. SEPARACIÓN SÓLIDO – LÍQUIDO:
 Filtración
 Centrifugación
2. RUPTURA CELULAR:
 Métodos mecánicos
 Permeabilidad
 Métodos químicos y biológicos
3. SEPARACIÓN DE RESTOS CELULARES:
 Filtración
 Centrifugación
4. CONCENTRACIÓN:
 Ultrafiltración
 Precipitación
 Destilación
 Extracción con solventes
 Extracción líquido-líquido
PROCESOS DE PURIFICACIÓN

1. Pretatamiento-acondicionamiento:
 Adsorción
 Precipitación
 Cromatografía de Afinidad
2. Alta resolución
 Cromatografía de intercambio
 Cromatografía de afinidad
 Cromatografía de ligando
 Cristalización
3. Terminación:
 Filtración por geles
 HPLC
ESQUEMA DE LA EXTRACCIÓN DE ENZIMAS
PURIFICACIÓN DE ENZIMAS
Para medir la actividad de las enzimas es necesario obtener la enzima al
estado puro, para tal fin se la debe aislar. Las enzimas pueden aislarse de
diferentes fuentes: cerebro, hígado, bazo o del estómago, en el caso de
animales; también se pueden obtener de plantas y bacterias. Debe buscarse
siempre una fuente que sea asequible, es decir que esté al alcance y sea fácil
de obtenerla, teniendo en cuenta la siguiente información de contenido de
enzimas.
• Cerebro: 10 %
• Hígado: 50 %
• Bazo: 30 %

Nota: No deben trabajarse con órganos congelados, sino con órganos de


reciente obtención de animales recién sacrificados.
SECUENCIA:
1. Homogenizado: La muestra (tejido) previamente pesada junto con el
Buffer – Sucrosa, se homogenizan o trituran en un homogenizador de
vidrio a fin de romper las células.
2. Centrifugación: El homogenizado se lleva a centrifugar y así se separa
el precipitado del eluyente, éste se vuelve a centrifugar y nuevamente se
separa el precipitado del eluyente y por última vez se vuelve a
centrifugar a unas 100 000 revoluciones por un minuto, separándose el
último precipitado y eluyente.
3. Medición de la Actividad: en el último eluyente se hallan las enzimas
claves como: Hexoquinasa, malato deshidrogenasa, fosfofructoquinasa,
etc., cuyas actividades se miden.
CONSERVACIÓN DE CULTIVOS
OBJETIVOS:
 Preservar la pureza genética del cultivo sin pérdida de ninguna de sus
propiedades bioquímicas.
 Mantener las características de la población (propiedades morfológicas y
bioquímicas).
 Preservar los niveles de su productividad inicial.
 Lograr que el cultivo pueda ser transportado y manejado con facilidad. Este
último puede ser un factor esencial en la selección de un método de
preservación.
 El conocimiento de las características del cultivo es esencial en la elección
de un método de preservación (conservación).
No hay métodos de mantenimiento comunes en todas las industrias
CONSERVACIÓN Y CONTROL DE CEPAS MICROBIANAS