Micro growth factors

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TEMA 4: NUTRICIÓN
MICROBIANA,
COMPOSICIÓN,
PREPARACIÓN Y
ESTERILIZACIÓN DE
MEDIOS DE CULTIVO
UNIDAD II: NUTRICIÓN, METABOLISMO,

CRECIMIENTO Y MUERTE MICROBIANA
“CRECIMIENTO...”

Dra. María Gabriela Paraje 1

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REQUERIMIENTOS PARA EL
CRECIMIENTO:
- QUÍMICOS
- FÍSICOS

REQUERIMIENTOS
FÍSICOS

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REQUERIMIENTOS FISICOS
 TEMPERATURA
 ACIDEZ Y ALCALINIDAD (pH)
 PRESIÓN OSMÓTICA
TEMPERATURA
 INFLUENCIA VELOCIDAD DE
REACCIONES ENZIMÁTICAS
 MÍNIMA, ÓPTIMA, MÁXIMA

(separada por 30 °C)

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Fuente: Michael T. Madigan, John M. Martinko. 2004. Brock Biología de los Microorganismos 10ed.
 Sicrófilos
- rango: < 0-20°C, óptimo < 15oC
 organismos marinos,
 algas: Chlamydomonas nivalis (nieve rosada),
 bacterias: Pseudomonas, Flavobacterium
 membrana contiene alto % de ácidos grasos insaturados

 Profundidad de los océanos o en regiones polares
 Sicrótrofos o Sicrófilos facultativos

- rango: 0-35°C, óptimo 20-30oC
 Pseudomonas - crecen en el refrigerador
 Pyrococcus, Pyrodictium (aguas termales)
 Más comunes que scrófilos
 Deterioro de alimentos a bajas temperaturas

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 Sicrótrofos o Sicrófilos facultativos

- rango: 0-35°C, óptimo 20-30oC
 Pseudomonas - crecen en el refrigerador

 Pyrococcus, Pyrodictium (aguas termales)
 Más comunes que scrófilos
 Deterioro de alimentos a bajas
temperaturas

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 Mesófilos - rango: 15-45 °C, óptimo:

30-40 °C
 lamayoría de los microorganismos (del

suelo, aguas, patógenos)
 37 °C (cuerpo humano – estufas de

cultivo)

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 Termófilos - rango: 40-70 °C, óptimo

de 55-65 °C
 membrana contiene alto % de ácidos
grasos saturados
 enzimas estables al calor
 Bacillus stearothermophilus, organismos
de compostaje (indicador biológico de
esterilización)
 No son causan problemas en la salud
pública
 Hipertermófilos - rango: 80-113°C,

óptimo > 90oC
 Archaea:Pyrococcus, Pyrodictium (aguas
termales´ - actividad volcánica)

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 Hipertermófilos - rango: 80-113°C,

óptimo > 90oC
Archaea: Pyrococcus, Pyrodictium
(aguas termales - actividad volcánica)

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Pyrodictium
ESTUFA DE CULTIVO

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pH
 MAYORÍA ENTRE pH 6,5 y 7,5 (raro < 4 )
 HONGOS: más amplio, óptimo 5 – 6
 BACTERIAS ACIDÓFILAS (Thiobacillus) y

ALCALÓFILAS (Bacillus)
 REGULACIÓN CON BUFFERS EN MEDIOS

DE CULTIVO (neutralizar ácidos de los
mismos m.o.)

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6.6 8-9 10.2

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Presión Osmótica
 El agua se desplaza a zonas de mayor concentración
de solutos. Una presión osmótica alta causa pérdida de
agua y plasmólisis de la célula
 Se inhibe el crecimiento (se separa la pared de la
membrana)
 MÉTODO DE CONSERVACIÓN DE ALIMENTOS
(pescado salado, miel, leche condensada,
mermelada)
 Halófilos extremos: bacterias que toleran altas
concentraciones salinas (15-30%)
 Halófilos facultativas: toleran hasta un 2 % de sales
(hasta 15%)

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La semipermeabilidad de la membrana citoplasmática y la permeabilidad

de la pared celular originan, entre otros, el fenómeno de plasmólisis.
Este fenómeno se observa cuando la tonicidad del medio externo es
mayor que la del protoplasto (medio hipertónico) en estas condiciones
el agua sale del protoplasto y este se encoge por lo que la membrana
citoplasmática se separa de la pared.

