MICROBIOLOGÍA GENERAL

Dra. Paulina L. Páez

plpaez@unc.edu.ar
La taxonomía es la ciencia de la clasificación, agrupa y separa los organismos
vivos de acuerdo a sus características fenotípicas o genéticas. Para propósitos
de clasificación, los organismos usualmente son reconocidos en órdenes
superiores, familias, géneros, especies y subespecies.

Es una ciencia ARTIFICIAL, influida por los avances en las técnicas.

SE DIVIDE El objetivo es el
1. CLASIFICACION: Es la ordenación de los microorganismos en de ser ESTABLE,
grupos o taxones en función de semejanzas mutuas o de parentesco
evolutivos.
OBJETIVA Y
2. NOMENCLATURA: Es la asignación de un nombres específico a los PREDICTIVA
grupos taxonómicos de acuerdo a criterios y normas preestablecidas y
admitidas internacionalmente.
3. IDENTIFICACION: Es la parte práctica de la taxonomía, dado que
permite encuadrar un determinado organismo en un grupo taxonómico
previamente establecido.
♦ Al preparar un sistema de clasificación, se ubican todos los
microorganismos en grupos homogéneos, que a su vez pertenecen a otro
grupo más extenso siguiendo una estructura jerárquica sin superposiciones.

♦ Una categoría de cualquier rango une grupos de nivel inferior en función

de propiedades comunes.

♦ En la taxonomía bacteriana los niveles o rangos utilizados son los

siguientes (en orden ascendente):

● ESPECIE
● GÉNERO
● FAMILIA
● ORDEN
● CLASE
● REINO
● DOMINIO

El grupo taxonómico básico es la ESPECIE

 SISTEMAS DE CLASIFICACIÓN

Las características taxonómicas de los microorganismos se utilizan para formar

un sistema de clasificación.

Existen dos formas generales para elaborar un sistema de clasificación:

SISTEMA FENÉTICO
☺ Los microorganismos se agrupan en función de semejanzas en sus características
fenotípicas.
☺Los microorganismos que comparten muchas características forman un único
taxón.

SISTEMA FILOGENÉTICO
☺Los microorganismos se agrupan en función de probables relaciones evolutivas.
☺Es difícil de realizar para las bacterias debido a la falta de registros fósiles.
 Las distintas categorías taxonómicas se definen por las propiedades y características
que poseen las bacterias que las integran.

Los datos reciben el nombre de caracteres taxonómicos e incluyen caracteres

fenotípicos, genéticos y quimiotaxonómicos.

FENOTÍPICOS GENÉTICOS QUIMIOTAXONÓMICOS

1) MORFOLÓGICOS
2) BIOQUÍMICAS/FISIOLÓGICAS
3) SEROLÓGICAS
4) FAGOTIPIA
5) PRUEBAS DE INHIBICIÓN
1 ) ADN / ARN: contenido 1) MEMBRANA CITOPLASMÁTICA: ácidos
de G+C, hibridación ADN- grasos, tipos de lípidos polares, presencia
ADN, secuenciación del de ácidos micólicos
ARNr 2) PARED CELULAR: tipos de
peptidoglicano, presencia de ácidos
teicoicos
3) PROTEÍNAS: comparación perfil
proteínas, secuencia de aminoácidos
 PRINCIPALES CARACTERÍSTICAS APLICADAS EN TAXONOMÍA BACTERIANA

Forma celular
CARACTERÍSTICAS MORFOLÓGICAS Tamaño de las células
CLÁSICAS Morfología de las colonias
Características ultraestructurales
Tinción
GENÉTICAS Cilios y flagelos
Mecanismo de movilidad
Forma y localización de endoesporas
Posibilidad de recombinación Inclusiones celulares
por Conjugación o color
Transformación

Plásmidos Fuentes de C y N
FISIOLOGICAS Y
Componentes de la pared celular
METABÓLICAS Fuentes de energía
Productos de fermentación
ECOLÓGICAS Tipo nutricional
Temperatura de crecimiento
Luminiscencia
Mecanismo de conversión de energía
Ciclo vital Movilidad
Relaciones simbióticas Tolerancia osmótica
Patogenicidad Relaciones con el oxígeno
Preferencia de hábitat pH óptimo de crecimiento
Necesidad de temperatura; pH; Pigmentos fotosintéticos
Necesidad de oxígeno Necesidad y tolerancia a la sal
Necesidad de concentración osmótica Metabolitos secundarios
Sensibilidad a antibióticos
 TAXONOMÍA

