Cap. 6 How Cells Grow - M.schuler F.kargi - 2002.en - Es

6
Cómo crecen las células
6.1. INTRODUCCIÓN
Para los microbios, el crecimiento es su respuesta más esencial a su entorno fisicoquímico. El crecimiento es el resultado
tanto de la replicación como del cambio en el tamaño celular. Los microorganismos pueden crecer bajo una variedad de
condiciones físicas, químicas y nutricionales. En un medio nutritivo adecuado, los organismos extraen nutrientes del medio y
los convierten en compuestos biológicos. Parte de estos nutrientes se utilizan para la producción de energía y parte para la
biosíntesis y la formación de productos. Como resultado de la utilización de nutrientes, la masa microbiana aumenta con el
tiempo y puede describirse simplemente por
sustratos + células –– Æ productos extracelulares + más células

(6,1)
S S + X –– Æ S P + norte X
El crecimiento microbiano es un buen ejemplo de reacción autocatalítica. La tasa de crecimiento está directamente relacionada con
la concentración celular y la reproducción celular es el resultado normal de esta reacción.
La tasa de crecimiento microbiano se caracteriza por la red tasa de crecimiento específica, definido como
dX
metro red ∫ 1 (6.2a)
X dt
155
metro neto = metro g - k re (6.2b)
dónde X es la concentración de masa celular ( gramo/ l), t es el tiempo (h), y metro red es la tasa de crecimiento específica neta (h- 1). El
crecimiento específico neto es la diferencia entre una tasa de crecimiento específico bruto, metro gramo
(h- 1), y la tasa de pérdida de masa celular debido a la muerte celular o al metabolismo endógeno, k d ( h- 1).
El crecimiento microbiano también se puede describir en términos de concentración de número de células, NORTE, como
así como X. En ese caso
dN
metro R ∫ 1 (6,3)
N dt
dónde metro R es la tasa de replicación específica neta (h- 1). Si ignoramos la muerte celular, k re, entonces usamos
el símbolo m ¢ R; y en los casos en que la muerte celular no sea importante, metro R será igual m ¢ R.
En este capítulo discutiremos cómo la tasa de crecimiento específica cambia con su entorno.
ambiente. Primero, consideraremos el crecimiento en cultivo por lotes, donde las condiciones de crecimiento cambian constantemente.
6.2. CRECIMIENTO DE LOTES
El crecimiento por lotes se refiere al cultivo de células en un recipiente con una carga inicial de medio que no se ve alterada por
la adición o eliminación adicional de nutrientes. Esta forma de cultivo es simple y muy utilizada tanto en laboratorio como
industrialmente.
6.2.1. Cuantificación de la concentración celular
La cuantificación de la concentración celular en un medio de cultivo es fundamental para la determinación de la cinética y

estequiometría del crecimiento microbiano. Los métodos utilizados en la cuantificación de la concentración celular se pueden
clasificar en dos categorías: directos e indirectos. En muchos casos, los métodos directos no son factibles debido a la
presencia de sólidos en suspensión u otros compuestos interferentes en el medio. Tanto el número de células como la masa
de células se pueden cuantificar según el tipo de información necesaria y las propiedades del sistema. A menudo se prefiere
la concentración de la masa celular a la medición de la densidad del número de células cuando solo se mide una, pero a
menudo es deseable la combinación de las dos mediciones.
6.2.1.1. Determinación de la densidad del número de células. Un tobogán de Petroff-Hausser o un
hemocitómetro se utiliza a menudo para el recuento celular directo. En este método, se coloca una rejilla calibrada sobre la
cámara de cultivo y se cuenta el número de células por cuadrado de rejilla utilizando un microscopio. Para ser
estadísticamente confiable, se deben contar y promediar al menos 20 cuadrados de la cuadrícula. El medio de cultivo debe ser
transparente y libre de partículas que puedan ocultar células o confundirse con células. Los tintes se pueden utilizar para
distinguir entre células vivas y muertas. Este método es adecuado para cultivos no agregados. Es difícil contar los mohos con
el microscopio debido a su naturaleza micelial.
Para el recuento de células viables se utilizan placas que contienen medio de cultivo apropiado gelificado con agar (placas de
Petri). (La palabra viable utilizado en este contexto significa que puede reproducirse). Las muestras de cultivo se diluyen y esparcen
sobre la superficie del agar y las placas se incuban. Las colonias se cuentan en la superficie del agar después del período de
incubación. Los resultados se expresan en términos de unidades formadoras de colonias (UFC). Si las células forman agregados,
entonces un solo
156 Cómo crecen las células Cap. 6