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ANAEROBIOSIS,
ANAEROBIOSIS
ESTRICTA Y
FACULTATIVA,
MICROAEROFILIA.


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(a) Microorganismos aerobios; (b) anaerobios estrictos; (c)

anaerobios o aerobios facultativos; (d) microaerófilos y (e)
anaerobios aerotolerantes. (Madigan et al. 2003).

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Aerobios
 Son aquellos que necesariamente requieren el oxígeno para

vivir, su metabolismo es de respiración aerobia es decir que
el oxígeno es el aceptor final de electrones.
 La superóxido dismutasa (SOD) y la enzima catalasa
permiten que contrarreste las formas tóxicas del oxígeno
como es el caso de los radicales libres, anión peróxido,
radical hidroxilo, etc.
 Formación de H2O y CO2
 Producción de enzima Catalasa: desdoblamiento del
Peróxido de hidrógeno (H2O2) en H2O y oxígeno
 Ej. Bacillus, Mycobacterias, hongos, etc.
Control positivo: Stahylococcus aureus

Control negativo: Streptococcus pyogenes
Prueba de Catalasa para diferenciar microrganismos:

Diferencia Bacillus (+) de Clostriduim( -)
Streptococcus (-) de Micrococcus ( +)

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Anaerobios (aerobios) facultativos
 Utilizan el oxígeno cuando está presente pero cuando no

hay pueden continuar su crecimiento a través de la
fermentación o respiración anaerobia.
 Aunque su crecimiento es mayor en presencia de
oxígeno así como su producción de energía, pero crece
en todo el tubo.
 La enzima catalasa y superóxido dismutasa (SOD)
permite que contrarreste las formas tóxicas del oxígeno
como es el caso de los radicales libres, anión peróxido,
radical hidroxilo, etc.
 Ejemplo, Escherichia coli, levaduras.
Microaerófilos
 Son aerobios que requieren oxígeno pero no en concentraciones
elevadas.
 Su tipo de respiración es aerobia.
 Utilizan el O2 como fuente de energía pero a conc. <15%
 Son sensibles a radicales libres y peróxidos.
 Enzima SOD: transforma radicales superóxido en H2O2 y la
Catalasa en agua
 Capnófilas: desarrollan mejor con concentraciones de CO2
elevadas
 La cavidad oral presenta todas estas variantes. Las especies
capnófilas aumentan en personas con alteraciones periodontales
 Ejemplo, bacterias de aguas negras, Methanobacterium
formicicum, Azospirillum, Campylobacter, Helycobacter (H. pylori)

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microaerofilia

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Anaerobios aerotolerantes
 Toleran el oxígeno porque tiene una enzima

(SOD), que neutraliza las formas tóxicas del
oxígeno pero no lo usan para su crecimiento ni
para la obtención de energía.
 Los de este grupo fermentan los carbohidratos
para formar ácido láctico.
 Ejemplo, los lactobacilos usados en la
producción de quesos, yogures y alimentos
fermentados.
 Enterococcus faecalis, Sreptococcus spp.
Anaerobios estrictos
 Viven en ausencia de oxígeno atmosférico.
 No pueden usar el oxígeno molecular (O2) como aceptor de
electrones para la producción de energía ni para su
crecimiento.
 Aceptor final de hidrógeno: compuesto inorgánico (NO3 o SO4)
 Fermentación: la fuente de carbono provee energía, el
donador de hidrógeno y el aceptor final (un compuesto
orgánico como ácidos o alcoholes)
 No tienen enzimas para neutralizar las formas tóxicas del
oxígeno y por esto dada su extrema sensibilidad pueden morir
cuando este elemento está presente en el medio.
 Ejemplo, especies de Clostridium, Methanobacterium,
 Muy frecuente en microorganismos orales

