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EXTRACCIN EN FASE SLIDA (SPE)

Mtodos de Extraccin y Separacin de Compuestos de Inters para la Industria de Alimentos


Dra. Blanca E. Barragn Huerta

Extraccin en Fase slida

La extraccin en fase slida SPE es una tcnica preparativa que el analista utiliza para purificar la muestra previa a la cuantificacin y/o para concentracin del analito que est presente en la muestra. Se basa en la particin selectiva de uno mas componentes en dos fases, uno de los cuales es un liquido adsorbente y la segunda fase es un liquido. El solido adsorbente suele estar en tubos desechables en forma de jeringas (cartuchos)

Principio de la tcnica

SPE es una tcnica de extraccin que se basa en la retencin sobre un adsorbente slido de los compuestos deseados disueltos en una muestra lquida. La adicin de un eluyente permite eliminar los componentes de la matriz que interfieren, para despus eluir y concentrar los analitos de inters. La extraccin en fase slida sustituye a la extraccin lquido-lquido clsica.

De acuerdo con el carcter qumico del grupo funcional unido a la slice o al copolmero, las fases resultantes se pueden clasificar en: no polares, polares o de intercambio inico. La eleccin de los disolventes utilizados depende de la naturaleza de la fase estacionaria

Aplicaciones de EFS

Preparar de muestras para anlisis con HPLC, GC, espectroscopia UV e IR Concentrar de las sustancias que se analizarn Eliminar de sustancias que causan interferencias Reemplazar las extracciones lquidolquido habituales

Ejemplos de Aplicaciones

Eliminacin de pigmentos de vegetales y hortalizas Retencin de antocianinas y otras interferencias en anlisis de pesticidas en vinos Vitaminas en zumos Residuos de antibiticos en leches

Ventajas

Es una tcnica muy sencilla y rpida Tamao de muestra pequeo Altas tasas de recuperacin Reproducibilidad de resultados Reduccin del consumo de disolventes orgnicos Existen numerosos adsorbentes disponibles en el mercado para SPE Se puede acoplar a otras tcnicas de separacin SPE es muy efectiva para extraer compuestos polares o apolares de muestras lquidas Est limitada a muestras lquidas

Modalidades de SPE

Etapa de Acondicionamiento

La activacin del adsorbente Hidrofbicos- metanol o acetonitrilo Hidrofilicos- hexano o cloruro de metileno

Etapa de carga de muestra


Aplica la muestra Los contaminantes pasan sin ser retenidos

Conviene analizar la fraccin no retenida

Etapa de lavado

Permite la eliminacin de cualquier resto de compuestos

Etapa de Secado

Hace circular aire 210min

Mejora el rendimiento de extraccin

Etapa de elucin

Se pasa un solvente para romper la interaccin y eluir al 100% los compuestos de inters.

Etapa de Concentracin

Los compuestos de inters se [] evaporando una parte del solvente.


Agente desecante

Recomendaciones

Fuerza de elucin de disolventes

Extraccin en Fase Slida y Determinacin por HPLC de patulina en jugo concentrado de manzana

Patulina

La patulina es una micotoxina producida por diversas especies del gnero Penicillium y Aspergillus; principalmente de Penicillium expansum se ha encontrado en frutas como manzanas y productos de manzana.

Durazno, Naranjas, Chabacanos, Tomates y productos de Tomate

Regulacin de la Comisin Europea

Para jugos de fruta e ingredientes de manzana en otras bebidas 50 mg/Kg Productos slidos incluyendo compotas de manzana y pur de manzana 25 mg/Kg Productos destinados para lactantes y nios pequeos 10 mg/kg
China es el principal pas que produce concentrados de jugo de manzana (AJC)

Mtodos para medir Patulina en AJC


Cromatografa en capa fina Cromatografa de gases HPLC deteccin UV -Pre-tratamiento de la muestra

ELL + solvente + tiempo + costo * Carbonato de Na

EFS altas tasas de recuperacin excelente reproducibilidad de resultados mayor selectividad de los anlisis reduccin del consumo de disolventes orgnicos menor tiempo de anlisis

Proceso EFS

Materiales y Mtodos

Muestras de Jugo concentrado de manzana Estndar de Patulina----5mg + 50mL de agua bidestilada (pH4) acido actico Solucin tampon de cido actico----0.45 mL de acido acetico glacial+ 40mL de agua destilada+ 0.245 CH3COONa ajusta pH=4 con acido acetico

Acetato de etilo, metanol, hexano, acetona Acetonitrilo (HPLC) Acido actico y Carbonato de Sodio

Aparatos

HPLC acoplado con un detector de UV Material para SPE Cartuchos Accubond ODS C18 500mg/3mL.

SPE y preparacin de la muestra

Cartucho C18 fueron prelavados

1g de muestra + 0.5mL de Sol tampon (Eluir 2-3 mL/min)

La columna se eluyo con solvente (hexacet-acetona; 1.5.4, 1.4.5, 1,3.6)

El residuo se disuelve en 1mL de sol tampon y se inyecta en el HPLC

Evapora 40C

ELL y preparacin de la muestra 5g de muestra + 10mL de agua 3extracciones 3*25mL de acetato de etilo agitando vigorosamente por 1min

Identicacin por HPLC


Caractersticas: Columna: 250mm x 4.6 mm Fase estacionaria C18 5mm Fase mvil: Acetonitrilo- agua (1:10) Longitud de onda 276mL Muestra: 5ml

%Recuperacin

Limite de deteccin mnimo fue de 0.005mg/Kg

Cromatograma de la solucin estndar de Patulina

9.482min

Cromatograma ELL

Cromatograma EFS

Conclusin

El procedimiento de la SPE se aplic con xito a la extraccin de la patulina del zumo de manzana concentrado. Jugo concentrado de manzana fue tratado por el Cartucho C18 de SPE y se analiz por HPLC utilizando un detector UV. Las tasas de recuperacin y las variaciones de los coeficientes fueron 96,4% y 3.8%, respectivamente, el mnimo niveles detectables son 0.005 mg / kg. El mtodo propuesto rpido, fcil, fiable y barato para el control de calidad de jugo de manzana