Informe N°2 Medios de Cultivo y Siembra de Bacterias

UNIVERSIDAD NACIONAL DEL CALLAO
Facultad de Ingeniería Química
UNIVERSIDAD NACIONAL DEL

CALLAO
LABORATORIO DE MICROBIOLOGÍA
SEMESTRE 2021-A
INFORME N°2: Preparación de Medios de Cultivo

y Siembra de bacterias
Docente: Dra. Sonia Herrera Sánchez

Integrantes:
- Escobedo Flores Josué
- Kaira Delgado Jhenifer
- Rivas Astuhuaman Yasmin
- Rodríguez Baldeón Brandon Lee
1
INFORME 2: “MEDIOS DE CULTIVO Y SIEMBRA DE BACTERIAS”
INDICE
PREPARACIÓN DE MEDIOS DE CULTIVO ............................................................................................ 4
1. INTRODUCCIÓN ........................................................................................................... 4
2. OBJETIVOS ................................................................................................................... 5
3. MARCO TEÓRICO ......................................................................................................... 6
3.1 MEDIOS DE CULTIVO ....................................................................................................... 6
3.2 CONSTITUYENTES DE LOS MEDIOS DE CULTIVO ............................................................. 6
3.3 TIPOS DE MEDIOS DE CULTIVO ....................................................................................... 7
3.4 SIEMBRA Y ALIMENTO DE MICROORGANISMOS ............................................................ 9
3.5 CULTIVO EN MEDIO SÓLIDO .......................................................................................... 10
3.6 CULTIVO EN MEDIO SEMISÓLIDO ................................................................................. 10
3.7 CULTIVO EN MEDIO LÍQUIDO ........................................................................................ 11
3.8 MÉTODOS GENERALES .................................................................................................. 12
3.9 POR MEZCLA .................................................................................................................. 12
3.10 MÉTODOS ESPECIALES .................................................................................................. 13
4. PROCEDIMIENTO EXPERIMENTAL ............................................................................. 14
4.1 EQUIPOS Y MATERIALES ................................................................................................ 14
4.2 EXPLICACIÓN DE LA PARTE EXPERIMENTAL .................................................................. 16
5. RESULTADOS .............................................................................................................. 21
6. DISCUSIÓN ................................................................................................................. 22
7. RECOMENDACIONES ................................................................................................. 23
8. CUESTIONARIO .......................................................................................................... 24
8.1 ¿Qué cuidados deben tenerse al preparar un medio de cultivo sólido en caja de Petri?
24
8.2 ¿De los siguientes medios, mencionar en qué consiste su capacidad diferencial o
selectiva y qué tipos de microorganismos crecen en ellos? Agar Rosa de Bengala y Agar Papa
Dextrosa. ................................................................................................................................... 24
8.3 ¿Cuál es la función de los colorantes e indicadores en los medios de cultivo? ............ 25
8.4 De los medios usados indica cuáles son específicos para mohos y cuáles para bacterias
y ¿por qué? ................................................................................................................................ 25
8.5 Cuando se siembran hongos en medio líquido, describe cómo es el crecimiento con y
sin agitación............................................................................................................................... 27
8.6 ¿En qué casos se siembra en medio semisólido y cuáles son las precauciones que se
deben tomar? ............................................................................................................................ 29
2
8.7 Anota la morfología colonial de un moho y de una bacteria, indicando de que medio lo
obtuviste.................................................................................................................................... 30
9. REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS.................................................................................. 31
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PREPARACIÓN DE MEDIOS DE CULTIVO

