Universidad Técnica

“LUIS VARGAS TORRES” – Esmeraldas

Facultad de Ingenierías
Carrera de Ingeniería Química

MATERIA: Análisis Instrumental.

Exposición #1 – 1er Hemisemestre

Método de calibración simple o del estándar externo para cuantificar un analito en
una muestra.

Integrantes – G2
Bermeo Molina Ricardo Hernán
Bone Quiñónez Isis Elizabeth
Verduga León Fernanda Nicole

Curso – Paralelo:
5TO – “B”

Fecha de realización:
Miércoles, 22 de enero de 2020

Fecha de entrega:
Jueves, 20 de febrero de 2020

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ÍNDICE DE TEMAS
1. OBJETIVOS ...................................................................................................................... 1

2. INTRODUCCIÓN............................................................................................................. 1

3. MARCO TEÓRICO .......................................................................................................... 1

3.1 Método de los mínimos cuadrados...................................................................................... 2

3.2 Errores en la calibración del patrón externo ....................................................................... 3

3.3 Aspectos a tener en cuenta .................................................................................................. 4

4. VALORACIÓN DEL EQUIPO SOBRE EL TEMA DESARROLLADO ....................... 4

5. CONCLUSIONES............................................................................................................. 5

6. BIBLIOGRAFÍA ............................................................................................................... 5

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1. OBJETIVOS
- Exponer los conceptos comunes (definición, uso, errores y aspectos) a todo procedimiento
analítico, relacionándolos con la etapa de calibración simple o del estándar externo que resulta
indispensables para poder comprenderla y llevarla a cabo.

2. INTRODUCCIÓN
Algunos procedimientos analíticos requieren la comparación de una propiedad del analito (o del
producto de una reacción con el analito) con estándares o patrones tales que la propiedad que se está
probando concuerde de manera muy cercana con la del estándar. (Skoog, Holler, & Crouch, 2008)
Los estándares o patrones químicos se utilizan para determinar factores de recuperación y para la
etapa de calibración. Los métodos de calibración pueden dividirse en tipos: los que utilizan estándares
externos (calibración externa) y los que utilizan estándares añadidos a la muestra.
Un estándar externo es el que se analiza separadamente de la réplica desconocida que se está
ensayando. Una serie de tales estándares contienen distintas concentraciones conocidas de analito, junto
a la matriz que es similar o idéntica a la de la muestra. (Kenneth A. Rubinson, 2001)

3. MARCO TEÓRICO
Los estándares externos pueden usarse para calibrar un procedimiento de medida, cuando los
componentes de la matriz, incluyendo los reactivos que se requieran en el preparado, no causan
interferencias. También pueden usarse para calibrar un análisis en el que el analista tiene suficiente
control sobre las medidas puedan mantenerse constantes; así puede realizarse la oportuna corrección del
error determinado por el interferente. (Kenneth A. Rubinson, 2001)
Un estándar o patrón externo se prepara por separado de la muestra. Los estándares externos se usan
para calibrar instrumentos y procedimientos cuando no hay efectos de interferencia de la matriz de
componentes sobre la disolución del analito. Se prepara una serie de tales estándares externos que
contienen el analito en concentraciones conocidas. Lo ideal es usar tres o más de las disoluciones en el
proceso de calibración. No obstante, se puede confiar en calibraciones de dos puntos en algunos análisis
de rutina.
La calibración se consigue al obtener la señal de respuesta (absorbancia, altura del pico, área del
pico) en función de la concentración conocida del analito. Una curva de calibración se prepara con una
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gráfica de los datos o ajustándoles una ecuación matemática aceptable, como la ecuación de la recta dada
por la pendiente y la ordenada al origen que se usa en el método de los mínimos cuadrados lineales. El
paso siguiente es la etapa de predicción, en la que se obtiene la señal de respuesta para la muestra y se
usa para predecir la concentración desconocida del analito 𝑪𝒙 , a partir de la curva de calibración o de la
ecuación de mejor ajuste. La concentración del analito en la muestra original se calcula luego mediante
𝑪𝒙 aplicando los factores de dilución convenientes tomados de los pasos que se siguieron para preparar
la muestra.

