INFORME PRÁCTICA EXTRACCION DNA.

CINDYFARLEY BETANCUR TAMAYO.

YENCY VALERIA CIRO CUERVO.
DIANA MARCELA MORALES PALMA.

LABORATIO DE BIOTECNOLOGIA.
ELKIN LEANDRO ESCOBAR CHAVES.

FACULTAD DE CIENCIAS FARMACEUTICAS Y ALIMENTARIAS.

UNIVERSIDAD DE ANTIOQUIA.
ABRIL 28
2021
 INTRODUCCION.

Actualmente el estudio de la variación genética entre individuos y especies se

ha implementado en el campo de la ciencia, para explicar patrones y procesos
evolutivos por medio de marcadores moleculares, fragmentos de ADN con o sin
función conocida, para obtener información sobre la variación alélica que
permite la distinción de individuos. Estos marcadores se obtienen con técnicas
cómo la PCR y la electroforesis, los cuales hacen posible analizar la variación
de la molécula de ADN con detalle.
La aplicación de técnicas moleculares inicia con la extracción de ADN y la
obtención exitosa de datos confiables y reproducibles que dependen en gran
medida, de la extracción de ADN puro.
 RESULTADOS.

Se realizó un procedimiento de extracción de ADN de 9 muestras de material

vegetal. A continuación, se muestra los valores obtenidos luego de la
extracción y purificación de ADN, mezcla de reacción para la PCR y la
fotografía del Gel de electroforesis.

Grupo Muestra Abs λ (260 nm) Abs λ (280 nm) A260/A280 Pureza % [ ] DNA ng/μL
1 Arveja 0,817 0,436 1.874 408.5
2 Arveja 0,113 0,062 1.822 56.5
3 Arveja 0,075 0,062 1.209 37.5
4 Cebolla 0,075 0,051 1.470 37.5
5 Cebolla 0,081 0,061 1.327 40.5
6 Cebolla 0,035 0,020 1.75 17.5
7 Banano 0,937 0,481 1.948 468.5
8 Banano 0,901 0,405 2.224 450.5
9 Banano 0,922 0,473 1.949 461
Tabla 1 Análisis por espectroscopia UV de la muestra de DNA obtenido en la extracción.

La determinación de la pureza del material vegetal se realiza con la siguiente

ecuación:
|260|nm
pureza DNA=
|280|nm
Resolviendo…
0.817
pureza DNA=
0.436
pureza DNA=1.874

La determinación de la concentración del material vegetal se realizó con la

siguiente ecuación (asumir un factor de dilución de 10 y 50ng/ μl es una K):

g ng
DNA =|260| nm∗factor de dilucion∗50
μL μL

Resolviendo…
 g ng
DNA =0.817 nm∗10∗50
μL μL
g ng
DNA =408.5
μL μL

COMPONENTE VOLUMEN POR REACCIÓN FUNCIÓN DEL COMPONENTE

La necesaria para llegar a Agua que ha alcanzado un alto grado
Agua MIlli-Q 100µl/tubo de purificación facilitando así su uso
para PCR
Buffer 10X 10 µl Mantiene el pH adecuado para el
funcionamiento de la ADN polimerasa.
Iniciador o cebador en una secuencia
Primer 5´ 50 µM 1 µl corta de ADN de cadena simple que
se utiliza en una reacción en cadena
de la polimerasa (PCR). En el método
PCR se emplea un par de cebadores
Primer 3´ 50 µM 1 µl para hibridar con el ADN de la muestra
y definir la región del ADN que será
amplificada. También se les conoce
como oligonucleótidos.
Se proporciona como una solución
dNTP´s 10mM 2 µl práctica a una concentración de 10
Mm, puede usarse para diferentes
aplicaciones en las que se necesitan
nucleótidos trifosfato para la síntesis
de nuevas cadenas de ADN
Se refiere a la cadena de ADN de
ADN molde 20 µl cadena sencilla que es utilizada para
sintetizar otra molécula de ADN o de
ARN complementaria.
Taq Polimerasa 5 U/µl 1 µl La Taq polimerasa es ideal para la
PCR gracias a esta estabilidad
térmica.  Su ADN polimerasa es muy
termoestable y su mayor actividad se
presenta cerca de los 70ºC.
Tabla 2.Mezcla de reacción para la PCR
Grafico 1. Fotografía del gel de electroforesis
ANALISIS DE RESULTADOS.
(2 PAGINAS MAX)