ENFOQUE
ENFOQUE TAXONOMÍA
GENÉTICO O
CLÁSICO NUMÉRICA
MOLECULAR
 RASGO O CARACTERISTICA
Forma
Tamaño
Morfología de colonia
Características ultraestructurales
Tinción
Mecanismo de motilidad
Inclusiones celulares
Fuentes de carbono y nitrógeno
Constituyentes de pared celular
Fuente de energía
Productos de fermentación
Temperatura óptima de desarrollo y
rango
Tolerancia osmótica
Relación con el oxígeno
pH óptimo y rango
Sensibilidad a inhibidores y
antibióticos
Usa las características bioquímicas, morfológicas y culturales, así como las
susceptibilidad a los antibióticos y compuestos inorgánicos, para determinar el grado
de similitud entre organismos.

Se calcula luego un coeficiente o porcentaje de similitud.

Se construye un dendrograma o matriz de similitudes entre los organismos.

 Ejemplo de codificación de datos
Estados
Característicos Cepa A Cepa B Cepa C Cepa D
1 + + - 0
2 + + + +
3 + + + -
4 - + 0 0
5 + + + +
6 + + - +
7 + + - 0
8 0 - + +
9 + + + +
10 + + + -
11 + 0 - 0
12 + + + -
DENDROGRAMA
GRUPO

50 60 70 80 90 100

C. freundii 1
Citrobacter

C. diversus
2

Escherichia coli
3
GÉNERO Y ESPECIE
El significado ideal de la identificación y clasificación debe ser comparar la
secuencia de cada secuencia de genes en una cepa dada, con la secuencia de
genes para cada especie conocida.

El método que se usa es la hibridización.

Este método puede ser usado para medir el número de secuencias de DNA que
dos organismos cualesquiera tienen en común y para estimar el porcentaje de
divergencia dentro de las secuencias de DNA que están relacionadas pero no
son idénticas.

• BRINDA UN CONCEPTO MÁS UNIFICADO DE ESPECIE

VENTAJAS DE LA • ES MÁS OBJETIVA Y ESTABLE
• SE PUEDEN ORGANIZAR ESQUEMAS DE
CLASIFICACION
IDENTIFICACIÓN FIDEDIGNOS
GENETICA • INDICA CÓMO EVOLUCIONARON LOS
MICROORGANISMOS Y CÓMO PUEDEN AGRUPARSE
Se comparan macromoléculas que se comportan como “cronómetros evolutivos”.
Sus característcias son:
1. distribución universal
2. realizar la misma función en todos los seres vivos
3. sus secuencias deben permitir la identificación de regiones de homología y
heterogeneidad
4. la tasa de cambio de la secuencia de la macromolécula debe estar en correlación con la
distancia evolutiva
SE UTILIZA EL ARNr, Y DENTRO DE ELLOS EL 16S
 PRINCIPALES CARACTERÍSTICAS APLICADAS EN TAXONOMÍA BACTERIANA
COMPOSICIÓN DE ÁCIDOS CARACTERÍSTICAS COMPARACIÓN DE
NUCLÉICOS MOLECULARES PROTEÍNAS
(CONTENIDO EN G+C)

HIBRIDACIÓN DE ÁCIDOS NUCLEICOS

SECUENCIACIÓN DE ÁCIDOS NUCLEICOS
 NOMENCLATURA

Los microbiólogos asignan nombre a los microorganismos de acuerdo

con el SISTEMA BINOMIAL del botánico sueco Carl Von Linneo.

El nombre latinizado y en cursiva consta de dos partes:

El primer nombre, escrito con mayúscula, es el nombre genérico.
El segundo nombre, en minúscula, es el epíteto de la especie.

Escherichia coli

A menudo se abrevia el nombre genérico con una letra mayúscula.

