CAPITULO 3:

AMINOACIDOS, PEPTIDOS Y PROTEINAS

TEMA:
TRABAJAR CON PROTEINAS

EQUIPO 4:

Villa Paulina
Quiroz Noel
Reyes Sarahy
Torres kassandra
Zepeda Maria
 ¿Cómo pueden purificarse las proteínas?
Una preparación pura de proteínas es
esencial para poder determinar sus
propiedades y su actividad, pues cada
célula puede tener miles de tipos de
proteínas
La fuente de proteínas son
generalmente células
microbianas.
Los métodos clásicos de separación de
proteínas aprovechan propiedades que
varían de una proteína a otra,
incluyendo propiedades, carga y
tamaño. A estos métodos se le han
añadido recientemente otros como lo es
el clonaje del DNA.
 ¿Cómo pueden purificarse las proteínas?
Uno de los primeros pasos del
fraccionamiento utiliza la diferencia de
solubilidad de las proteínas que es una
función compleja del pH, la temperatura,
concentración de sal, etc.
La diálisis, por ejemplo, es un procesos que
separa las proteínas de los solutos pequeños
aprovechando el mayor tamaño de las
proteínas
Una vez obtenido el extracto, se
disponen de diversos métodos para
purificar las proteínas que estos
contienen, este extracto se somete a
tratamientos que separa las proteínas
en diferentes fracciones en base a
algunas propiedades como su tamaño, a
este paso de la conoce como
fraccionamiento
 INTERCAMBIO IONICO

• tiene grupos cargados negativamente

• la fase móvil las proteínas con carga
neta positive.
 Cromatografia de filtracion en gel

• separa proteínas en base a su tamaño.

• las proteínas de mayor tamaño
emergen de las columnas antes que las
pequeñas
• La fase solida consiste en unas
pequeñas perlas hagas de material
entrecruzados.
 Cromatografia de afinidad

La cromatografía por afinidad se

basa en la afinidad de unión de
proteínas.
Las partículas de la columna
tienen en este caso un grupo
químico.
 LAS PROTEINAS PUEDE SEPARARSE Y CARACTERIZARSE
POR ELECTROLISIS.
La técnica para la separación de proteínas se basa en el desplazamiento de las proteínas cargadas en un campo
eléctrico, proceso denominado electroforesis.

𝜇 = 𝑉 /𝐸
“el desplazamiento de una proteína en un gel en una
electroforesis es por lo tanto, función de su tamaño y
forma”

La electroforesis también permite

determinación de propiedades
cruciales de una proteína tales como Electroforesis es sumamente importante como método
su punto isoeléctrico y su masa. analítico.
LAS PROTEINAS PUEDE SEPARARSE Y CARACTERIZARSE POR ELECTROLISIS
 LAS PROTEINAS PUEDE SEPARARSE Y CARACTERIZARSE POR ELECTROLISIS

Un método electroforético muy utilizado para la estimación de pureza y masa

molecular emplea el detergente dodecil sulfato sódico (SDS).

El enfoque isoeléctrico es un procedimiento

utilizado para determinar un punto isoeléctrico de
una proteína, se establece un gradiente de pH
dejando que una mezcla de ácidos y bases
orgánicas de baja masa molecular (anfolitos) se
distribuya espontáneamente en un campo eléctrico
generando a través del gel.
 Es posible cuantificar proteínas no aisladas
A fin de purificar las proteínas es esencial disponer de un método para detectar y
cuantificar dicha proteína en presencia de muchas proteínas más en cada etapa.

En este caso de proteínas enzimáticas, se puede determinar la cantidad de enzima en

una disolución, con el fin de conocerse:
• La ecuación global de la reacción catalizada
• Un procedimiento analítico para determinar la desaparición de sustrato o aparición de un
producto en ciertas reacciones
• Si la enzima requiere cofactores tales como iones metálicos
• La dependencia de la actividad enzimática respecto de la concentración del sustrato
• pH optimo
• Una zona de temperatura de la cual sea estable la enzima con actividad elevada
 Es posible cuantificar proteínas no aisladas

Después de cada paso de purificación:

• se determina la actividad de la preparación (en unidades de actividad enzimática),
• se determina independientemente la cantidad total de proteína y el cociente de los
2 valores de la misma.
• La actividad y la proteína generalmente disminuyen en cada paso. Los datos
finalmente se recogen en una tabla de purificación.