“AÑO DE LA UNIDAD, LA PAZ Y EL DESARROLLO”

IDEX “PERÚ – JAPÓN”

CARRERA:
LABORATORIO CLINICO Y ANATOMIA PATOLÓGICA

CURSO:
PARASITOLOGÍA

DOCENTE:
ELIZABETH HERNANDEZ ALVA

ESTUDIANTE:
CETTY PATTY NEQUENDEY

Chachapoyas - 2023
 METODOS DE CONCENTRACIÓN
METODO DE RITCHIE.

FUNDAMENTO: Este método emplea el éter y formaldehído, el primero, libera las

formas parasitarias de las grasas y restos vegetales, por disolución de las mismas y
el formol permite fijar y conservar las formas parasitarias. La concentración se hace
por centrifugaciones sucesivas.

MATERIALES:
• Tubos de ensayo cónicos de 15 ml.
• Embudo
• vaso de precipitados
• aplicador de madera
• pipeta Pasteur
• porta y cubreobjetos.
Equipos.
• Microscopio
• Centrifuga
Beactivos.
• Solución salina fisiológica
• Éter
• Formaldehido al 10%

TECNICA:
1.Tomar una muestra de heces (aprox 3 gr) y agregarle 30 ml de agua destilada y
mezclar de forma homogénea.
2. Filtrar la suspensión a través de un colador o gasa y ayudándose con un embudo,
llenar el tubo de ensayo a 2 -3 mm antes del borde.
3. Centrifugar durante dos minutos a 2500 r.p.m.
4. Descartar el sobrenadante y agitar el sedimento; agregar agua destilada hasta
llenar el tubo (efectuar los pasos 3 y 4 las veces que sean necesarias hasta que el
sobrenadante sea claro)
5. Agregar 4 ml de formol al 10 % durante 10 minutos.
6. Agregar 2 ml de éter, tapar el tubo y agitar vigorosamente durante 30 seg.
destapando lentamente para que el contenido no salga al exterior.
7. Centrifugar un minuto a 1500 r.p.m. Se observan cuatro capas:
8. Descartar el sobrenadante.
9. Introducir la pipeta Pasteur hasta el sedimento y se coloca una gota sobre un
portaobjetos se le añade una gota de Lugol y se observa al microscopio con
objetivos de 10x y 40x

2. MÉTODO DE BAERMANN (TECNICA DE MIGRACION LARVARIA)

FUNDAMENTO: Se basa en la migración activa o movimiento de las larvas. El método

aprovecha tanto el termo tropismo, como el hidro tropismo positivos de las larvas vivas
que abandonan las materias fecales si existe agua alrededor, para concentrarlas
biológicamente por sedimentación. Muy útil para buscar Strongyloides.
MATERIALES:
• Embudo y base para embudo
• Tubo de hule o plástico
• clip de abrazadera o resorte
• varilla fina o barra de metal, colador
• Tubo de ensayo, pipeta Pasteur
• cajas de Petri ,tijeras
• Toallas de papel, espátula, hilo
• Vaso o frasco
• cubre objetos y portaobjetos.

