Familia del factor de transcripción de estrés térmico ( Hsf ) de la planta : estructura, función y evolución
resumen
Diez años después, Nover et al. Presentaron la
primera descripción general de una familia
completa de plantas Hsf para Arabidopsis
thaliana . [1], recopilamos datos para 252 Hsfs
de nueve especies de plantas (cinco eudicots y
cuatro monocotiledóneas) con secuencias
genómicas completas o casi completas. El nuevo
conjunto de datos proporciona información
interesante sobre las relaciones filogenéticas
dentro de la familia Hsf en plantas y permite el
refinamiento de su clasificación en distintos
grupos. Numerosas publicaciones durante la
última década documentan la diversificación y la
interacción funcional de Hsfsasí como su
integración en las complejas redes de
señalización y respuesta al estrés de las plantas.
Este artículo es parte de un número especial
titulado: Regulación de genes de plantas en
respuesta al estrés abiótico.
1. Introducción: respuesta al estrés de las plantas
El origen de las plantas terrestres hace unos 400
millones de años requirió adaptaciones
especiales a las condiciones ambientales que
cambiaban rápidamente. Como organismos
sésiles, las plantas debían especializarse en el
crecimiento y la propagación en condiciones de
estrés divergente, como temperaturas bajas o
altas, estrés por alto contenido de sales o metales
pesados o deficiencia extrema de agua. Una red
de sistemas interconectados de respuesta al
estrés celular es un requisito previo para la
supervivencia de la planta y la productividad
desafiada por los cambios globales del clima [2–
9]. Aunque las respuestas al estrés de las plantas
se estudiaron experimentalmente desde
mediados del siglo XIX, un hito en el análisis de
los sistemas de respuesta al estrés celular fue el
trabajo pionero de F. Ritossa con la mosca de la
fruta Drosophila, quien observó cambios
sorprendentes en los patrones de actividad
genética del polietileno. cromosomas en las
glándulas salivales larvales después del estrés
por calor (HS) [10]. Las proteínas de estrés
térmico ( Hsps ) recién formadas fueron
descritas por Tissieres y colaboradores [11]. Al
final resultó que, Ritossa había descubierto las
partes centrales de un sistema general de
respuesta al estrés conservado en todo el mundo
vivo, incluidos todos los procariotas y eucariotas
investigados hasta ahora. Los casi 50 años de
investigación en biología de células moleculares
en este campo descubrieron un sistema central
de respuesta al estrés en las células que detectan
desviaciones de la homeostasis de las proteínas,
es decir, el equilibrio entre la nueva síntesis, el
plegamiento, el direccionamiento intracelular, la
función biológica y la degradación de las
proteínas. Los miembros inducidos por Hs y
expresados constitutivamente de las familias
conservadas de Hsp actúan como chaperonas
moleculares. Son esenciales para el
mantenimiento y / o restauración de la
homeostasis de proteínas [12-17]. Se supone que
la desnaturalización de las proteínas y los
problemas en el procesamiento de las proteínas
recién sintetizadas durante el estrés provocan
una disminución del conjunto de chaperonas
libres. Esta llamada respuesta al estrés de la
proteína citosólica desencadena la transcripción
de genes que codifican Hsp bajo el control de los
factores de transcripción de estrés por calor
( Hsfs ), que están en el centro de esta revisión.
Nos concentraremos principalmente en la
estructura y la función de Hsfs de la planta, pero
ocasionalmente también incluiremos
información relevante sobre Hsfs o proteínas
activadoras de la transcripción de sistemas que
no son de plantas .
2. Estructura modular de Hsfs Al igual que
muchas otras proteínas que regulan la actividad
genética, los Hsfs tienen una estructura modular.
A pesar de una considerable variabilidad en
tamaño y secuencia, su estructura básica y modo
de reconocimiento del promotor se conservan en
todo el reino eucariota [18-20]. Para la
presentación en la Fig. 1, mostramos cinco
ejemplos de Hsfs de tomate con características
típicas de Hsfs de plantas .
2.1. Dominio de unión al ADN (DBD) y
elementos de estrés por calor (HSE) El dominio
de unión al ADN (DBD) altamente estructurado
se encuentra cerca del extremo N de todos los
Hsfs . Los análisis de la estructura cristalina y de
la solución de RMN del DBD de Hsfs
seleccionados de Drosophila, levadura y planta
revelaron que está formado por un haz de tres
hélices (H1, H2 y H3) y una lámina ß
antiparalela de cuatro hebras [21–24]. El núcleo
hidrofóbico de este dominio asegura el
posicionamiento preciso y la interacción
altamente selectiva del motivo central hélice-
giro-hélice (H2-T-H3) con elementos
promotores de estrés por calor (HSE; [25-27].
Los HSE están formados por patrones
repetitivos de motivos de unión palindrómica
(5'-AGAAnnTTCT-3 ') aguas arriba de la caja
TATA de genes eucarióticos inducibles por HS
[1, 28-31]). Los residuos G y C posicionados en
el surco principal en sitios opuestos de la hélice
de ADN son esenciales para la función HSE
[25]. Por lo general, se requieren más de dos
motivos HSE, y además, los detalles de la
estructura fina HSE, así como el contexto del
promotor o la cromatina son cruciales para la
unión eficiente de los oligómeros Hsf [30, 32-
35]. Los sitios de unión independientes de HSE
para Hsfs son objeto de especulaciones
frecuentes. En este contexto, es notable que la
Hsf única en la levadura es esencial para la
supervivencia también en condiciones sin estrés
y que la mayoría de los sitios de unión para la
única Drosophila Hsf residen en genes que no
son HS (ver Sección 3.2). Con respecto a las
plantas, se debe demostrar experimentalmente si
la asociación observada de AtHsfA1a con los
llamados elementos sensibles al estrés (STRE,
por ejemplo -AGGGG-) es relevante para la
expresión dependiente de Hsf de los genes
correspondientes [30]. Al menos, los sitios de
unión débiles para Hsfs , por ejemplo, en el
promotor de genes de mantenimiento, pueden
mejorarse mediante la unión adyacente de otros
factores de transcripción como parte de un
complejo potenciador (Sección 4.4, [35]).
2.2. La oligomerización de dominio (OD) La
oligomerización de dominio (OD o HR-A /
región B) está conectado al dominio de unión al
ADN por un enlazador flexible de longitud
variable (15-80 residuos de aminoácidos). Un
patrón heptad de residuos de aminoácidos
hidrofóbicos en la región HR-A / B conduce a la
formación de un dominio de espiral enrollado
característico de los dominios de interacción de
proteínas de tipo cremallera de leucina [36]. Con
base en las peculiaridades de su OD,
discriminamos tres clases de Hsfs en las plantas,
es decir, las clases A, B y C (ver Fig. 1 y [1, 37,
38]). Similar a todos los Hsfs no vegetales , por
ejemplo, levadura, nematodos, Drosophila y
mamíferos [37], la región HR-A / B de la planta
Bs Hsfs es compacta, mientras que los Hsfs
clase A y clase C tienen regiones HR-A / B
extendidas causado por inserciones de 21 (clase
A) o 7 (clase C) residuos de aminoácidos entre
las partes A y B (ver letras minúsculas en los
ejemplos que figuran a continuación; Sl ,
tomate; Sc , levadura de panadería ; Hs ,
humano). Curiosamente, la DO de la planta Hsfs
confiere distintos patrones de especificidad para
la heterooligomerización (ver Secciones 4.3 y
4.6):
2.3. Señal de localización nuclear (NLS) La
señal de localización nuclear (NLS) de Hsfs está
formada por grupos monopartitos (m) o
bipartitos (b) de residuos de aminoácidos
básicos C-terminal de la DO [39]. En Hsfs de
tipo B , el grupo básico conectado con el motivo
tetrapéptido represor altamente conservado
-LFGV- (subrayado, ver Sección 4.5)
presumiblemente sirve como NLS.