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Cultivos en anaerobiosis
•tubos con medio de cultivo llenos por completo.
•medios con sustancias que reaccionan con el

oxígeno y lo excluyen.
•dispositivo especial (cámara anaeróbica)
•cajas o tubos incubados en recipientes con

granos germinados (cebada, centeno)

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JARRA DE ANAEROBIOS

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Otros gases
N2 componente principal de de la atmósfera (78%). Gas inerte: no es usado
por la mayoría de los organismos, los que pueden reducir el triple enlace del
N2 con la enzima nitrogenasa se denominan diazotrofos o fijadores de N2 y
pueden desarrollarse en ambientes sin N-combinado
CO tóxico para la mayoría de los organismos (cadena respiratoria)

puede ser oxidado a CO2 por algunos microorganismos
CH4 liberado a la atmósfera por microorganismos metanogénicos, gas con

efecto invernadero, puede ser oxidado a CO2 por bacterias metanotróficas
CO2 importante gas, fuente de carbono para los autótrofos, aerobios y

anaerobios, fotosintéticos o quimiosintéticos. Muchos hongos lo requieren a
niveles superiores a los atmosféricos, para ciertas síntesis
H2 poco usado, tóxico para la mayoría de los microorganismos, brinda

energía a bacterias Hydrogenomonas: H2+O2 = H20 + ATP
REQUERIMIENTOS
QUÍMICOS

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Requerimentos de nutrientes:
 Macroelementos: C, O, H, N, P,
S, Ca, K, Fe, Mg
 Microelementos (llamados también

oligoelementos): Zn, Mn, Co, Cu, Ni,
Mo, Se

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Macroelementos
Macronutrientes o macroelementos
 Son captados por los microorganismo (m.o.) en

cantidades relativamente grandes.
 Más del 95% del peso seco de la célula

microbiana esta constituido por C, O, H, N, S,
P, K, Ca, Mg y Fe.

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Requerimentos de C, H y O
 C, O, H, N, S y P.
 Son componentes de carbohidratos,
lípidos, proteínas y ácidos nucleicos.
 Son necesarios en cantidades de g/L de

medio de cultivo.
 Las necesidades de C, H y O suelen

cubrirse simultáneamente.
Carbono
 mitad del peso seco.

 Fuente de energía y/o compuestos para
biosíntesis.
 El carbono es necesario para construir el
esqueleto de todas las moléculas orgánicas;

las moléculas que sirven como fuente de C
aportan también átomos de H y O, excepto el
CO2.

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Requerimientos de N, P y S
Se deben incorporar en grandes cantidades. Aunque
pueden adquirirse a partir de los mismos nutrientes
que aportan C, los m.o. suelen emplear también
fuentes inorgánicas.
 N: necesario para sintetizar a.a., purinas, pirimidinas

(ácidos nucleicos) y polímeros de la pared celular.
 Se encuentran formando el grupo amino (proteínas).
 Reincorporación
 Iones amonio – nitrato
 Cianobacterias (N2 de la atmósfera)
Requerimientos de N, P y S
Se deben incorporar en grandes cantidades. Aunque
pueden adquirirse a partir de los mismos nutrientes
que aportan C, los m.o. suelen emplear también
fuentes inorgánicas.
 P: presente en ácidos nucleicos, fosfolípidos,

nucleótidos como ATP, varios cofactores, algunas
proteínas y otros componentes celulares.
 S: necesario para la síntesis de sustancias como los aa
azufrados como cisteína y metionina, la biotina,
coenzima A, tiamina y otros componentes.

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 K, Ca, Mg y Fe: se encuentran en la célula en forma de

cationes, desempeñando varias funciones. Se utilizan en
cantidades de mg.
 K+: necesario para actividad de enzimas, entre ellas

algunas que participan en la síntesis de proteínas.
 Ca2+: contribuye a la termorresistencia de endosporas.
 Mg2+:actúa como cofactor de muchas enzimas, forma

complejos con el ATP y estabiliza los ribosomas y las
membranas celulares.
 Fe2+ y Fe3+: Forma parte de los citocromos y es

cofactor de enzimas y de proteínas transportadoras de
electrones.
Micronutrientes