EQUIPOS.
• Microscopio
• Centrifuga
REACTIVOS.
• Agua a 37°c
• Solución de yodo

TECNICA:
1. Pesar 5-10 g de heces y preparar cuadrados de gasa donde se coloca la muestra.
2.- colocar los paquetes de gasa sobre una malla metálica e introducidos en el aparato
de Baermann, que consiste en un embudo situado en posición vertical sujeto por una
barra, en él se coloca, en el extremo más estrecho, un tubo de goma cerrado mediante
una pinza de Kauffman.
3.- Se cubre la muestra con agua tibia (37°c) y se deja durante 6-12 h (una noche).
4.- Transcurrido ese tiempo, abrir la pinza y drenar unos 10mL de fluido por el cuello
del embudo hacia un tubo de ensayo o de centrífuga.
5.- Dejar sedimentar por lo menos durante 30 minutos. Si se dispone de una
centrífuga, el fluido puede ser centrifugado a 1000 rpm por 2 minutos y las larvas
quedaran en el fondo del tubo.
6.- Se elimina el sobrenadante con ayuda de una pipeta Pasteur para no remover el
fondo del tubo, dejando únicamente 1 ml y se mezcla el sedimento con el líquido
restante.
7.- Examinar una muestra de sedimento en una caja de Petri para determinar la
presencia de larvas.
8.- Usar una pipeta Pasteur para transferir una gota pequeña de fluido de sedimento
de la caja de Petri a un portaobjetos.
9.- Añadir una gota de yodo para fijar la larva y colocar cuidadosamente un
cubreobjetos sobre la gota
MÉTODO DE HARADA-MORI.

FUNDAMENTO: Sirve para la diferenciación entre larvas de uncinaria y de los géneros

Trichostrongylus y Strongyloides; en la diferenciación entre larvas de uncinaria y larvas
de otros géneros; para determinar la viabilidad de los huevos y/o larvas; para embromar
huevos de trematodos (Paragonimus y Fasciola) y de céstodos (Diphyllobothrium). El
procedimiento es especialmente útil en el diagnóstico de infecciones humanas por
Necator americanus, Anchylostoma duodenale, Strongyloides stercoralis y
Trichostrongylus sp.

MATERIALES:
• Tubos 13 x 100, 16 x 150 0 16 x 180 mm
• Tiras de papel filtro cortadas 2 mm menos anchas que el diámetro del tubo y
2 cm más largas, con un extremo más afinado
• Pinza curva con aplicador, tapón de goma o corcho.
• Parafilm o cinta adhesiva, baja-lenguas,
• Gradilla, lente de aumento o lupa de mano (opcional),
 • pipetas Pasteur, Cajas de Petri de 5 cm de diámetro
• porta-objetos de 7.5 x 2.5 cm, Cubre objetos 22 x 22

EQUIPOS Y REACTIVOS:
a. Equipos.
• Microscopio
• Incubadora
b. Reactivos.
• Solución salina fisiológica,
• alcohol 30%
• formalina 5%
• agua destilada.

TECNICA
Usar muestras de heces frescas, sin refrigerar.
Existen 2 variaciones: una en tubo de ensayo y otra en preparación inclinada en caja
de Petri.
TECNICA EN TUBO DE ENSAYO
1. Agregar al tubo 1 o 2 mL de agua destilada o solución salina.
2. Cortar una tira de papel filtro de 12-15 x 1,5-2 cm dependiendo del diámetro y
tamaño del tubo.
3. Hacer una muesca en el extremo inferior del papel filtro.
4. .Con un aplicador de madera tomar y extender unos 0.5-1.0 g de heces sobre el
tercio medio de la tira, dejando libre los extremos.; descartar aplicador.
6. Insertar esta tira con la parte escrita dentro del tubo de ensayo. Quedará una
porción extendida fuera del tubo por la que pasarán elementos solubles de las
heces.
7. Con todo cuidado agregar agua destilada hasta que el nivel llegue por debajo del
extendido de heces. Tener cuidado de no mojar las heces.
8. Colocar los tubos así preparados en una gradilla y mantener en lugar seguro a
temperatura ambiente o Incubar a 27°C - 37°C por 4 a I0 días (En la selva, a
temperatura ambiente).
9. Revisar diariamente el nivel de agua. Reemplazar aquélla perdida por
evaporación, con mucho cuidado. Para verificar si hay larvas móviles en el
sedimento.
10.0btener una porción del sedimento con una pipeta Pasteur, colocarlo en la caja
de Petri y observar al microscopio estereoscópico. También se puede centrifugar
y observar el sedimento.
11.Para estudiar la morfología diferencial, aspirar larvas con la pipeta y agregar
solución de Lugol, cubrir con una laminilla y observar al microscopio óptico.
.
RESULTADOS:

Esta técnica es útil, principalmente, para la obtención de larvas radiciformes y

filiformes denquilostomídeos y estrongiloideos.