2.4. Señal de exportación nuclear (NES)
Dependiendo del balance de importación y
exportación nuclear, la distribución intracelular
de Hsfs cambia dinámicamente entre el núcleo y
el citoplasma [40, 41]. Se requiere una señal de
exportación nuclear (NES) hidrófoba,
frecuentemente rica en leucina en el extremo C
de muchos Hsfs [41] para la exportación nuclear
mediada por el receptor en complejo con el
receptor NES. Junto con los módulos
activadores adyacentes (motivos AHA, consulte
la Sección 2.5), el NES sirve como parte de una
región de firma específica de tipo en el terminal
C (*) de Hsfs clase A en plantas ([38], consulte
la Sección 2.7) .
2.5. Motivos activadores (motivos AHA) La
función de los Hsfs de clase A como activadores
de la transcripción está mediada por motivos de
péptidos activadores cortos (motivos AHA)
ubicados en sus dominios C-terminales (CTD).
Estos motivos se caracterizan por residuos de
aminoácidos aromáticos (W, F, Y), grandes
hidrófobos (L, I, V) y ácidos (E, D) [38, 42, 43].
En Hsfs del tipo A3, el CTD no contiene
motivos distintos de AHA, sino más bien un
patrón característico de residuos de triptófano ,
que proporcionan contribuciones aditivas a la
función activadora [44]. Entre los Hsfs de clase
A , los tipos HsfA8 forman una marcada
excepción ya que sus CTD carecen de cualquier
motivo AHA detectable. De acuerdo con esto,
AtHsfA8 fue inactivo en el ensayo monohíbrido
de levadura y no recluta componentes de la
maquinaria de transcripción en ensayos in vitro
pulldown [38].
Motivos similares de AHA o regiones
activadoras con patrones de residuos aromáticos
en un entorno ácido se identificaron en muchos
otros factores de transcripción de levaduras y
mamíferos, por ejemplo Hsfs , VP16, RelA ,
Sp1, Fos , Jun, Gal4, Gcn4 (ver resumen y
referencias en [ 38, 43]). Lo más probable es que
representen los sitios esenciales de contactos con
subunidades del complejo de transcripción basal.
Tjian y Maniatis [45] propusieron un modelo de
interfaces cohesivas, es decir, de superficies que
interactúan con un patrón mutuamente
correspondiente de residuos de aminoácidos
aromáticos / hidrófobos entre la proteína
activadora y sus proteínas diana cargadas
positivamente ( coactivadores ). En apoyo de
este concepto, las formas mutantes con
intercambios de los residuos aromáticos y / o
hidrófobos no interactúan con los componentes
de la maquinaria de transcripción in vitro y son
deficientes en los ensayos de reportero in vivo
[38, 46-53].
2.6. Dominio represor de la clase B hsfs toda
clase B hsfs , excepto HsfB5, se caracterizan por
el tetrapéptido - LFGV- en el dominio C-
terminal, que se supone que funcionan como
motivo represor por la interacción con una hasta
ahora desconocida corepressor en la maquinaria
de transcripción [54 –56]. Conservados
similares: los motivos LFGV también se
identificaron como núcleos de dominios
represores en otros factores de transcripción de
plantas (ver Sección 4.5 y [55]).
2.7. Dominios funcionales y secuencias de firma
Los dominios y motivos funcionales descritos
anteriormente (Secciones 2.1 a 2.6) son
generales (NLS, NES) o específicos de la familia
Hsf o del grupo (motivos AHA, OD). El DBD
con su estructura 3D altamente conservada y su
motivo central H2-T-H3 para el reconocimiento
HSE, así como la región HR-A / B como OD,
representan las características de todos los Hsfs
eucarióticos . Incluso el posicionamiento del
intrón en el DBD adyacente al motivo HTH se
conserva evolutivamente (Fig. 1, puntas de
flecha). Aunque el OD con su estructura en
espiral está presente en todos los Hsfs eucariotas
, viene en tres diseños diferentes en Hsfs de
plantas . Esto se utilizó para distinguir Hsfs de
plantas en tres clases principales. La forma
compacta del OD caracteriza a los Hsfs de clase
B de planta y también a todos los Hsfs no
vegetales , mientras que los representantes de las
clases A y C comparten extensiones
características de las regiones de enlace entre las
partes HR-A y B (ver Sección 2.2). Una
subclasificación específica de tipo de Hsfs de
plantas se facilita mediante detalles relacionados
con la presencia, posición y secuencia de
motivos NLS, NES, AHA o regiones
activadoras. Es notable en este contexto que la
mayoría de los dominios funcionales descritos
hasta ahora (ver Secciones 2.3 a 2.6) se
caracterizan por motivos bastante cortos. El
hecho de que dicho motivo ejerza o no su
función asociada puede depender
particularmente también de su contexto
molecular. Por lo tanto, hay grupos de residuos
de aminoácidos básicos, que no son funcionales
como NLS [39] o algunos de los motivos
canónicos de AHA, por ejemplo, en HsfA5, no
son funcionales en las plantas ([57], ver Sección
4.6). Otros motivos de secuencia conservadora
evolutiva, adyacentes a dominios funcionales o
aislados dentro de los Hsfs proporcionan
evidencia adicional para la clasificación. Para
fines prácticos, resumimos la información
descrita anteriormente sobre las características
compartidas de Hsfs , es decir, la presencia y
características de dominios o motivos
funcionales, su posición dentro de la proteína,
así como partes de secuencia conservadas de
función desconocida, bajo el término secuencias
de firma. Para ilustrar el punto, se dan dos
ejemplos con tomate HsfA4b y HsfA5 (Fig. 2 y
[57]). Estas secuencias de firma han demostrado
ser útiles para caracterizar los distintos tipos de
Hsf , por ejemplo, tipo HsfA1 frente a A2 frente
a A3, etc., o incluso subtipos como Hsfs B2a
frente a B2b o Hsfs A4a frente a A4b [30, 38,
57, 58] . Además, son útiles para asignar Hsfs
recientemente identificados al tipo o subtipos
apropiados. Dar el conjunto completo de
secuencias de firmas subyacentes a nuestra
clasificación Hsf está ciertamente fuera del
alcance de esta revisión. Describiremos la
compilación de las secuencias de firmas junto
con nuestro canal de anotaciones automatizadas
recientemente desarrollado para Hsfs en otros
lugares.
3. Multiplicidad de Hsfs 3.1. La familia Hsf de
la planta Hasta ahora, la composición de la
familia Hsf en las plantas se ha descrito
completamente solo en algunas especies modelo
como Arabidopsis y arroz [1, 18, 59]. Por
ejemplo, A. thaliana, que sirvió como prototipo
para la familia Hsf , tiene un conjunto de 21
genes que codifican Hsf con 15 miembros que
pertenecen a la clase A , 5 miembros a la clase B
y uno a la clase C (Tabla 1). Sin embargo, los
análisis recientes de Hsfs en otras especies
indicaron que tanto el tamaño como la
composición de la familia Hsf están sujetos a
cambios evolutivos. Para obtener una visión
general de la composición de Hsf en las plantas
con flores, hemos extraído y caracterizado los
Hsfs de 9 especies de plantas con genomas
completamente o casi completamente
secuenciados (Tabla 1). Las referencias a las
fuentes de datos se dan en la leyenda de la Tabla
1, y las secuencias completas de nucleótidos y
aminoácidos de los Hsfs identificados se
proporcionan como información en nuestra
nueva base de datos (www.cibiv.at/services/hsf).
Las familias Hsf de 14 especies de plantas
adicionales con secuenciación de genomas muy
avanzada se compilan en la Tabla S1, y los datos
correspondientes también se incluyen en la
nueva base de datos. Nuestra encuesta reveló
que la familia Hsf de Arabidopsis tiene solo 21
miembros considerablemente pequeños, y está
cerca de las familias más pequeñas observadas
hasta ahora en angiospermas con 18 o 19 Hsfs
como se encontró para Ricinus , Vitis , Citrus y
Carica (Tablas 1 y S1) . El número de Hsfs en
otras especies de plantas es típicamente más alto
con un máximo actual de 52 genes Hsf
identificados en la soja. La multiplicidad de Hsfs
en las angiospermas es presumiblemente el
resultado de duplicaciones de genes y
duplicaciones de genoma completo (DAG) en
diferentes puntos de evolución, seguido de una
extensa pérdida de genes ( paleodiploidización ).
