UNIVERSIDAD NACIONAL DE PIURA

FACULTAD DE CIENCIAS
DEPARTAMENTO DE CIENCIAS BIOLÓGICAS

MICROBIOLOGÍA DE ALIMENTOS

PRÁCTICAS DE LABORATORIO
PRÁCTICA Nº 4

Blgo. -Mcblgo. DOROTHY TORRES DE LEÓN, M.Sc.

 GÉNEROS: ​ ​Enterococcus y Streptococcus

El género ​Streptococcus comprende una gran variedad de especies con hábitats muy
diferentes ,cuyas actividades tienen considerable importancia práctica para la especie
humana. Algunos miembros son patógenos para el hombre y otros animales. Como
productores de ácido láctico, algunos estreptococos desempeñan importantes
funciones en la producción de leche ácida, ensilados y otros productos fermentados.
Para distinguir los estreptococos no patógenos de las especies patógenas, el género
Streptococcus ​se ha dividido en tres géneros. El género ​Lactococcus comprende
estreptococos importantes en la industria láctea, mientras que el género ​Enterococcus
comprende estreptococos que son principalmente de origen fecal
Los estreptococos y cocos relacionados también se dividen en grupos inmunológicos,
que se basan en la presencia de antígenos constituidos por carbohidratos específicos.
Estos grupos antigénicos ( o grupos Lancefield), se designan con letras ; actualmente
se reconocen desde la A a la O. Los enterococos presentan el antígeno del grupo D

OBJETIVOS
Proporcionar al estudiante las diferentes pruebas bioquímicas que lleven a la
diferenciación de los géneros ​Streptococcus​ y ​Enterococcus ​.

MATERIALES
Tubos con caldo triptosa
Tubos con agar triptosa
Tubos con caldo triptosa bilis 40%
Tubos con caldo triptosa pH 9.6
Tubos con caldo triptosa 6.5% NaCl
Tubos con caldo triptosa telurito 0.05%
Tubos con caldo sorbitol rojo de fenol
Tubos con caldo aesculin azida fierro bilis
Placas de Petri con agar TTC
Placas de Petri con agar aesculin azida fierro bilis
Placas de Petri con agar gelatina según frazier

Reactivos:
Hg Cl​2

PROCEDIMIENTO
1. Disponer de cultivos jóvenes de cepas sospechosas de ser cocos para proceder a
su coloración de gram
2. Proceder a las siembras de los tubos y placas con medios de cultivo para las
pruebas bioquímicas de identificación
a. Catalasa
1. Colocar una fracción del crecimiento bacteriano sobre un portaobjeto limpio.
Cubrir con algunas gotas de H​2​O​2​ al 3%
2. El desprendimiento gaseoso (burbujas) indica prueba catalasa positiva.

b. Crecimiento a . 45ºC
1. Inocular los tubos de agar triptosa a partir de cultivos puros.
2. Incubar a 45ºC +- 1ºC en B.M. x 48 hrs.
3. Observar crecimiento​ ​ (+)

c. Crecimiento en 40% de Bilis

1. Inocular los tubos de agar triptosa 40% bilis a partir de cultivos puros.
2. Incubar a 37ºC por 48 hrs.
3. Observar crecimiento​ ​ (+)

d. Crecimiento a pH 9.6
1.Inocular los tubos de caldo triptosa pH9.6 a partir de cultivos puros.
2. Incubar a 37ºC por 48 hrs.
3. Observar crecimiento​ ​ (+)

e. Crecimiento en 6.5% NaCl

1.Inocular los tubos de caldo triptosa 6.5% NaCl a partir de cultivos puros.
2. Incubar a 37ºC por 48 hrs.
3. Observar crecimiento​ ​ (+)

f. Supervivencia a 60ºC durante 30 minutos.

1. Sembrar abundantemente en tubos con caldo triptosa y mantenerlos en B.M.
a 60ºC x 30’ y enfriar.
2. Incubar a 37ºC por 48 hrs.
3. Observar crecimiento​ ​ (+)

g. Crecimiento en 0.05% de Telurito

1.Inocular los tubos de caldo triptosa 0.05% de telurito a partir de cultivos
puros.
2. Incubar a 37ºC por 48 hrs.
3. Observar crecimiento​ ​ (+)

h. Fermentación del Sorbitol

1..Sembrar los tubos de caldo sorbitol rojo de fenol la cepa en estudio.
2. Incubar a 37ºC por 48 hrs.
3. Observar la formación de un color amarillo que indica fermentación

i. Crecimiento en Aesculina en caldo

1. A partir de un cultivo de 24 hrs. sembrar la cepa en caldo Aesculina Azida
Fierro Bilis
2. Incubar a 37ºC por 48 hrs
3. Observar ennegrecimiento del tubo.

j. ​ Crecimiento en​ placa de agar Barnes o TTC

1. Sembrar por agotamiento por estría las placas del medio
2. I​ ncubar a​ 37ºC por 24 - 48 hrs
3. Observar :
 ​Enterococcus faecalis:​ colonias con centro rojo rodeadas de una
aureola blanca.
​Streptococcus faecium y​ ​Streptococcus durans:​ colonias blancas o
rosadas.
​Streptococcus bovis:​ muy pequeñas colonias rojas o blancas.
Streptococcus equinus:​ no desarrollan

k. Crecimiento en Aesculina en Agar.

1. A partir de un cultivo de 24 hrs. sembrar la cepa en agar Aesculina Azida
Fierro Bilis
2. Incubar a 37ºC por 48 hrs
3. Observar colonias negras rodeadas de un halo oscuro

l. Hidrólisis de Gelatina
1. Sembrar por agotamiento por estría las placas del medio Agar Gelatina
según Frazier.
2. Incubar a 37ºC por 24 - 48 hrs
3. Agregar sobre la superficie​ ​del agar una ​ ​solución clorhídrica Hg.Cl​2
Eliminarla después de 5 min. y lavar con agua corriente
​(+) zona clara rodea la estría