1. INTRODUCCIÓN
Los medios de cultivo son una mezcla de nutrientes que, en concentraciones adecuadas y en
condiciones físicas óptimas, permiten el crecimiento de los microorganismos. Estos medios
son esenciales en el Laboratorio de Microbiología por lo que un control en su fabricación,
preparación, conservación y uso asegura la exactitud, confiabilidad y reproducibilidad de los
resultados obtenidos. En los laboratorios de microbiología se utilizan diferentes tipos de
medios de cultivo que pueden ser preparados en forma líquida o en forma sólida. Usualmente
para preparar un medio sólido, se parte de un medio líquido al que se le añade un agente
solidificante como el agar, la gelatina o la sílicagel.
Los medios de cultivo son preparaciones utilizadas para diferentes propósitos tales como:
aislamiento e identificación de microorganismos, prueba de esterilidad, análisis de agua,
ambientales, alimentos y productos bacteriológicos.
Los heterótrofos constan de una capacidad sintética limitada por lo necesita compuestos más
complejos eso a que las células no pueden obtener por sí mismas sus requerimientos de
nitrógeno directamente de las proteínas. Las bacterias autótrofas pueden utilizar el nitrógeno
libre, amoniaco o nitrato, de tal manera que los medios pueden ser muy simples.
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2. OBJETIVOS
Conocer los diferentes tipos de medios de cultivo existentes para el crecimiento de
microorganismo en el laboratorio.
Identificar los diferentes pasos a seguir en la preparación de un medio de cultivo.
5
3. MARCO TEÓRICO
3.1 MEDIOS DE CULTIVO
Un medio de cultivo es un conjunto de nutrientes, factores de crecimiento y otros

componentes que crean las condiciones necesarias para el desarrollo de los
microorganismos. Puede ser de tipos líquidos o semisólidos, estos constan de nutrientes
necesarios para el crecimiento o desarrollo de: Bacterias, virus, hongos, tejidos, etc.
Estos siempre van a tratar de favorecer el pH y las condiciones necesarias para los
microorganismos, en el caso de las bacterias los medios de cultivo pueden ser
específicos según la bacteria, ya sea Gram positivas o Gram negativas.
Figura 16: Medios de cultivo sólidos
Fuente: médium.com
3.2 CONSTITUYENTES DE LOS MEDIOS DE CULTIVO
A continuación, se mencionará algunos de los constituyentes habituales de los medios

de cultivo:
• Agar
Se utiliza como agente gelificante para dar solidez a los medios de cultivo.
6
En el agar bacteriológico el componente dominante es un polisacárido que se

obtiene de ciertas algas marinas y que presenta la indudable ventaja de que, a
excepción de algunos microorganismos marinos, no es utilizado como nutriente.
• Extractos
• Peptonas
• Fluidos corporales
• Sistemas amortiguadores
Figura 17: agar agar
Fuente: Wikipedia.com
3.3 TIPOS DE MEDIOS DE CULTIVO
Medio que proporcione substancias nutritivas para los microorganismos y que les
permita desarrollarse, puede ser considerado como tal. Se pueden clasificar en:
a) Por su origen
✓ Naturales: Están constituidos por substancias naturales tales como papa, leche,
huevo, sangre, etc.
✓ Artificiales: Si está elaborado con substancias de composición química conocida
se le llama sintético.
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b) Por su consistencia:
✓ Sólidos. Son aquellos que contienen un agente solidificante entre sus
componentes, normalmente agar. Se preparan en placas de Petri o en tubos en
slant (tubos con la superficie del medio inclinada).
✓ Líquidos. Se denominan caldos y se preparan en tubos o matraz Erlenmeyer.
Figura 18: Tipos de medios de

cultivo
Fuente: microbiologiavip.blogs
c) Por su composición:
✓ Medios generales. Permiten el desarrollo de una gran variedad de
microorganismos.
✓ Medios de enriquecimiento. Favorecen el crecimiento de un determinado grupo
de microorganismos, sin llegar a inhibir totalmente el crecimiento del resto.
✓ Medios selectivos. Permiten el crecimiento de un tipo de microorganismos
determinado, inhibiendo el desarrollo de los demás.
✓ Medios no selectivos: Ejemplo: caldo y agar nutritivos.
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3.4 SIEMBRA Y ALIMENTO DE MICROORGANISMOS
La siembra puede realizarse en medio líquido, sólido o semisólido, utilizando ansa, hilo,
o bien hisopo o pipeta estéril. Se debe esterilizar en la llama (hasta que todo el filamento
se haya puesto al rojo vivo) el ansa o el hilo y enfriar, antes y después de realizada la
siembra. Para transferir los microorganismos, se recomienda:
a) Medio líquido a medio líquido: utilizar pipeta Pasteur o graduada, ansa o hilo.
b) Medio líquido a medio sólido: utilizar pipeta Pasteur o graduada, ansa o hilo, e hisopo.
c) Medio sólido a medio sólido: utilizar ansa o hilo.
d) Medio sólido a medio líquido: ansa o hilo.
Luego de sembrado, el medio de cultivo se incuba a una temperatura adecuada para el

