Técnicas coprológicas utilizadas en el diagnóstico veterinario

1. Toma de muestras y envío al laboratorio

1.1 Heces
La materia fecal utilizada para el diagnóstico coprológico, se debe tomar
directamente del recto preferiblemente, para evitar la contaminación con elementos
extraños que puedan impedir su interpretación, si no es posible extraerla de esta
manera, se puede obtener al momento de la deposición o, muestras frescas
encontradas en el piso, asegurándose de que se encuentre libre de cuerpos extraños,
tierra o heces de otros animales.
La muestra se debe depositar en un recipiente limpio, con algodón o en bolsas
herméticamente cerradas en un ambiente húmedo, en caso de que la materia fecal
esté seca, no se podrá utilizar para realizar el diagnóstico, debido a que los
elementos de diseminación podrían estar deteriorados.
Es fundamental que los recipientes o bolsas, estén etiquetados, completamente
limpios y cerrados, además de realizar una anamnesis completa del animal en
estudio.

EXAMEN COPROLOGICO
● EXAMEN DIRECTO DE HECES FRESCAS
Sobre una lámina portaobjetos, agregar 2 gotas de suero fisiológico a temperatura ambiente,
enseguida se añadir una pequeña cantidad de heces fecales, homogeneizadas previamente
con el contenido de la muestra; mezclar adecuadamente este contenido hasta obtener una
capa fina, se recomienda que la transparencia bajo esta mezcla permite visualizar y leer sin
dificultad un texto; posteriormente se coloca una laminilla cubreobjetos, y se observa al
microscopio en los objetivos 10x y 40x.
si se desea obtener una adecuada visualización de protozoos móviles o sus quistes, se
recomienda agregar paralelamente una gota de lugol sobre la lámina, y posteriormente se
procede a extender la materia fecal.
Por medio de la presente técnica, se permite visualizar las diferentes formas parasitarias; sin
embargo en caso de no observar formas parasitarias por este método, no se debe descartar
la posibilidad de que el animal esté padeciendo de una parasitosis, debido a que la cantidad
de muestra utilizada para la realización de la técnica, es relativamente poca, por esa razón
se recomienda una adecuada homogeneización de la muestra previo a su análisis. sin
embargo, esta técnica es difícilmente sustituible debido a su sencillez y rapidez. Además,
porque esta técnica permite la visualización de algunas formas parasitarias las cuales su
visualización se dificulta con otros métodos.
MÉTODOS CUALITATIVOS
● Técnicas de flotación
Las técnicas de flotación, se basan, en la diferencia de densidades entre las formas
parasitarias y los residuos alimenticios, si se agrega cierta cantidad de materia fecal en
agua, los huevos y elementos fecales sólidos se sedimentarán, permitiendo decantar las
grasas y pigmentos que se encuentran disueltos en el sobrenadante. Estas técnicas se
utilizan par huevos de cestodos, nematodos y quistes de algunos protozoarios, pero no son
indicadas para ciertos huevos de trematodos, además pueden alterar los trofozoitos y
quistes de algunos protozoos y ciertas larvas de nematodos, haciendo difícil su
identificación.
a. Flotación en solución saturada de NaCl
- Se mezclan 2 gramos de heces con la solución en un frasco.
- Con unas pinzas se separa la muestra.
- Se agrega suficiente solución hasta llenar el frasco.
- Sobre la superficie se coloca un cubreobjetos, evitando que se formen
burbujas de aire en la superficie del líquido de flotación y que floten
porciones de heces sin separar. (si no es posible evitar esto, resuspender las
heces en otro recipiente y filtrar mediante doble gasa y agregar al vial con
una pipeta)
- Esperar 45 minutos, retirar el cubreobjetos en posición horizontal para evitar
que se pierda la muestra que queda adherida al mismo.
- Colocar en un portaobjetos y observar de 40x a 100x

figura 1. Secuencia para la realización de la técnica de flotación.