3.1 Método de los mínimos cuadrados

El método de los mínimos cuadrados se basa en dos suposiciones:
- La primera es que hay en realidad una relación lineal entre la respuesta medida 𝒚 y la
concentración 𝒙 del analito estándar. La relación matemática que representa esta suposición se
llama modelo de regresión, y se podría representar con 𝒚 = 𝒎𝒙 + 𝒃 donde 𝒃 es la ordenada al
origen o intersección con el eje 𝒚, es decir, el valor de 𝒚 cuando 𝒙 es cero, y 𝒎 es la pendiente
de la recta.
- También se supone que cualquier desviación de los puntos de la línea recta surge de un error en
la medición. Es decir, se supone que no hay error en los valores 𝒙 de los puntos
(concentraciones).
Ambas suposiciones son aceptables para muchos métodos analíticos, pero es necesario tener en
cuenta que siempre que haya una incertidumbre importante en los datos 𝒙, el análisis básico lineal de los
mínimos cuadrados podría no dar la mejor recta. Además, el análisis de mínimos cuadrados podría no
ser aceptable cuando la incertidumbre en los valores 𝒚 varía de manera significativa con respecto a 𝒙. En
este caso, se necesitarían aplicar diferentes factores de ponderación a los puntos y ejecutar un análisis
ponderado de mínimos cuadrados.
En los casos en que los datos no se ajustan a un modelo lineal, entonces se puede recurrir a los
métodos de regresión no lineal. Algunos de éstos utilizan modelos polinomiales o procedimientos de
regresión múltiple. Para determinar una concentración desconocida 𝑪𝒙 a partir de la recta de mínimos
cuadrados, se obtiene el valor de la respuesta del instrumento 𝒚𝒙 para la incógnita, y la pendiente y la
ordenada al origen se usan para calcular la concentración desconocida 𝑪𝒙 como se muestra en la siguiente
ecuación:
𝒚𝒄 − 𝒃
𝑪𝒙 =
𝒎
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3.2 Errores en la calibración del patrón externo
Cuando se usan patrones o estándares externos, se supone que se obtendrán las mismas respuestas
cuando la misma concentración del analito esté presente en la muestra y en el patrón. Por tanto, la relación
funcional de calibración entre la respuesta y la concentración del analito se debe aplicar también a la
muestra. En una determinación no suele utilizarse la respuesta original que da el instrumento, sino que
se corrige la respuesta original analítica con la medición de un blanco. Un blanco ideal es idéntico a la
muestra pero sin el analito.
En la práctica, con muestras complejas, se requiere muchísimo tiempo para preparar un blanco ideal
(y a veces es imposible hacerlo), por lo que se debe buscar un término medio. A menudo un blanco real
es un blanco disolvente que contiene el mismo solvente en el cual está disuelta la muestra, o un blanco
reactivo, que contiene el disolvente más todos los reactivos que se usan en la preparación de la muestra.
Aun con las correcciones del blanco, varios factores pueden ocasionar que falle la suposición
elemental del método del patrón externo. Los efectos de la matriz (la matriz incluye el analito y otros
constituyentes, los cuales se denominan concomitantes), debido a las especies extrañas en la muestra que
no están presentes en los patrones o el blanco, pueden ocasionar que las concentraciones del mismo
analito en la muestra y en los patrones proporcionen respuestas distintas. Las diferencias en las variables
experimentales cuando se miden blanco, muestra y patrón también pueden invalidar la función de
calibración establecida. Aun cuando la suposición básica es válida, los errores pueden ocurrir debido a
la contaminación durante el muestreo o en las etapas de preparación de la muestra.
Además, se pueden presentar errores sistemáticos durante el proceso de calibración. Por ejemplo, si
los patrones están preparados de manera incorrecta, habrá un error. La exactitud con la que se preparen
los patrones depende de la exactitud de las técnicas gravimétricas y volumétricas y del equipo usado. La
forma química de los patrones debe ser idéntica a la del analito en la muestra; el estado de oxidación, la
isomerización o la complejación del analito pueden alterar la respuesta. Una vez preparados, la
concentración de los patrones puede cambiar debido a la descomposición, la volatilización o la adsorción
en las paredes del contenedor. La contaminación de los patrones también puede dar como resultado
concentraciones del analito más elevadas que las esperadas. Un error sistemático se puede presentar si
hay algún sesgo en el modelo de calibración. Por ejemplo, puede haber errores si la función de calibración
se obtiene sin usar suficientes patrones para lograr estimaciones estadísticas buenas de los parámetros.
(Skoog, Holler, & Crouch, 2008)