crecimiento.
Figura 19: SIEMBRA Y AISLAMIENTO DE MICROORGANISMOS
Fuente: fbioyf.unr.edu.ar/
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3.5 CULTIVO EN MEDIO SÓLIDO
• Tubos con agar inclinado
Previo a la siembra y con posterioridad a esta es importante pasar la boca del tubo
(sin la tapa) por la llama del mechero (flameado). Esta operación genera corrientes
de convección que previenen que los contaminantes del aire caigan dentro de los
recipientes. El calentamiento puede también matar los microorganismos que se
encuentren en la boca de los recipientes. Para realizar la siembra se puede utilizar el
ansa, realizando un movimiento suave sobre la superficie del agar en forma de zigzag,
desde el fondo hasta la parte superior, cuidando de no dañar el agar.
Figura 20: medios de cultivo de agar agar
Fuente: bitacora-diadia.blogspot.mx
3.6 CULTIVO EN MEDIO SEMISÓLIDO
Se utilizan tubos sin inclinar. Se siembra por picadura o punción utilizando un hilo.
Este tipo de medio contiene una proporción menor de agar que los medios sólidos. El
medio queda inoculado al introducir el hilo en profundidad, pero sin tocar el fondo del
tubo, retirándolo posteriormente por la misma trayectoria utilizada al realizar la
picadura.
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3.7 CULTIVO EN MEDIO LÍQUIDO
Habitualmente se realiza en tubos, frascos o Erlenmeyer. Antes y después de realizada

la siembra, se debe pasar la boca del recipiente (sin tapa) por la llama del mechero
(flameado). En los cultivos líquidos no tiene lugar la formación de colonias, por lo
tanto, no sirven como técnica de aislamiento. La utilización de medios de cultivo
líquidos permite la obtención de una población microbiana grande, con un elevado
número de microorganismos, para ser utilizados posteriormente.
Figura 21: medios de cultivo liquido
Fuente: microbiologiavip.blogs
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3.8 MÉTODOS GENERALES
a) Por diseminación en la superficie de un medio sólido en placa de Petri

• Agotamiento de ansa: Se flamea el ansa, se enfría y después de rozar la siembra
realizada previamente, se realizan estrías en dos placas en forma consecutiva sin
recargar el ansa.
• Depósito y posterior quemado: Se carga el ansa con la muestra y las estrías se
extienden sobre un área pequeña de la superficie de la placa. Se retira el ansa, se
quema a la llama, y luego de enfriarla en el interior de la placa se hacen nuevas
estrías por otra zona tocando ligeramente la muestra sembrada anteriormente. Este
proceso puede repetirse sucesivamente.
• Dilución previa en solución fisiológica o caldo: Se toma la muestra para aislar y
se la resuspende en solución fisiológica o caldo nutritivo, preparando luego
diluciones seriadas decimales en condiciones asépticas. Se toman las diluciones y
se estría con ellas una placa para cada una. En la dilución adecuada se obtendrán
colonias aisladas.
• Extensión en superficie con espátula de Drigalski: Aquí también pueden
prepararse diluciones decimales. Se deposita sobre la superficie de la placa una
gota o 0,1 ml de una determinada dilución del cultivo de microorganismos y se
extiende con ayuda de la espátula, previamente esterilizada por flameado, en todas
las direcciones hasta que esté completamente seco.
3.9 POR MEZCLA
Esta técnica tiene la ventaja de permitir el cálculo del número de bacterias presentes
en la muestra, si se trabaja con exactitud. Se realizan diluciones seriadas de la muestra
y se coloca en tubos estériles, por separado, el mismo volumen de cada una.
12
Figura 22: medios de cultivo por mezcla
Fuente: Merck. 2002. Microbiology
3.10 MÉTODOS ESPECIALES
Se basan en las características del germen que se quiere aislar. Hay que tener en
cuenta que puede haber gérmenes que poseen idénticos comportamientos frente a un
mismo agente físico o químico.
• Calentamiento: se utiliza para el aislamiento de gérmenes esporulados de los

no esporulados. Consiste en calentar la suspensión a 100ºC durante 10 min.
y 85ºC durante 15 o 30 min. Luego se siembra en medios sólidos.
• Agregado de álcali o ácido: tratamiento de la muestra con algunos de estos
agentes ya que existen microorganismos que los resisten y otros que no.
• Variaciones de la temperatura de incubación: incubando a dos temperaturas
distintas.
• Cambios en el pH: existen unos pocos gérmenes que pueden crecer en
medios con pH extremos.
• Presencia de sales o colorantes: debido a la capacidad de distintos
microorganismos de crecer o no en medios con sales,
sustratos, colorantes o antibióticos, se utilizan distintos medios de cultivo
con el fin de lograr su aislamiento.
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4. PROCEDIMIENTO EXPERIMENTAL
4.1 EQUIPOS Y MATERIALES