La diversificación de los duplicados restantes
tanto en secuencia como en función condujo a
los conjuntos de Hsfs en las angiospermas
contemporáneas. Presumiblemente, los WGD
específicos de linaje dentro de las angiospermas
son la causa de un número variable de Hsfs entre
diferentes especies de plantas. Por ejemplo, en la
evolución del linaje de Arabidopsis, se supone
que al menos dos rondas adicionales de WGD
tuvieron lugar aproximadamente hace 60-70 y
23-43 Myr [60]. Desde entonces, la mayoría de
los duplicados se han perdido. Por el contrario,
en el linaje de la soja también se han producido
dos rondas de WGD, sin embargo, estos eventos
fueron más recientes (~ 59 y ~ 13 millones de
años, respectivamente [61]). Esto puede explicar
el número mucho mayor de 52 genes que
codifican Hsf para la soja y la coexistencia de 2–
3 miembros muy relacionados de Hsfs en los
grupos individuales (Tabla 1). Para obtener una
mejor visión general de las relaciones evolutivas
de los Hsfs individuales detectados y anotados
por nosotros, y para capturar los eventos
evolutivos que formaron las familias Hsf
contemporáneas , calculamos un árbol
filogenético para los 252 Hsfs . Para garantizar
que solo se usaron secuencias homólogas para la
reconstrucción del árbol, limitamos el análisis a
las partes N-terminales de las proteínas que
contienen el DBD y el OD (ver flecha de doble
punta en la parte superior de la Fig. 1). Para
mejorar la legibilidad del árbol filogenético
resultante, colapsamos clados que representan el
mismo tipo y subtipo Hsf , respectivamente (Fig.
3). El árbol completamente expandido se
muestra en la figura complementaria S1. El
árbol filogenético refleja fielmente la
clasificación de los Hsfs basada en las
secuencias de firma (véase la Sección 2.7), lo
que indica que el sistema de anotación actual de
Hsfs refleja en general las relaciones evolutivas
de las secuencias. Aunque claramente separados
en grupos distintos, la mayoría de los tipos Hsf
están presentes tanto en eudicots como en
monocotiledóneas. Esto tiene un aspecto
interesante para la evolución del sistema Hsf en
las plantas. Ya el último ancestro común de las
plantas con flores tenía una familia Hsf cuya
composición se parecía a la de las especies
contemporáneas. Los datos preliminares sobre la
composición de las familias Hsf en coníferas
(gimnospermas) indican desviaciones
considerables del patrón encontrado en las
angiospermas. A pesar de la similitud general
entre monocotiledóneas y eudicots , también hay
diferencias claras. Los representantes de HsfA9,
HsfB3 y HsfB5 están confinados a los eudicots y
los tipos correspondientes surgieron
presumiblemente después de la división de
monocotiledóneas y eudicots . La situación aún
no está clara para la función HsfA9 en
monocotiledóneas (ver Sección 4.8). Sin
embargo, la diferencia más marcada entre
monocotiledóneas y eudicots es la complejidad
sustancialmente mayor del grupo HsfC en
monocotiledóneas. Las duplicaciones de genes
en el linaje de monocotiledóneas condujeron a la
aparición de los tipos específicos de
monocotiledóneas C1a, C1b, C2a y C2b. Las
consecuencias funcionales de esta expansión aún
no se han determinado. En el árbol filogenético
(Fig. 3), hemos seguido la nomenclatura original
tal como se calculó para la familia Arabidopsis
Hsf [1] y luego se aplicó también a la familia
Hsf de arroz [18, 59]. Sin embargo, nuestro
creciente conocimiento con ahora 23 especies de
plantas y sus conjuntos completos de Hsfs, por
un lado, y herramientas bioinformáticas más
refinadas , por otro lado, condujeron a pocos
cambios y adiciones importantes:
- Nuestra asignación anterior de Hsfs en el grupo
de arroz Hsf A2 / A6 / A7 estrechamente
relacionado ([18], véase también [59]) tuvo que
revisarse y adaptarse a la nueva complejidad con
tres representantes para HsfA2 y dos para Hsfs.
A6 y A7. - Debido a la falta de similitudes con
el grupo de eudicots HsfA9 específico de semilla
(ver Sección 4.8), el arroz original HsfA9 fue
reemplazado en un nuevo grupo HsfA8 junto
con los representantes correspondientes de otras
monocotiledóneas. Queda por demostrar si las
monocotiledóneas también poseen un tipo HsfA
específico de semilla equivalente a HsfA9 (ver
Sección 4.8) y si el nuevo grupo
monocotiledóneo HsfA8 no solo está
filogenéticamente, sino también funcionalmente
relacionado con el subtipo HsfA8 de eudicots . -
Se identificaron tres representantes inusuales de
genes similares a Hsf en el genoma del tomate.
Parecen únicos, y su expresión y posible papel
dentro de la familia Hsf queda por analizar.
3.2. Los no plantas hsfs La multiplicidad de la
floración planta hsfs está en agudo contraste con
la situación en la mayoría de otros organismos.
Los Hsfs únicos en la levadura Saccharomyces
cerevisiae , en los nematodos y en Drosophila no
solo son necesarios para la respuesta de HS. Por
lo tanto, la alteración del gen Hsf en la levadura
es letal incluso a temperaturas de crecimiento
normales [62, 63]. Aunque la levadura contiene
tres genes adicionales que codifican proteínas
similares a Hsf con un dominio de unión al ADN
conservado, es decir, Skn7, Mga1 y Sfl1 [37],
ninguna de estas proteínas puede reemplazar
funcionalmente a la levadura Hsf . Esto
proporciona la base para probar Hsfs
heterólogos en mutantes de levadura con
disrupción del gen hsf1 [38, 64, 65 ]. En
Drosophila, las cepas con un alelo hsf letal
condicional sobreviven, pero muestran
anormalidades en la ovogénesis y el desarrollo
larvario temprano [66]. Los recientes análisis de
inmunoprecipitación de cromatina y microarrays
confirmaron que la mayoría de los sitios de
unión de Drosophila Hsf en realidad no están
asociados con genes HS, sino con genes que
codifican proteínas del desarrollo y
reproductivas [67]. Los principales mamíferos
Hsfs sensibles a la inducción de estrés son Hsf1
en cooperación con Hsf2 [19, 31]. Sin embargo,
ambos Hsfs también tienen funciones esenciales
en los procesos de desarrollo, como la
ovogénesis, la espermatogénesis o la
diferenciación de células eritroides . En
contraste con esto, los mamíferos Hsf3 y Hsf4
tienen funciones más especializadas en la
modulación y el desarrollo de la respuesta al
estrés [20, 31]. Además, se descubrieron tres
proteínas similares a Hsf con función
desconocida en el genoma humano (HsfY1,
HsfX1 y Hsf5). Contienen el DBD pero carecen
de la región característica HR-A / B y otras
características esenciales de Hsf [20].
4. Diversificación funcional e interacciones de
Hsfs de plantas Nuestro conocimiento general
sobre los roles específicos de diferentes Hsfs en
plantas es aún limitado. Pero cada vez que se
analiza en detalle, existe una notable
diversificación funcional, y los análisis de
mutantes knock-out (KO) indican que, por lo
general, los Hsfs no pueden reemplazarse entre
sí, excepto dentro de los subtipos, por ejemplo,
de HsfA1 (para más detalles, consulte la Tabla 2
y Sección 4.2). Primero, discutiremos la
diversificación funcional con más detalle basado
en análisis de mutantes Hsf (Sección 4.1) y
luego nos enfocaremos más selectivamente en
los resultados obtenidos para Hsfs individuales
(Secciones 4.2 a 4.8).
