DETECCION DE LA

RESISTENCIA BACTERIANA
MODULO 7
Detección de la resistencia a
carbapenémicos en Enterobacterias,
Pseudomonas y otros No fermentadores
Edgar Gonzales Escalante
 DETECCION DE LA
RESISTENCIA BACTERIANA

MODULO 7
Detección de la resistencia a carbapenémicos:
CARBAPENEMASAS
 BACTERIAS MECANISMOS
BLEE/AmpC + Pérdida de porinas
Enterobacterias Carbapenemasas
Pérdida de porinas
P. aeruginosa Bomba de eflujo
Carbapenemasas
Cefalosporinasas + Pérdida de porinas
Acinetobacter spp. Carbapenemasas
Las carbapenemasas son b-lactamasas que hidrolizan a
muchos betalactámicos incluyendo los antibióticos
CARBAPENEMICOS
Se han identificado la producción natural de
Carbapenemasas en algunas bacteria: Stenotrophomona
maltophilia, Bacillus cereus, Bacteriodes fragilis,
Flavobacterium, Chryseobacterium y Aeromonas
La diseminación de genes resistencia se da en elementos
genéticos móviles
 Clase A(2f): Serin-carbapenemasas

serratia marcensces enzima imipenemasa No-metalocarbapenemasa-A

Imipenem > Meropenen = R

Aztreonam = R
Cefalosporinas 3raG = S
Inhibidas Ac Clavulánico (±)
Cromosómicas / Inducibles
Cinética enzimática: Kcat /Km
 Clase A(2f): Serin-carbapenemasas
•La mayoría codificadas
en plásmidos.
•Inhibidas por ácido
clavulánico y ácido
borónico.

Klebsiella pneumoniae Carbapenemasa

Cinética enzimática: Kcat /Km
 Clase A(2f): Serin-carbapenemasas
Guiana extended-spectrum

Originalmente como BLEE

Escasa actividad sobre
carbapenémicos
Carbapenemasas:
GES -1,-2, -4 y -5
Inhibidas por Ac. clavulánico
Inhibida por Imipenem
Cinética enzimática: Kcat /Km
 Clase B(3): Metalo-β-lactamasas
Hidrolizan los β-lactámicos, Requieren cationes Zn2+
excepto AZTREONAM
No se inhiben por el ácido
clavulánico, sulbactan
y tazobactam

Se inhiben por quelantes de cationes bivalentes como EDTA o compuestos

tiólicos como el ácido 2-mercaptopropiónico o el ácido dipicolínico.
 Metalo- β-lactamasas adquiridas

IMP-48

VIM-40

NDM-10

www.lahey.org/studies
Mecanismo de acción de las
Metalo-β-lactamasas
 Mecanismo de acción de las
Metalo-β-lactamasas

NH2

N S
O
H CH3
H3C O N HN
N O
H3C C OH O S
O O OH

Aztreonam
Cinética enzimática: Kcat /Km
 Clase D (2df): Serin-β-lactamasas
Oxacilinasas o de tipo OXA: CHDL
Carbapenem-Hidrolysing class D β-Lactamasas

Hidrolizan preferentemente Oxacilina

Fenotípicamente no son detectadas
Pobremente inhibidas por Ac.
Clavulanico, sulbactan y tazobactan
Mayormente en Acinatobacter sp.
OXA-48 en Enterobacterias
Cinética enzimática: Kcat /Km
Detección en el Laboratorio de
Microbiología
Cambios en los puntos de corte en Enterobacterias
CLSI M100-S19 (2009) CLSI M100-S26 (2016)
Antibiótico
S I R S I R
*Doripenem ≤1 2 ≥4
+Ertapenem ≤2 4 ≥8 ≤ 0,5 1 ≥2
# Imipenem ≤4 8 ≥ 16 ≤1 2 ≥4
& Meropenem ≤4 8 ≥ 16 ≤1 2 ≥4

* Interpretación 2016 basado en 500 mg. Cada 8 horas

+ Interpretación 2016 basado en 1g. Cada 24 horas
# Interpretación 2016 basado en 500mg c/ 6 hs o 1 g. c/ 8 hs
& Interpretación 2016 basado en 1 g. Cada 8 horas
 Cambios en los puntos de corte en
Pseudomonas aeruginosa
CLSI M100-S19 (2009) CLSI M100-S26 (2016)
Antibiótico
S I R S I R
*Doripenem ≤2 4 ≥8
# Imipenem ≤4 8 ≥ 16 ≤2 4 ≥8
& Meropenem ≤4 8 ≥ 16 ≤2 4 ≥8