colonia no puede formarse a partir de una sola célula. Este método ( recuentos de platos) es más adecuado para bacterias y levaduras y
mucho menos adecuado para mohos. Se debe contar una gran cantidad de colonias para obtener un número estadísticamente
confiable. Los medios de crecimiento deben seleccionarse con cuidado, ya que algunos medios apoyan el crecimiento mejor que otros.
los recuento viable puede variar, dependiendo de la composición del medio de cultivo. A partir de una sola célula, pueden necesitarse 25
generaciones para formar una colonia fácilmente observable. A menos que se elijan el medio y las condiciones de cultivo correctos,
algunas células que son metabólicamente activas pueden no formar colonias.
En un método alternativo, se coloca un medio de gel de agar en un pequeño anillo montado en un portaobjetos de
microscopio y las células se esparcen en esta placa de cultivo en miniatura. Después de un período de incubación de varias veces,
se examina el portaobjetos con un microscopio para contar las células. Este método tiene muchas de las mismas limitaciones que
los recuentos en placa, pero es más rápido y se contarán las células capaces de una reproducción limitada.
Otro método se basa en la resistencia eléctrica relativamente alta de las células (Fig. 6.1). Comercial contadores de
partículas Emplee dos electrodos y una solución de electrolito. Se coloca un electrodo en un tubo que contiene un orificio.
Se aplica vacío al tubo interior, lo que hace que una solución de electrolito que contiene las células sea succionada a través
del orificio. Se aplica un potencial eléctrico a través de los electrodos. A medida que las células pasan a través del orificio, la
resistencia eléctrica aumenta y provoca pulsos de voltaje eléctrico. El número de pulsos es una medida del número de
partículas; Se conoce la concentración de partículas, ya que el contador se activa para un volumen de muestra
predeterminado. La altura del pulso es una medida del tamaño de la celda. Se utilizan sondas con varios tamaños de orificio
para diferentes tamaños de celda. Este método es adecuado para células discretas en un medio libre de partículas y no se
puede utilizar para organismos miceliales.
El número de partículas en solución se puede determinar a partir de la medición de lig dispersos

metría). La luz pasa a través
Figura 6.1. Diagrama de un contador de partículas que utiliza el

método de resistencia eléctrica para medir el número de células
y la distribución del tamaño de las células. La relación entre los
volúmenes de una partícula no conductora y el volumen del
orificio (alterado al cambiar el diámetro del orificio) determina el
tamaño del pulso de voltaje. (Adaptado con permiso, de DIC
Wang y otros, Tecnología de fermentación y enzimas, John
Wiley & Sons, Nueva York, 1979, pág. 64.)
Segundo. 6.2 Crecimiento por lotes 157

la muestra de cultivo y un fototubo mide la luz dispersada por las células en la muestra. La intensidad de la luz dispersa es
proporcional a la concentración celular. Este método ofrece los mejores resultados para las suspensiones de partículas y
células diluidas.
6.2.1.2. Determinación de la concentración de masa celular. Métodos directos. Determi-

nación de celular peso en seco es el método directo más comúnmente utilizado para determinar la concentración de masa
celular y es aplicable solo para células cultivadas en medio libre de sólidos. Si hay sólidos no celulares, como sólidos de
melaza, celulosa o licor de maceración de maíz, la medición del peso seco será inexacta. Normalmente, las muestras de
caldo de cultivo se centrifugan o filtran y se lavan con una solución tampón o agua. La masa celular húmeda lavada se
seca luego a 80ºC. ∞ C durante 24 horas; luego se mide el peso de la celda seca.
El volumen del celular esta alto se utiliza para estimar de forma rápida pero aproximada la concentración de células en un
caldo de fermentación (por ejemplo, fermentaciones de antibióticos industriales). El caldo de fermentación se centrifuga en un tubo
graduado ahusado en condiciones estándar (rpm y tiempo) y se mide el volumen de células.
Otro método rápido se basa en la absorción de luz por células suspendidas en medios de cultivo de muestra. La
intensidad de la luz transmitida se mide con un espectrómetro. Turbidez o densidad óptica la medición del medio de cultivo
proporciona un método rápido, económico y sencillo para estimar la densidad celular en ausencia de otros sólidos o
compuestos que absorben la luz. El alcance de la transmisión de luz en una cámara de muestra es una función de la
densidad celular y el grosor de la cámara. La transmisión de luz está modulada tanto por absorción como por dispersión.
Las células pigmentadas dan resultados diferentes a las no pigmentadas. Debe tenerse en cuenta la absorción de fondo por
los componentes del medio, particularmente si las especies absorbentes disueltas se incorporan a las células. El medio
debe estar esencialmente libre de partículas. El procedimiento adecuado implica el uso de una longitud de onda que
minimice la absorción por los componentes del medio (a menudo se utilizan longitudes de onda de 600 a 700 nm),
"supresión" del medio y el uso de una curva de calibración. La curva de calibración relaciona la densidad óptica (DO) con
las mediciones de peso seco. Tales curvas de calibración pueden volverse no lineales a valores altos de DO (> 0,3) y
dependen en cierta medida del estado fisiológico de las células.
Métodos indirectos. En muchos procesos de fermentación, como las fermentaciones en molde, no se pueden utilizar
métodos directos. En tales casos se utilizan métodos indirectos, que se basan principalmente en la medición del consumo de
sustrato y / o formación de producto durante el curso del crecimiento.
Los componentes intracelulares de las células, como el ARN, el ADN y las proteínas, se pueden medir como
medidas indirectas del crecimiento celular. Durante un ciclo de crecimiento por lotes, las concentraciones de estos
componentes intracelulares cambian con el tiempo. La figura 6.2 muestra la variación de ciertos componentes
intracelulares con el tiempo durante un ciclo de crecimiento por lotes. La concentración de ARN (ARN / peso celular)
varía significativamente durante un ciclo de crecimiento por lotes; sin embargo, las concentraciones de ADN y
proteínas permanecen bastante constantes. Por lo tanto, en un medio complejo, la concentración de ADN puede
usarse como una medida del crecimiento microbiano. Las mediciones de proteínas celulares se pueden lograr
utilizando diferentes métodos. Las mediciones de nitrógeno total de aminoácidos, Biuret, Lowry (reactivo de folina) y
Kjeldahl se pueden utilizar para este propósito. Los aminoácidos totales y el método de Lowry son los más fiables.
Recientemente,