Materiales Imagen
Tubos de ensayo
Placas Petri
Mechero Bunsen
Estufa
Asa de siembra y espátula
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Agar
Queso fresco
Balanza de precisión
Vaso de precipitado y probeta
Agitador magnético
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4.2 EXPLICACIÓN DE LA PARTE EXPERIMENTAL

La muestra por analizar para este experimento es el queso fresco, considerando las
especificaciones de calidad sanitaria que este debe cumplir.
COLIFORMES
➢ Preparación del medio de cultivo BD Agar Endo:
Componentes de este medio:
DIGERIDO PEPTIDO DE TEJIDO ANIMAL 10.0g
LACTOSA 10.0g
FOSFATO DIPOTASICO DE HIDROGENO 3.5g
SULFITO SODICO 2.5g
FUCSINA BASICA 0.5g
AGAR 15.0g
(Fórmula por litro) pH final: 7,5 ± 0,2
1. Disolver 41,5g esta fórmula nos dará 1L de medio. También requiere que
agreguemos 20mL de etanol al 95%. Para este caso solo deseamos preparar 200mL,
por lo que haremos la conversión para solo usar la cantidad necesaria:
Además, tener en cuenta que esta fórmula ya contiene una fuente de carbono
(Lactosa) y también Agar, por lo cual el medio será necesariamente Sólido.
2. Una vez todo pesado será colocaran todos nuestros componentes en un matraz
(Agua, medio, etanol) y se calentará en un mechero hasta su ebullición, agitando
ocasionalmente para la correcta solución del medio.
16
3. Pasamos la solución a una botella de tapa con rosca.
4. Esterilizamos durante 1 minuto a 116 ºC, acortando al máximo los tiempos de subida
y bajada de la autoclave.
5. Dejamos enfriar nuestro medio, hasta que pueda ser manipulable.
6. Finalmente, colocaremos el medio en placas Petri, todo esto al lado de un mechero
encendido para evitar posibles contaminaciones que afecten el crecimiento de las
bacterias que sembraremos. Los 200 ml nos permitirán llenar aproximadamente 8
placas, recordar que después de llenar una placa, pasar la boquilla de la probeta por
el mechero para asegurar la asepsia del proceso.
BASE DE COLORACION ROSADA
17
➢ Realización de la siembra:
1. Marcamos el material con su nombre y grupo.
2. Realizamos la siembra en medio sólido
SALMONELLA
➢ Preparación del medio de cultivo BD Salmonella Shigella Agar:
Componentes de este medio:
PEPTONA PANCREATICA DE CARNE 5.0g
EXTRACTO DE CARNE 5.0g
SALES BILIARES 8.5g
CITRATO SODICO 10g
TIOSULFATO SODICO 8.5g
CITRATO FERRICO AMONIACAL 15.0g
LACTOSA 10.0g
ROJO NEUTRO 25.0mg
VERDE BRILLANTE 0.33mg
AGAR-AGAR 15.0g
(Fórmula por litro) pH final: 7,0 ± 01
18
1. Disolver 63 g esta fórmula nos dará 1L de medio. Para este caso solo deseamos
preparar 100 mL, por lo que haremos la conversión para solo usar la cantidad
necesaria: Además, tener en cuenta que esta fórmula ya contiene una fuente de
carbono (Lactosa) y también Agar-Agar, por lo cual el medio será necesariamente
Sólido.
2. Ahora colocamos los componentes en un matraz y calentar agitando hasta la
ebullición para una correcta disolución
3. Pasamos la solución a una botella de tapa con rosca.
4. Enviamos el matraz a la autoclave 116 ºC durante 5 minutos.
5. Dejamos enfriar nuestro medio, hasta que pueda ser manipulable.
6. Finalmente, colocaremos el medio en placas Petri, todo esto al lado de un mechero
encendido. Los 100 ml nos permitirán llenar aproximadamente 4 placas, recordar
que después de llenar una placa, pasar la boquilla de la probeta por el mechero para
asegurar la asepsia del proceso.
COLOR DEL MEDIO ROJO-NARANJA
19
➢ Realización de la siembra:
1. Marcamos el material con su nombre y grupo.
2. Realizamos la siembra en medio sólido.
Basados en el cuadro debemos asumir que esta bacteria no se encuentra en la muestra de