La técnica de Harada mori nos permite identificar la morfología de Necator

americanus, Strongyloides, Paragonimus, Fasciola, Ancylostoma duodenale,
Diphyllobothrium y Espirometría
METODO DE SHEATHER SUGAR

FUNDAMENTO: Se basa en la flotación de quistes, ooquistes y huevos de parásitos

en una solución de azúcar que posee mayor densidad que ellos. Esta técnica es útil
para la concentración de quistes y ooquistes de protozoos y huevos de helmintos y
se usa como método preferencial en el diagnóstico de la orden de los coccidios:
Cryptosporidium, Cyclospora, Isospora, etc.

MATERIALES:
Tubos de ensayo 13 x 100, láminas portaobjetos, laminilla cubreobjetos.
Aplicador, asa de platino, gradilla para tubos de ensayo.
Embudo de vidrio, gasa.
REACTIVOS:

Solución saturada de azúcar y SSF

EQUIPOS:

Microscopio, centrífuga.

TECNICA
1. Homogeneizar 1 a 2 g de heces en suero fisiológico.
2. Colocar un embudo y filtrar el material homogeneizado.
3. Centrifugar a 1 500 r.p.m. durante 2 a 5 minutos.
4. Eliminar el sobrenadante, y agregar la solución de azúcar hasta 1 cm del borde
del tubo, agitar hasta disolver el sedimento.
5. centrifugar como en el paso anterior, completar con la solución de azúcar hasta
el borde y esperar de 2 a 5 minutos la formación de un menisco.
6. Tomar una muestra de la superficie del menisco y colocarla en una lámina
portaobjeto, agregar lugol, cubrir con una laminilla y observar al microscopio.
7. En el caso de observar coccidios, preparar un frotis para teñir por el método de
Ziehl-Neelsen modificado.

RESULTADOS: Informar la presencia de las formas evolutivas de los parásitos

encontrados y su cantidad, expresado en cruces.
La intensidad parasitaria puede expresarse cualitativa o semicuantitativa:
Cualitativamente: Escaso, regular o buena cantidad, según sea el grado de facilidad
o dificultad para ubicarlos.
Semicuantitativamente: Contando las formas parasitarias:
Si se observan 1 ó 2 elementos en toda la lámina, escribir el nombre del agente y
su estadio evolutivo
Si se observan de 2 a 5 elementos por campo microscópico 10X 0 40X.
(++) Si se observan de 6 a IO elementos por campo microscópico 10X 0 40X.
 (+++) Si se observan >10 elementos por campo microscópico 10X o 40X.
Resultado negativo
Informar que no se observaron quistes, trofozoítos, ni huevos de parásitos

METODO DE FAUST

FUNDAMENTO: Se basa en que los quistes y/o huevos de los parásitos flotan en la
superficie por ser de menor densidad que el sulfato de zinc al 33% cuya densidad es
de 1.180. Es útil para la búsqueda de quistes y/o huevos de parásitos y raras veces
se observan larvas. Los elementos parasitarios son recuperados de la capa
superficial y los residuos se mantienen en el fondo del tubo.

MATERIALES:

Gradilla para tubos de ensayo, tubos de prueba 15 x 150, tubos de prueba

13 x 100
láminas portaobjetos, laminillas cubreobjetos
embudo pequeño de vidrio, baja lengua o bagueta, gasa.

REACTIVOS:

Sulfato de zinc 33,3%

 Solución de lugol

EQUIPOS:
Microscopio
centrífuga.