Figura 6.2. Los cambios dependientes del tiempo en la composición celular y el tamaño celular para Azotobacter vinelandii en
cultivo discontinuo se muestran. (Con permiso, de ML Shuler y HM Tsuchiya, “El tamaño de la célula como indicador de
cambios en la composición intracelular de Azotobacter vinelandii, ”Can. J. Microbiol. 31: 927, 1975 y el Consejo Nacional
de Investigación de Canadá, Ottawa.)

Sin embargo, muchos medios contienen proteínas como sustratos, lo que limita la utilidad de este enfoque.
La concentración de ATP intracelular (mgATP / mg de células) es aproximadamente constante para un organismo dado.
Por tanto, la concentración de ATP en un caldo de fermentación puede usarse como una medida de la concentración de
biomasa. El método se basa en la actividad luciferasa, que cataliza la oxidación de la luciferina a expensas del oxígeno y del
ATP con la emisión de luz.
luciferasa ligero
luciferina + O 2 + ATP (6,4)
Cuando hay exceso de oxígeno y luciferina, la emisión de luz total es proporcional al ATP total presente en la muestra. Se
pueden usar fotómetros para detectar la luz emitida. Con este método se pueden medir pequeñas concentraciones de biomasa,
ya que concentraciones muy bajas de ATP (10- 12 g ATP / l) pueden medirse mediante fotómetros o contadores de centelleo. El
contenido de ATP de una célula bacteriana típica es de 1 mg de ATP / g de células de peso seco, aproximadamente.
A veces, los nutrientes utilizados para la producción en masa celular se pueden medir para seguir el crecimiento microbiano.
Los nutrientes utilizados para la formación del producto no son adecuados para este propósito. Se pueden utilizar medidas de nitrato,
fosfato o sulfato. Se puede medir la utilización de una fuente de carbono o la tasa de absorción de oxígeno para controlar el crecimiento
celular cuando la masa celular es el producto principal.
Los productos del metabolismo celular pueden usarse para monitorear y cuantificar el crecimiento celular. Ciertos
productos producidos en condiciones anaeróbicas, como el etanol y el ácido láctico, pueden relacionarse casi
estequiométricamente con el crecimiento microbiano. Los productos deben estar asociados al crecimiento (etanol) o asociados al
crecimiento mixto (ácido láctico) para correlacionarse con
crecimiento microbiano. Para fermentaciones aeróbicas, CO 2 es un producto común y puede estar relacionado con el crecimiento
microbiano. En algunos casos, cambios en el pH o adición ácido-base para controlar el pH
se puede utilizar para controlar la absorción de nutrientes y el crecimiento microbiano. Por ejemplo, la utilización de amonio da como
resultado la liberación de iones de hidrógeno (H +) y, por lo tanto, una caída del pH. La cantidad de base agregada para neutralizar
el H + liberado es proporcional a la absorción y el crecimiento de amonio. De manera similar, cuando se usa nitrato como fuente de
nitrógeno, los iones de hidrógeno se eliminan del medio, lo que resulta en un aumento del pH. En este caso, la cantidad de ácido
añadido es proporcional a la absorción de nitrato y, por tanto, al crecimiento microbiano.
En algunos procesos de fermentación, como resultado del crecimiento micelial o la formación de polisacáridos
extracelulares, la viscosidad del caldo de fermentación aumenta durante el curso de la fermentación. Si el sustrato es un
polímero biodegradable, como almidón o celulosa, entonces la viscosidad del caldo disminuye con el tiempo a medida que
continúa la biohidrólisis. Los cambios en la viscosidad del caldo de fermentación pueden correlacionarse con la extensión del
crecimiento microbiano. Aunque los caldos poliméricos generalmente no son newtonianos, la viscosidad aparente medida a
una tasa fija se puede usar para estimar la concentración de células o producto.
6.2.2. Patrones de crecimiento y cinética en cultivo por lotes
Cuando se inocula un medio de nutrientes líquido con un cultivo de semillas, los organismos toman selectivamente los
nutrientes disueltos del medio y los convierten en biomasa. Una curva de crecimiento por lotes típica incluye las siguientes
fases: (1) fase de retraso, (2) fase de crecimiento logarítmico o exponencial, (3) fase de desaceleración, (4) fase
estacionaria y (5) fase de muerte. La figura 6.3 describe un ciclo de crecimiento por lotes.