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Micronutrientes o microelementos u
oligoelementos
 Son aquellos que se requieren en cantidades tan
pequeñas, que los contaminantes presentes en
agua, en los recipientes para el cultivo y en los
componentes habituales del medio son a menudo
suficientes.
 Normalmente son parte de enzimas y cofactores;

facilitan la catálisis de reacciones y
mantenimiento de la estructura de proteínas.
 Mn, Zn, Co, Mo, Ni y Cu deben estar disponibles

en cantidades de g.
Requerimientos nutricionales
Se distinguen 2 categorías:
1. frecuentemente esenciales para el crecimiento

como Ca, Mn, Fe, Co, Cu y Zn y
2. raramente esenciales como B, Na, Al, Si, Cl, V,

Cr, Ni, As, Se, Mo, Sn, e I.
 A veces es difícil demostrar un requerimiento

de un micronutriente por que generalmente está
presente en suficiente cantidad como impureza
de los componentes principales.

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 Zn2+: se localiza en el centro activo de algunas enzimas.
 Mn2+: facilita a muchas enzimas la catálisis de la

transferencia de los grupos fosfato.
 Mo2+: necesario para fijar nitrógeno.
 Co2+: componente de la vitamina B12.
 Cu2+: tiene funciones en algunas enzimas de óxido-

reducción.
Composición celular
 Cantidad de C = 50%
 Cantidad de N = 8%
 Cantidad de P = 5%
 Cantidad de S = 3%
El hidrógeno y el oxígeno constituyen el agua

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Factores de crecimiento
Son sustancias precursoras de ciertos
constituyentes orgánicos de la célula que el m.o.
es incapaz de sintetizar; generalmente se
requieren en pequeñas concentraciones.
Existen tres clases principales:

1. Aminoácidos síntesis de proteínas
2. Purinas y pirimidinas síntesis de ácidos nucleicos
3. Vitaminas normalmente forman la totalidad o
parte de los cofactores enzimáticos; constituyen
grupos prostéticos o centros activos de ciertas
enzimas.
Factores Estimulantes
 Influyen en el proceso de crecimiento.
 No son imprescindibles.
 En presencia de factores estimulantes crecen
más rápido y mejor.

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Composición típica de compuestos orgánicos e

inorgánicos de m.o.
Constituyentes inorgánicos
g/100 g en peso seco

Elemento Bacteria Hongos Levaduras
Fósforo 2-3 0.4-4.5 0.8-2.6
Azufre 0.2-1.0 0.1-0.5 0.01-0.24
Potasio 1-4.5 0.2-2.5 1-4
Magnesio 0.1-0.5 0.1-0.3 0.1-0.5
Sodio 0.5-1 0.02-0.5 0.01-0.1
Calcio 0.01-1.1 0.1-1.4 0.1-0.3
Fierro 0.02-0.2 0.1-0.2 0.01-0.5
Cobre 0.01-0.02 --------- 0.002-0.01
Manganeso 0.001-0.01 --------- 0.0005-0.007
Molibdeno -------- --------- 0.0001-0.0002
Total Cenizas 7-12 2-8 5-10
Composición típica de compuestos

orgánicos e inorgánicos de m.o.
Compuesto Bacteria Levaduras Hongos

(% base seca) (% base seca) (% base seca)
Promedio Promedio Promedio

Carbono 48 46-52 48 46-52 48 45-55
Nitrógeno 12.5 10-14 7.5 6-8.5 6 4-7
Proteínas 55 50-60 40 35-45 32 25-40
Carbohidratos 9 6-15 38 30-45 49 40-55
Lípidos 7 5-10 8 5-10 8 5-10
Acidos nucleicos 23 15-25 8 5-10 5 2-8
Cenizas 6 4-10 6 4-10 6 4-10

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Elemento Funciones fisiológicas

