Aislamiento de

microorganismos
INTRODUCCIÓN
En la naturaleza los microorganismos
crecen en poblaciones mixtas, formadas
por muchas especies que interactúan entre
sí, por lo que para poder aislar
microorganismos es necesario obtener
cultivos puros a partir de resiembras
consecutivas en un medio sólido
conteniendo agar, un polisacárido obtenido
de algas marinas, como agente gelificante.
Esta técnica de aislamiento se utilizó por
primera vez en el laboratorio de Koch en
1881 y continúa siendo ampliamente usada
en diversas áreas microbiológicas debido a
su simplicidad y utilidad.
En todos los ambientes naturales habitan múltiples microorganismos
de diversos tipos y actividad fisiológica. Para efectuar el estudio de un
organismo particular es necesario separarlo de la población mixta en
la que se encuentra. Para tal fin se emplean técnicas de aislamiento
que conduzcan a la obtención de un cultivo puro, las cuales incluyen:
1. Separación física de los microorganismos mediante: a) Diluciones
seriadas y siembra por vertido en placa. b) Siembra por
agotamiento.
2. 2. Utilización de medios de cultivo selectivos y diferenciales.
3. 3. Aprovechamiento de características particulares de los
microorganismos, tales como la formación de esporas, el
metabolismo anaerobio y/ o facultativo, la capacidad para utilizar
sustratos poco comunes, etc.
Materiales
Cultivos puros de los siguientes microorganismos:
Bacillus sp. (esporulado) Penicillium sp..
Saccharomyces cerevisiae Serratia marcescens
Staphylococcus epidermidis Staphylococcus aureus
Escherichia coli Streptomyces griseus
Rhodotorula sp. Pseudomonas
aeruginosa
Micrococcus luteus
Aspergillus niger
Técnicas de aislamiento
a) Dilución de la muestra.
1. Pesar 10 g o medir 10 mL de la muestra natural y en condiciones asépticas vaciar en un
matraz Erlenmeyer con 90 mL de SSI estéril, o tomar 1 mL de una muestra mixta de
cultivos puros y en condiciones asépticas transferir a un tubo con 9 mL de SSI estéril.
2. 2. Homogeneizar y a partir de esta suspensión preparar 2 diluciones decimales mas (10-2 y
10-3 ), para ello emplear dos tubos con 9 mL de SSI estéril c/u.
b) Siembra por vertido en placa en medios selectivos y diferenciales.
3. Fundir los medios de cultivo contenidos en los tubos de ensayo de 22x175 y mantenerlos a
45ºC.
4. 2. Preparar la zona aséptica.
5. 3. A partir de la última dilución y con una pipeta estéril transferir 0.1 mL a 5 cajas de Petri
vacías y estériles.
6. 4. Colocar la pipeta después de su uso en un pipetero que contenga una solución
sanitizante y lavar posteriormente.
7. 5. Agregar a cada caja, uno de los siguientes medios de cultivo: SRB, TSA, MSA, EMB,
YPDM, previamente fundidos.
6. Mezclar suavemente el inóculo con el medio. Para ello colocar la caja sobre la mesa y girar 5
veces en el sentido de las manecillas del reloj, 5 veces en sentido inverso, 5 veces hacía delante y
atrás y 5 en sentido horizontal.
7. Dejar solidificar. 8. Asegurar cada una de las cajas con maskin-tape. 9. Incubar de acuerdo a las
indicaciones del Cuadro 8.
c) Siembra por agotamiento en medios selectivos y diferenciales.
1. A partir de la última dilución y con el asa bacteriológica sembrar por la técnica de cuadrante
radial cada una de las siguientes placas: TSA, MSA, EMB, YPDM.
2. Asegurar cada una de las cajas con maskin-tape.
3. Incubar de acuerdo a las indicaciones del Cuadro 8.
d) Aislamiento de bacilos esporulados.
1. Colocar el tubo de la segunda dilución en un baño de agua a ebullición y mantenerlo durante
10 minutos.
2. 2. A partir del tubo anterior, con el asa bacteriológica sembrar por cuadrante radial 2 placas
de TSA+MnSO4
3. 3. Asegurar cada una de las cajas con maskin-tape e incubar en las condiciones que se indican
en el Cuadro 8.
Bibliografía
http://depa.fquim.unam.mx/amyd/archivero/Protocolos2014_1_24195
.pdf
http://www.cua.uam.mx/pdfs/conoce/libroselec/23Manual%20de%20
microbiologia_09diciembre2016.pdf