Figura 6.3. Curva de crecimiento típica para una población bacteriana. Tenga en cuenta que la fase de crecimiento (que se muestra
aquí para el número de células) depende del parámetro utilizado para controlar el crecimiento.
los fase de latencia ocurre inmediatamente después de la inoculación y es un período de adaptación de las células
a un nuevo entorno. Los microorganismos reorganizan sus constituyentes moleculares cuando se transfieren a un nuevo
medio. Dependiendo de la composición de los nutrientes, se sintetizan nuevas enzimas, se reprime la síntesis de algunas
otras enzimas y la maquinaria interna de las células se adapta a las nuevas condiciones ambientales. Estos cambios
reflejan los mecanismos intracelulares para la regulación de los procesos metabólicos discutidos en el capítulo 4. Durante
esta fase, la masa celular puede aumentar un poco, sin un aumento en la densidad del número de células. Cuando el
inóculo es pequeño y tiene una fracción baja de células que son viables, puede haber una fase de pseudoretardo, que es
resultado, no de adaptación, sino de tamaño pequeño del inóculo o mal estado del inóculo.
La baja concentración de algunos nutrientes y factores de crecimiento también puede provocar una fase de retraso
prolongada. Por ejemplo, la fase de retraso de Enterobacter aerogenes ( antes Aerobacter aerogenes) crecido en medio
tampón de glucosa y fosfato aumenta a medida que la concentración de Mg 2+, que es un activador de la enzima fosfatasa,
disminuye. Como otro ejemplo,
incluso las células heterótrofas requieren CO 2 fijación (para complementar los intermediarios eliminados de los ciclos metabólicos
clave que producen energía durante la biosíntesis rápida) y burbujeo excesivo
puede eliminar el CO generado metabólicamente 2 demasiado rápido para que la reestructuración celular se lleve a cabo de manera
eficiente, particularmente con un pequeño inóculo.

La edad del cultivo del inóculo tiene un fuerte efecto sobre la duración de la fase de retraso. La edad se refiere a
cuánto tiempo se ha mantenido un cultivo en un cultivo por lotes. Por lo general, el período de retraso aumenta con la edad del
inóculo. En algunos casos, hay una edad óptima del inóculo que resulta en un período de retraso mínimo. Para minimizar la
duración de la fase de retraso, las células deben adaptarse al medio de crecimiento y las condiciones antes de la inoculación,
y las células deben ser jóvenes (o células en fase exponencial) y activas, y el tamaño del inóculo debe ser grande (5% a 10%
por volumen). Puede que sea necesario optimizar el medio nutritivo e incluir ciertos factores de crecimiento para minimizar la
fase de retraso. La figura 6.4 muestra un ejemplo de varia-
ción de la fase de retraso con MgSO 4 concentración. Muchas plantas de fermentación comerciales dependen del cultivo por lotes; para
obtener una alta productividad a partir de un tamaño de planta fijo, la fase de retraso
debe ser lo más corto posible.

Pueden observarse múltiples fases de retardo cuando el medio contiene más de una fuente de carbono. Este
fenómeno, conocido como crecimiento diauxico, es causado por un cambio en las vías metabólicas en medio de un ciclo de
crecimiento (ver Ejemplo 4.1). Después de que se agota una fuente de carbono, las células adaptan sus actividades
metabólicas para utilizar la segunda fuente de carbono. La primera fuente de carbono es más fácilmente utilizable que la
segunda, y la presencia de una fuente de carbono más fácilmente disponible reprime la síntesis de las enzimas necesarias
para el metabolismo del segundo sustrato.
los fase de crecimiento exponencial también se conoce como el fase de crecimiento logarítmico. En esta fase, las células se han
adaptado a su nuevo entorno. Después de este período de adaptación, las células pueden multiplicarse rápidamente y la masa celular
y la densidad del número de células aumentan exponencialmente con el tiempo. Este es un período de crecimiento equilibrado, en el
que todos los componentes de una célula crecen al mismo ritmo.
la celda permanece aproximadamente
constante durante , la tasa de crecimiento específica neta
Figura 6.4. Influencia del Mg 2+ concentración en la

fase de retraso en E. aerogenes cultura. (Con permiso
de A. CR Dean y
C. Hinshelwood, Crecimiento, función y regulación en
células bacterianas. Oxford Press, Londres, 1966, pág. 55.)

determinado a partir del número de células o de la masa celular sería el mismo. Dado que las concentraciones de nutrientes son
grandes en esta fase, la tasa de crecimiento es independiente de la concentración de nutrientes. La tasa de crecimiento exponencial es
de primer orden:
dX = metro
red X, X = X0 a t=0 (6,5)
dt
Integración de eq. 6.5 rendimientos
X = metro t, o
en red
X = X e metro
0
red t (6,6)
X0
dónde X y X 0 son concentraciones de células en el tiempo t y t = 0.