TECNICA
l) Mezclar bien una parte de la muestra en 10 partes de agua destilada.
2) Filtrar la suspensión a través de una gasa y con la ayuda de un embudo.
3) Centrifugar el filtrado a 2500 rpm por 1 min
4) Decantar el líquido sobrenadante y completar con agua hasta igualar la medida
anterior, centrifugar nuevamente. Re suspender el sedimento
5) Repetir el procedimiento hasta 2 veces hasta que el líquido sobrenadante esté
listo.
6) Decantar nuevamente el líquido sobrenadante remplazándolo por igual cantidad
de solución de sulfato de Zn al 33%. Mezclar bien la solución bien la solución con
el sedimento. Centrifugar durante I minutos por 1500 rpm.
7) Tomar de 3-4 gotas de las partículas que flotan en la superficie del líquido.
Colocarlos en una porta-objeto y mezclar con 1-2 gotas de lugol, colocar cubre-
objeto y examinar al microscopio.

RESULTADOS:
Método indicado para la identificación huevos livianos de helmintos (Necator,
Tricocéfalos, Ascaris, H. nana).
Trichuris trichura Áscaris lombricidas Hymenolepis
MÉTODO DE WILLIS

FUNDAMENTO: Los huevos y quistes de peso específico menor que la solución

saturada de cloruro de sodio tienden a subir y adherirse a un cubreobjetos colocando
en contacto con la superficie del líquido.

MATERIALES:
Frascos de 10 mL (de penicilina)
Aplicadores de madera
Cubreobjetos
Reactivos:
solución de Willis (cloruro de sodio sobresaturado)
EQUIPOS:
Microscopio.

TECNICA

l. Coloque una porción de la muestra de heces (2 ml si es diarreica), o de 2 a 3gr

en un frasco de penicilina. Llene una cuarta parte del frasco con solución de Willis.
2. Por medio de un aplicador disgregue la porción tomada de la muestra y mézclela
minuciosamente con la solución y llenar el frasco completamente con solución de
Willis.
3. Coloque cuidadosamente un cubreobjetos sobre la boca del frasco.
4. Compruebe que el cubreobjetos está en contacto con el líquido y dejar reposar
durante 10 minutos
5. Levante el cubreobjetos con cuidado y coloque el cubreobjetos sobre un
portaobjetos y observe al microscopio inmediatamente.

Nota: observar inmediatamente ya que esta preparación se seca con suma rapidez,
de lo contrario, proteja la gota del cubreobjetos bañándolo con vaselina y cera.

RESULTADOS
Se observa al microscopio y es posible hallar huevos de Ancylostoma, H. nana,
Ascaris, Tenia y tricocéfalos (es el mejor método para detectar la presencia de
Ancylostoma).

Este método es de alta sensibilidad en el diagnóstico de huevos livianos de

helmintos: A. duodenale, N. americanus, A. lumbricoides, H nana.
 TÉCNICA DE SEDIMENTACIÓN ESPONTÁNEA EN TUBO (TÉCNICA DE
CONCENTRACIÓN POR SEDIMENTACIÓN, SIN CENTRIFUGACIÓN)

FUNDAMENTO: Se basa en la gravidez que presentan todas las formas parasitarias

para sedimentar espontáneamente en un medio menos denso y adecuado como la
solución fisiológica, En este método es posible la detección de quistes, trofozoítos de
protozoarios, huevos y larvas de helmintos.

MATERIALES:
Tubos de vidrio o plástico de 13 x 100, 16 x 150, o tubos de 50 mL de forma
cónica.
Láminas portaobjetos.
Laminillas de celofán (22 x 22 mm ó 22 x 30 mm).
Pipetas de vidrio o plástico.
Gasa recortada en piezas de 9 x 9 cm

REACTIVOS:
Solución fisiológica
Agua destilada, hervida o de lluvia.
EQUIPOS:
Microscopio.