4.1. Fenotipos y mutantes Hsf Los detalles de la
función Hsf se elaboraron generalmente
probando las formas mutantes correspondientes
en ensayos de expresión transitoria después de la
transformación mediada por PEG de
protoplastos o el bombardeo de partículas de
células de epidermis de embriones de girasol
[68] u hojas de Arabidopsis [55]. Los
experimentos condujeron a la identificación de
varios motivos / dominios funcionales, como los
motivos NLS [39], NES [38, 41], AHA [38, 42–
44], el papel del OD para las interacciones Hsf
[35, 40 , 57, 69, 70 ] y de chaperones para el
control de la función Hsf [71-73]. Para los
análisis de fenotipos mutantes Hsf en planta,
existe una colección única de líneas de inserción
de Arabidopsis en su mayoría de T-DNA
disponible públicamente en el SALK Institute
San Diego (http://signal.salk.edu/ cgi -bin /
tdnaexpress ). Estas líneas mutantes KO que
carecen de Hsfs individuales o combinaciones de
ellas obtenidas por cruce forman la base de la
mayoría de las investigaciones compiladas en la
Tabla 2. Además, varias líneas de
sobreexpresión de Hsf (OE) de Arabidopsis,
especialmente de HsfA2 (Tabla 2, grupo I, nos.
7-9) y HsfA9 (no. 15), ayudaron a aclarar las
funciones particulares de estos Hsfs para la
termotolerancia y la maduración de semillas,
respectivamente. Se obtuvieron nuevas ideas
interesantes generando plantas transgénicas que
expresan formas negativas dominantes de Hsfs
obtenidas ya sea por deleción de la CTD o por
fusión con un motivo represor quimérico (grupo
I, números 3, 10 y 12). En algunos casos, se
identificaron mutantes con pérdida de función
(LOF) como resultado de las pantallas mutantes
(grupo I, no 23). Es notable que algunas líneas
mutantes Hsf KO o LOF muestren fenotipos
claros, lo que indica que la falta de función de
estos Hsfs no puede ser compensada por otras
(números 6, 13, 14 y 20). En otros casos, sin
embargo, solo los mutantes KO dobles (n. ° 18)
o incluso los mutantes KO cuádruples dieron
efectos negativos claros (n. 5).
Complementamos los datos que se muestran en
la Tabla 2 con un grupo de mutantes
seleccionados que proporcionan información
interesante sobre la función Hsf , porque las
proteínas que interactúan con Hsf o los
componentes de la transducción de señales de
estrés se ven afectados (Tabla 2, grupo II,
números 1 a 13).
4.2. Identificación de HsfA1a como regulador
maestro en tomate Una pista esencial para la
diversificación funcional dentro del grupo
HsfA1 de tomate provino de análisis de plantas
transgénicas con derribo de la expresión de
HsfA1a como resultado del silenciamiento
génico postranscripcional ( cosupresión , plantas
CS). Estas plantas eran similares a las plantas de
tipo salvaje en todos los parámetros de
desarrollo principales, pero eran
extremadamente sensibles a las temperaturas
elevadas, porque la síntesis inducida por HS de
Hsfs A2 y B1, así como la de las chaperonas, fue
prácticamente eliminada por la eliminación de la
expresión de HsfA1a [74 ] A pesar de la
complejidad de la familia Hsf (Tabla 1), HsfA1a
parece tener una función única como regulador
maestro para la termotolerancia adquirida , y no
puede ser reemplazado por ningún otro Hsf . Es
responsable de desencadenar la respuesta de HS
y más tarde, por interacción con Hsfs A2 y B1
en una tríada funcional, afecta diferentes
aspectos de la respuesta y recuperación de HS
(Secciones 4.3 y 4.4). La composición de las
familias Hsf de tomate y Arabidopsis es en gran
medida congruente (Tabla 1). Sin embargo, no
se pudo identificar un papel comparable como
regulador maestro para ninguno de los cuatro
AtHsfA1 [75, 76]. Los mutantes KO con
knockouts simples de Hsfs A1a, A1b, A1d o
A1e, así como mutantes KO dobles o triples, no
tuvieron defectos marcados en la respuesta
global de HS y el nivel de termotolerancia a
largo plazo de Arabidopsis [75, 76]. Sin
embargo, el análisis de transcriptoma de
mutantes dobles KO indicó que estos Hsfs tienen
un cierto papel para la transcripción inducida por
HS de un subconjunto de genes, que incluye no
solo genes que codifican pequeñas proteínas de
choque térmico ( sHsps ), Hsp70 y Hsp101, sino
también genes que codifican algunos Hsfs como
HsfA2, HsfA7a, HsfB1 y HsfB2a, así como
genes que codifican enzimas metabólicas
inducidas por HS, como la inositol-3-fosfato
sintasa2 (Ips2) y galactinol sintasa 1 (GolS1). La
búsqueda del "regulador maestro" de la
respuesta de Arabidopsis HS fue exitosa cuando
se probó un mutante KO cuádruple con falta
total de los cuatro representantes de HsfA1 [77].
Sin embargo, en este caso, las plantas mutantes
no solo se vieron gravemente afectadas en la
respuesta de HS y adquirieron termotolerancia,
sino que también tuvieron marcados defectos de
desarrollo. Las diferencias aparentes entre el
tomate con un solo regulador maestro (HsfA1a,
[74]) y Arabidopsis con el grupo HsfA1 [77] son
sorprendentes. Sin embargo, no puede excluirse
que, de hecho, el tomate esté más cerca de la
situación de Arabidopsis de lo que se pensaba
antes. La situación de cosupresión en tomate,
con ARNsi generados debido a la inserción
repetida invertida en el genoma, podría haber
afectado no solo la expresión de HsfA1a como
se probó en la publicación de Mishra et al. [74]
La expresión de los otros miembros del grupo
HsfA1 de tomate no se pudo evaluar en el
momento de los experimentos. Aunque el
fenotipo normal y el desarrollo de las plantas CS
de tomate argumentan en contra de tal
interpretación, el caso necesita una nueva
investigación.
4.3. HsfA2 como potenciador inducido por HS
de la termotolerancia HsfA2 es estructural y
funcionalmente similar a HsfA1 [43], pero solo
se expresa en plantas estresadas. Sin embargo,
pertenece a las proteínas más fuertemente
inducidas en tomate, Arabidopsis y arroz que se
acumulan a altos niveles en plantas expuestas a
HS a largo plazo o ciclos repetidos de HS y
recuperación [40, 42, 74, 78-81]. Los efectos
cruciales de HsfA2 para altos niveles de
termotolerancia inducida dependen
evidentemente no solo de la abundancia de este
Hsf en plantas estresadas sino también de la
heterooligomerización con HsfA1. Juntas, las
dos proteínas forman un tipo de complejo
superactivador para los genes que codifican
Hsp , cuya actividad es mucho mayor que la de
los dos Hsfs individualmente (Fig. 5 y
referencias [40, 69]). La función superactivadora
de los heterooligómeros HsfA1 / A2 del tomate
muy probablemente refleja la combinación de
los dos tipos de dominios de activación con sus
diferentes tipos y patrones de motivos AHA. Es
tentador especular que la interacción observada
entre los Hsfs del grupo Arabidopsis HsfA1 [82]
podría tener efectos combinatorios similares,
porque los dominios de activación C-terminal de
los cuatro representantes son bastante diferentes
[38]. Además de los efectos de HsfA2 en la
termotolerancia nivel, los análisis exhaustivos de
líneas de Arabidopsis HsfA2 KO indican un
papel más amplio para la expresión de
relacionados con el estrés, no chaperonas genes
de codificación generales como GOLS1
( galactinol sintasa 1) o APX2 ( ascorbato
peroxidasa 2 ) [79, 81, 83, 84]. En apoyo de
esto, las plantas de KO fueron sensibles al HS, a
la luz alta, al estrés oxidativo y a la anoxia,
mientras que las plantas de Arabidopsis con
sobreexpresión de HsfA2 mostraron no solo
niveles más altos de termotolerancia sino
también una mayor resistencia al estrés salino /
osmótico [85, 86], oxidativo estrés [84] y anoxia
[87]. En resumen, HsfA2 puede considerarse
como uno de los reguladores clave de la
respuesta al estrés de la planta, protegiendo
también contra el daño oxidativo de los
orgánulos y la muerte celular posterior [84].