El tiempo necesario para duplicar la masa microbiana viene dado por eq. 6.6. El exponencial
el crecimiento se caracteriza por una línea recta en una gráfica de semilogaritmo de ln X versus tiempo:
0,693
t d = en 2 = (6,7)
metro red metro red
dónde t re es el tiempo de duplicación de la masa celular.
De manera similar, podemos calcular un tiempo de duplicación en función de los números de celda y el espectro neto.
tasa específica de replicación. Así
t ¢ d = En 2 (6,8)
metro R
dónde t ¢ re es el tiempo de duplicación basado en la tasa de replicación. Durante un crecimiento equilibrado t re
será igual t ¢ re, ya que la composición y el tamaño promedio de las células no cambiarán con el tiempo.
los fase de crecimiento de desaceleración sigue la fase exponencial. En esta fase, el crecimiento
desacelera debido al agotamiento de uno o más nutrientes esenciales oa la acumulación de subproductos tóxicos del
crecimiento. Para un cultivo bacteriano típico, estos cambios ocurren en un período de tiempo muy corto. El entorno que
cambia rápidamente da como resultado desequilibrado
crecimiento. Durante el crecimiento desequilibrado, la composición y el tamaño de las células cambiarán y t re y t ¢ re
será no igualarse. En la fase exponencial, el sistema de control metabólico celular está configurado para
lograr las máximas tasas de reproducción. En la fase de desaceleración, las tensiones inducidas por el agotamiento de
nutrientes o la acumulación de desechos provocan una reestructuración de la célula para aumentar las perspectivas de
supervivencia celular en un entorno hostil. Estos cambios observables son el resultado de los mecanismos moleculares de
represión e inducción que discutimos en el Capítulo 4. Debido a la rapidez de estos cambios, la fisiología celular en
condiciones de limitación de nutrientes se estudia más fácilmente en cultivo continuo, como se analiza más adelante en este
capítulo. .
los fase estacionaria comienza al final de la fase de desaceleración, cuando la tasa de crecimiento neto es cero (sin
división celular) o cuando la tasa de crecimiento es igual a la tasa de muerte. Aunque la tasa de crecimiento neto es cero
durante la fase estacionaria, las células siguen siendo metabólicamente activas y producen metabolitos secundarios. Metabolitos
primarios son productos relacionados con el crecimiento y metabolitos secundarios no están relacionados con el crecimiento. De
hecho, la producción de ciertos metabolitos aumenta durante la fase estacionaria (p. Ej., Antibióticos, algunas hormonas)
debido a la desregulación de los metabolitos. Durante el curso de la fase estacionaria, pueden ocurrir uno o más de los
siguientes fenómenos:

1. La concentración de masa celular total puede permanecer constante, pero el número de células viables puede
disminución.
2. Puede ocurrir lisis celular y puede caer la masa celular viable. Una segunda fase de crecimiento puede
ocurren y las células pueden crecer en productos de lisis de células lisadas (crecimiento críptico).
3. Es posible que las células no estén creciendo, pero pueden tener un metabolismo activo para producir
metabolitos. La regulación celular cambia cuando las concentraciones de ciertos metabolitos (carbono, nitrógeno, fosfato)
son bajas. Los metabolitos secundarios se producen como resultado de la desregulación de los metabolitos.
Durante la fase estacionaria, la célula cataboliza las reservas celulares de nuevos componentes básicos y de monómeros
productores de energía. Se llama metabolismo endógeno. La célula siempre debe gastar energía para mantener una
membrana energizada (es decir, la fuerza motriz del protón) y el transporte de nutrientes y para funciones metabólicas
esenciales como la motilidad y la reparación del daño a las estructuras celulares. Este gasto de energía se llama energía de
mantenimiento. La ecuación apropiada para describir la conversión de la masa celular en energía de mantenimiento o la
pérdida de masa celular debido a la lisis celular durante la fase estacionaria es
dX = -k X
o X = X e- k t re (6,9)
re entonces
dt
dónde k re es una constante de velocidad de primer orden para el metabolismo endógeno, y X entonces es la celda
concentración de masa al comienzo de la fase estacionaria. Porque S es cero, metro gramo es cero en la fase estacionaria.
El motivo de la interrupción del crecimiento puede ser el agotamiento de un nutriente esencial o la acumulación
de productos tóxicos. Si se produce un producto inhibidor y se acumula en el medio, la tasa de crecimiento se ralentizará,
dependiendo de la producción de inhibidor, y a un cierto nivel de concentración de inhibidor, el crecimiento se detendrá.
La producción de etanol por levadura es un ejemplo de una fermentación en la que el producto inhibe el crecimiento. La
dilución del medio toxificado, la adición de un compuesto químico no metabolizable que forma un complejo con la toxina o
la eliminación simultánea de la toxina aliviaría los efectos adversos de la toxina y produciría un mayor crecimiento.
los fase de muerte o fase de declive) sigue a la fase estacionaria. Sin embargo, algo de muerte celular puede
comenzar durante la fase estacionaria y no siempre es posible una demarcación clara entre estas dos fases. A
menudo, las células muertas se lisan y los organismos vivos utilizan los nutrientes intracelulares liberados en el medio
durante la fase estacionaria. Al final de la fase estacionaria, ya sea por agotamiento de nutrientes o acumulación de
productos tóxicos, comienza la fase de muerte.
La tasa de muerte generalmente sigue una cinética de primer orden:
dN = -k re ¢ norte
o N = N e-s k re ¢ t (6,10)
dt
dónde norte s es la concentración de células al final de la fase estacionaria y k ¢ re es el primero-

orden constante de tasa de mortalidad. Una parcela de ln norte versus t produce una línea de pendiente - k ¢ re. Durante la fase de muerte,
las células pueden lisarse o no, y el restablecimiento del cultivo puede ser posible.
sible en la fase de muerte temprana si las células se transfieren a un medio rico en nutrientes. Tanto en la fase de muerte
como en la estacionaria, es importante reconocer que hay una distribución de

