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Mecanismos de Resistencia

enzimáticos a los B-lactamicos


en P. aeruginosa
Que discos usamos en el
antibiograma?
• Aztreonam
• Ceftadzidima
• Cefepime
• Amoxicilina mas Acido clavulanico (para la búsqueda de
BLEE)
• Imipenem
• Meropenem
• EDTA (para la búsqueda de MBL)
• Piperacilina
• Piperacilina/tazobactam
Que discos usamos en el
antibiograma?
• Ciprofloxacina
• Amikacina
• Gentamicina
• Colistina
Que son las carbapenemasas?

• Son enzimas (B-lactamasas capaces de


hidrolizar (inactivar) significativamente los

Carbapenemes (Imipenem, Meropenem y


Ertapenem), penicilinas, y/o monobactames y
cefalosporinas las cuales se han asociado a
elementos genéticos transferibles.
Carbapenemasas MBL
Tienen actividad o hidrolizan todos los betalactamicos, excepto
aztreonam.

En su sitio activo poseen Zn para la actividad enzimática

Inhibibles por quelantes (EDT A)

No se inhibe por (acido clavulanico, sulbactan, Tozaban)


Carbapenemasas KPC
• Tienen actividad o hidrolizan todos los betalactamicos.

• En su sitio activo poseen serina para la actividad


enzimática

• Inhibibles por Acido Fenil Boronico

• Inhibición variable por acido clavulanico


AMP-C hiperproducida y cierre de Porinas

• Estos dos mecanismos asociados tienen actividad


carbapenemasa.
Detección fenotípica de carbapenemasas
Análisis interpretado del antibiograma.

• KPC : Alto nivel de resistencia al imipenem (ausencia de zona de inhibición


en el método de difusión . Aztreonam alcanza alto nivel de resistencia.

• MBL: Un 15% de las cepas pueden presentar zona de inhibición distintas


de cero para este carbapenem. Aztreonam sensible.

• Los mecanismos de resistencia no enzimáticos como déficit de oprD y/o


eflujo, casi sin excepciones, no son capaces de alcanzar el alto nivel de
resistencia a imipenem.
Método de discos combinados para
detección de KPC y MBL

• MEROPENEM+CLOXACILINA (3000ug/disco),
• MEROPENEM+ACIDO BORONICO (600ug/disco)
• MEROPENEM+EDTA (750ug/disco).

• Interpretación

• Aquellas cepas donde el mecanismo implicado en la resistencia a carbapenemes


fuera la presencia de enzimas AmpC, cursarán con una doble inhibición (inhibidas
por APB y CLOXA/OXA).
• Las cepas con KPC (incluso en especies con hiperproducción de AmpC) mostrarán
sólo inhibición por APB y no por CLOXA/OXA.

• Mientras que si el mecanismo implicado en una MBL, la cepa mostrará inhibición por
• EDTA.
Tabla de sensibilidad y especificidad
para los discos combinados en
P. aeruginosa
Método de Hodge Modificado para
P. aeruginosa
Es un método complementario para aquellos aislamientos que arrojan resultados
negativos para KPC o MBL
Como detectar BLEE
• Por el método del triple disco:

• Buscamos sinergia entre CAZ-AMC-FEP


BLEE
Las mas frecuentes adquiridas por plásmidos son
GES, PSE-1, PSE-4 . Otras ( TEM, PER-1, OXA).

• Fenotipo: Resisten a Monobactamicos,


penicilinas, cefalosporina. Excepto a
Carbapenemes.
Como detectar Betalactamasa
tipo GES-2
• 1. Ceftadzidima resistente (< 18 mm)
• 2. Un huevo (sinergia ) IPM-CAZ (20 mm
de centro a centro)

IPM
Fenotipo de P. aeruginosa con
Betalactamasa tipo GES-2
Resistencia a aminopenicilinas (AMP, AMX)

Actividad variable sobre ATM, C4G, PIP

Inhibición con acido clavulanico: variable


Inhibible por imipenem

Hay una fuerte disociación de los


betalactamicos.

Persistencia clonal en los hospitales.


Fenotipo resistencia natural
Aislamiento con MBL

Sinergismo +
Aislamiento con MBL

Sinergismo +
Ensayo de sinergia en la inhibición
con disco para cepas multirresistentes.
CNDR- MINSA

• Es un método cualitativo de baja complejidad.


• Esta al alcance de cualquier laboratorio de
microbiología.
• Tiene la complejidad de un antibiograma.
Metodología para el ensayo en
cepas multiresistentes
• Preparar una suspensión 0.5 Mc Farland del aislamiento
multiresistente a estudiar.
• Estriar en Agar Muller Hinton como si fuera a realizar un
antibiograma.
• Colocar en fila al menos 7 discos de un betalactámico,
de un lado y al menos 7 discos de un aminoglucósido,
formando con ambas filas de discos una L.
• Incubar 18-24 horas.
• Observar sinergismo entre ambas filas de discos.
Informe del ensayo
• Si se observó sinergismo entre el B-lactámico, (Ej: Imipenem) y
el aminoglucósido (Ej:Amikacina) informar de la siguiente manera:

• Pruebas adicionales demostraron sinergia entre


Imipenem y Amikacina. Se sugiere como terapia
combinada.
Ensayo de sinergia en la inhibición
con disco para cepas multirresistentes

Sinergia positiva Sinergia Negativa


GRACIAS POR SU ATENCION