Finalmente, vale la pena notar que la expresión
de HsfA2 junto con las chaperonas Hsp90,
Hsp70 y Hsp17-CII se encontró como parte
integral del desarrollo de anteras en tomate, lo
que indica que las chaperonas preformadas
pueden ser importantes para proteger el polen en
maduración y germinación del daño por calor [7,
88, 89 ].
4.4. Tomate HsfB1 actúa como sinérgico
coactivador de HsfA1a En contraste con la clase
A hsfs , un número considerable de hsfs
asignados a clases B y C no tienen ninguna
función evidente como activadores de
transcripción en su propio [35, 38, 90]. Por el
contrario, un tetrapéptido LFGV altamente
conservado en todos los Hsfs de clase B forma el
núcleo de un dominio represor (ver Sección 4.5).
Sin embargo, bajo ciertas condiciones de
arquitectura promotora apropiada, el tomate
HsfB1 inducido por HS puede actuar como
coactivador cooperando con Hsfs clase A , como
HsfA1a. Los dos Hsfs se ensamblan en un
complejo similar al realosoma , necesario para
reclutar la proteína de unión a CREB (CBP) de
la ortóloga histológica acetil transferasa HAC1.
La formación de este complejo ternario da como
resultado una fuerte activación sinérgica de la
expresión del gen informador [35]. Además,
HsfB1 también coopera con otros activadores
transcripcionales que controlan la expresión
génica del mantenimiento de la casa . HsfB1
podría ayudar a mantener y / o restaurar la
expresión de genes de limpieza durante la HS.
Las interacciones intrigantes entre el tomate
Hsfs A1a, A2 y B1 como tríada funcional y el
papel de las chaperonas para la regulación de las
diferentes etapas de la respuesta de HS se
resumen en la Sección 5.2.
4.5. Función represora de Hsfs clase B La falta
de funciones activadoras en Hsfs clase B
condujo a la identificación de un dominio
represor en el terminal C [54]. La comparación
de la secuencia de aminoácidos entre muchos
miembros de la clase B Hsfs identificó un
motivo tetrapéptido casi invariante -LFGV-
adyacente a los grupos básicos, que
aparentemente forman el núcleo del dominio
represor. Similar - Los motivos LFGV también
se encuentran en otros factores de transcripción
de plantas que se sabe que tienen funciones
represoras, por ejemplo, ABI3 / VP1, AP2 /
ERF, MYB y GRAS [55]. Sin embargo, el papel
del motivo tetrapéptido conservado está lejos de
ser claro, porque no se han realizado análisis
mutantes apropiados, y el supuesto corepresor
aún no se ha identificado. Para sus pruebas
experimentales, Ikeda y Ohme -Takagi utilizaron
ABI3 / VP1 y solo demostraron que dos residuos
hidrofóbicos flanqueantes (subrayados) son
cruciales para la función (-LRLFGVNM-); pero
los cambios en el motivo central no fueron
probados. Curiosamente, los análisis con plantas
de doble KO de Arabidopsis hsfB1 / hsfB2b
indicaron un papel de Hsfs de clase B para la
represión de la expresión del gen HS durante la
recuperación y de la resistencia del patógeno
mediante el control de la expresión del gen
defensina Pdf1.2. Los resultados indican que
debido a la pérdida de la función represora en las
plantas mutantes dobles KO, los niveles de
ARNm de Pdf1 / 2 estaban altamente regulados.
El efecto parece ser específico del gen, porque
los niveles de ARNm de HsfA2 apenas se vieron
afectados [56]. Pero es interesante notar que los
genes que codifican Pdf1.2 se encuentran entre
los genes inducibles por HS en Arabidopsis [91].
4.6. HsfA5 actúa como represor específico del
HsfA4 antiapoptótico . Se informó una
peculiaridad funcional intrigante para dos Hsfs
de clase A relacionados con filogenéticamente
de tomate y Arabidopsis (Fig. 2). A pesar de las
similitudes estructurales, HsfA4 actúa como
potentes activadores de la expresión del gen HS,
mientras que el grupo A5 Hsfs está inactivo e
inhibe la actividad de HsfA4. Evidentemente,
HsfA5 interfiere específicamente con el estado
oligomérico activo de HsfA4 y, por lo tanto, con
su capacidad de unión al ADN [57].
Curiosamente, ni HsfA5 ni A4 interactúan con
HsfA1 o HsfA2 y viceversa, HsfA1 no puede
interactuar con Hsf A4 o A5. Sin embargo, los
detalles moleculares de esta especificidad de la
DO aún no se han aclarado. El OD de HsfA5
solo es necesario y suficiente para ejercer el
efecto represor sobre HsfA4. Los ensayos
desplegables y las pruebas de interacción de dos
híbridos de levadura han demostrado que se
prefiere la formación de heterooligómeros
HsfA4 / HsfA5 a la formación de
homooligómeros de ambos Hsfs [57]. A pesar de
la presencia de un motivo AHA de buena fe
conservado, por ejemplo -DFWEQFLTE- para
AtHsfA5, no existe una función activadora
medible de HsfA5 en las plantas. Esta
observación intrigante subraya una vez más la
importancia del contexto molecular de un
motivo dado. Curiosamente, las pruebas en
ensayos de indicador monohíbrido de levadura
indican una función activadora transcripcional
normal de la CTD de AtHsfA5, si se fusiona con
la levadura Gal4-DBD, es decir, en el contexto
heterólogo. Además, como se esperaba, este
motivo AHA puede ser inactivado por la
mutación W> A [38]. El papel de HsfA5 como
represor de HsfA4 es intrigante porque hay
hallazgos experimentales sobre los niveles de
expresión alta específicos de tejido y estrés (ver
Sección 4.9) y funciones especializadas de Hsfs
A4:
( i ) Un mutante HsfA4d de arroz (spl7) con una
transición W> C en la cadena ß1 de la DBD
mostró lesiones necróticas espontáneas en hojas
maduras debido a una hipersensibilidad a
condiciones de estrés leve [92].
Desafortunadamente, el papel de este
intercambio de aminoácidos en la unión del
ADN u otras funciones HsfA4d no se estudió
más a fondo. (ii) Las plantas de Arabidopsis
transgénicas que albergan una forma mutante
negativa dominante de HsfA4a se ven afectadas
negativamente en su respuesta al estrés
oxidativo debido a la disminución de los niveles
de ascorbato peroxidasa 1 (Apx1) [93]. (iii) El
trigo y el arroz HsfA4a, pero no HsfA4d,
confirió tolerancia al cadmio (Cd) a las cepas de
levadura sensibles al Cd y a las plantas de arroz
con OE de trigo HsfA4a. De acuerdo con estas
observaciones, los niveles de transcripción de
HsfA4a aumentaron mucho en las raíces de trigo
y arroz expuestas al estrés por Cd. Además, se
descubrió que las líneas KO de arroz que
carecen de HsfA4a son hipersensibles a Cd [94].