propiedades entre los individuos de una población. Con una distribución estrecha, la muerte celular se producirá casi
simultáneamente; con una distribución amplia, una subfracción de la población puede sobrevivir durante un período
prolongado. Es esta subfracción la que dominaría el restablecimiento de un cultivo a partir del inóculo derivado de cultivos
estacionarios o en fase de muerte. Por tanto, el uso de un inóculo antiguo puede seleccionar variantes de la cepa original
que tienen capacidades metabólicas alteradas.
Para describir mejor la cinética de crecimiento, definimos algunos parámetros relacionados estequiométricamente. Los
coeficientes de rendimiento se definen en función de la cantidad de consumo de otro material. Por ejemplo, el rendimiento de
crecimiento en una fermentación es
re X
YX/S ∫ - (6,11)
re S
Al final del período de crecimiento del lote, tenemos un rendimiento de crecimiento aparente o rendimiento de crecimiento
observado). Debido a que las condiciones de cultivo pueden alterar los patrones de utilización del sustrato, el rendimiento de
crecimiento aparente no es una verdadera constante. Por ejemplo, con un compuesto (como la glucosa) que es tanto una fuente de
carbono como de energía, el sustrato se puede consumir como:
re S = re S asimilación + re S asimilado + re S energía de crecimiento + re S mantenimiento

en biomasa en una energía (6,12)
extracelular
producto
En la sección de cultivo continuo, diferenciaremos entre el rendimiento de crecimiento real (que es constante) y el
rendimiento aparente. Pueden definirse coeficientes de rendimiento basados en otros sustratos o formación de
productos; por ejemplo,
X
Y =-D (6,13)
re O 2
X / O2
YP/S= - D PAGS (6,14)

re S
Para organismos que crecen aeróbicamente con glucosa, Y X / S es típicamente de 0,4 a 0,6 g / g para la mayoría
levadura y bacterias, mientras Y X/ O es de 0,9 a 1,4 g / g. El crecimiento anaeróbico es menos eficiente y el coeficiente de
2
rendimiento se reduce sustancialmente (ver Fig. 6.5). Con sustratos que son más o
menos reducido que la glucosa, el valor del coeficiente de rendimiento aparente cambiará. Xa
metano, Y X / S asumiría valores de 0,6 a 1,0 g / g, con el correspondiente Y X/ O disminuyendo hasta aproximadamente 0,2 g / g. En la
2
mayoría de los casos, el rendimiento de biomasa en una fuente de energía de carbono es 1.0 ±
0,4 g de biomasa por g de carbono consumido. La tabla 6.1 enumera algunos ejemplos de Y X / S y Y X/ O2
para una variedad de sustratos y organismos.
UN coeficiente de mantenimiento se utiliza para describir la tasa específica de absorción de sustrato para el mantenimiento
celular, o
[ dS dt] metro
metro ∫ - (6,15)
X
Sin embargo, durante la fase estacionaria, donde hay poco sustrato externo disponible, el metabolismo endógeno de los
componentes de la biomasa se utiliza como energía de mantenimiento.

Figura 6.5. Rendimientos de crecimiento aeróbico y anaeróbico de Streptococcus faecalis con glucosa como
sustrato. (Con autorización de B. Atkinson y F. Mavituna, Manual de ingeniería bioquímica y biotecnología, Macmillan,
Inc., Nueva York, 1983.)
El mantenimiento celular representa gastos de energía para reparar los componentes celulares dañados, para transferir
algunos nutrientes y productos dentro y fuera de las células, para la motilidad y para ajustar la osmolaridad del volumen interior de
las células. Las tasas de crecimiento microbiano, formación de productos y utilización del sustrato generalmente se expresan en
forma de tasas específicas (p. Ej., Normalizadas con respecto a X), ya que las biorreacciones son autocatalíticas. Las tasas
específicas se utilizan para comparar la eficacia de varios esquemas de fermentación y biocatalizadores.
Los productos microbianos se pueden clasificar en tres categorías principales (ver Fig. 6.6):
1. Los productos asociados al crecimiento se producen simultáneamente con el crecimiento microbiano.

La tasa específica de formación de productos es proporcional a la tasa específica de crecimiento,
metro gramo. Tenga en cuenta que metro gramo difiere de metro red, la tasa de crecimiento específico neto, cuando el metabolismo
endógeno es distinto de cero.
1 dP = Y
qP= P/X metro gramo (6,16)
X dt
La producción de una enzima constitutiva es un ejemplo de un producto asociado al crecimiento.
2. La formación de producto no asociada al crecimiento tiene lugar durante la fase estacionaria

cuando la tasa de crecimiento es cero. La tasa específica de formación de productos es constante.