queso por lo cual al realizar el ensayo el medio no debería cambiar de color, pero se hallarse
la placa con el medio debería ser de color incolora con centro negro
20
5. RESULTADOS
Después de 48 a 72 horas se hace la lectura de los microorganismos sembrados y se calcula
de la siguiente manera:
𝑁° 𝑑𝑒 𝑐𝑜𝑙𝑜𝑛𝑖𝑎𝑠 𝑝𝑜𝑟 𝑝𝑙𝑎𝑐𝑎
𝑈𝐹𝐶/𝑚𝑙 =
𝑉𝑜𝑙𝑢𝑚𝑒𝑛 𝑠𝑒𝑚𝑏𝑟𝑎𝑑𝑜 𝑥 𝐷𝑖𝑠𝑜𝑙𝑢𝑐𝑖𝑜𝑛
MICROORGANISMO CLASE LIMITE “m” PROMEDIO UFC/ml

COLIMFORMES 3 5𝑥102 (3 + (5𝑥102 ))/2 251.5
SALMONELLA 2 0 (2+0) /2 1
Preparación de Disoluciones
Para preparar distintas disoluciones
𝑪𝒊 𝒙𝑽𝒊 = 𝑪𝒇 𝒙𝑽𝒇
𝑪𝒊 Fd 𝑪𝒇 𝑽𝒇 /𝑽𝒊
NaCl 5Mm 10 0.5Mm 10ml/1ml 1ml/0.1ml
Glucosa 50% 25 2% 25ml/1ml 1ml/0.04ml
𝐾2 𝐻𝑃𝑂4 100𝑔/𝐿 2 50g/L 2ml/1ml 1ml/0.5ml
103 𝑏𝑎𝑐𝑡𝑒𝑟𝑖𝑎𝑠/𝑚𝑙 100 10 bacterias/ml 100ml/1ml 1ml/0.01ml
Conteo de Coliformes
La muestra analizada del queso fresco no es apta para el consumo humano porque supera
los LMP de acuerdo a la “Norma sanitaria que establece los criterios microbiológicos de
calidad sanitaria e inocuidad para los alimentos y bebidas de consumo humano” (RM-
591-2008-MINSA).
MICROORGANISMO LMP(M) RESULTADO CONCLUSION

No es apto para
el consumo
COLIFORME 5𝑥102 − 103 𝑈𝐹𝐶/𝑔 251.5 UFC/g
humano porque
supera los LMP.
21
6. DISCUSIÓN
Actualmente en el mercado ya podemos encontrar medios específicos y parra distintos

microorganismos, y es un poco más económico que el precio de los reactivos que usas para
preparar estos medios de cultivo.
En el mercado tenemos por ejemplo el PETRIFILM que viene en paquetes, viene con un
plástico y una zona donde se adiciona la muestra, la desventaja es que todos son para el
mismo microorganismo.
Algunos autores clasifican a los medios de cultivo según su finalidad:
✓ NO SELECTIVOS: contienen suficientes nutrientes como para soportar el crecimiento

de gran variedad de microorganismos.
✓ SELECTIVOS: permiten el crecimiento de sólo un tipo de microorganismo.
✓ ENRIQUECIDO: son medios no selectivos que se le agrega sustancias como ser

sangre, suero, albúmina, etc... Para microorganismos exigentes.
✓ DIFERENCIALES: son medios de cultivo que permiten establecer diferencias entre

diferentes tipos microorganismos.
Los medios de cultivo se preparan:
1. En el laboratorio a partir de sus diferentes componentes.
2. A partir de productos en polvo deshidratados comerciales
3. Pueden adquirirse medios listos para su uso.
22
7. RECOMENDACIONES
• Lo principal antes de comenzar cualquier práctica es importante esterilizar y desinfectar