Los resultados indican peculiaridades
interesantes en las cadenas ß1, ß2 de la DBD de
HsfA4a como base para el reconocimiento
selectivo del promotor. En comparación con
HsfA4d, solo se cambian dos residuos de Por otro lado, se demostró que el girasol HsfA9
aminoácidos. interactúa físicamente con el represor IAA27 de
la respuesta de auxina , es decir, el papel
4.7. HsfA3 como parte de la señalización de
intrigante de HsfA9 en la maduración de la
estrés por sequía La anatomía funcional del
semilla parece estar incrustado en las redes de
tomate HsfA3 es básicamente similar a HsfA1a
control hormonal dominadas por el ácido
y HsfA2, excepto que la región activadora C-
abscísico (ABA) y las auxinas [70] .
terminal parece más difusa con un patrón de
Curiosamente, la expresión de una forma
residuos de triptófano conservados (Sección 2.5,
negativa dominante de HaHsfA9 en plantas de
[44, 73]). Una investigación reciente mostró que
tabaco dio como resultado niveles drásticamente
la sequía y la expresión de HsfA3 inducida por
reducidos de sHsps específicos de semillas con
HS en Arabidopsis depende del factor de
solo efectos menores en la maduración y
transcripción DREB2A (proteína de unión al
germinación de las semillas [104]. Los últimos
elemento sensible a la deshidratación 2A), y esto
resultados indican que, en contraste con los
también es válido para los genes que codifican
supuestos anteriores, la función HsfA9 no es
Hsp18.1-CI, Hsp26.5- MII y Hsp70 [95, 96]. La
esencial para el desarrollo de la tolerancia al
sobreexpresión de DREB2A o DREB2C
estrés por desecación de semillas. En vista de la
condujo a la inducción de HsfA3 y, en
evidente falta de HsfA9 en monocotiledóneas, es
consecuencia, de otros genes relacionados con
intrigante que los datos de microarrays de arroz
HS. Esto fue acompañado por una mayor
indiquen niveles muy altos de ARNm de
tolerancia a los tratamientos de HS, mientras que
OsHsfA1a en semillas pero no en otros tejidos
los mutantes DREB2A KO mostraron una
(http://bar.utoronto.ca). El significado funcional
termotolerancia reducida [96-98]. Resultados
de esto tiene que ser demostrado.
similares se obtuvieron por sobreexpresión de la
Respectivamente, es interesante notar que, en
Zea mays DREB2A en Arabidopsis [99].
contraste con todos los demás eudicots
4.8. HsfA9 controla la expresión de Hsp durante investigados hasta ahora con generalmente un
el desarrollo de la semilla El papel único de solo gen codificador de HsfA9, Eucalyptos
HsfA9 durante el desarrollo de la semilla grandis ( Myrtaceae ) contiene al menos 17
representa otro caso de diversificación funcional. genes codificadores de HsfA9 estrechamente
HsfA9 se caracterizó como un Hsf especializado relacionados, además del conjunto normal de
para embriogénesis y maduración de semillas en otros 20 Hsfs ( Tabla S1). Será interesante
girasol y Arabidopsis [68, 100, 101 ]. En el investigar los patrones de expresión de estos
desarrollo de semillas de Arabidopsis, la genes HsfA9 y dilucidar la importancia
expresión de HsfA9 está controlada por el factor funcional de esta sorprendente expansión del
de transcripción ABI3 ( ácido abscísico grupo A9.
insensible a 3) [101]. La expresión ectópica de
4.9. Diversificación por expresión Aunque los
HsfA9 causó la formación de sHsps y Hsp101
análisis funcionales detallados de Hsfs se limitan
en hojas sin condiciones de tensión [101], y la
a los ejemplos descritos anteriormente, los datos
sobreexpresión de HsfA9 de girasol (Helianthus
completos de expresión de microarrays
annuus , Ha) solo o junto con HaDREB2 en
compilados en la base de datos AtGenExpress
semillas de tabaco aumentó la acumulación de
(https://www.genevestigator.com;
Hsps y mejoró la longevidad de las semillas
http://jsp.weigelworld.org/expviz/ ;
[102, 103] Por lo tanto, el papel independiente
http://bar.utoronto.ca) proporcionó la base para
de HS de HsfA9 probablemente resulta de su
una visión más detallada del transcriptoma Hsf
cooperación con otros factores de transcripción
de Arabidopsis durante el desarrollo, así como
del desarrollo como ABI3 o DREB2 formados
durante las respuestas de estrés abiótico y
durante la maduración de la semilla [100, 101].
biótico [105-108]. Los mayoría de los
sorprendentes resultados pueden resumirse como
sigue :
(i) Los patrones de expresión de Hsf en
diferentes órganos indican que los cuatro
miembros del grupo HsfA1 se expresan
constitutivamente a niveles bajos en la mayoría
de los órganos. Como ya se mencionó, HsfA9 se
expresa exclusivamente durante la maduración
de la semilla, y las transcripciones de Hsfs A1a,
A4c y A5 se encuentran principalmente en el
desarrollo de anteras y / o polen. Las
transcripciones de Hsfs A4c, A7a, B1 y C1 están
enriquecidas en raíces, y las de Hsfs A4c, A8 y
B2a son más altas en hojas. (ii)
Independientemente del tejido, la expresión de
HsfA2 y, en cierta medida, también de Hsfs
A1d, A4a, A4c, A7a, A7b, A8, B1, B2a, B2b,
B4 y C1 son inducidas por diferentes estresores
abióticos, particularmente en raíces (iii) Las
transcripciones que codifican Hsfs A1e, A3,
A4a, A4c, A6b, A8, B2a y C1 son
particularmente prominentes en muestras de
estrés osmótico, salino y frío. (iv) Las
transcripciones que codifican Hsfs A2, A4a, A8
y B1 se inducen en respuesta a diversos
estresores bióticos.
Obviamente, los niveles de ARNm no pueden
usarse para sacar conclusiones inmediatas sobre
los niveles de proteínas. Sin embargo, pueden
señalar direcciones de futuras investigaciones.
Los datos de proteínas correspondientes para
Arabidopsis Hsfs solo están disponibles para
HsfA2 y HsfA9 [79, 101]. El resumen de los
niveles cambiantes de ARNm de las fuentes
AtGenExpress hace que sea muy probable que al
menos parte de la diversidad de Hsf resulte de
sus patrones de expresión particulares durante
diferentes situaciones de estrés y desarrollo.
Desafortunadamente, los conjuntos de datos de
complejidad comparable no están disponibles
para ninguna otra planta (http://bar.utoronto.ca).
Sin embargo, los cambios complejos de los
niveles de ARNm Hsf durante el desarrollo, así
como el estrés por calor, frío y oxidación
también se informaron para el arroz [59, 109,
110].
5. Control de la actividad de Hsf 5.1. Mamíferos
Hsf1 Debido al papel central de las chaperonas
en muchos aspectos de la biología de las células
moleculares y las enfermedades humanas, la
estructura y la función de Hsfs , especialmente
Hsf1 humanos, se estudiaron ampliamente. El
sistema de mamíferos sirve como un excelente
ejemplo para el control multinivel de la
respuesta al estrés, pero también de los procesos
de desarrollo bajo el control de Hsf1 [15, 19,
31 ]. Por lo tanto, queremos enfatizar las
similitudes y diferencias entre mamíferos y
plantas resumiendo brevemente los resultados de
las células de mamíferos (Fig. 4). Podemos
discriminar cuatro estados distintos de Hsf1
humano:
(i) Similar a los receptores de esteroides de
mamíferos [17], el Hsf1 inactivo e
hipofosforilado existe en complejos
citoplasmáticos con el complejo Hsp90. (ii) Tras
el tratamiento del estrés, por ejemplo, como
resultado de la homeostasis desequilibrada de la
proteína (respuesta de la proteína citosólica), la
liberación de Hsf1 del complejo chaperona
permite la trimerización , la importación nuclear
y la unión a secuencias de ADN que contienen
HSE. Este proceso está conectado con un
aumento de la fosforilación y sumoilación en la
región represora C-terminal del dominio HR-A /
B. Es una cuestión de especulación que, de
forma similar a la situación en Drosophila, Hsf1
se une preferiblemente a HSE en regiones de
cromatina abierta caracterizadas por
nucleosomas modificados apropiadamente y la
maquinaria de ARN polimerasa II (RNAPII)
[111], es decir, existen genes inducibles por HS
en un pre -activado estado. Curiosamente, se
informó que Hsf1 media la disminución de la
acetilación de histonas en todo el genoma, lo que
puede indicar la profunda reprogramación
transcripcional en HS [112]. (iii) La activación
de la transcripción implica la eliminación del
residuo de sumo, así como la fosforilación
adicional de los trímeros Hsf1 y la interacción
con los componentes de la maquinaria RNAPII
(SWI / SNF, complejo Mediador) para permitir
la transición del complejo RNAPII al modo de
alargamiento y la entrada de un nuevo RNAPII
en el formulario de iniciación. (iv) La atenuación
(inactivación) de Hsf1 resulta de la unión de la
maquinaria Hsp70 y la desfosforilación . En este
último paso, Hsf1 se acetila en el DBD [113]. La
unión de la chaperona se considera como un tipo
de control de retroalimentación de la actividad
de Hsf después de que se restablecen los niveles
citosólicos de las chaperonas libres. En su
función de atenuación, interactúa Hsp70 con
CoREST , un general corepressor y el
componente de la histona deacetilasa complejos
[114].