b. Técnica de Faust
Esta técnica utiliza una solución de alta densidad la cual permite que las estructuras
parasitarias con menor peso tienden a flotar manteniendo sus estructuras, el proceso es más
rápido al centrifugar la muestra separando de una forma adecuada los elementos residuales
en las heces, eliminando los desechos y ofreciendo un aspecto limpio que facilita la
observación de las estructuras quísticas. Además el uso de lugol permite un contraste entre
las estructuras parasitarias.
 - Colocar 5 g de materia fecal en un recipiente.
- Disolver en 50 ml de agua destilada y homogeneizar.
- Colar en otro recipiente y depositar la suspensión en el tubo de centrífuga (llenar
hasta un centímetro del borde del tubo) y centrifugar a 650 r.p.m por 2 min.
- Decantar el sobrenadante y resuspender nuevamente con agua destilada
- Volver a centrifugar botando el sobrenadante, repitiendo hasta que el sobrenadante
quede transparente.
- Una vez aclarado el sobrenadante resuspender y centrifugar nuevamente.
- Retirar el tubo de la centrífuga y colocarlo en la gradilla.
- Obtener el material con el asa o tomar de la superficie del líquido tres gotas del
material flotante y depositarlas separadas sobre un portaobjetos para hacer la
observación directamente al microscopio y por último con el asa de alambre tomar
una gota de sobrenadante directamente de la superficie que debe depositarse en un
portaobjetos.
- Sobre esta gota depositar una gota de lugol parasitológico y homogeneizar.
- Colocar un cubreobjetos para que la muestra se extienda y poder realizar la
observación.

SEDIMENTACIÓN
Este método permite concentrar las diferentes formas parasitarias presentes en las heces
fecales, por medio de simple gravedad; para la realización de la técnica inicialmente se
mezclan unos cuantos gramos de materias fecales con agua, hasta lograr su completa
homogenización; enseguida se filtra la solución a través de una gasa doble, en un frasco de
500 cc y posteriormente se agrega agua hasta aproximadamente 2,5 cc del borde. luego se
agregan de 2 a 3 gotas de azul de metileno o verde malaquita, para teñir los restos
vegetales, pero no las formas parasitarias, de este modo facilitando la adecuada
visualización en el microscopio, por último, se deja reposar 30- 40 minutos;
posteriormente, se retira el sobrenadante hasta dejar 100 cc de la solución, y se vuelve a
llenar hasta el mismo nivel, luego se repite el procedimiento hasta que el sobrenadante
adquiera cierta transparencia; finalmente para terminar el procedimiento, se descarta el
sobrenadante y se analiza el sedimento, para lo cual se recogen 5-8 gotas del sedimento con
una pipeta pasteur, las cuales se agregan sobre una lámina portaobjetos, se coloca un
laminilla cubreobjetos, enseguida se monta en el microscopio con el diafragma cerrado. de
igual forma, se puede tomar el sedimento y montar sobre una caja de petri y examinar con
ayuda de un estereoscopio, para visualización de huevos de tamaño considerable como los
de Fasciola hepatica.
Se recomienda este tipo de técnica para el diagnóstico de formas parasitarias como quistes
de amebas, ciliados, huevos de trematodos y cestodos seudofilideos, ya que debido a su
tamaño y peso no se detectan por las técnicas habituales de flotación. Una de las ventajas
de este método de diagnóstico es la recuperación de todos los huevos de helmintos, larvas
de nematodos, y quistes de protozoos; sin embargo posee una desventaja y es el gasto de
tiempo y concentrar muy poco las formas parasitarias, haciendo tediosa su visualización en
el microscopio.
Las técnicas de flotación y sedimentación son métodos cualitativos de concentración que se
complementan, y se utilizan conjuntamente para el diagnóstico parasitológico en
veterinaria.

COPROCULTIVOS O INCUBACIÓN DE HECES

Tiene como finalidad, mantener las heces en condiciones óptimas de humedad, temperatura
y oxigenación para que las formas parasitarias evolucionen y alcancen estadios que
permitan su identificación de manera más sencilla y exacta, simulando las condiciones que
se generan en el medio ambiente.
a. Esporulación de ooquistes de coccidios
- En una caja de petri, se mezclan las heces con solución de dicromato
potásico al 2% el cual tiene acción bactericida y fungicida, además le brinda
humedad al medio.
- La placa se coloca en una estufa a temperatura de 20 a 25°C.
- Ventilar a diario para brindar el oxígeno necesario a los ooquistes.