los instrumentos y superficies donde se trabajará.
• Para obtener un medio sólido debemos agregar un agente solidificante al medio líquido
y el más utilizado es el agar.
• Cuando llevamos a la autoclave el medio que está en un frasco, la tapa no debe estar
cerrada completamente para que se pueda esterilizar, y el vapor pueda entrar en el
interior.
• Para el medio sólido no olvidar que se añade 15 gramos de agar por 1 litro de medio.
• No olvidar que el agar no se disuelve a temperatura ambiente, sino que necesita de

temperaturas elevadas, por lo que se lleva a la autoclave.
• Evitar que se formen burbujas al momento de verter el medio a las placas Petri.
• Añadir al medio un componente sensible a la temperatura como antibióticos.
23
8. CUESTIONARIO
8.1 ¿Qué cuidados deben tenerse al preparar un medio de cultivo sólido en caja de Petri?
• La caja de Petri tiene que estar bien limpia y seca.
• Asegurarse de que el medio de cultivo este perfectamente fundido (sin grumos y de
un color claro) antes de ser vertido a las cajas Petri
• Preparan las placas vertiendo el medio fundido y estéril dentro de ellas y en un
ambiente aséptico.
• Es conveniente homogenizar el medio en el transcurso de la operación para evitar
que el agar sedimente en el fondo del recipiente y no se distribuya por igual en todas
las placas.
• También es posible conservar el medio destinado a preparar placas Petri
solidificado y estéril en tubos que se fundirán al baño María en el momento de la
preparación de las mismas.
• Los caldos y medios sólidos pueden conservarse, una vez esterilizados, a
temperatura ambiente, pero para reducir su deshidratación y el consiguiente cambio
en las concentraciones de sus componentes es preferible conservarlos a 4ºC.
8.2 ¿De los siguientes medios, mencionar en qué consiste su capacidad diferencial o
selectiva y qué tipos de microorganismos crecen en ellos? Agar Rosa de Bengala y Agar
Papa Dextrosa.
El medio de cultivo Rosa de Bengala es selectivo para el aislamiento y recuento de

levaduras y mohos significativos en el deterioro de alimentos. Este medio es bueno para
el aislamiento de hongos porque reduce la extensión de las colonias sin afectar la
germinación de las esporas. El cloranfenicol presente en la composición del medio
inhibe el crecimiento de la mayoría de las bacterias.
El agar papa dextrosa es un medio de cultivo nutritivo sólido, no selectivo. En él
pueden crecer especies bacterianas y fúngicas, pero su uso está indicado especialmente
para el aislamiento de hongos filamentosos y levaduras.
24
8.3 ¿Cuál es la función de los colorantes e indicadores en los medios de cultivo?
Estas sustancias se utilizan en los medios selectivos y diferenciales. Los colorantes

actúan como agentes bacteriostáticos o como inhibidores del crecimiento. Se utilizan
principalmente: Fucsina básica, Verde brillante, Verde de Malaquita, Cristal Violeta,
Eosina, Azul de Metileno, Tionina, etc.
Los indicadores son sustancias químicas que varían de color según el pH del medio.
Se utilizan en los medios diferenciales y permiten visualizar, por cambios de color del
medio de cultivo o de las colonias, la ocurrencia de distintas reacciones bioquímicas.
8.4 De los medios usados indica cuáles son específicos para mohos y cuáles para bacterias
y ¿por qué?
➢ PARA LOS MOHOS:
La mayoría de los hongos son nutricionalmente poco exigentes y desarrollan en

medios sencillos que contengan medios sencillos que contengan hidratos de carbono
como fuente de carbono (glucosa, maltosa, sacarosa, almidón, celulosa), sales de
nitrógeno inorgánico o peptonas, como fuente de nitrógeno y pequeñas cantidades de
oligoelementos (Fe, Mg, P, K Zn,Cu, Mn y Mo).
Hay tres tipos generales de medios de cultivo para mohos:
1. Medios Naturales: Trozos o infusiones de frutas, vegetales, granos de cereales o

tejidos animales. Varían mucho en su composición y no son reproducibles.
Tampoco son de amplio uso.
2. Medios Semisintéticos: Extractos de plantas, peptonas, agar y otros compuestos
son de amplio uso.
3. Medios Sintéticos: Composición química definida
25
Entre ellos los más destacados tenemos:
Medios con y sin sangre.

