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1) ¿Qué es una electroforesis de proteína?

R/ La electroforesis es una técnica para la separación de moléculas según la movilidad de
estas en un campo eléctrico a través de una matriz porosa, la cual finalmente las separa por
tamaños moleculares y carga eléctrica, dependiendo de la técnica que se use. La técnica
clásica utiliza una tira recubierta de una sustancia porosa impregnada de un electrolito. Sus
extremos se sumergen en dos depósitos independientes que contienen ambos al electrolito y
están unidos a los electrodos del generador de corriente. La muestra se deposita en forma de
un pequeño trazo transversal en la tira. La distancia de migración se mide en relación un
marcador interno. Las placas son reveladas con sales de plata, azul de Coomassie, o
reactivos en particular.

2) ¿Qué es la cromatografía en columna aplicada a proteína?

R/
las matrices preparativas más utilizadas en la separación de proteínas. Las matrices
preparativas más usadas son frecuentemente de polímero naturales como agarosa o
dextrano, pero también pueden estar ´ compuestas por poliacrilamida. Las columnas
de SEC de alto rendimiento son usadas analíticamente para estudiar la pureza de las
proteínas, su plegamiento, las interacciones proteína. etc. (Irvine 2003). Por otro
lado, las separaciones preparativas se realizan utilizando matrices de SEC de baja
presión y sirven para ´ separar mezclas de proteínas con diferentes pesos
moleculares, proteínas de otras macromoléculas biológicas y para la separación de
proteínas agregadas de monómeros. La cromatografía de exclusión molecular es
frecuentemente utilizada como un paso de pulimiento final del producto (Cutler,
2008). Fase móvil. En contraste con otros tipos de cromatografía, la selectividad de
una matriz de SEC no se puede ajustar cambiando la composición de la fase móvil.
Las matrices de SEC tienden a ser ´ compatibles con muchos buffers acuosos;
incluso en la presencia de surfactantes, agentes reductores o agentes
desnaturalizantes. Dado que las moléculas no ´ son adsorbidas en la matriz, las
proteínas se eluyen de modo socrático para lo cual se requiere de un ´ solo buffer.
Idealmente, todos los buffers usados en SEC y en todos los tipos de cromatografía
deben de ser filtrados con una membrana de 0.2 µm y desgasificados.

La cromatografía es una técnica que permite la separación de moléculas diferentes

presentes en una misma muestra. El método está basado en la circulación de una
 fase móvil (que arrastra a la mezcla de compuestos a separar), a través de una fase
estacionaria. Dependiendo de la afinidad relativa que por ambas fases tengan los
distintos compuestos presentes en la mezcla resultará su separación. La
cromatografía de exclusión molecular (a menudo también llamada filtración en gel
o de tamiz molecular) es una de las técnicas más sencillas de las empleadas en la
separación de proteínas y ácidos nucleicos. Este tipo de cromatografía se realiza en
columnas cilíndricas rellenas con algunos de los geles que se fabrican con este fín y
que pueden ser de varios tipos: dextranos con enlaces cruzados (sephadex), agarosa
(sepharose, Bio-gel A), poliacrilamida (Bio-gel B), etc. Todos estos geles (fase
estacionaria) se hallan constituidos por gránulos (particulas) de un material
esponjoso hidratado, que contiene poros con un tamaño de diámetro determinado.

3) ¿Qué es y cómo se hace la secuencia de proteína?

Las proteínas son una clase importante de moléculas que se encuentran en todas las
células vivas. Una proteína se compone de una o más cadenas largas de aminoácidos,
cuya secuencia corresponde a la secuencia de ADN del gen que la codifica. Las
proteínas desempeñan gran variedad de funciones en la célula, incluidas estructurales
(citoesqueleto), mecánicas (músculo), bioquímicas (enzimas), y de señalización celular
(hormonas). Las proteínas son también parte esencial de la dieta.