CONCLUSIONES.
(1/2 PAGINA)
 CUESTIONARIO.
 Mencione los 3 pasos importantes en el proceso de extracción y
purificación de ADN y mencione el reactivo clave en cada uno de ellos y
cuál es su función
Extracción:
La extracción consiste en la separación y purificación del ADN con el fin de
poder estudiarlo, analizarlo o manipularlo.1
1. Obtención de la muestra celular.
2. Lisis celular: Es el proceso físico o químico por el cual se rompen las
membranas para liberar sus componentes celulares.
3. Degradación de proteínas: se rompen las proteínas que cubren al
ADN  usando proteasas.
Reactivo clave: Sodio de silo de sulfato (SDS), este degrada la membrana
celular capturando lípidos y proteínas evitando que cantidades significativas
de ADN queden atrapadas en los restos celulares
Purificación:
Esta se realiza con la eliminación de proteínas y lípidos de membrana
mediante solventes orgánicos.
1. Adición de solventes orgánicos; por ejemplo el fenol.
2. Centrifugación: Permite la formación de dos fases.
3. Precipitación.
Reactivo clave: Cloroformo, su función es la eliminación de los residuos
lipídicos que pudiesen estar aún presentes en la muestra.
Etanol: Remueve la concentración residual de sales

 Mencione las fases de la PCR y a que tiempo y temperatura típica es

utilizada cada una.

1. Desnaturalización: (95ºC) la reacción se calienta bastante para separar,

o desnaturalizar, las cadenas de ADN. Esto proporciona los moldes de
cadena sencilla para el siguiente paso.2
2. Anillado: (55ºC) la reacción se enfría para que los cebadores puedan
unirse a sus secuencias complementarias en el molde de ADN de
cadena sencilla.2
 3. Extensión: (72ºC): la temperatura de la reacción se eleva para que
la Taq polimerasa extienda los cebadores y sintetice así nuevas cadenas
de ADN.2

 ¿Qué otras macromoléculas pueden ser separadas por electroforesis en

gel? ¿Cuál es el polímero más utilizado para cada una de esas
macromoléculas?

La electroforesis en gel es una técnica utilizada para separar fragmentos de

ADN u otras macromoléculas, como ARN y proteínas por su tamaño y carga.
Como su nombre lo indica, en la electroforesis en gel participa un gel similar a
la gelatina. Los geles para separar ADN suelen estar hechos de un polisacárido
llamado agarosa, que se consigue como hojuelas secas pulverizadas. Cuando
la agarosa se calienta en una solución amortiguadora (agua mezclada con
algunas sales) y deja enfriar, se forma un gel sólido ligeramente blando. 3

 ¿Además del azul de bromofenol, que otro colorante se utiliza en los

buffers de carga?

Los buffers de carga están formulados como soluciones 5x que contienen

Ficoll, Tris-buffer, EDTA y Xileno-Cianol FF, Cresol Red o Naranja G como
colorante de rastreo.4
1. Consultar las tablas de relación de absorbancias A260/A280 para
estimar la pureza del ADN.
BIBLIOGRAFIA.

1. Alberto Checa Rojas. (2016). Extracción de ADN. 2021, Abril 23,

Conogasi.org Sitio web: http://conogasi.org/articulos/extraccion-de-adn/
2. Sitio web: https://es.khanacademy.org/science/ap-biology/gene-expression-
and-regulation/biotechnology/a/polymerase-chain-reaction-pcr
3. Laura Patricia Alejos Velázquez, María del Consuelo Aragón Martínez,
Amelia Cornejo Romero, Extracción y purificación de ADN. Sitio web:
http://www2.inecc.gob.mx/publicaciones2/libros/710/extraccion.pdf
4. https://www.medicalexpo.es/prod/ampliqon-s/product-128207-942053.html
5. Extracción y purificación de ADN, Universidad Francisco Marroquín, Sitio
web:https://www.youtube.com/watch?
v=a8d8ZNSX880&ab_channel=akademeiaUFM