Medios con y sin antimicótico (cicloheximida).
Medios con antibióticos.
Agar Sabouraud: Este medio puede ser utilizado para el aislamiento,
identificación y conservación de hongos saprófitos y patógenos. Se utilizan
placas de petri o tubos con agar inclinado es uno de los métodos más utilizados.
Examinar 2 o 3 veces por semana a 30ºC o TA durante 30 días para informar
NEGATIVOS.
Medios para aislamiento primario: Agar cerebro-corazón con antibióticos y agar
extracto levadura. Aislamiento hongos patógenos
(también se usa agar sangre y Sabouraud) excepto dermatofitos (Agar Mycosel o

Sabouraud con atb)
Medios diferenciales: Agar maíz con Tween 80 y azul triptano (Candidas), agar
semilla (criptococos), otros.
➢ PARA BACTERIAS
Generalmente las bacterias son inoculadas en medios líquidos o solidificados con

agar, esta debe realizarse en zonas asépticas. Los cultivos microbianos por métodos
de dilución, en medios sólidos por estría en placa o en medio líquidos.
26
8.5 Cuando se siembran hongos en medio líquido, describe cómo es el crecimiento con
y sin agitación.
Usaremos el medio líquido que es el Agar Sabouraud, que es un medio enriquecido
para hongos.
PROCEDIMIENTO
Se humedece el asa de platino con agua estéril o con el agua de condensación de la
placa. Con el asa húmeda se toca el borde de la colonia y se resiembra:
Tocando con el asa el centro de la placa o del agar inclinado, así al crecer invadirá
toda la superficie de la placa o tubo.
Por estría
Si es un medio líquido, se sumerge el asa cargada y se agita posteriormente.
27
Para los hongos productores de micosis superficiales, la temperatura de incubación

es de 20 a 30 ºC, mientras que para micosis profundas es de 37 ºC. En general los
medios pueden incubarse a 30 ºC durante 2 semanas.
Las placas se sellan con papel parafina o cinta aislante, para evitar la desecación y
contaminación. No se invierten para evitar que las esporas caigan en la tapa.
Como se observa, el hongo ha crecido invadiendo toda la superficie. Ahora vamos a

la observación.
Para ello ponemos una gota de Azul de lactofenol en un portaobjetos y mezclamos
con la muestra, cogiendo con el asa de siembra solo la parte superior del hongo.
El azul de lactofenol permite la visualización de hongos y además tiene las siguientes

características:
El fenol destruye la flora acompañante (algunas veces en los cultivos, juntos a los
hongos pueden crecer colonias de bacterias).
28
El ácido láctico conserva las estructuras fúngicas al crear, por decirlo de algún modo,
una película que las protege provocado por un cambio de gradiente osmótico entre el
interior y el exterior de dicha estructura.
El azul de algodón (lactofenol) tiene la capacidad de adherirse a las hifas y conidios
de los hongos microscópicos.
8.6 ¿En qué casos se siembra en medio semisólido y cuáles son las precauciones que se
deben tomar?
Los medios semisólidos se emplean para estudiar la movilidad de los
microorganismos y para favorecer la separación de microorganismos con diferentes
requerimientos de oxígeno, además de que en medios líquidos es más difícil detectar
contaminación que perjudiquen el estudio. Las precauciones que se deben tomar son:
✓ Perdida de volumen en el proceso de esterilización.
✓ En el proceso de colocar la solución en las placas de Petri no se formen
burbujas.
✓ Descontaminación del material de vidrio utilizado en este caso las placas de
Petri.
✓ Parámetros de calidad como son el almacenamiento del agua utilizada,
regulación del pH (ya que algunos microorganismos no necesariamente crecen
en medio neutro).
29
8.7 Anota la morfología colonial de un moho y de una bacteria, indicando de que medio
lo obtuviste.
ASPERGILLUS FUMIGATOS
La textura de las colonias es aterciopelada, afelpada, vellosa o algo plegada, con

margen blanquecino o beige. El color inicialmente es blanco virando en
aproximadamente siete días a un verde azulado por la producción de conidias. El
reverso dela colonia es incoloro. (Ministerio de salud, 2007).
ESCHERICHIA COLI
Escherichia coli en agar Mac Conkey. Se logran ver colonias aisladas, son colonias
medianas, circulares, convexas, bordes redondeados, lactosas positivas lo que les da
coloración rosada. (Morfología colonial bacteriana en medios de cultivo, 2010).
30
9. REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS
• Cerra, H. et al (2013). Manual de Microbiología Aplicada a las Industrias