E. coli
ESTRUCTURACIÓN JERÁRQUICA EN TAXONOMÍA

Rango Nombre taxonómico

Dominio Bacteria
Phylum o Proteobacteria
Reino
Clase γ-Proteobacteria
Orden Enterobacteriales
Familia Enterobacteriaceae
Género Shigella
Especie S. dysenteriae
 Estructura secundaria del ARNr 16/18 S de los tres Dominios

Bacteria Archaea Eucarya

Los puntos rojos señalan posiciones en las que arqueas y bacterias suelen diferir
Árbol filogenético de todos los seres vivos
Resumen de las principales características diferenciales entre Bacteria, Archaea y Eukarya

Característica Bacteria Archaea Eukarya

- Estructura celular procariótica Sí Sí No
- ADN circular Sí Sí No
- Histonas No Sí Sí
- Núcleo rodeado de membrana Ausente Ausente Presente

- Pared celular de peptidoglicano Sí No No

- Lípidos de membrana Enlaces éster Enlaces éter Enlaces éster
- Ribosomas 70S 70S 80S
- Intrones No No Sí

- Plásmidos Si Sí Raro
- Sensibilidad de ribosomas a la toxina No Sí Sí
diftérica
- Sensibilidad a cloranfenicol, Sí No No
estreptomicina y kanamicina
- Metanogénesis No Sí No
- Reducción desasimilativa de sulfatos y Sí Sí No
férrico
- Nitrificación Sí No No
- Desnitrificación Sí Sí No
- Fijación de nitrógeno Sí Sí No
- Fotosíntesis oxigénica Sí No Sí (en cloroplastos)
- Quimiolitotrofía Sí Sí No
- Vesículas de gas Sí Sí No
- Sintesis de gránulos de reserva de Sí Sí No
carbono (β-hidroxialcanoatos)
- Crecimiento por encima de 80º Sí Sí No
Arbol filogenético de los principales linajes de Bacteria basado
en la comparación de secuencias de ARNr 16S
 DEFINICIÓN DE ESPECIE
Para los taxónomos que trabajan con organismos superiores

ESPECIE es un grupo de poblaciones naturales que se reproducen entre si y que están

aisladas de otros grupos desde el punto de vista de la reproducción.

Para los microbiólogos

ESPECIE BACTERIANA es una colección de cepas que comparten numerosas
propiedades estables y que difieren de forma significativa de otros grupos de cepas.

Una CEPA es una población de microorganismos que desciende de un único organismo

o de un aislamiento en cultivo puro.

Cada especie se asigna a un GÉNERO, el siguiente rango de la jerarquía taxonómica.

Un GÉNERO es un grupo bien definido de una o más especies que está claramente
separado de otros géneros.
 ESPECIE

Grupo taxonómico básico.

Menos definido que para organismos superiores.
Rasgos morfológicos no tan importantes.
Puede ser considerada como una colección de cepas que muestran
muchos rasgos en común y difieren considerablemente de otras cepas.

SUBESPECIE
Basada en variaciones fenotípicas y genotípicas menores, pero
constantes. Es la categoría más baja aceptada oficialmente
 CATEGORÍAS INFRASUBESPECIE

Nombre preferido Sinónimo Cepas que tienen

biovar biotipo prop bioquímicas o fisiológicas

especiales

serovar serotipo prop antigénicas distintivas

patovar patotipo prop patogénicas para ciertos

animales

fagovar fagotipo lisis por ciertos fagos

morfovar morfotipo rasgos morfológicos

especiales
 Se entiende por identificación microbiana al conjunto de técnicas y
procedimientos que se aplican para establecer la identidad de un
microorganismo.
En el área clínica es importante conocer cual es el agente causal de la infección que presenta un
enfermo para poder tratarlo.
Investigación básica donde se aisla un determinado microorganismo que debe identificarse para
comprobar si se trata de un microorganismo conocido o de uno nuevo para poder clasificarlo.
En la industria de alimentos, donde las normas de control de calidad exige que la fabricación de estos
alimentos debe realizarse en áreas controladas con ausencia de ciertos microorganismos, los
alimentos son sometidos a una serie de controles microbiológicos para asegurar la ausencia de
microorganisms que puedan causar infecciones y/o descartar la presencia de toxinas capaces de
causar intoxicaciones alimentarias.

