Perlmann y Engvall

(1971)

Es una técnica (Rx Ac-Ag)

que nos permite
determinar antígenos y/o
anticuerpos de forma
cuantitativa, cualitativa y
semicuantitativa .

Combinando la
especificidad de los
anticuerpos con la
sensibilidad de un ensayo
enzimático.
 KIT DE
ELISA
➢Muestra
➢Microplacas (96 pozos)
➢Enzima
➢Soluciones
amortiguadoras
➢Substrato
➢Lector de ELISA
TIPO DE
MUESTRA

➢Suero
➢Orina
➢Heces
➢LCR
APLICACIONES
Detección de
Detección de Ag o Ac autoanticuerpos

 Virus  IgG (factor

 Hongos reumatoide)
 Parásitos  DNA
 Bacterias  Complejos inmunes
 Detección Ag
Detección hormonas
tumorales
 Progesterona  Antígeno prostático
 Cortisol  Alfa- fetoproteína
 Estrógenos  Antígeno del ovario
 Insulina  Antígeno
 Testosterona carcinoembrionario
 Gonadotropina
coriónica humana
 ELISA DE TIPO INDIRECTO
40h, 37ºC
40min, 37ºC 30min,
37ºC
30min,
37ºC
Sol. Bloqueo

Ag + Sol. Sol. Bloqueo

amortiguadora de (PBS pH 7.4 +
carbonatos pH 9.2 caseína)

Sol. Citratos pH 5.6

H2SO4
2.5 N OPD

O.D 490nm 10min oscuridad

MATERIALES DE FASE SÓLIDA
SOPORTE FORMA TIPO DE
DISPONIBLE UNION AL Ag

Poliestireno Placas, Covalente

láminas y
perlas
Nitrocelulosa Membranas y No covalente
láminas
Polivinilo Placas, Covalente
láminas
Látex, Nylon Placas, Covalente
láminas y
perlas
Poliestireno (anhidrido maleico)
R
R
pH > 7.2

R = proteína, péptido u
otro ligando
Poliestireno (melaimida)

R R

pH >6.5 – 7.5

R = Proteína, péptido
u otros ligandos.
SOLUCIONES DE BLOQUEO
SOLUCIÓN COMPOSICIÓN DESVENTAJAS

Caseína Leche Puede

descremada 5% enmascarar
algunos Ag’s

SFB Suero Fetal Muy cara

Bovino
BSA Albúmina sérica Muy cara
bovina al 3%
ENZIMAS
ENZIMA ORIGEN CROMOGENO
Peroxidasa Rábano OPD (Amarillo-
492nm)
TMB (amarillo-
490nm)
Fosfatasa E. coli PNP (Amarillo)
alcalina
β-Galactosidasa E. coli ONPG (Amarillo
410nm)
Glucosa oxidasa Aspergilus Glucosa OPD
niger (Naranja 490nm)
Lisozimas Clara de
huevo
Malato Corazón de
deshidrogenasa cerdo
ELISA Indirecta
ELISA de captura