MÉTODOS CUANTITATIVOS
Indican la cantidad de parásitos existentes, permitiendo identificar el grado de la infección.
Se emplea el sistema de valoración h.p.g y l.p.g.
1. Diagnóstico de trematodos
a. Técnica de Dennis: Se utiliza específicamente para identificación de
Fasciola hepatica.
- Pesar 2 gramos de materia fecal.
- Colocarlos en un recipiente.
- Agregar 25 cc de solución detergente.
- Mezclar con un agitador.
- Colocar una malla metálica sobre un embudo.
- Filtrar la suspensión en un tubo de 50cc.
- Lavar con solución detergente el recipiente que contiene la muestra.
- Filtrar el lavado y adicionarlo a un tubo de 50cc.
- Agregar solución detergente al sedimento contenido en la malla hasta
llenar el tubo.
- Dejar reposar de 5 a 10 minutos.
- Eliminar el sobrenadante del tubo.
- Agregar 2 gotas de yodo y dejar reposar.
- Colocar el contenido en una caja de petri.
 - Observar al estereoscopio.

b. Técnica de McMaster: esta técnica permite realizar un conteo estimado de

la carga parasitaria, y por tanto su interpretación clínica a través del número
de Ooquistes, huevos o larvas p.g.h. Para la realización de la técnica o
método de McMaster es necesaria la implementación de la cámara de
McMaster, la cual consta de 2 compartimentos independientes y abiertos
lateralmente, que se encuentran cubiertos por un cubreobjetos; cada
compartimiento tiene una altura de 0,15 cm y el cubreobjetos posee una
cuadrícula de 1 cm de cada lado; por lo tanto, el volumen que se examina en
cada cámara es de 0,15 cc.
El procedimiento del método de McMaster es el siguiente, inicialmente se
suspenden 2 gramos de heces fecales en solución saturada de NaCl hasta
obtener un volumen final de unos 60 ml; enseguida, filtrar la mezcla a través
de una gasa doble, presionando firmemente sobre ella, de esta manera se
eliminan las partículas sólidas de tamaño considerable; luego, se debe agitar
suavemente la filtración, a fin de obtener un homogenizado adecuado,
enseguida, y con ayuda de una pipeta empezar a llenar los compartimientos
de la cámara de McMaster, evitando la formación de burbujas o la
introducción de partículas a la cámara; enseguida, se debe realizar el
montaje de la cámara en el microscopio y se deja reposar por 5 minutos, a
fin de que las formas parasitarias floten y se acumulen en la parte superior
de la cámara.
Enseguida se enfoca, en objetivos de 4 y 10x, sin mover la cámara a fin de
realizar más fácilmente el conteo en los diferentes cuadrantes; no se debe
enfocar en objetivos superiores ni intentar enfocar la parte inferior, ya que se
puede romper debido a la presión de los objetivos sobre esta; realizar el
conteo de las columnas marcadas en ambas cámaras, en relación 1 g en 30
cc, por lo tanto la relación de la cantidad de elementos o partículas de
diseminación por gramo de heces, es la sumatoria del conteo de ambos
compartimentos, multiplicandolos con 100.
si el número de formas parasitarias es bajo, se considera importante volver a
repetir el conteo varias veces y obtener un promedio. de igual forma si el
conteo de huevos y larvas es muy elevado, se recomienda realizar el conteo
de una sola cámara o realizar una dilución de la suspensión realizando el
conteo y multiplicando por el factor de dilución.
 En este método, el recuento es mínimo es de 100 formas parasitarias p.g.h.
Cuando se requiere mayor sensibilidad de la técnica se recomienda realizar
una ligera modificación:
- pesar 4 g de heces fecales y se añade 56 ml de agua
- Enseguida, mezclar adecuadamente con una espátula y dejar reposar
30 minutos.
- Posteriormente, filtrar la mezcla con una gasa doble en un recipiente
e inmediatamente agregar 10 ml de esta solución a un tubo falcon
para su posterior centrifugación.
- Centrifugar 7 minutos a 1200 r.p.m
- Descartar el sobrenadante, teniendo precaución de no tocar el
sedimento.
- Añadir al sedimento 4 ml de una solución de flotación como lo es
solución salina sobresaturada o glucosa.
- Finalmente, realizar el montaje en la Cámara de McMaster,
rellenando cada una de las celdas, procurando no formar burbujas y
absorción de partículas al interior de esta.