TABLA 6.1 Resumen de factores de rendimiento para el crecimiento aeróbico de diferentes microorganismos en diversas fuentes de
carbono
YX/S Y X/ O2 un
Organismo Sustrato g/g g / mol g / gC g/g
Enterobacter aerogenes Maltosa 0.46 149,2 1.03 1,50

Manitol 0,52 95,2 1,32 1,18
Fructosa 0,42 76,1 1.05 1,46
Glucosa 0.40 72,7 1.01 1,11
Candida utilis Glucosa 0,51 91,8 1,28 1,32
Penicillium chrysogenum Glucosa 0,43 77,4 1.08 1,35
Pseudomonas fluorescens Glucosa 0,38 68,4 0,95 0,85
Rhodopseudomonas spheroides Glucosa 0.45 81,0 1.12 1,46
Saccharomyces cerevisiae Glucosa 0,50 90,0 1,25 0,97
Enterobacter aerogenes Ribosa 0,35 53,2 0,88 0,98
Succinato 0,25 29,7 0,62 0,62
Glicerol 0.45 41,8 1,16 0,97
Lactato 0,18 16.6 0.46 0,37
Piruvato 0,20 17,9 0,49 0.48
Acetato 0,18 10,5 0,43 0,31
Candida utilis Acetato 0,36 21,0 0,90 0,70
Pseudomonas fluorescens Acetato 0,28 16,8 0,70 0.46
Candida utilis Etanol 0,68 31,2 1,30 0,61
Pseudomonas fluorescens Etanol 0,49 22,5 0,93 0,42
Klebsiella sp. Metanol 0,38 12,2 1.01 0,56
Metilomonas sp. Metanol 0.48 15,4 1,28 0,53
Pseudomonas sp. Metanol 0,41 13,1 1.09 0.44
Metilococo sp. Metano 1.01 16,2 1,34 0,29
Pseudomonas sp. Metano 0,80 12,8 1.06 0,20
Pseudomonas sp. Metano 0,60 9,6 0,80 0,19
Pseudomonas methanica Metano 0,56 9.0 0,75 0,17
un Y
es el factor de rendimiento que relaciona los gramos de células formadas por gramo de O 2 consumado. Con permiso de S. Nagai en Avances
X/ O2
en Ingeniería Bioquímica, vol. 11, TK Ghose, A. Fiechter y N. Blakebrough, eds., Springer-Verlag, Nueva York, pág. 53, 1979.
q P = b = constante (6,17)
Muchos metabolitos secundarios, como los antibióticos (por ejemplo, penicilina), son productos no asociados al
crecimiento.
3. La formación de productos asociados al crecimiento mixto tiene lugar durante el crecimiento lento y
Fases estacionarias. En este caso, la tasa específica de formación de producto viene dada por la siguiente ecuación:
q P = a.m g + segundo
(6,18)
La fermentación del ácido láctico, la goma xantana y algunos metabolitos secundarios del cultivo celular son ejemplos
de productos asociados al crecimiento mixto. La ecuación 6.18 es una

Figura 6.6. Patrones cinéticos de crecimiento y formación de productos en fermentaciones discontinuas: (a) formación de productos
asociados con el crecimiento, (b) formación de productos asociados con el crecimiento mixto y (c) formación de productos no asociados
con el crecimiento.
Luedeking – Piret ecuación. Si a = 0, el producto solo está asociado al no crecimiento, y si b = 0, el producto

solo estaría asociado al crecimiento y, en consecuencia, un haría
entonces ser igual a Y P / X.
Algunos de los conceptos relacionados con la tasa de crecimiento y el rendimiento se ilustran en el ejemplo 6.1.
Ejemplo 6.1.
Se hizo crecer una cepa de moho en un cultivo discontinuo sobre glucosa y se obtuvieron los siguientes datos.
Celda Glucosa
Hora concentración concentración
(h) (g / l) (g / l)
0 1,25 100
9 2,45 97
dieciséis 5.1 90,4
23 10,5 76,9
30 22 48,1
34 33 20,6
36 37,5 9.38
40 41 0,63
a. Calcule la tasa de crecimiento específica neta máxima.

segundo. Calcule el rendimiento de crecimiento aparente.
C. ¿Qué concentración celular máxima se podría esperar si se usaran 150 g de glucosa con el mismo tamaño de
inóculo?
Solución Una parcela de ln X versus t produce una pendiente de 0,1 h.
- X 1 = En 37.5 En 5.1
en X 2 en - @ 0.1 h- 1
un) metro neto =
t2- t1 36-16
segundo)
Y = - re X = - 41-1,25 a 0,4 g de células / g de sustrato
re S 0,625-100
C) X max = X 0 + YS 0 = 1,25+ 0,4 (150) = 60,25 g células / l

