INSTITUTO TECNOLOGICO DEL VALLE DE OAXACA

BIOLOGIA CELULAR

4.4 METODOS CITOQUIMICOS

LICENCIATURA EN BIOLOGIA

CUARTO SEMESTRE GRUPO: “A”

ELABORO: AMAYA MARTINEZ PARLA DOLORES

para lo cual hay dos líneas de investigación.4 METODOS CITOQUIMICOS  El objetivo de estos métodos es la localización e identificación de las sustancias químicas constituyentes de las células.4. .

1. 2.-determinación de diferentes compuestos químicos en el interior de la célula. .-obtención de fracciones subcelulares y su posterir análisis bioquímico.

Que es la citoquimica La citoquímica estudia la composición química de la célula y permite detectar la localización topográfica de algunos principios inmediatos. . metales pesados y otras sustancias. enzimas. Se considera como un nexo de unión entre la morfología y la bioquímica.

Incubación en el medio de reacción: como consecuencia se liberar unos productos que bien por si mismos.   Las muestras a estudiar son extensiones de sangre periférica y de médula ósea. 3. acetona. Existen diversos fijadores: metanol. formaldehído. Las reacciones deben tener 3 características: sensibilidad. .. etanol. Las muestras deben ser recientes y a poder ser sin anticoagulantes.Contraste: para resaltar en lo posible el producto de reacción y permitir una óptima visualización del núcleo y del citoplasma. Para la correcta valoración citoquímica hay que intercalar controles positivos y negativos. dan lugar a un precipitado visible en el lugar de la reacción. especificidad y reproductibilidad.En una reacción bioquímica hay tres pasos fundamentales:  1. glutaraldehído... 2.Fijación: para preservar las estructuras y reactividad funcional celulares evitando fenómenos nocivos para las mismas e impidiendo también la difusión de componentes bioquímicos entre los diferentes compartimentos celulares así como al medio extracelular. o al combinarse con otra sustancia presente. improntas de tejidos y células impactadas mediante citocentrifugación procedentes de diversos líquidos biológicos. etc.

. La velocidad de desplazamiento dependerá de las características de las biomoléculas.LA CROMATOGRAFIA   permite la separación de biomoléculas basándose en la diferente velocidad de desplazamiento de los componentes de una mezcla a través de un medio determinado. Dentro de esta técnica existen distintas modalidades.

. Uno de los extremos se impregna con un disolvente que avanzará por capilaridad a través del papel. Aquellas moléculas que sean solubles en el disolvente serán arrastradas y avanzarán más rápido que las que no lo sean obteniéndose así una separación en función de la solubilidad.CROMATOGARFIA EN PAPEL  se aplica una mezcla de biomoléculas sobre una hoja de papel adsorbente.

Al final podrán recogerse las distintas fracciones separadas en función de su carga. por tanto.CROMATOGRAFIA DE INTERCAMBIO IONICO  la muestra se pasa por una columna con una resina cargada (positiva o negativamente) de forma que las moléculas de la muestra interaccionarán con la resina en mayor o menor grado en función de su carga y. . avanzarán a distinta velocidad.

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mientras las grandes irán más rápido.CROMATOGRAFIA DE FILTRACION  se pasa la muestra por una columna de resina porosa sin cargas. en función del tamaño molecular. . La separación se hace. por tanto. Las moléculas pequeñas avanzarán más despacio pues tienden a entrar en los poros de la resina.

La electricidad forzará el desplazamiento de las moléculas en función de su carga. . es decir.ELECTROFORESIS   es una técnica derivada de la cromatografía que lo que hace es aplicar un campo eléctrico a una muestra colocada en la base de una lámina del gel agarosa. se moverán al polo positivo o al negativo según cual sea su carga neta y lo harán a una velocidad que dependerá de su masa y del número de cargas eléctricas.

con fuerzas centrífugas progresivamente mayores. choque osmótico. El método más usado es la ultracentrifugación diferencial.. de forma que las partículas se van separando en función de su tamaño. Para estudiar esta fase soluble.   . Por este método separamos los distintos componentes celulares que podemos estudiar de forma aislada . vibración ultrasónica. en cada fase se obtiene un precipitado que se recoge y un sobrenadante que se vuelve a centrifugar..METODOS DE FRACCIONAMIENTO CELULAR  En los métodos de fraccionamiento celular lo que se hace es destruir la célula por procedimientos mecánicos o químicos ( trituración. La última fracción que se obtiene corresponderá a una fase soluble en la que tendremos todo tipo de moléculas. para separar distintas biomoléculas podemos recurrir a otras técnicas como la cromatografía y la electroforesis. proceso durante el cual se somete a las células destruidas a una serie de centrifugaciones. es decir.) y luego se separan los distintos componentes que constituyen la célula.

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educastur.FUENTES DE INFORMACIÓN  http://web.princast.doc .es/cpr/nalon_caudal/downloads /losmetodosdeestudiodelacelulacuaderno1.

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