EQUIPO 3

Laboratorio de Bioquímica II PRÁCTICA 2: ACCIÓN DE LA AMILASA SOBRE EL ALMIDÓN

Lunes de 16:00 a 18:00
● Vila Madrid Manuela Monserrat
Otoño 2021
● Garcia Anaya Marcos
NRC: 13971
Docente: M.C. Leticia Georgina ¿SE PUEDEN DETECTAR LA ACTIVIDAD DE LA ENZIMA ● Castillo Ortega Karina
García Albarrán
AMILASA DURANTE LA GERMINACIÓN?

INTRODUCCIÓN PROCEDIMIENTO
Almidón: es una macromolécula que está compuesta por dos polímeros distintos
Definición de glucosa, la amilosa (en proporción del 25 %) y la amilopectina (75 %). .
de carbohidrato
Ambos están formados por unidades de glucosa, en el caso de la amilosa unidas entre ellas por enlaces a 1-4 lo que da lugar a una cadena lineal. En el caso
de la amilopectina, aparecen ramificaciones debidas a enlaces a 1-6.

Función: Servir de reserva de energía y glucosa en vegetales donde se acumula

OBJETIVO
en forma de granos en los cloroplastos y aminoplastos. Es especialmente
abundante en el trigo, maíz, arroz, y en la patata. Es muy importante para la
Evalúa la actividad de la amilasa en semillas de frijol ó alubias durante el proceso de germinación.
alimentación humana.
Características: El almidón como los productos de la hidrólisis del almidón
constituyen la mayor parte de los CARBOHIDRATOS digestibles de la dieta
MATERIALES Y REACTIVOS
habitual. Se obtienen de las semillas de cereales, maíz , trigo, arroz y de algunas ● 1 gotero ● 1 pipeta de 10 ml.
raíces y tubérculos, papa, camote y yuca. ● ¼ de pliego de papel manila ● 3 cajas de Petri ● Agar nutritivo adicionado con
● 1 regla transparente ● 1 vaso de precipitado. almidón. (200 mg de almidón / 100 ml
Enzima: La función de una enzima, básicamente, es incrementar la velocidad de
una reacción. ● 3 frascos gerber de 100 ml para iniciar la ● 1 estufa de incubación a 25 0 C de medio)
germinación ● Solución reveladora: Lugol
Presentan las siguientes características: ● 10 a 12 frijoles ó alubias (de
● 3 alfileres
1ª.- Son proteínas. preferencia grandes de tamaño
● 1 navaja o bisturí
2ª.- Son los catalizadores más eficientes que se conocen. La mayor parte de las reacciones ● Un lápiz graso homogéneo) limpias y sin germinar
celulares ocurren a una velocidad alrededor de un millón de veces más alta de lo que ● 20 g de algodón absorbente
serían en ausencia de enzimas.
3ª.- La mayoría de las enzimas se distinguen por su especificidad, lo que significa que cada
conversión de un reactivo (llamado sustrato) en un producto es catalizada por una HOJAS DE SEGURIDAD
enzima determinada.
4ª.- Quizá una de las más notables características es que las acciones de muchas enzimas Glucosa Almidón
están reguladas de modo que pueden cambiar de un estado de baja actividad a uno de
alta actividad, dependiendo de las condiciones celulares en las que se encuentren.

Clasificación:
-DESHIDROGENASAS.- Catalizan la pérdida de hidrógeno (H+ y e-) de un sustrato teniendo como aceptor una molécula diferente al oxígeno.
- OXIDASAS.- Catalizan la pérdida de hidrógeno de un sustrato teniendo como aceptor al oxígeno.
CUESTIONARIO
-QUINASAS (CINASAS).- Catalizan la transferencia de grupos fosfato del ATP a otra molécula.
1. ¿Cuál es el fundamento de la presencia ó ausencia de almidón al momento de revelar?
- TRANSAMINASAS.- Transfieren grupos amino a grupos carbonilo.
El almidón está compuesto por un 20% de amilosa, y un 80% de amilopectina. La amilosa tiene una cadena lineal debido a sus enlaces
-FOSFATASAS.- Rompen enlaces fosfoéster en presencia de agua. α-1-4, los cuales favorecen la conformación helicoidal, por lo que al revelar con lugol los iones triyoduro se introducen entre estas
-TIOQUINASAS (TIOCINASAS).- Forman enlaces tioéster dependientes de ATP a partir de la coenzima A y ácidos carboxílicos. hélices formando un compuesto de inclusión de coloración azul-violeta.
-MUTASAS.- Catalizan rearreglos intramoleculares de grupos funcionales.
La prueba del yodo (Lugol) es una reacción química usada para determinar la presencia o alteración de almidón y otros polisacáridos. El
reactivo de Lugol, que contiene una mezcla de yodo y yoduro, permite reconocer polisacáridos, particularmente el almidón por la
-TRANSALDOLASAS Y TRANSCETOLASAS.- Transfieren grupos de tres y dos carbonos respectivamente.
formación de una coloración azul-violeta intensa y el glucógeno y dextrinas por la formación de coloración roja. Esta reacción es el
-EPIMERASAS.- Catalizan la formación de compuestos con orientaciones espaciales diferentes.Ø DESCARBOXILASAS.- Eliminan grupos carboxilo. resultado de la formación de cadenas de poliyoduro a partir de la reacción del almidón con el yodo presente en la solución de Lugol. La
-SINTETASAS.- Forman nuevos compuestos por condensación de dos sustratos. amilosa, el componente del almidón de cadena lineal, forma hélices donde se juntan las moléculas de yodo, formando un color azul
De las dos enzimas que se requieren para la oscuro a negro.
-HIDROLASAS.- Rompen enlaces introduciendo una molécula de agua digestión del almidón la alfa amilasa está presente
en la semilla antes de la germinación, la alfa
-FOSFORILASAS.- Introducen fosfato inorgánico.
amilasa y las proteínas aparecen inmediatamente
después, de iniciada la germinación.