TECNICA

1. l. Tomar una porción de heces (l - 2 g) y homogeneizar con suero fisiológico en

un tubo limpio.
2. Colocar una gasa, hundiéndola en la abertura del tubo y sujetándola con una
liga alrededor de ella.
3. Filtrar el homogeneizado a través de la gasa, llenando el tubo hasta la cuarta
parte de su contenido.
4. Agregar suero fisiológico hasta 1 cm por debajo del borde del tubo.
5. Tapar la abertura del tubo con una tapa, Parafilm o celofán.
6. Agitar enérgicamente el tubo por 15 segundos aproximadamente.
7. Dejar en reposo de 30 a 45 minutos.
8. En caso que el sobrenadante esté muy turbio, eliminarlo y repetir la misma
operación con solución fisiológica o agua filtrada.
9. Aspirar la parte media del tubo con una pipeta y colocar 1 ó 2 gotas en una
lámina portaobjeto.
10. Aspirar del fondo del sedimento con una pipeta y depositar 1 ó 2 gotas del
aspirado en los extremos de la otra lámina portaobjeto y agregar 1 gota de
solución lugol
11. Cubrir ambas preparaciones con las laminillas y observar al microscopio.
 RESULTADOS
Examinar primero la preparación con solución fisiológica para observar formas
móviles y de menor peso específico (trofozoítos, quistes y larvas) y luego la
preparación con lugol para observar sus estructuras internas, de estos y de otros
parásitos de mayor peso específico (huevos, larvas).

MÉTODO DE SEDIMENTACIÓN RÁPIDA (CONCENTRACIÓN POR

SEDIMENTACIÓN SIN CENTRIFUGACIÓN)

FUNDAMENTO: Se basa en la gravidez de los huevos que, por su tamaño y peso

sedimentan rápidamente cuando se suspenden en agua.

MATERIALES:

Copa o vaso de vidrio o plástico cónico de 150 a 200 mL.

Coladera de malla metálica o plástico.
Placas Petri o lunas de reloj.
Aplicador de madera
Gasa, pipeta, etc

REACTIVOS:

Agua corriente filtrada

Lugol

EQUIPOS:

Microscopio.

TECNICA

1. Homogeneizar 3 a 6 g de heces con unos 10 a 20 mL de agua filtrada

2. Colocar la coladera y filtrar la muestra.
3. Llenar la copa con agua filtrada hasta 1 cm. debajo del borde.
4. Dejar sedimentar la muestra durante 30 minutos.
5. Decantar las 2/3 partes del contenido del vaso y agregar nuevamente agua.
 6. Repetir los pasos anteriores cada 5 a 10 minutos por 3 a 4 veces, hasta que el
sobrenadante quede limpio.
7. Transferir el sedimento a una placa Petri o luna de reloj, con ayuda de una pipeta
Pasteur.
8. Observar al estereoscopio o microscopio, a menor aumento.

RESULTADOS

Este método es especialmente útil para la búsqueda de Fasciola hepática,

Paragonimus sp. y nematodos como Ascaris lumbricoides (huevo fecundado o no
fecundado), Trichuris trichura, Hymenolepis nana, Diphyllobothrium pacificum, etc
Informar de la presencia de huevos o larvas de parásitos.

Huevos de Diphyllobothrium

Huevos de Fasciola hepatica

 MÉTODO DE PA RODI ALCARAZ (MÉTODO DE CONCENTRACIÓN POR
FLOTACIÓN SIN CENTRIFUGACIÓN, EN SOLUCIÓN SOBRESATURADA DE
AZÚCAR)

FUNDAMENTO
Se basa en la propiedad que tienen los quistes y/o huevos de flotar en la superficie
de una solución saturada de azúcar, debido a su menor densidad. El método es útil
para la detección de quistes de protozoarios y huevos de helmintos.
Materiales:
Tubos de 13 x 100 ó 15 x 150.
Láminas portaobjetos.
Laminillas cubreobjetos.
Aplicador de madera (bajaenguas).
Reactivos:
Solución saturada de azúcar (azúcar rubia).
Formol.
Solución de lugol
Equipo:
Microscopio.

