UNIVERSIDAD NACIONAL PEDRO RUIZ GALLO

FACULTAD CIENCIAS BIOLOGICAS

DEPARTAMENTO ACADÉMICO MICROBIOLOGÌA –
PARASITOLOGÌA

ASIGNATURA VIRTUAL
MI 401 FISIOLOGÍA Y GENÉTICA MICROBIANA
TAREA 5

Ciclo académico: VII

Semestre: 2021-I

Tarea 5: Informe de práctica: Crecimiento microbiano. Curva de crecimiento. Escala

de MacFarland. Cuenta Directa (Práctica 6)

Desempeño:

Aplica métodos de determinación del crecimiento microbiano para diferentes tipos de

microorganismos y muestras según protocolos.

Informe de la Práctica

Responsables:

• Chupillón Silva César

• De la Cruz Durand Joel
• Ortiz Medrano Brayan
• Purihuamán Rojas Lizandro
Practica 6: Crecimiento microbiano. Curva de crecimiento. Escala de
MacFarland. Cuenta Directa
I. INTRODUCCION

Crecimiento es el aumento de la cantidad de constituyentes y estructuras

celulares, cuando hay crecimiento en ausencia de división celular hay aumento en
el tamaño y peso de la célula. Mientras que cuando el crecimiento es seguido de
división celular hay un aumento en el número de células. Es importante distinguir
entre el crecimiento de células individuales y el crecimiento de poblaciones, ya
que en los microorganismos debido a su pequeño tamaño no se hacen estudios de
crecimiento individual sino estudios de crecimiento de poblaciones. El
crecimiento de una población ocurre de una manera exponencial.
El principio de la escala McFarland es reaccionar iones sulfato con iones
bario para dar como producto un precipitado de Sulfato de Bario;
estequiométricamente se determinó que el reactivo en exceso es el portador del
ion sulfato. Permite determinar en suspensiones bacterianas el número de
bacterias/mililitro, o en UFC según una escala que va de 0.5 a 10. Los estándares
pueden ser visualmente comparados con suspensiones de bacterias en SSFe. Para
asegurar la densidad correcta se puede usar espectrofotómetros.
II. OBJETIVOS

✓ Ejecutar los procedimientos de uso de la Escala de Mc Farland y la Cuenta

Directa para la determinación del número de microorganismos en cultivos
bacteriano y eucariota.

✓ Establecer las ventajas y las desventajas del uso la Escala de Mc Farland y la

Cuenta Directa.

III. MATERIALES
✓ Escala de Mc Farland (NF)
✓ Cultivo de Saccharomyces sp. caldo Sabouraud
✓ Placas de Petri con agar Sabouraud
✓ Tubos de ensayo de 180 x 100 mm con tapa hermética
✓ Cámara de Neubauer.
✓ Pipetas de 1 mL.
✓ Láminas o portaobjetos.
✓ Espátulas de Drigalsky,
✓ Mechero de alcohol, bandeja
✓ Soluciones: BaCl2 al 1%, H2SO4 al 1%, solución salina fisiológica esterilizada
✓ Microscopios ópticos con objetivo de inmersión
✓ Centrífuga y estufa graduada a 37°C
 IV. METODOLOGÍA

I. Determinación del número de microorganismos con la Escala de Mc Farland

• Obtención de la Escala de Mc Farland

2. Colocar en el primer tubo 0.1 mL de

1. Colocar en una gradilla una serie de 10 BaCl2 al 1% y luego incrementar en

tubos e identificarlos del 1 al 10 2. 0.1mL la cantidad del reactivo en los

tubos siguientes de tal manera que el
último tenga 1.0 mL del reactivo.

3. Agregar a cada tubo H2SO4 al 1% en

4. La opacidad de la mezcla se
cantidad suficiente hasta que el
incrementará a mayor número de tubos
volumen final en cada tubo sea de 10
y representará al siguiente número de
mL y cerrar herméticamente los tubos
microorganismos:
para prevenir la evaporación.

II. Determinación del número de microorganismos por Cuenta Directa

1. De los tubos A y B, sacar una pequeña

2. Contar en 5 de los 25 cuadrados
muestra y llenar la cámara de Petroff
Hausser de tal manera que ocupe la rejilla grandes los microrganismos observados.
sin que haya exceso.

