Métodos

GUIA PARA EL ESTUDIANTE PRÁCTICA # 2: IDENTIFICACIÓN MORFOLÓGICA DE LOS PARÁSITOS

HELMINTOS MÁS COMUNES EN LA REGIÓN Y PRUEBAS DE COPROLÓGICO.

Practica 3

Esta técnica permitió reconocer cualquier elemento de diseminación de los parásitos teniendo en
cuenta el examen macroscópico o físico y el Examen microscópico el que hicimos de la siguiente
manera:

1. Separamos de la muestra 2-5 gr. De heces en un recipiente (mortero, taza).

2. Agregamos 15 ml de solución salina saturada.
3. Disolvimos muy bien las heces con una cucharilla o un abate lenguas. Hasta que quede una
pasta uniforme.
4. Pasamos la mezcla por un colador en un recipiente limpio.
5. Llenamos un tubo de ensayo con el líquido filtrado hasta el borde dejando un menisco
convexo
6. Eliminamos con un palillo las burbujas o sustancias que flotan.
7. Colocamos un cubreobjetos y esperar 15-30 min como máximo. Si se pasa de este tiempo,
los huevos colapsan o se rompen debido a la acción osmótica.
8. Retiramos cuidadosamente el cubreobjetos y colocarlo sobre un portaobjetos.
9. Observamos al microscopio con el objetivo de 10X.

Datos:

El método de flotación con solución salina saturada la realizamos porque el uso de solución salina
fisiológica no sirve para ésta técnica ya que no tiene la densidad requerida.

Practica 2 (100 garrapatas )

Para este laboratorio tuvimos que recolectar una muestra de 100 teleologías de Rhipicephalus
(boophilus) microplus. Paa esto lo hicimos con varios sistemas de producción bovina con una
población variable en peso, edad, raza, sexo, estado reproductivo, ect.

Para contener los especímenes vivos hasta su llegada al laboratorio, nos recomendaron
almacenarlos en recipientes plásticos de aproximadamente 500ml, a los cuales se les abrieron
orificios para facilitar la ventilación y se colocaron tamo de arroz en su base, para mantuvieran la
humedad y la temperatura

Luego de la llegada al laboratorio, se realiza cuatro (4) grupos homogéneos de veinte (20)
garrapatas cada uno. En lo posible, se deben eliminar individuos que presenten heridas, que sean
de tamaño pequeño, o que presenten anormalidades con respecto a la población en general. Una
vez separados los grupos, se debe asignar una nomenclatura aleatoria, en este caso Grupo
Cipermetrina, Grupo Amitraz, Grupo Etion y Grupo control. En lo posible, los grupos deben reposar
sobre una caja de Petri estéril.
 3. A partir de los productos comerciales, en un Erlenmeyer preparar 200ml de cada una de las
soluciones de trabajo: solución 1 (Cipermetrina a 200ppm), solución 2 (Amitraz 600ppm), solución
3 (Etion 400ppm), solución 4 (Alcohol a 100ppm). Para esto, se recomienda emplear la formula
V1*C1 = V2* C2 para la preparación de las soluciones (Fig.2).

Figura 2. Preparación de soluciones de trabajo

4. Rotular una caja de Petri estéril con el nombre respectivo de cada grupo.

5. Teniendo dosificados los productos y debidamente rotulados los Erlenmeyer y cajas de Petri
estériles, se procede a depositar los individuos de cada grupo sobre una gasa en forma de mochila,
y posteriormente se realiza la inmersión de los veinte (20) especímenes dentro de la solución de
trabajo respectiva. Las inmersiones deben hacerse de manera sincrónica, y deben mantenerse
durante un tiempo de cinco (5) minutos (Fig.3).

6. Pasado los cinco (5) minutos estipulados en todos los grupos, se procede con un papel
absorbente a retirar los residuos del producto donde fueron sumergidas.

Figura.3. Inmersión de los tratamientos y grupos control

7. Con la ayuda de un papel filtro se debe pesar el total de las garrapatas en cada grupo, para
tener un estimado del peso promedio de cada garrapata.

8. Luego de realizar el pesaje, cada espécimen se adhiere a una cinta de papel por su superficie
dorsal, y posteriormente se coloca la cinta sobre la caja de Petri. Introducir un trozo de algodón
humedecido con agua destilada dentro de la caja de Petri para favorecer la humedad relativa al
80% e incubar a 27°c, durante 14 días (Fig 4).

Figura.4. Disposición final de especímenes.

9. Al día 14, pesar la masa de huevos de cada caja de Petri en una balanza electrónica, y estimar el
peso promedio de huevos por cada garrapata.
 10. Luego de pesados los huevos, recolectar un total de 300 huevos al azar de cada caja de Petri,
en lo posible de diferentes hembras de la caja, y colocar dentro de un tubo de vidrio de 10mL con
un trozo de algodón humedecido en su interior. Cerrar la boca del tubo con la ayuda de algodón y
cinta para evitar la fuga de larvas, y mantener los huevos bajo las mismas condiciones de humedad
y temperatura señaladas anteriormente durante 21 días.

11. Pasado los 21 días, estimar el porcentaje de eclosión de huevos cuantificando los huevos y
larvas contenidas en cada tubo por medio de un estereoscopio.

12. Una vez realizado todo el procedimiento, determinar la eficiencia reproductiva (ER), y la
eficacia de cada producto empleando las siguientes formulas.