INSTITUTO TECNOLOGICO DEL VALLE DE OAXACA

BIOLOGIA CELULAR

4.4 METODOS CITOQUIMICOS

LICENCIATURA EN BIOLOGIA

CUARTO SEMESTRE GRUPO: “A”

ELABORO: AMAYA MARTINEZ PARLA DOLORES

para lo cual hay dos líneas de investigación.4. .4 METODOS CITOQUIMICOS  El objetivo de estos métodos es la localización e identificación de las sustancias químicas constituyentes de las células.

2.1.-obtención de fracciones subcelulares y su posterir análisis bioquímico. .-determinación de diferentes compuestos químicos en el interior de la célula.

Se considera como un nexo de unión entre la morfología y la bioquímica. metales pesados y otras sustancias. enzimas.Que es la citoquimica La citoquímica estudia la composición química de la célula y permite detectar la localización topográfica de algunos principios inmediatos. .

Fijación: para preservar las estructuras y reactividad funcional celulares evitando fenómenos nocivos para las mismas e impidiendo también la difusión de componentes bioquímicos entre los diferentes compartimentos celulares así como al medio extracelular. Las reacciones deben tener 3 características: sensibilidad. 3. etanol. formaldehído.. glutaraldehído.   Las muestras a estudiar son extensiones de sangre periférica y de médula ósea.Incubación en el medio de reacción: como consecuencia se liberar unos productos que bien por si mismos.. especificidad y reproductibilidad.. acetona. Existen diversos fijadores: metanol. . improntas de tejidos y células impactadas mediante citocentrifugación procedentes de diversos líquidos biológicos. dan lugar a un precipitado visible en el lugar de la reacción. 2.Contraste: para resaltar en lo posible el producto de reacción y permitir una óptima visualización del núcleo y del citoplasma. etc. Para la correcta valoración citoquímica hay que intercalar controles positivos y negativos. Las muestras deben ser recientes y a poder ser sin anticoagulantes. o al combinarse con otra sustancia presente.En una reacción bioquímica hay tres pasos fundamentales:  1.

LA CROMATOGRAFIA   permite la separación de biomoléculas basándose en la diferente velocidad de desplazamiento de los componentes de una mezcla a través de un medio determinado. Dentro de esta técnica existen distintas modalidades. La velocidad de desplazamiento dependerá de las características de las biomoléculas. .

Aquellas moléculas que sean solubles en el disolvente serán arrastradas y avanzarán más rápido que las que no lo sean obteniéndose así una separación en función de la solubilidad. . Uno de los extremos se impregna con un disolvente que avanzará por capilaridad a través del papel.CROMATOGARFIA EN PAPEL  se aplica una mezcla de biomoléculas sobre una hoja de papel adsorbente.

. avanzarán a distinta velocidad. Al final podrán recogerse las distintas fracciones separadas en función de su carga.CROMATOGRAFIA DE INTERCAMBIO IONICO  la muestra se pasa por una columna con una resina cargada (positiva o negativamente) de forma que las moléculas de la muestra interaccionarán con la resina en mayor o menor grado en función de su carga y. por tanto.

.

La separación se hace.CROMATOGRAFIA DE FILTRACION  se pasa la muestra por una columna de resina porosa sin cargas. mientras las grandes irán más rápido. . por tanto. en función del tamaño molecular. Las moléculas pequeñas avanzarán más despacio pues tienden a entrar en los poros de la resina.

ELECTROFORESIS   es una técnica derivada de la cromatografía que lo que hace es aplicar un campo eléctrico a una muestra colocada en la base de una lámina del gel agarosa. . es decir. La electricidad forzará el desplazamiento de las moléculas en función de su carga. se moverán al polo positivo o al negativo según cual sea su carga neta y lo harán a una velocidad que dependerá de su masa y del número de cargas eléctricas.

choque osmótico. de forma que las partículas se van separando en función de su tamaño. para separar distintas biomoléculas podemos recurrir a otras técnicas como la cromatografía y la electroforesis..   .METODOS DE FRACCIONAMIENTO CELULAR  En los métodos de fraccionamiento celular lo que se hace es destruir la célula por procedimientos mecánicos o químicos ( trituración.. proceso durante el cual se somete a las células destruidas a una serie de centrifugaciones. Por este método separamos los distintos componentes celulares que podemos estudiar de forma aislada . El método más usado es la ultracentrifugación diferencial. vibración ultrasónica. con fuerzas centrífugas progresivamente mayores. Para estudiar esta fase soluble. es decir.) y luego se separan los distintos componentes que constituyen la célula. en cada fase se obtiene un precipitado que se recoge y un sobrenadante que se vuelve a centrifugar. La última fracción que se obtiene corresponderá a una fase soluble en la que tendremos todo tipo de moléculas.

.

.

princast.educastur.doc .es/cpr/nalon_caudal/downloads /losmetodosdeestudiodelacelulacuaderno1.FUENTES DE INFORMACIÓN  http://web.

Sign up to vote on this title
UsefulNot useful