GUIA DE LABORATORIO DE

BIOLOGIA CELULAR

Unidad de Formación ECP

Versión: 001 Fecha: 2018 Manual de calidad
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Código: OBSERVACIÓN DE ESPORAS

Laboratorio No. 6
Tema: Observación de esporas
OBJETIVOS

 Adquirir destreza en la tinción de endosporas

 Diferenciar bacterias esporuladas de las no esporuladas.
 Interpretar los resultados obtenidos en la aplicación de esta técnica.

FUNDAMENTO
Cuando existen condiciones inadecuadas de suministro de carbono, nitrógeno y fósforo,
ciertas bacterias producen formas altamente resistentes y deshidratadas denominadas
endosporas o esporas, las cuáles son resistentes al calor, agentes químicos, desecación,
radiación, ácidos y desinfectantes. La endospora germina para producir una célula
vegetativa única. La esporulación no es un método de multiplicación bacteriana sino una
forma de reposo latente dentro del ciclo de vida.

Las endosporas bacterianas carecen de actividad metabólica y están especialmente

adaptadas para la supervivencia prolongada en condiciones adversas, ya que son
especialmente resistentes frente a los efectos letales del calor, la desecación, la
congelación, los productos químicos tóxicos y la radiación.

Estas estructuras que contienen una copia completa del genoma, se desarrollan en el
interior de la célula bacteriana y cuando la célula muere y se lisa o rompe, la endospora
queda libre. Las endosporas germinarán cuando las condiciones ambientales vuelvan a
ser favorables. Los géneros bacterianos capaces de formar endosporas son los Bacillus,
Clostridium y Sporosarcina.

Su visualización se da de la manera más simple como cuerpos refringentes intracelulares

en suspensión de bacterias sin teñir, o como zonas incoloras dentro de las bacterianas
teñidas con los métodos habituales. Su ubicación varía dentro de la célula en: terminales,
subterminales y centrales.

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ELENA MARIA PEÑARANDA LIZARAZO CARMELITA MENDOZA PEREZ CLAUDIA SOFIA MONTEJO TORRES
Fecha FEBRERO 2018 Fecha MAYO 2018 Fecha MAYO 2018
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Figura 1. Localización y morfología de las esporas en tres especies de Bacillus.

La pared de la espora es relativamente impermeable, no obstante, los colorantes pueden

penetrar si se calienta la preparación. En esta práctica utilizaremos la coloración de
Sheffer–Fulton, tinción mediante la cual, las esporas se tiñen de verde por el colorante
verde malaquita y el cuerpo bacteriano se tiñe de rojo por la safranina.

MATERIALES Y EQUIPOS

Item Tipo Descripción

01 MAT Láminas

02 MAT Laminillas

03 MAT Asa redonda

04 MAT Pipeta Pasteur

01 CEP Cultivo de Bacillus cereus

02 CEP Bacillus subtilis

03 CEP Bacillus thuringiensis

01 Equipo Microscopio

02 Equipo Mechero

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REACTIVOS

Item Descripción
1 Verde Malaquita
2 Safranina

PROCEDIMIENTO

Pasos Descripción
1 Tomar una lámina limpia y sin rayaduras

Realizar un frotis de la cepa de Bacillus cereus sobre una gota de solución

2
salina, fijar y enfriar

3 Teñir con verde de malaquita durante 5 minutos

Adicionar calor por la base de la lámina, hasta la emisión de vapores (repetir

4
este procedimiento varias veces teniendo el cuidado de no dejar hervir)

5 Lavar con agua

6 Agregar safranina y dejar actuar por 1 minuto

7 Lavar con agua para retirar el exceso de colorante y secar.

8 Observar con los diferentes aumentos del microscopio.

Tomar fotografías para anexar al informe y registrar todas las observaciones

9
realizadas tales como morfología celular y posición de la espora.

10 Repetir el mismo procedimiento con cada una de las cepas proporcionadas.

NOTA: Anexar al informe de laboratorio el registro fotográfico de lo observado, colocando

en cada imagen el nombre de la imagen, la descripción y el aumento con el cual se
observó.

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CUESTIONARIO

1. ¿Cuáles son las ventajas que proporciona a las bacterias la formación de

esporas?

2. Investigue y explique mediante un diagrama el proceso de esporulación.

3. Mencione y describa otra tinción utilizada para observar esporas.

BIBLIOGRAFÍA
 Davis,B.D etall.Tratado de Microbiología. Salvat Editores Microbiología y
parasitología medica ( 2 edición Masón-Salvat medicina)..
 Manual de laboratorio (clínico básico) microbiología. Alberto Delgado Iribarren, Ana
Polanco, Silvia Amich, Santiago Prieto, María Luisa Salve.
 Zinsser microbiología 20ª edición
 Microbiología sexta edición Thomas D Brock, Michael T Madigan
 Peñaranda, E. (2018). Práctica Observación de esporas. Manual de prácticas de
Biología celular. Bacteriología y laboratorio clínico.

ANEXOS
No. DESCRIPCION
Anexo
Capítulo Morfología y Estructura bacteriana. Recuperado de:
1
http://www.higiene.edu.uy/cefa/2008/MorfologiayEstructuraBacteriana.pdf

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