No. de clase NOMBRE REACCIÓN QUE CATALIZAN

1 OXIDORREDUCTASAS Catalizan reacciones de óxido-reducción

2 TRANFERASAS Catalizan reacciones de transferencia de grupos Complejo amilosa yodo. Las filas de átomos de yodo se adaptan
exactamente al núcleo de la hélice de amilosa.

3 HIDROLASAS Catalizan ruptura de enlaces químicos con

Clasificación de los de monosacáridos
adición de agua.
4 LIASAS
Catalizan la ruptura de enlaces químicos sin
participación de agua (adición a dobles enlaces).
5 ISOMERASAS Catalizan reacciones de isomerización.
6 LIGASAS O SINTETASAS Catalizan reacciones que consisten en unir dos
moléculas.
Reacción acoplada con la intervención de
enlaces fosfato de ATP (consumen energía)
2.¿Qué indican las zonas translúcidas?
Las zonas translucidas indican que no existen moléculas de amilosa ni amilopectina donde se pueda situar el yodo al interior, indicando
así que no hay almidón en esa zona ya que se hidrolizó con la amilasa que contiene la semilla que se coloca en esa placa.
La función de la amilasa es catalizar la digestión
de los hidratos de carbono, es decir, es una
reacción de hidrólisis para digerir el almidón o el 3.¿Por qué a mayor tiempo es mayor la zona translúcida?
glucógeno, y formar azúcares simples más A mayor tiempo de incubación se observan zonas translucidas más grandes pues la temperatura a la que se incuba favorece el proceso
sencillos. Existen dos tipos de amilasas: de germinación, el cual implica una mayor actividad de la amilasa.
·Alfa amilasa: es la presente en el tubo digestivo En la zona traslúcida se encuentran restos de almidón que ya fueron degradados en moléculas más sencillas por la amilasa, al romperse
de los animales. . Esta enzima hidroliza los o al hidrolizarse el almidón es unidades más pequeñas de carbohidrato el color azul-negro desaparecerse. En consecuencia, la prueba
enlaces 1-4 carbohidratos de forma aleatoria
de Lugol puede determinar el final de un hidrolisis, cuando ya no hay cambio de color.
dando lugar a una mezcla de dextrinas, maltosa y
glucosa. Actúa tanto sobre la amilosa como sobre
la amilopectina, aunque en la amilopectina los 4.¿Hay almidón en la zona translúcida? ¿Si no lo hay, en que se transformó?
puntos próximos al enlace 1-6 no pueden ser No hay pues la hidrolisis del almidón causada por la acción de la amilasa resulta en dextrinas o monosacáridos (α-D-Glucopiranosas).
hidrolizados.

La α-amilasa se ubica en la clasificación de las enzimas hidrolasas, actuando sobre el almidón hidrolizando los enlaces glucosídicos α-(1-4) y α- (1-6). Las
α-amilosas son enzimas que catalizan la hidrólisis de enlaces glicosídicos α-1,4, presentes en el almidón, glicógeno y otros polisacáridos.

BIBLIOGRAFÍA
FUNDAMENTOS
Reacción que cataliza la enzima amilasa BOHINSKI. 1991 Bioquímica. 5ed., México D.F., Editorial Pearson
La α-amilasa ataca de manera aleatoria enlaces 1,4 de las moléculas de amilosa y amilopectina, creando al principio huecos David L, Lehninger Principios de bioquímica, 6ta Edición, Editorial Omega.
al azar en los granos de almidón y liberando productos que aún son grandes La actividad de ambas amilasas implica la
incorporación de una molécula de H2O Clasificación
por cada enlacederoto,
losasí
deque son enzimas hidrolasas. Las reacciones hidrolíticas son
polisacáridos
irreversibles, de modo que no se puede detectar síntesis de almidón por amilasas. La beta-amilasas son de origen vegetal
(almendras, semillas en germinación etc.) las cuales rompen el almidón para formar beta-maltosas. Ellas actúan en la
amilosa para romper las unidades de maltosa de manera consecutiva. Cuando la beta- amilasa actúa en la amilopectina, se
liberan las unidades de maltosa en los extremos de las ramificaciones de amilopectina, hasta la acción de la enzima RESULTADOS
bloqueada en el enlace 1,6 glucosídico. La acción de la beta-amilasa se detiene en los puntos de ramificación, dejando una
molécula grande, llamada dextrina límite o dextrina residua.

Estructura química de la sacarosa

REACCIÓN AL AGREGAR LUGOL AL AGAR NUTRITIVO CON

ALMIDÓN Y LAS SEMILLAS.
El agar nutritivo es el medio donde crecen las semillas con
el almidón, pues este facilita el crecimiento. El efecto del
DISCUSIÓN
lugol es sobre el almidón de la semilla, La coloración
producida por el Lugol se debe a que el yodo se introduce
entre las espiras de la molécula de almidón. No es por
tanto, una verdadera reacción química, sino que se forma
un compuesto de inclusión que modifica las propiedades
físicas de esta molécula, apareciendo la coloración azul
violeta. CONCLUSIÓN

Estructura de la alfa amilasa