Los método más utilizados para la identificación microbiana se clasifican en:

Métodos basados en criterios morfológicos. No todos los microorganismos se

Métodos basados en tinción diferencial.
Métodos basados en pruebas bioquímicas.
Métodos basados en pruebas serológicas.
Métodos basados en detección molecular.
identifican por las mismas técnicas, ni
con base a un solo método, sino con la
combinación de uno o más.
 CULTIVO PURO

MORFOLOGÍA DE COLONIA Y GRAM

CARACTERÍSTICAS DE PROPIEDADES BIOQUÍMICAS PROPIEDADES

CRECIMIENTO ANTIGÉNICAS

CARACTERÍSTICAS GENÉTICAS O MOLECULARES

PORCENTAJE DE G+C ESTABILIDAD TÉRMICA

HIBRIDACION
 DIFICULTADES EN LA IDENTIFICACIÓN

• Asegurarse que se trabaja con un cultivo PURO

• Trabajar desde categorías mayores a menores
• APLICAR EL SENTIDO COMÚN EN CADA PASO
• Usar el menor número de pruebas
• Comparar el aislamiento con cepas tipo o de referencia

CUANDO NO SE LOGRA IDENTIFICAR EL AISLAMIENTO:

• Controlar pureza
• Asegurarse que se han realizado las pruebas apropiadas
• Controlar que los métodos sean confiables
• Que se han usado correctamente las distintas claves y tablas
MÉTODOS BASADOS EN CRITERIOS MORFOLÓGICOS.

 Los rasgos morfológicos (estructurales) han ayudado a los taxonomistas

a clasificar organismos.

 Bajo el microscopio pueden ser parecidos dificultándose su clasificación,

aún cuando la morfología celular dice poco sobre las relaciones
filogenéticas, sigue siendo útil para la identificación bacteriana.

 Características macroscópicas, en función del tamaño, altura de la

colonia, forma, color, olor, textura y grado de adherencia al medio de
cultivo.

 Por ejemplo: la presencia de endosporas y su localización resulta de

mucha utilidad para la identificación de bacilos esporulados.
MÉTODOS BASADOS EN TINCIÓN DIFERENCIAL.

 Es posible sacar conclusiones en relación con la morfología examinando

una lamina que fue sometida a un proceso de tinción.

 Estos criterios morfológicos encabezan la primera etapa del proceso de

identificación la mayor parte de la bacterias teñidas con Gram se pueden
clasificar como Gram positivas y Gram negativas.

 Tinciones fluorescentes (naranja de acridina, rodamina, blanco

calcofluor) tinción de inmunofluorescencia directa o indirecta.

 Tinciones vitales para la visualización de espiroquetas y protozoos.

 Tinciones acidorresistentes y otras tinciones para detectar capsulas,

flagelos, esporas.
MÉTODOS BASADOS EN PRUEBAS BIOQUÍMICAS

Estas pruebas se fundamentan en demostrar si el microorganismo es

capaz de fermentar azúcares, la presencia de enzimas, la degradación
de compuestos, la producción de compuestos coloreados.

Aún bacterias fuertemente relacionadas pueden separase en dos

especies diferentes con base a pruebas bioquímicas.
Por ejemplo las bacterias entéricas Gram – forman un grupo grande y
heterogéneo.

Esta familia Enterobacteriaceae incluye a varios patógenos que causan

síndromes diarreicos.

Los géneros clínicamente más importantes son: Escherichia, Salmonella,

Shigella, Citrobacter y Enterobacter.

El género Escherichia, Enterobacter y Citrobacter, fermentan la lactosa

con producción de ácido y gas a diferencia de los géneros Salmonella y
Shigella que no fermentan la lactosa.
Demostración de la producción de Indol

 Se emplearon dos tubos con triptona y se inocularon los microorganismos Salmonella y

Staphylococcus aureus y se dejó incubado a 37 ºC por 24 horas y después a temperatura
ambiente por 7 días.

 El tubo de S. aureus dio positivo con color a rojo cereza, esto indica que este tipo de
microorganismo es capaz de degradar al aminoácido tritófano formando un producto de
hidrólisis de Indol.

 Bioquímicamente la Salmonella se caracteriza por no fermentar la lactosa y por no licuar la

gelatina y por no producir Indol, aunque existen algunas excepciones.