TECNICA

1. Colocar I a 2 g de heces en el tubo de ensayo.

2. Agregar 3 a 5 mL de la solución sobresaturada de azúcar y homogeneizar con
un aplicador.
3. Llenar el contenido del tubo con la misma solución de azúcar hasta formar un
menisco.
4. Dejar en reposo por 30 minutos.
5. Colocar en la abertura del tubi, una laminilla cubreobjetos que permitirá la
adherencia por viscosidad de los quistes y huevos.
6. Colocar en la lámina portaobjeto una gota de solución de lugol.
7. Retirar la laminilla con sumo cuidado, colocarla sobre la lámina portaobjeto y
examinar al microscopio.
RESULTADOS:

Es conveniente la observación inmediata a 10 X y 40 X, pues los quistes y/o huevos

suelen deformarse si la densidad de la solución es demasiado alta. Informar los
estadios evolutivos de los parásitos encontrados.

TEST DE GRAHAM

FUNDAMENTO:

Las hembras adultas migran, a través del ano, hasta la zona perianal, lugar en el
que depositan los huevos. Este proceso se desarrolla, generalmente, durante la
noche o en el amanece (5:30am a 6:00am)
El test de Graham es una prueba utilizada para detectar enterobiasis, es una prueba
especial que consiste en colocar una tira adhesiva de papel de celofán, de unos 20
mm de ancho, en el extremo de un depresor de madera o de un porta, de tal forma
que la zona engomada quede hacia el exterior y que a cada lado del extremo queden
unos 5 cm de tira adhesiva.
Para realizar la prueba se debe colocar la tira sobre la región anal y perianal del
paciente y luego extenderla sobre un portaobjetos, de manera que la zona
engomada quede adherida al mismo. Seguidamente, observar al microscopio con
pocos aumentos 10X
La toma debe hacerse por la mañana, antes de que el paciente se asee o defeque.
Para facilitar la observación microscópica, entre el celofán y el portaobjetos puede
colocarse una gota de lugol o de xilol.

INSTRUCTIVO PACIENTES:

Las muestras deben obtenerse en la mañana antes de salir de la cama, antes

de obrar y hacerse aseo matinal.
No aplicar talcos ni cremas la noche anterior de tomar las muestras.
Escriba el nombre del paciente en cada una de las etiquetas blancas
autohadesivas que se encuentran en las placas.
No debe escribir ni pegar papeles autoadhesivos sobre el scotch.
Despegue el scotch de la placa, sosténgalo.
Aplique el scotch (nunca las placas de vidrio) por su cara pegajosa sobre la
piel vecina al orificio anal, sin introducir en el recto.
Pegue nuevamente la cinta sobre la placa de vidrio y guárdela,
 Repita el procedimiento durante 5 días seguidos, cada día con una placa
diferente.
El scotch no debe venir con deposición, talco ni crema.
Cuando tenga la última muestra lleve las placas a la Toma de Muestras.
Si encuentra algún gusano pequeño (2-3 mm) en la zona anal, péguelo al
scotch y éste a la

Enterobius vermicularis adulto.

OTROS METODOS PARA DIAGANOSTICAR PARASITOS; son los métodos

indirectos en los que usamos generalmente como muestra suero del paciente.

Técnica de ensayo inmunoenzimatico (Elisa) para el diagnóstico de

cisticercosis humana
Técnica de doble difusión para el diagnóstico de hidatidosis y fasciolosis
humana Técnica de inmunoblot para el diagnóstico de hidatidosis y
cisticercosis humana Técnica de inmunofluorescencia indirecta (ifi) para el
diagnóstico de toxoplasmosis. Técnica de hemaglutinacion indirecta (hai) para
el diagnóstico de toxoplasmosis.
METODO DE ELISA
La técnica de ELISA emplea como antígeno; la suspensión del parasito en estudio
(Eje. líquido vesicular de cisticerco de Taenia solium) adherido a soportes inertes
(placa de microtitulación) y ligado a una anti gamaglobulina humana (anti
anticuerpo) marcada con enzima, como detectora de la reacción antigeno-
anticuerpo.