5.2. Control de la actividad de Hsf en plantas
Las observaciones iniciales con ensayos de
cambio de banda y extractos nucleares de tomate
confirmaron la unión inducible por HS de Hsfs ,
muy probablemente HsfA1a, a oligonucleótidos
que contienen HSE [78]. Similar a la situación
en las células de mamíferos (ver Sección 5.1), se
supone que la base molecular de la activación de
Hsf implica la liberación de los complejos de
chaperona Hsp90 / Hsp70 como resultado de la
respuesta de la proteína citosólica ([72, 115, 116
]. El papel de ambos sistemas de chaperona para
el control de la actividad y la estabilidad de
HsfA1a, HsfB1 y HsfA2 son complejos, y las
interacciones subyacentes y las funciones
específicas parecen ser muy específicas para
ambos socios, Hsfs y chaperones
respectivamente ([72, 116–120]. Se resumen
más detalles en la Fig. 5. Además, la actividad y
disponibilidad del HsfA2 dominante en células
estresadas a largo plazo está bajo el control de
pequeños Hsps . Hsp17-CII interactúa
directamente con HsfA2 formando complejos
inactivos que finalmente se acumulan en
agregados de proteínas gigantes (gránulos de
estrés por calor, Fig. 5C y referencias [40, 71]).
La liberación de HsfA2 de los sitios de
almacenamiento inactivos requiere Hsp17-CI y
probablemente Hsp101 y la maquinaria Hsp70
(Fig. 5D, [71, 73]). Por otro lado, la función de
HsfA2 en Arabidopsis se demostró que dependía
de ROF1 / FKBP62 y ROF2 / FKBP65, que son
prolil cis / trans isomerasa cochaperonas de la
maquinaria Hsp90 [121-123]. El descubrimiento
de una proteína de unión a Hsf (HSBP1) como
regulador negativo de Hsf1 humano [124]
condujo a la identificación de proteínas similares
también en plantas. En el maíz, un embrión
mutante letal emp2 (pericarpio 2 vacío) de hecho
resulta de EMP2 no funcional, que es uno de los
dos HSBP ortólogos de maíz. Se puede
especular que el control de la función Hsf por
EMP2 (HSBP1) es obligatorio para la
embriogénesis normal. Los posibles socios de
interacción de EMP2 se identificaron como
HsfA2a, HsfA3, HsfA4d y HsfA5, mientras que
el segundo miembro, HSBP2 del maíz,
interactúa con Hsfs A6a y A4a y no puede
reemplazar EMP2. No se observó interacción
con la clase B o C Hsfs [125]. El Arabidopsis
HSBP también se caracterizó como potencial
regulador negativo de las actividades de Hsf por
interacción con Hsfs A1a, A1b y A2. Además,
de forma similar al maíz, los mutantes HSBP
KO de Arabidopsis son defectuosos en el
desarrollo de semillas [126]. Partes importantes
de la respuesta y recuperación de HS de la planta
a nivel transcripcional están evidentemente
reguladas por una tríada de Hsfs que interactúan
funcionalmente representados en tomate por
HsfA1a, HsfA2 y HsfB1 (Fig. 5). Se conocen
muchos datos sobre la función de estos Hsfs,
incluidas las interacciones de chaperonas [35,
40, 69, 71, 72, 74 ]. En contraste con esto,
nuestro conocimiento sobre las modificaciones
de Hsf de la planta es muy fragmentario.
Aparentemente, no hay una red comparable a la
resumida para Hsf1 humano en la Fig. 4. En
Arabidopsis, la sumoilación de HsfA2 en
Lys315 cerca del extremo C inhibe la actividad
de HsfA2 causando síntesis de Hsp reducida y
niveles de termotolerancia [127]. Por otro lado,
la activación dependiente de Ca2 + de MAP
quinasas bajo HS puede dar como resultado la
fosforilación de Hsfs y / o chaperonas; pero los
detalles esenciales quedan por aclarar [128,
129].
5.3. La respuesta de la proteína desplegada
basada en ER de las plantas El concepto de
acumulación y agregación de proteínas
desnaturalizadas en el citoplasma como parte del
sistema de detección de estrés (respuesta de la
proteína citosólica) que conduce a la activación
de Hsf es ampliamente aceptado (ver Secciones
5.1 y 5.2). Pero lo mismo es cierto para la sala
de emergencias como segundo compartimento
celular principal con actividades de plegamiento
y procesamiento de proteínas. La respuesta de
proteína desplegada (UPR) basada en ER en
eucariotas es responsable del ajuste de los
niveles de chaperona a la necesidad de
procesamiento de proteínas en este
compartimento [130, 131]. Los mecanismos de
señalización en las plantas implican precursores
unidos a la membrana ER de factores de
transcripción bZip que sufren escisión
proteolítica y transporte nuclear en el EPU [132-
134]. Formación de otro bZip factor de
resultados de por estrés activación del factor de
empalme IRE1b requiere para la generación de
la madurar bZip60 ARNm [135]. Entre las
proteínas recién sintetizadas se encuentran las
chaperonas específicas de ER como BiP y BAG
como proteína antiapoptótica [136].
5.4. Efectos epigenéticos de la respuesta al estrés
Es bien sabido que la modificación del estado de
cromatina es una parte integral de la expresión
diferencial de genes. Los patrones de genes
preactivados o silenciados marcados por la
metilación del ADN, la asociación con ARN no
codificantes y las modificaciones de
nucleosomas se propagan de manera estable en
un linaje celular dado [137-144]. En todos los
eucariotas, los patrones de modificación de las
histonas cambian rápidamente en el proceso de
activación y transcripción génica (código de
histona, [137]). Como se esperaba, esto también
es parte de la respuesta al estrés de la planta
[145, 146]. Además, los nucleosomas también se
diversifican mediante la incorporación de
variantes de histonas, por ejemplo, del extendido
H2A.Z, que es un marcador importante para la
memoria epigenética del estado de la cromatina
[147-149]. Kumar y Wigge [150] informaron
que los nucleosomas que contienen H2A.Z están
asociados con genes de Arabidopsis que
responden al calor y al frío y que H2A.Z se
libera tras la inducción de estrés. De acuerdo con
esto, las plantas con deficiencia de H2A.Z en sus
nucleosomas exhiben genes HS
constitutivamente regulados . Otro aspecto de la
respuesta de HS con respecto a la estructura de
la cromatina y las variaciones epigenéticas es la
activación transitoria de elementos repetitivos o
grupos de genes silenciados cerca de las
regiones centroméricas [151], así como la
pérdida transitoria del silenciamiento de genes
epigenéticos [152].
