INSTITUTO TECNOLOGICO DEL VALLE DE OAXACA

BIOLOGIA CELULAR

4.4 METODOS CITOQUIMICOS

LICENCIATURA EN BIOLOGIA

CUARTO SEMESTRE GRUPO: “A”

ELABORO: AMAYA MARTINEZ PARLA DOLORES

para lo cual hay dos líneas de investigación.4.4 METODOS CITOQUIMICOS  El objetivo de estos métodos es la localización e identificación de las sustancias químicas constituyentes de las células. .

-determinación de diferentes compuestos químicos en el interior de la célula.1. .-obtención de fracciones subcelulares y su posterir análisis bioquímico. 2.

Que es la citoquimica La citoquímica estudia la composición química de la célula y permite detectar la localización topográfica de algunos principios inmediatos. . Se considera como un nexo de unión entre la morfología y la bioquímica. metales pesados y otras sustancias. enzimas.

.En una reacción bioquímica hay tres pasos fundamentales:  1. o al combinarse con otra sustancia presente.   Las muestras a estudiar son extensiones de sangre periférica y de médula ósea. formaldehído. especificidad y reproductibilidad. Para la correcta valoración citoquímica hay que intercalar controles positivos y negativos. glutaraldehído. etc. .Fijación: para preservar las estructuras y reactividad funcional celulares evitando fenómenos nocivos para las mismas e impidiendo también la difusión de componentes bioquímicos entre los diferentes compartimentos celulares así como al medio extracelular.Contraste: para resaltar en lo posible el producto de reacción y permitir una óptima visualización del núcleo y del citoplasma.. dan lugar a un precipitado visible en el lugar de la reacción. Las reacciones deben tener 3 características: sensibilidad.Incubación en el medio de reacción: como consecuencia se liberar unos productos que bien por si mismos. improntas de tejidos y células impactadas mediante citocentrifugación procedentes de diversos líquidos biológicos. 2.. 3. etanol. Las muestras deben ser recientes y a poder ser sin anticoagulantes. Existen diversos fijadores: metanol. acetona.

LA CROMATOGRAFIA   permite la separación de biomoléculas basándose en la diferente velocidad de desplazamiento de los componentes de una mezcla a través de un medio determinado. . La velocidad de desplazamiento dependerá de las características de las biomoléculas. Dentro de esta técnica existen distintas modalidades.

. Aquellas moléculas que sean solubles en el disolvente serán arrastradas y avanzarán más rápido que las que no lo sean obteniéndose así una separación en función de la solubilidad. Uno de los extremos se impregna con un disolvente que avanzará por capilaridad a través del papel.CROMATOGARFIA EN PAPEL  se aplica una mezcla de biomoléculas sobre una hoja de papel adsorbente.

avanzarán a distinta velocidad. por tanto. .CROMATOGRAFIA DE INTERCAMBIO IONICO  la muestra se pasa por una columna con una resina cargada (positiva o negativamente) de forma que las moléculas de la muestra interaccionarán con la resina en mayor o menor grado en función de su carga y. Al final podrán recogerse las distintas fracciones separadas en función de su carga.

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en función del tamaño molecular. Las moléculas pequeñas avanzarán más despacio pues tienden a entrar en los poros de la resina. por tanto. . mientras las grandes irán más rápido. La separación se hace.CROMATOGRAFIA DE FILTRACION  se pasa la muestra por una columna de resina porosa sin cargas.

ELECTROFORESIS   es una técnica derivada de la cromatografía que lo que hace es aplicar un campo eléctrico a una muestra colocada en la base de una lámina del gel agarosa. . La electricidad forzará el desplazamiento de las moléculas en función de su carga. es decir. se moverán al polo positivo o al negativo según cual sea su carga neta y lo harán a una velocidad que dependerá de su masa y del número de cargas eléctricas.

  . vibración ultrasónica. en cada fase se obtiene un precipitado que se recoge y un sobrenadante que se vuelve a centrifugar. Para estudiar esta fase soluble. de forma que las partículas se van separando en función de su tamaño. El método más usado es la ultracentrifugación diferencial.. Por este método separamos los distintos componentes celulares que podemos estudiar de forma aislada .METODOS DE FRACCIONAMIENTO CELULAR  En los métodos de fraccionamiento celular lo que se hace es destruir la célula por procedimientos mecánicos o químicos ( trituración. choque osmótico. para separar distintas biomoléculas podemos recurrir a otras técnicas como la cromatografía y la electroforesis. proceso durante el cual se somete a las células destruidas a una serie de centrifugaciones. La última fracción que se obtiene corresponderá a una fase soluble en la que tendremos todo tipo de moléculas.. es decir.) y luego se separan los distintos componentes que constituyen la célula. con fuerzas centrífugas progresivamente mayores.

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FUENTES DE INFORMACIÓN  http://web.princast.es/cpr/nalon_caudal/downloads /losmetodosdeestudiodelacelulacuaderno1.educastur.doc .

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