Universidad de San Carlos de Guatemala

Centro Universitario del Sur Occidente

Técnico en procesador de Alimentos
Bioquímica I
Marlon Vinicio Carranza Tobar 201641371

GUlA DE ESTUDIO No. 6

PURIFICACION Y CARACTERIZACION DE LAS PROTEINAS

1. Explique los procedimientos de separación basados en el tamaño molecular

Cromatografía de filtración en gel y la ultra centrifugación. Con la cromatografía
de filtración en gel se separan moléculas en virtud de sus diferencias de tamaño. La
capacidad separadora reside en el gel cuya matriz consta de un gran número de esferas
porosas microscópicas. Estas esferas están constituidas por largas cadenas de polímeros
unidas entre si por enlaces químicos para formar una red tridimensional. Los que
separan las moléculas atendiendo a las diferencias en la carga eléctrica neta del
compuesto, como la cromatografía de intercambio iónico y la electroforesis.

La cromatografía de intercambio iónico (o cromatografía iónica) es un proceso

que permite la separación de iones y moléculas polares basadas en las propiedades de
carga de las moléculas. Puede ser usada en casi cualquier tipo de molécula cargada,
incluyendo proteínas grandes, nucleótidos y aminoácidos pequeños.

2. Explique en consisten los procedimientos de separación basados en

diferencias de solubilidad.
Filtración por gravedad: Consiste en retener partículas sólidas suspendidas de un
líquido o un gas forzando la mezcla a través de una barrera porosa que puede ser mallas,
fibras, material poroso o un relleno sólido.
Filtración por succión: La filtración a vacío o por succión se utiliza para mezclas como
barros y pastas. El agua al pasar a través de la trompa, en el estrechamiento interior,
aumenta su velocidad originando una disminución de presión. Esto origina una succión
del aire a través de la conexión con el matraz, originando un pequeño vacío en éste.
Decantación: Consiste en separar componentes que contienen diferentes fases siempre
que exista una diferencia significativa entre las densidades.
Cristalización: Proceso de separación de un soluto a partir de su disolución, por
sobresaturación de la misma, aumento de la concentración o por enfriamiento de esa
disolución. La cristalización permite separar solutos prácticamente puros.
Recristalización: La finalidad de este proceso es conseguir un adecuado grado de
pureza que nos permita determinar el punto de fusión de la sustancia. El punto de fusión
de un compuesto es una característica física que nos confirma el grado de pureza de una
muestra.
Sublimación: Es el paso de una sustancia del estado sólido al gaseoso sin pasar por el
estado líquido. Se puede considerar como una forma especial de destilar una sustancia
sólida.
Destilación: La separación y purificación de líquidos por destilación constituye una de
las principales técnicas para purificar líquidos volátiles. La destilación hace uso de la
diferencia entre los puntos de ebullición de las sustancias que constituyen una mezcla.

3. Explique en qué consisten los procedimientos de separación basados en la

carga eléctrica.
La cromatografía de intercambio iónico (o cromatografía iónica) es un proceso
que permite la separación de iones y moléculas polares basadas en las propiedades de
carga de las moléculas. Puede ser usada en casi cualquier tipo de molécula cargada,
incluyendo proteínas grandes, nucleótidos y aminoácidos pequeños. Sin embargo,
mientras que la electroforesis separa las moléculas fundamentalmente en función de su
carga, la cromatografía lo hace en base a una amplia gama de características (ejemplos,
solubilidad en la cromatografía de reparto, polaridad en la de adsorción, carga en la de
intercambio iónico, etc.).

4. En que consiste la separación de proteínas por adsorción selectiva.

En la adsorción, el intercambio iónico y la cromatografía son procesos de sorción
en los que ciertos adsorbatos se transfieren selectivamente desde la fase fluida a la
superficie de partículas rígidas insolubles suspendidas en un recipiente o empaquetadas
en una columna.
 5. En qué consisten las separaciones basadas en la especificidad de ligandos:
Cromatografía de afinidad.
Consiste en dos factores, en primer lugar, el ligado debe poseer una elevada
afinidad por la sustancia a ser purificada, pero la interacción debe ser reversible. En
segundo término debe ser posible unir el ligado a la matriz por algún medio sin que esto
modifique sustancialmente su interacción con la macromolécula. La afinidad del
ligamento debería situarse entre 10-4 y 10-8 M en solución.
Cromatografía de afinidad.
Es muy usada en el laboratorio como herramienta analítica y preparativa, se basa
en la interacción de proteínas con ligandos unidos a la matriz de forma muy específica,
en general se trata de análogos que naturalmente interaccionan con las proteínas. Por
ejemplo: El sustrato inhibidor o cofactor de una enzima; el mensajero (hormona,
neurotransmisor, toxina) en el caso de un receptor, aminoácidos (proteasas; ligandos
pseudoespecificos como pigmentos (Cibacron blue; dextram blue) que se parece a
nucleótidos usados como cofactores o secuencias complementarias de un ácido nucleico
que se desee aislar de una mezcla compleja.

6. En que consiste el proceso de extracción y purificación de proteínas, explique.

Es una serie de procesos que permiten aislar un solo tipo de proteína de una
mezcla compleja. La purificación de proteínas es vital para la caracterización de la
función, estructura interacciones de la proteína de interés, para separar las mezclas de
las proteínas se basa en: tamaño molecular, solubilidad, carga eléctrica, diferencia en
sus características de absorción y la afinidad biológica para otras moléculas.

7. A que se refiere la caracterización de las moléculas de proteínas, explique.

Esto se refiere a que Cuando se obtiene o se determina una nueva proteína, esta
se tiene que clasificar, teniendo en cuenta la similitud de su secuencia lineal de
aminoácidos con secuencias de proteínas cuya función ya se conoce. 

8. En que consiste la caracterización de las moléculas de proteína, que métodos

existen para determinar el peso molecular de una proteína.
La caracterización de las proteínas consiste en clasificar las proteínas teniendo
en cuenta la similitud de su secuencia lineal de aminoácidos con secuencias de proteínas
cuya función ya se conoce. Los métodos utilizados para determinar el peso molecular de
una proteína pueden ser: Electroforesis desnaturalizante en gel de poliacrilamida-sds: El
gel, una vez preparado en su soporte, nos permite separar una mezcla de proteínas en
forma de bandas según su peso molecular.

9. Cuáles son los tres tipos de medidas de sedimentación que se utilizan para
determinar el peso molecular de una proteína por análisis de sedimentación
(S) de una proteína.
 Diálisis y centrifugación
 Centrifugación en gradiente de densidad
 Cromatografía de exclusión molecular