6. Mecanismos de señalización e integración del
estrés Con el descubrimiento de que los
miembros de las familias Hsp actúan como
chaperonas moleculares involucradas en muchos
aspectos de la homeostasis de las proteínas y la
señalización celular ([153]; ver Introducción), el
concepto general de señalización HS siempre se
centró en la disrupción de la homeostasis de la
proteína citosólica y el agotamiento del conjunto
de chaperonas libres como base de la activación
de Hsf (ver Secciones 5.1 y 5.2). Pero, por
supuesto, muchas otras partes de las células,
como las membranas, el citoesqueleto y las
redes metabólicas, perciben los cambios de
temperatura y crean señales, por ejemplo, Ca2 +,
óxido nítrico (NO), especies reactivas de
oxígeno (ROS), metabolitos, señales de lípidos,
que en conjunto contribuyen a la complejidad de
diversos sistemas de respuesta de temperatura.
Por lo tanto, con respecto a la transducción de
señales, nos enfrentamos al problema de varios,
si no muchos, "termómetros" diferentes [154-
157]. De hecho, la transcripción controlada por
Hsf de los genes que codifican Hsp es solo una
pequeña parte del programa general de respuesta
celular HS, que afecta a muchas funciones de
mantenimiento y desarrollo de las plantas [2].
Lo mismo es cierto para los mecanismos y
componentes que contribuyen a la tolerancia al
estrés. Muchos otros factores de transcripción
[101, 145, 158–160], proteínas y metabolitos
inducidos por el estrés, pequeños ARN no
codificantes, así como hormonas del estrés como
el etileno (ETH), ABA, ácido salicílico (SA) y
ácido jasmónico (JA ) son partes integrales de la
respuesta altamente compleja de las plantas
como organismos completos en un ambiente
estresante [5, 6, 91, 101, 161–165]. Es casi
trivial afirmar que nuestra discusión centrada en
HS y Hsfs por sí sola no refleja la situación
habitual de las plantas en su entorno natural
cuando los períodos de alta temperatura
generalmente se combinan con deficiencia de
agua, privación de nutrientes, mucha luz y estrés
oxidativo. La complejidad de modificación de
estos normales multistress situaciones se ilustra
mejor por análisis de microarrays de patrones de
expresión génica como compilado para
Arabidopsis en el AtGenExpress iniciativa
(véase la Sección 4.9, [4, 166-168] o integrales
de análisis de los cambios metabólicos [163,
169- 171]. Sin duda, mejorar el conocimiento
sobre tales cambios inducidos por el estrés es
esencial para mejorar la tolerancia al estrés y la
productividad de las plantas culturales en un
período de cambios climáticos globales [6, 9].
En el marco de esta revisión sobre la estructura y
función de Hsf , No podemos entrar en todos los
detalles interesantes de la integración del estrés,
pero para ilustrar el ungüento , nos gustaría
mencionar brevemente algunos ejemplos
relevantes que indican la estrecha conexión de la
señalización de Hsf con otras partes de la
respuesta al estrés.
- Mediante la detección de mutantes de
Arabidopsis con defectos en la termotolerancia
(mutantes calientes), Lee et al. [172] identificó
un mutante de Snitrosoglutatión reductasa .
Evidentemente, NO la homeostasis es esencial
para la termotolerancia y el desarrollo, y NO las
plantas superproductoras exhiben fenotipos
termosensibles . El cribado original identificó
también mutantes con defectos en la síntesis
ABA y SA, señalización ETH, sensibilidad UV
y señalización ROS [173], y ninguno de estos
mutantes con defectos en la termotolerancia
había reducido los niveles de Hsps . Esto indica
que, además de Hsps , muchos otros
componentes contribuyen significativamente a la
tolerancia al estrés de las plantas. - La respuesta
HS del musgo Physcomitrella patens coincide
con la activación de los canales de Ca2 + y, a
temperaturas de control, puede ser imitada por
las perturbaciones de la fluidez de la membrana
[174]. Por otro lado, la señalización de Ca2 + es
fundamental para muchos otros sistemas de
respuesta al estrés y hormonal estrechamente
relacionados con los cambios complejos de los
patrones de fosforilación de proteínas [175,
176]. De acuerdo con esto, la proteína de unión a
Ca2 + calmodulina 3 (CaM3) en Arabidopsis es
crucial para altos niveles de termotolerancia
adquirida [177], y Ca2 + -CaM3 actúa aguas
abajo de la señalización de NO [178]. - El
equilibrio de ROS es importante para la
supervivencia y la señalización no solo en las
plantas. Además del daño oxidativo de las
proteínas como parte de la respuesta de la
proteína citosólica, las ROS tienen funciones
directas como señales de HS [8, 179, 180 ]. Los
eliminadores de ROS como el ascorbato
deterioran la expresión de chaperonas inducida
por HS. - MBF1c ( factor de puente de
multiproteína 1c) es un coactivador de la
transcripción de eucariotas altamente conservado
. En Arabidopsis, se demostró que estaba
involucrado en la respuesta a ETH, así como a la
expresión de termotolerancia sin afectar los
niveles de Hsp . MBF1c coopera con el factor de
transcripción WRKY39, que es bien conocido
por su papel en las vías de señalización SA y JA.
Los efectos sobre la termotolerancia niveles
reflejan evidentemente el papel esencial de las
hormonas del estrés y la síntesis de los
metabolitos de estrés tales como trehalosa ,
poliaminas, prolina y glicina betaína para la
tolerancia al estrés [160, 173, 180, 181 ] -
inducida-HS A lipocalina representa una familia
de proteínas conservadas que se encuentran tanto
en procariotas como en eucariotas. Su
importancia para la termotolerancia basal y
adquirida en Arabidopsis indica que la
peroxidación lipídica causa un daño grave en la
membrana y probablemente desencadena la
respuesta de muerte celular (apoptosis) en
condiciones de HS [182]. - La expresión de
AtHsfs A6a y A6b aumenta mucho en
condiciones de estrés por sal y frío (ver Sección
4.9, [106]). El papel especial de estos dos Hsfs
para la respuesta al estrés por sal y sequía fue
confirmado por Yoshida et al. [183] utilizando
mutantes de señalización ABA con triple KO de
los tres factores de transcripción dependientes
ABA conocidos AREB1, AREB2 y ABF3. Los
tres se caracterizaron como reguladores maestros
de la expresión de genes sensibles a la sequía en
la señalización dependiente de ABA en
respuesta al estrés por deficiencia de agua [183].
El análisis de microarrays de los patrones de
expresión de ARN de Arabidopsis areb1 /
areb2 / abf3 triples mutantes mostró una mayor
sensibilidad a la sequía y una expresión
marcadamente deteriorada de genes sensibles a
la sequía, entre ellos Hsfs A6a y A6b.
Desafortunadamente, faltan estudios sobre
posibles genes objetivo de Hsfs A6a y A6b 7.
Observaciones finales La sorprendente
multiplicidad de Hsfs en plantas con flores en el
rango de ~ 20-50 miembros y patrones
conservados de diversificación estructural y
funcional entre Hsfs individuales se correlaciona
con el notable perfección en la adaptación de las
plantas terrestres al crecimiento y la
supervivencia en una amplia variedad de
situaciones de estrés. La función básica de los
Hsfs de clase A como activadores de la
expresión del gen HS, como se observa para
Hsfs en todos los organismos eucariotas, se
complementa con roles adicionales en el
desarrollo de las plantas y diferentes respuestas
al estrés. Aunque no se analizan con suficiente
detalle, los miembros de la clase B Hsfs en su
mayoría no tienen función activadora, sino que
actúan como represores de la expresión génica.
No se sabe nada sobre el posible papel de la
clase C Hsfs con cuatro o más representantes en
monocotiledóneas. Aunque se estudió solo para
algunos ejemplos, las chaperonas (Hsp90, Hsp70
y Hsp17) están evidentemente involucradas en el
control de la actividad, la localización
intracelular y la estabilidad de los Hsfs de la
planta . Sin embargo, toda la complejidad de las
interacciones o la cooperación entre los
miembros individuales de la familia o de Hsfs
con supuestos coactivadores y corepresores,
respectivamente, está emergiendo.