 No todos los microorganismos pueden realizar este rompimiento de triptona a indol, por lo
cual esta reacción es de valor taxonómico.

 E. coli logró degradar la triptona y reaccionar para producir Indol, es decir dio positiva la
prueba, el microorganismo Gram - a pesar de que se le consideraba susceptible, en este
medio reaccionan sin ningún problema.
Los sistemas comerciales más comúnmente usados son :

* BBL, ENTEROTUBE II (Becton Dickinson). Es un sistema para

usar en la identificación de Enterobacterias, definidas como
bacilos Gram -, aerobios o anaerobios facultativos, oxidasa (-).
Consiste en un tubo de plástico con 12 medios de cultivo
contenidos en compartimentos individuales que se inoculan
simultáneamente en una etapa y permiten la detección de 15
características bioquímicas.

* OXI/FERM TUBE II, (Becton Dickinson). Es un sistema listo para

usar para la identificación de bacilos Gram (-), aerobios o
anaerobios facultativos, oxidasa (+). Consiste en un tubo de
plástico de 12 medios de cultivo que permite la realización
simultánea de 14 pruebas bioquímicas.

* API 20 E. Es un sistema estandarizado para la identificación de

Bacterias Gram -. Consiste en una plantilla con microtubos
conteniendo medios de cultivo deshidratados que se
reconstituyen al agregar una suspensión bacteriana. Permite
la realización de 23 pruebas bioquímicas a partir de una única
colonia bacteriana.
Producción de H2S por los microorganismos

 Aquí se inoculan los microorganismos E. coli y Salmonella en un tubo de

ensayo cada uno con agar inclinado.

 E. coli no cambia el color, da negativo, no reacciona con el azufre o no

es capaz de producir ácido sulfhídrico en un medio de aminoácido que
contenga azufre, el microorganismos no se desarrolla en medio de O2 en este
caso.

 Mientras que la salmonella si desarrolla (en este medio con

aminoácido) (H2S), esta prueba dio positivo.

 También hay presencia del gas en medio del agar, este gas demuestra la
presencia de (H2S). También el ennegrecimiento en la línea de siembra, nos
indica que hubo producción de ácido sulfhídrico
MÉTODOS BASADOS EN DETECCIÓN MOLECULAR

 A través de procedimientos y reactivos, se pueden detectar determinadas

secuencias de ADN que son propias de un determinado agente microbiano.

 PCR se aplica generalmente para la identificación de microorganismos que no

pueden ser cultivados por métodos convencionales.

Vibrio cholerae,
Helicobacter pylori,
Staphylococcus aureus,
Shigella dysenteriae,
Escherichia coli,
Mycobacterium tuberculosis.
MÉTODOS BASADOS EN PRUEBAS SEROLÓGICAS.

 Implican la utilización de preparaciones de inmunoglobulinas específicas provenientes de

suero o de un reactivo y que pueden ser de gran utilidad en la identificación microbiana en
muestras puras o muestras biológicas.

 Cada uno tiene un fundamento particular, pero en líneas generales todos se basan en la
reacción de un antígeno presente en el agente microbiano con su anticuerpo
correspondiente.

 Los serotipos permiten diferenciar organismos a nivel de subespecie, algo de gran

importancia en epidemiología.

 Inmunofluorescencia puede utilizarse para la identificación del µorganismo aislado o

presente en una muestra biológica.

 En el método directo se fija la muestra problema a una lamina y se pone en contacto con el
antisuero específico marcado con una sustancia fluorescente (rodamina o fluoresceína)
transcurrido el tiempo para que tenga lugar la reacción antígeno anticuerpo se expone la
lamina a la radiación ultravioleta para visualizar la reacción
ELISA

 Enzyme Linked Immuno Sorbent Asssay" por sus siglas en inglés que significan
Ensayo Inmuno Enzimático Absorbente. Estudio inmunológico de laboratorio por
medio de reactivos para detectar diversos gérmenes, tales como virus o protozoarios.

 Se basa en la detecciónde un antígeno inmovilizado sobre una fase sólida mediante

anticuerpos que directa o indirectamente producen una reacción cuyo producto, por
ejemplo un colorante, puede ser medido espectrofotométricamente.