4. Sacar promedio y encontrar el número

3. Comparar los resultados obtenidos con
final según la siguiente fórmula:
los de los procedimientos anteriores.
𝑁°𝑚𝑜 = 𝑋 𝑥 25 𝑥 50 𝑥 1000
 V. RESULTADOS

• Número de microrganismos según la Escala de McFarland

Escala de BaCl2 x 2H2O H2SO4/Na2SO4 Volumen Concentración celular
McFarland (0,048M) (ml) final (ml) (UFC X 108/ml)
1 0,1 9,9 3
2 0,2 9,8 6
3 0,3 9,7 9
4 0,4 9,6 12
5 0,5 9,5 15
10
6 0,6 9,4 18
7 0,7 9,3 21
8 0,8 9,2 24
9 0,9 9,1 27
10 1,0 9,0 30

Tubo A: 3x 108 ufc/ml

• Número de microorganismos observados por el Método de cuenta directa

N° Cuadrados Microorganismos Promedio Fórmula para microorganismos
presentes Total observados
1 135
2 138 𝑁°𝑚𝑜 =𝑋 𝑥 25 𝑥 50 𝑥 1000=
3 122 128 128 x 25 x 50 x 1000 =

4 120 𝑁°𝑚𝑜 = 1.6 x 108 mo /ml

5 125
Resultado:

Tubo A: 1,6 x 108 mo/ml

Tubo B: 0

VI. CONCLUSIONES
✓ Se realizaron los procedimientos de la Escala de McFarland, teniendo como
resultado para el tubo A: 3x 108 UFC/ml y en la Cuenta Directa se determinó que
los microorganismos observados para el tubo A y B son: 1,6 x 108 mo/ml y 0
respectivamente.
✓ Se determinó que el método de McFarland es más apropiado ya que no
discrimina entre las células vivas de las muertas, además la Cuenta Directa
presenta más limitaciones.

VII. REFERENCIAS

Ulloa, F. (2017). Análisis de los métodos para medir la turbidez de los inóculos y
su influencia en el antibiograma de la bacteria E.coli en urocultivos. [Tesis
para optar el título de Licenciado, Universidad Técnica de Ambato].
https://repositorio.uta.edu.ec/bitstream/123456789/10786/1/TESIS%20F
REDDY%20ULLOA.pdf

Fiallos, J. (2017). Determinación de la correlación entre Métodos Visuales,

Ópticos y Difusión en placa en el Crecimiento de Escherichia coli.
Universidad Técnica de Ambato.
https://repositorio.uta.edu.ec/bitstream/123456789/26334/1/BQ%20135.p
df
 Mateos, P. (2013). Crecimiento microbiano. Universidad de Salamanca.
http://webcd.usal.es/Web/educativo/micro2/tema07.html

Medición del crecimiento Microbiano. (2013). Universidad Nacional de México

[Archivo PDF].
http://depa.fquim.unam.mx/amyd/archivero/U4b_MedicionCrecimiento_
19837.pdf

Ramírez, S., Parra, J., y Alvarez, A. (2017). Análisis de técnicas de recuento de

Microorganismos. Universidad Libre Pereira.
https://repository.unilibre.edu.co/bitstream/handle/10901/17610/1.An%C
3%A1lisis%20de%20recuentro.pdf?sequence=1&isAllowed=y

VIII. CUESTIONARIO
1. Mencione las ventajas y desventajas del uso la Escala de McFarland en la
determinación del número de microorganismos.
La ventaja es que no es necesario incubar ni usar equipo especial para estimar
el número de bacterias. La desventaja de este método contabiliza a las
bacterias vivas y también las muertas, por lo que se puede sobreestimar la
población de bacterias.
2. Mencione las ventajas y desventajas del uso de la Cuenta Directa en la
determinación del número de microorganismos.
La ventaja es que permite al operador contar en cada cuadro del campo y luego
estimar una cantidad más exacta de microorganismo, además de poder
diferenciar bacterias vivas y muertas. La desventaja es que es más trabajoso y
se necesita ser más cuidadoso.
3. Compare los resultados de las dos experiencias e interprete.
Ambas técnicas son utilizadas, dependiendo el laboratorio, para la estimación
de la cantidad de microorganismo presentes en una muestra. Lo que permite
conocer su tasa de crecimiento y posteriormente, de ser necesario, contralarlo.
Cada técnica podría dar un resultado distinto debido a que tienen ciertas
limitantes o desventajas. Pero consideramos en este trabajo que la disertación
de bacterias muertas en la técnica de cuenta directa es un factor importante al
momento de dar un resultado.