Hidrógeno Constituyente de agua celular, materiales celulares orgánicos
Oxígeno Constituyente de agua celular, materiales celulares orgánicos;
como O2, aceptor de electrones en la respiración de los aerobios
Carbono Constituyente de materiales celulares orgánicos
Nitrógeno Constituyente de proteínas, ácidos nucleicos, coenzimas
Azufre Constituyente de proteínas (como aminoácidos cisteína y
metionina), de algunas coenzimas (por ejemplo, CoA,
cocarboxilasa).
Fósforo Constituyente de ácidos nucleicos, fosfolípidos, coenzimas
Potasio Uno de los principales cationes inorgánicos de las células,
cofactor de algunas enzimas.
Magnesio Importante catión celular, cofactor inorgánico en muchas
reacciones enzimáticas, incluyendo aquellas que requieren ATP;
funciona uniendo las enzimas a los sustratos; constituyente de las
clorofilas.
Manganeso Cofactor inorgánico de varias enzimas, a veces remplazando al
Mg.
Calcio Importante catión celular, cofactor de algunas enzimas (por
ejemplo proteasas)
Hierro Constituyente de citocromos y otras hemo o no hemoproteínas;
cofactor de cierto número de enzimas.
Cobalto Constituyente de la vitamina B12 y de sus coenzimas derivados.
Cobre, zinc, níquel, Constituyentes inorgánicos de enzimas especiales.
molibdeno

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UNIDAD II: NUTRICIÓN, METABOLISMO,

UNIDAD II: NUTRICIÓN, METABOLISMO,

Dra. María Gabriela Paraje 1

UNIDAD II: NUTRICIÓN, METABOLISMO,

Dra. María Gabriela Paraje 2

 MÍNIMA, ÓPTIMA, MÁXIMA

Dra. María Gabriela Paraje 3

Dra. María Gabriela Paraje 4

 membrana contiene alto % de ácidos grasos insaturados

 Sicrótrofos o Sicrófilos facultativos

Dra. María Gabriela Paraje 5

 Sicrótrofos o Sicrófilos facultativos

 Pseudomonas - crecen en el refrigerador

Dra. María Gabriela Paraje 6

 Mesófilos - rango: 15-45 °C, óptimo:

 lamayoría de los microorganismos (del

 37 °C (cuerpo humano – estufas de

Dra. María Gabriela Paraje 7

 Termófilos - rango: 40-70 °C, óptimo

 Hipertermófilos - rango: 80-113°C,

Dra. María Gabriela Paraje 8

Dra. María Gabriela Paraje 9

Dra. María Gabriela Paraje 10

 Hipertermófilos - rango: 80-113°C,

Dra. María Gabriela Paraje 11

Dra. María Gabriela Paraje 12

Dra. María Gabriela Paraje 13

Dra. María Gabriela Paraje 14

 HONGOS: más amplio, óptimo 5 – 6

 BACTERIAS ACIDÓFILAS (Thiobacillus) y

 REGULACIÓN CON BUFFERS EN MEDIOS

Dra. María Gabriela Paraje 15

Dra. María Gabriela Paraje 16

6.6 8-9 10.2

Dra. María Gabriela Paraje 17

Dra. María Gabriela Paraje 18

Dra. María Gabriela Paraje 19

La semipermeabilidad de la membrana citoplasmática y la permeabilidad

Dra. María Gabriela Paraje 20

UNIDAD II: NUTRICIÓN, METABOLISMO,

Dra. María Gabriela Paraje 21

(a) Microorganismos aerobios; (b) anaerobios estrictos; (c)

Dra. María Gabriela Paraje 22

 Son aquellos que necesariamente requieren el oxígeno para

Control positivo: Stahylococcus aureus

Prueba de Catalasa para diferenciar microrganismos:

Dra. María Gabriela Paraje 23

Anaerobios (aerobios) facultativos

 Utilizan el oxígeno cuando está presente pero cuando no

Dra. María Gabriela Paraje 24

Dra. María Gabriela Paraje 25

 Toleran el oxígeno porque tiene una enzima

Dra. María Gabriela Paraje 26

•tubos con medio de cultivo llenos por completo.

•medios con sustancias que reaccionan con el

•dispositivo especial (cámara anaeróbica)

•cajas o tubos incubados en recipientes con

Dra. María Gabriela Paraje 27

Dra. María Gabriela Paraje 28

Dra. María Gabriela Paraje 29

Dra. María Gabriela Paraje 30

Dra. María Gabriela Paraje 31