* Interpretación 2016 basado en 500 mg. Cada 8 horas

# Interpretación 2016 basado en 500mg c/ 6 hs o 1 g. c/ 8 hs
& Interpretación 2016 basado en 1 g. Cada 8 horas
CLSI M100-S26
Test de Hodge Modificado
 Carba NP

Rapid Identification of Carbapenemase Types in Enterobacteriaceae and Pseudomonas spp. by Using a Biochemical Test .
Dortet L, Poirel L, Nordmann P. Antimicrobial Agents and Chemotherapy. 2012. 56:12 p. 6437– 6440
Pruebas moleculares
 Detección de Carbapenemasas en
Enterobacterias
Ejemplo:
Aislamiento K.pneumoniae
Meropenem= 18 mm
KPC KPC Diámetro del inhibidor= 6 mm
9 + 3 + 5 = 17 mm
MBL

ERT MEM APB

MBL 10 300

ATM
17 mm
BLEE

Las C3G son mejores sustratos para MBL

Radio del ATB 1 + Radio del ATB 2 (radio del inhibidor) + 5 mm

Klebsiella pneumoniae productora de KPC
 R

Klebsiella pneumoniae productora de MBL

Resistente a Aztreonam
 BLEE

Klebsiella pneumoniae productora de MBL

También productora de BLEE
Detección de Carbapenemasas en
P. aeruginosa

MEM EDTA
MBL 10
MBL

15 mm
BLEE

IPM CAZ
10 30
BLEE

20 mm

Las C3G son mejores sustratos para MBL

 EDTA

Pseudomonas aeruginosa productora de GES

 S
R

Pseudomonas aeruginosa productora de GES

 S

Pseudomonas aeruginosa productora de MBL

Sensible a Aztreonam
 R

Pseudomonas aeruginosa productora de MBL

Resistente a Aztreonam
Comparación de EDTA según concentración

EDTA EDTA
0.5 M 0.1 M
 Hay que tener
buena vista para
la lectura
Discos combinados

IPM IPM
EDTA
≥ 5mm 10

EDTA
0.1 M
Discos combinados
IPM
10

≥ 5mm

EDTA
IPM 0.1 M
EDTA
 R

¿Que podemos hacer frente a esto…?

Test de Hodge modificado (Pasteran et al):
indicador Kpn 700603

Bacteria productora de Carbapenemasa

 Test de Hodge modificado

Nicola F, Nievas J, Smayevsky J. Evaluación de diversos métodos fenotípicos para la detección de carbapenemasas
KPC en Klebsiella pneumoniae. Revista Argentina de Microbiología (2012) 44: 290-302
Pasteran F, Gonzalez LJ, Albornoz E, Bahr G, Vila AJ, Corso A. Triton Hodge Test: Improved protocol for Modified Hodge Test for enhanced detection of NDM and
other carbapenemase producers. J. Clin. Microbiol. 2016 Mar;54(3):640-9
Detección colorimétrica

Productor de
carbapenemasa

NO
carbapenemasa
Carbapenem Inactivation Method (CIM)

van der Zwaluw K, de Haan A, Pluister GN, Bootsma HJ, de Neeling AJ, Schouls LM (2015) The Carbapenem Inactivation Method (CIM), a Simple
and Low-Cost Alternative for the Carba NP Test to Assess Phenotypic Carbapenemase Activity in GramNegative Rods. PLoS ONE 10(3): e0123690.
doi:10.1371/journal.pone.0123690
Detección por medios Cromogénicos
Otros métodos
Métodos
Automatizados
Razones para la variabilidad en la expresión
Diferencia en permeabilidad y/o eflujo

Variabilidad acorde al tipo de enzima

Acorde al origen de la codificación

Cromosoma (1 copia), plásmidos (+/- 1 copia)

Acorde a la expresión del gen

Eficiencia del promotor
Posición del gen/casette si esta codificado en integrón
 ¡Tenemos que
estar preparados!

Que no sea el Fin!!!

Gracias por la paciencia!
“Lo que tenemos que aprender
lo aprendemos haciéndolo”