c. Técnica de Borays Pearson

- Pesar 5 gramos de materia fecal.
- Colocarlos en un recipiente.
- Adicionar agua para preparar la suspensión.
- Mezclar con un agitador.
- Colocar una malla metálica.
- Filtrar la suspensión.
- Agregar agua al recipiente y el tamiz que contiene la muestra.
- Filtrar el lavado y agregarlo a una probeta
- Adicionar agua hasta llenarla.
- Dejar reposar por 5 min.
- Eliminar el sobrenadante.
- Llenar nuevamente la probeta.
- Dejar reposar por 5 min (repetir el último paso por 3 veces).
- Eliminar el sobrenadante de la probeta y adicionar de 3 a 5 gotas de
azul de metileno al sedimento.
- Agitar y tomar 1cc del sedimento.
- Colocar la muestra en un portaobjetos.
- Observar al microscopio en 10x.

d. Técnica de Sloss modificado

- Pesar 2 gramos de heces
- Colocarlos en un Beaker.
 - Adicionar agua.
- Agitar y homogeneizar la muestra para formar la suspensión.
- Tamizar en una caja de petri.
- Agregar agua para arrastrar los huevos existentes.
- Comprimir el sedimento con una espátula.
- Desechar el sedimento.
- Distribuirlo en dos tubos de ensayo.
- Centrifugar a 1500 r.p.m durante 5 min.
- Botar el sobrenadante.
- Agitar el sedimento y colocar los tubos en una gradilla.
- Adicionar solución azucarada hasta el borde de los tubos.
- Colocar una laminilla durante 5 min.
- Retirar las laminillas y colocarlas en un portaobjeto.
- Mirar al microscopio en 10x.

IDENTIFICACIÓN DE OOQUISTES DE Cryptosporidium sp

Los ooquistes de Cryptosporidium sp, son difíciles de identificar por su pequeño tamaño y
similitud con otros elementos normales de la heces como las levaduras.
Se encuentran varios metodos de tincion aceptables, pero es necesario que vayan
precedidos por un metodo de concentracion. Por su rapidez la tinción directa de las heces
puede usarse cuando se trata de verificar si están implicados en diarreas neonatales o en
diarreas de animales inmunosuprimidos.
1. Tinción por el método de Heine
- Depositar una cantidad pequeña de materia fecal sobre un portaobjetos y
extenderla.
- Teñir con Fucsina básica fenicada durante unos segundos.
- Eliminar el colorante sobrante y dejar secar.
- Observar al microscopio en 40x o 100x.

2. Tinción por el método de Kinyoun modificado

- Realizar una extensión fina de la muestra en el portaobjetos.
- Dejar secar.
- Fijar la muestra durante 6 segundos.
- Fijar con metanol durante 5 min. Dejar secar.
- Teñir con Fucsina básica fenicada durante 10 min.
- Lavar.
- Decolorar el exceso de Fucsina con alcohol clorhídrico hasta que la
extensión sea transparente.
- Lavar para quitar el exceso de colorante.
 - Teñir con solución de verde malaquita al 20%.
- Lavar.
- Dejar secar y observar al microscopio.
3. Tinción de Ziehl-Neelsen modificada
- Extensión de heces en el portaobjetos. Dejar secar.
- Fijar con metanol o alcohol. Dejar secar.
- Teñir con Fucsina básica durante 60 min. Lavar.
- Decolorar con ácido sulfúrico al 2% durante de 10 a 15 seg con el porta en
agitación. Lavar.
- Realizar una tinción de contraste con verde malaquita o azul de metileno al
5% durante 30 seg.
- Observar al microscopio.
4. Tinción de Giemsa.
- Extender las heces en un portaobjetos. Dejar secar.
- Fijar con metanol o alcohol durante 5 min. Dejar secar.
- Teñir con Giemsa durante 25 a 30 min. Lavar y dejar secar.

