Prácticas de Enzimología. Zoila F.

Honorio Durand

Universidad Nacional José Faustino Sánchez Carrión

FACULTAD DE CIENCIAS

ESCUELA PROFESIONAL DE BIOLOGÍA CON

MENCIÓN EN BIOTECNOLOGÍA

MANUAL DE PRACTICAS DE ENZIMOLOGIA

MODALIDAD VIRTUAL

Docente: Dra. ZOILA F. HONORIO DURAND

HUACHO

2021

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Prácticas de Enzimología. Zoila F. Honorio Durand

PRESENTACIÓN

El MANUAL DE PRÁCTICAS DE BIOQUIMICA (MODALIDAD VIRTUAL), está diseñada para las

sesiones sincrónicas y asincrónicas, con la finalidad de que sientas estar presente en el
laboratorio con tus compañeros y docentes.

Se recomienda que leas previamente la práctica que vas a realizar, para ello consulta el
Manual, libros virtuales o impresos a fin de que amplíes tus conocimientos y aclare las
dudas, procurando entender el porqué de los hechos, observar en forma minuciosa y
analítica a cada uno de los cambios que se presenten en las reacciones.
Escribe tus observaciones y busca la explicación científica y refuerza los aspectos
teóricos del curso.

Juntos podemos desarrollar tus capacidades en el uso de los materiales y los reactivos
con las debidas precauciones; que manejes los equipos con cuidado y destreza,
participes en los trabajos en grupo con eficiencia y cooperación en la solución de
problemas.

Los métodos y técnicas empleadas son la gravimetría, volumetría, potenciometría y

espectrofotometría en la preparación de las soluciones adecuadas para la extracción,
purificación de enzimas y su evaluación catalítica de los enzimas.

Lee el MANUAL DE PRÁCTICAS DE ENZIMOLOGÍA con anticipación para minimizar los

errores que se puedan cometer por la falta del dominio en la técnica a aplicar y en los
resultados.

Dra. Zoila F Honorio Durand

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Prácticas de Enzimología. Zoila F. Honorio Durand

Práctica N° 01

POTENCIOMETRÍA

I.- GENERALIDADES. -

Los protones (H+) libres, productos de la autoinización del agua, de los ácidos orgánicos,
productos de procesos metabólicos, catabolismo de proteínas y otros da lugar a un grado de a
acidez que depende de la concentración de éste (H+). Por ejemplo, en la sangre de un hombre
aparentemente normal contiene 40 nanomoles de H+/litro, responsable del valor de pH de la
sangre aplicando el logaritmo negativo de la [H+]

pH = - (log [H+] )
pH = - (log 40 x 10-9 )
pH = 7.4.

En la práctica los valores de pH de soluciones biológica y otros relacionados con la función del
agua como disolvente se va a medir directamente con el POTENCIÓMETRO.

II.- FUNDAMENTO

El potenciómetro es un quipo diseñado para medir cambios electroquímicos que se produce

en las reacciones químicas en las que hay transferencias de electrones.

Cuando el potenciómetro se usa para medir el pH es porque mide la diferencia de potencial

eléctrico entre un electrodo de pH y un electrodo de referencia conocido como CALOMEL, el
cual está conformado por un sistema de medición de mercurio y cloruro mercurio so
(Hg/ClHg), el cual debe estar calibrado con el electrodo de hidrógeno.

TIPOS DE ELECTRODOS:

1. Metálicos (Zn y Cu)

2. Metálicos-sal insoluble (Plata/Cloruro de plata
3. Gaseosos (Hidrógeno)
4. Electrodos selectivos de iones (aniones o cationes)
5. Calomel saturado (Mercurio metálico y cloruro mercurio so)
6. Vidrio (Electrodo selectivo para H+)

El electrodo de vidrio: es un electrodo de membrana que presenta Ag/AgCl que contiene ácido
clorhídrico 0,1M.
El bulbo está conformado por silicato (Na2O, CaO y SiO2) Na. La cara interna bañada por el
HCl 0,1M y la cara externa sensible a H+ presentes en la solución problema; en el interior el
Na+ del silicato es desplazado por el H+ cuando se establece la diferencia entre los H+ interno
y los H+ de la solución problema por lo que el Na+ que conducen la corriente dentro de ella .

Para que el electrodo funcione bien es necesario que ambas caras de la membrana estén bien
hidratadas para que exista el intercambio de Na+ y H+, por lo que debe conservarse sumergido
en agua o en una disolución acuosa de KCl.

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Prácticas de Enzimología. Zoila F. Honorio Durand

El voltaje medido es la diferencia entre el potencial del electrodo de vidrio y el electrodo de

referencia, calomel, cuando ambos se sumergen en la solución problema.

En el laboratorio tenemos los dos electrodos (de vidrio o membrana y el calomel o de

referencia en un solo tubo separados por zonas, observe la siguiente figura.

Fuente: Internet

III. PROCEDIMIENTO

Ingresar al link: https://phet.colorado.edu/sims/html/ph-scale/latest/ph-scale_en.html

a. Mida el pH de las 12 muestras

b. Exprese las moles de protones e hidroxilos en cada uno de los valores de pH
c. Interprete los valores de las concentraciones de las moléculas ácido y base en 500ml
de solución

INTERPRETA LOS RESULTADOS CONSULTANDO BIBLIOGRAFÍA

ESCRIBE LOS DATOS DE LA BIBLIOGRAFIA CONSULTADA USANDO EL ESTILO APA, versión última