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3.3 Aspectos a tener en cuenta
a) Los patrones deben cubrir el intervalo completo de trabajo.
b) El número de patrones varía en función del grado de exactitud y precisión requerido. Si los
patrones están dentro del intervalo lineal se preparan entre 3 y 5. Si la relación entre la señal
analítica y la concentración no es lineal se requiere un mayor número de patrones.
c) Se debe incluir en la curva el valor del blanco.
d) La concentración del analito se representa en el eje 𝒙 y la señal analítica en el eje 𝒚.
e) La utilización de calculadoras científicas, hojas de cálculo e incluso programas específicos para
tratamiento y presentación de datos permite fácilmente el cálculo de la ecuación de la curva de
calibrado. Habitualmente el intervalo de trabajo se limita a la zona de relación lineal entre señal
analítica y concentración, por lo que se obtiene una ecuación de primer grado mediante el método
estadístico de regresión lineal por mínimo cuadrados: 𝒚 = 𝒎𝒙 + 𝒃
f) La curva se debe siempre representar gráficamente para evitar malas interpretaciones del
coeficiente de correlación.
g) La concentración de las muestras se determina por interpolación, por lo que debe ser
convenientemente diluida para obtener una medida dentro del intervalo cubierto por los patrones
de calibración. Asimismo, la muestra de ensayo debe tener los reactivos auxiliares en la misma
concentración que los patrones.
h) Es aconsejable preparar dos muestras de ensayo con factores de dilución distinta para evitar
posibles errores y para facilitar la obtención de una medida dentro del intervalo de trabajo. De
no ser así se debe preparar otra muestra de ensayo con un factor de dilución adecuado, y repetir
la determinación. (Moreno & Ramírez, 2014)

4. VALORACIÓN DEL EQUIPO SOBRE EL TEMA DESARROLLADO

El método de calibración simple o estándar externo se utiliza como un procedimiento de medida de
los componentes de la matriz o reactivos no causen interferencia.
Se aplica una ecuación matemática de la recta dada de la pendiente y la ordenada al origen se usa el
método de los mínimos cuadrados en donde este se obtiene dos suposiciones. La primera es una relación
lineal que los ejes de las 𝒚 representa la respuesta de medida y 𝒙 la concentración del analito estándar y
se aplica la siguiente formula: 𝒚 = 𝒎𝒙 + 𝒃 donde 𝒃 es la ordenada al origen; 𝒙 es cero y 𝒎 es la
pendiente. La segunda es cuando surge una desviación de los puntos de la línea recta y ahí surge un error.
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 Hay que tener en claro ciertos aspectos en el método de calibración en donde la curva siempre se
representa gráficamente para no obtener malas interpretaciones o que se aconseja preparar dos muestras
de ensayo con distintas factores de dilución para evitar posibles errores.

5. CONCLUSIONES
- Para realizar este método se debe de tener en cuenta que no debe de haber ningún tipo de
interferente.
- Realizar de manera precisas los blancos para así obtener buenos resultados de análisis.
- El analista debe de tener un buen manejo del método a utilizar para minimizar los errores.

6. BIBLIOGRAFÍA
Kenneth A. Rubinson, J. F. (2001). Tipos de estándares. En J. F. Kenneth A. Rubinson, Análisis
Instrumental (págs. 113 - 115). Madrid: Prentice Hall.
Moreno, R. B., & Ramírez, A. M. (2014). Curva de calibrado mediante patrones externos. En R. B.
Moreno, & A. M. Ramírez, Análisis instrumental (págs. 48 - 49). Madrid: EDITORIAL
SINTESIS.
Skoog, D. A., Holler, F. J., & Crouch, S. R. (2008). En D. A. Skoog, F. J. Holler, & S. R. Crouch,
Principios de análisis instrumental (págs. 11 - 13). México, D.F: CENGAGE Learning Editores.

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