Técnicas coproparasitoscópica en cama de pollo

es una técnica cuantitativa para cuantificar los ooquistes de protozoarios del
género Eimeria en pollos alojados en condiciones de piso, este método se
utiliza la centrifugación y flotación para determinar el número de ooquistes
y permite identificar los factores de riesgos durante la crianza de pollos.
- pesar 10 g de muestra de la ca,a y agregar en un frasco
- adicionar 100 ml de agua y dejar reposar durante la noche
- homogeneizar y colocar en una malla fina
- mezclar y vaciar 15 ml en un tubo de centrífuga
- centrifugar durante 10 minutos
- eliminar el sobrenadante y resuspender con cloruro de sodio
- con el gotero llenar la cámara de Mcmaster y reposar por 2 minutos
- contar y multiplicar el número de ooquistes por el factor
67(estimado de las cantidades de muestra manejada).

CULTIVOS DE LARVAS EN VETERINARIA

 Existen diferentes métodos para el cultivo de larvas a partir de huevos de
nematodos , estos métodos tienen el mismo fundamento en cual es permitir
la maduración y eclosión de los huevos , estos cultivos dependen de 3
factores la temperatura, la humedad y la oxigenación, pero también hay que
tener en cuenta el estado de la materia fecal : si la materia fecal está
demasiado seca debe humedecerse y si están diarreicas debe solidificarse ,
como material consolidante se puede utilizar : carbón vegetal, musgo
estéril , el agua puede ser esterilizada pero no puede tener cloro .
Técnica de cultivo de Corticelli y Lai
consiste en la utilización de dos cajas de petri una que contiene agar y otra
que mas grande con agua a una altura de 1 cm la capa pequeña con agar va
sin tapa y la caja grande va con tapa, para generar condiciones óptimas de
humedad y se pone en una estufa oscurecida a temperatura de 24-27°c
durante 7 días o temperatura ambiente durante 10 días, cada 2 horas se
destapa la caja para permitir oxigenar el cultivo,pasados 10 días se invierte
la caja pequeña dentro del la grande para que las larvas pasen al agua , se
puede utilizar métodos como lo son de sedimentación o centrifugación para
concentrar las larvas y en un lapso de tiempo de 10 días evolucionan a larvas
infectantes
Recuperación de larvas del cultivo
el método más utilizado es la técnica de Baermann, el material cultivado se
coloca en una malla metálica o dentro de una gasa sumergida en un
embudo con agua entibiada , las larvas caen al fondo estas son recolectadas
y centrifugadas a 1500 rpm
Incubación de huevos de Strongylida
- Introducir la muestra en una caja de petri y se agrega agua a temperatura
ambiente, para proporcionarle la humedad suficiente.
- Se pone en una estufa de 20 a 25°C durante 7-10 días. Si no se tiene la
estufa, la embriogénesis se generará pero dependiendo de la temperatura
ambiental.
- Controlar diariamente la humedad y ventilación del coprocultivo durante
unos minutos.
- Pasado este tiempo, la muestra se pondrá en el aparato de Baermann, para el
aislamiento de las larvas y su posterior identificación.
-
CLASIFICACIÓN DE LARVAS
los métodos de clasificación de larvas infectantes se basan en los métodos
de wertejuk y de corticelli y lai en la cual se clasifican según las
diferencias morfológicas principalmente de las colas. estas se clasifican
dentro de 3 grupos :

1. larvas con cola de vaina corta: en este grupo encontramos las

larvas de Trichostrongylus axei, Trichostrongylus colubriformis ,
Trichostrongylus vitrinus y Ortertagia circumcincta y Ostertagia
ostertagi
2. larvas con cola de vaina mediana: En este encontramos ;
Haemonchus contortus y Haemonchus placei
3. larvas con cola de vaina larga: pertenecen ; Nematodirus spathiger
, Nematodirus battus, Nematodirus fillicolis , Nematodirus
helvetianus y Oesophagostomum radiatum , Oesophagostomum
venulosum y Chabertia ovina .

Una la clasificamos dentro de los tres grupos se examina : la forma

de extremidades anterior, la cavidad bucal, y la forma vaina larval.
dentro de estos 3 grupos podemos diferenciar las especies buscando
partes morfológicas para diferenciar Trichostrongylus spp y
Ostertagia spp.
las larvas de Trichostrongylus con más chicas y de de anchos mayor
que las Ostertagia, dentro de las colas medianas las células de de
Cooperia son más grandes que las de Haemonchus
En el tercer grupo las larvas de Nematodirus spp. son las más
grandes de todos los parásitos poseen 8 células intestinales y las de
Oesophagostomum tienen de 16-34 y las de chabertia ovina 28-32.