Farmacéutica, Cosmética y de Productos Médicos. Buenos Aires. Argentina.
• Morales, M. et al (2012). Manual de Microbiología. Departamento de ciencias básicas
académicas de Biología
• Cuervo, A. (2010). Manual de Protocolos de Microbiología General. Universidad de
San Buenaventuraseleccional Cali.
• Fernández. E; Santacruz. I. 2012.Manual de prácticas de laboratorio de microbiología
general – Universidad Autónoma Metropolitana
• ORGANIZACIÓN MUNDIAL DE LA SALUD Manual de Bioseguridad en el
Laboratorio Ginebra, OMS. 1983
31

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INFORME N°2: Preparación de Medios de Cultivo

Docente: Dra. Sonia Herrera Sánchez

PREPARACIÓN DE MEDIOS DE CULTIVO

3.1 MEDIOS DE CULTIVO

Un medio de cultivo es un conjunto de nutrientes, factores de crecimiento y otros

Figura 16: Medios de cultivo sólidos

3.2 CONSTITUYENTES DE LOS MEDIOS DE CULTIVO

A continuación, se mencionará algunos de los constituyentes habituales de los medios

En el agar bacteriológico el componente dominante es un polisacárido que se

Figura 17: agar agar

3.3 TIPOS DE MEDIOS DE CULTIVO

Figura 18: Tipos de medios de

3.4 SIEMBRA Y ALIMENTO DE MICROORGANISMOS

c) Medio sólido a medio sólido: utilizar ansa o hilo.

d) Medio sólido a medio líquido: ansa o hilo.

Luego de sembrado, el medio de cultivo se incuba a una temperatura adecuada para el

Figura 19: SIEMBRA Y AISLAMIENTO DE MICROORGANISMOS

3.5 CULTIVO EN MEDIO SÓLIDO

• Tubos con agar inclinado

Figura 20: medios de cultivo de agar agar

3.6 CULTIVO EN MEDIO SEMISÓLIDO

3.7 CULTIVO EN MEDIO LÍQUIDO

Habitualmente se realiza en tubos, frascos o Erlenmeyer. Antes y después de realizada

Figura 21: medios de cultivo liquido

3.8 MÉTODOS GENERALES

a) Por diseminación en la superficie de un medio sólido en placa de Petri

3.9 POR MEZCLA

Figura 22: medios de cultivo por mezcla

Fuente: Merck. 2002. Microbiology

3.10 MÉTODOS ESPECIALES

• Calentamiento: se utiliza para el aislamiento de gérmenes esporulados de los

4.1 EQUIPOS Y MATERIALES

Asa de siembra y espátula

Vaso de precipitado y probeta

4.2 EXPLICACIÓN DE LA PARTE EXPERIMENTAL

FOSFATO DIPOTASICO DE HIDROGENO 3.5g

SULFITO SODICO 2.5g

FUCSINA BASICA 0.5g

(Fórmula por litro) pH final: 7,5 ± 0,2

3. Pasamos la solución a una botella de tapa con rosca.

BASE DE COLORACION ROSADA

EXTRACTO DE CARNE 5.0g

SALES BILIARES 8.5g

CITRATO SODICO 10g

TIOSULFATO SODICO 8.5g

CITRATO FERRICO AMONIACAL 15.0g

ROJO NEUTRO 25.0mg

VERDE BRILLANTE 0.33mg

(Fórmula por litro) pH final: 7,0 ± 01

COLOR DEL MEDIO ROJO-NARANJA

1. Marcamos el material con su nombre y grupo.

2. Realizamos la siembra en medio sólido.

Basados en el cuadro debemos asumir que esta bacteria no se encuentra en la muestra de

MICROORGANISMO CLASE LIMITE “m” PROMEDIO UFC/ml

MICROORGANISMO LMP(M) RESULTADO CONCLUSION

Actualmente en el mercado ya podemos encontrar medios específicos y parra distintos

Algunos autores clasifican a los medios de cultivo según su finalidad:

✓ NO SELECTIVOS: contienen suficientes nutrientes como para soportar el crecimiento

✓ SELECTIVOS: permiten el crecimiento de sólo un tipo de microorganismo.