6.2.3. Cómo las condiciones ambientales afectan la cinética
del crecimiento
Los patrones de crecimiento microbiano y formación de productos que acabamos de discutir están influenciados por
condiciones ambientales como la temperatura, el pH y la concentración de oxígeno disuelto.
La temperatura es un factor importante que afecta el rendimiento de las células. Según su temperatura
óptima, los organismos se pueden clasificar en tres grupos: (1) psicrófilos
( T opt < 20 ° C), (2) mesófilos ( T opt = de 20 ° a 50 ° C), y (3) termófilos ( T optar> 50 °
C). A medida que aumenta la temperatura hacia la temperatura de crecimiento óptima, la tasa de crecimiento
aproximadamente se duplica por cada 10 ° C de aumento de temperatura. Por encima del rango de temperatura óptimo, la tasa de
crecimiento disminuye y puede ocurrir muerte térmica. La tasa de replicación específica neta se puede expresar mediante la
siguiente ecuación para la temperatura por encima del nivel óptimo:
dN = ( m ¢ - k ¢) N dt
(6,19)
R re
A altas temperaturas, la tasa de muerte térmica excede la tasa de crecimiento, lo que provoca una disminución neta en la
concentración de células viables.
Ambos m ¢ R y k ¢ re varían con la temperatura de acuerdo con la ecuación de Arrhenius:
m ¢ R = Ae- mi un / RT, k re ¢ = UN ¢ mi- mi d / RT (6,20)
dónde mi un y mi re son energías de activación para el crecimiento y muerte térmica. La energía de activación para el crecimiento es
típicamente de 10 a 20 kcal / mol y para la muerte térmica de 60 a 80 kcal / mol.
Es decir, la muerte térmica es más sensible a los cambios de temperatura que el crecimiento microbiano.
La temperatura también afecta la formación del producto. Sin embargo, la temperatura óptima para el crecimiento y la
formación del producto puede ser diferente. El coeficiente de rendimiento también se ve afectado por la temperatura. En algunos casos,
como la producción de proteínas unicelulares, la optimización de la temperatura
ción para maximizar el coeficiente de rendimiento ( Y X / S) es critico. Cuando la temperatura aumenta por encima de la
temperatura óptima, aumentan los requisitos de mantenimiento de las celdas. Es decir,
el coeficiente de mantenimiento (ver ecuación 6.15) aumenta al aumentar la temperatura con una energía de activación de 15 a 20
kcal / mol, lo que resulta en una disminución del coeficiente de rendimiento.
La temperatura también puede afectar el paso que limita la velocidad en un proceso de fermentación. A altas temperaturas,
la tasa de biorreacción podría ser más alta que la tasa de difusión, y la difusión se convertiría entonces en el paso limitante de la tasa
(por ejemplo, en un sistema celular inmovilizado). La energía de activación de la difusión molecular es de aproximadamente 6 kcal /
mol. La energía de activación para la mayoría de las biorreacciones es más de 10 kcal / mol, por lo que las limitaciones de difusión
deben considerarse cuidadosamente a altas temperaturas. La figura 6.7 muestra una variación típica de la tasa de crecimiento con la
temperatura.
La concentración de iones de hidrógeno (pH) afecta la actividad de las enzimas y, por lo tanto, la tasa de crecimiento
microbiano. El pH óptimo para el crecimiento puede ser diferente al de la formación del producto. Generalmente, el rango de pH
aceptable varía alrededor del óptimo por ± 1 a 2 unidades de pH. Los diferentes organismos tienen diferentes pH óptimos: el pH
óptimo para muchas bacterias varía de pH = 3 a 8; para levadura, pH = 3 a 6; para moldes, pH = 3 a 7; para células vegetales,
pH
= 5 a 6; y para células animales, pH = 6,5 a 7,5. Muchos organismos tienen mecanismos para

Figura 6.7. Gráfico de Arrhenius de la tasa de crecimiento de E. coli B
/ r. Los puntos de datos individuales están marcados con los
grados Celsius correspondientes.
E. coli B / r se cultivó en un medio complejo rico (!) Y un

medio de sales minerales de glucosa ("). (Con permiso,
según SL Herendeen, RA VanBogelen y FC Neidhardt,“
Levels of Major Protein of Escherichia coli durante el
crecimiento a diferentes temperaturas " J. Bacteriol. 139: 195,
1979, como se dibuja en RY Stanier y otros, El mundo
microbiano, 5a ed., Pearson Education, Upper Saddle
River, Nueva Jersey, 1986, 207.)
mantener el pH intracelular a un nivel relativamente constante en presencia de fluctuaciones en el pH ambiental.

Cuando el pH difiere del valor óptimo, aumentan los requisitos de energía de mantenimiento. Una consecuencia de
los diferentes pH óptimos es que el pH del medio se puede usar para seleccionar un organismo sobre otro.
En la mayoría de las fermentaciones, el pH puede variar sustancialmente. A menudo, la naturaleza de la fuente de

nitrógeno puede ser importante. Si el amonio es la única fuente de nitrógeno, los iones de hidrógeno se liberan en el medio como
resultado de la utilización microbiana del amoníaco, lo que resulta en una disminución del pH. Si el nitrato es la única fuente de
nitrógeno, los iones de hidrógeno se eliminan del medio para reducir el nitrato a amoníaco, lo que resulta en un aumento del pH.
Además, el pH puede cambiar debido a la producción de ácidos orgánicos, la utilización de ácidos (particularmente amino
ácidos), o la producción de bases. La evolución o suministro de CO 2 puede alterar mucho el pH en algunos sistemas (por ejemplo,
agua de mar o cultivo de células animales). Por tanto, el control del pH mediante un
tampón o un sistema de control de pH activo es importante. La variación de la tasa de crecimiento específica con el pH se representa
en la Fig. 6.8, lo que indica un pH óptimo.
Oxígeno disuelto ( DO) es un sustrato importante en las fermentaciones aeróbicas y puede ser un sustrato limitante, ya que el
oxígeno gaseoso es escasamente soluble en agua. A altas concentraciones de células, la tasa de consumo de oxígeno puede exceder
la tasa de suministro de oxígeno, lo que lleva a limitaciones de oxígeno. Cuando el oxígeno es el factor limitante de la velocidad, la
velocidad de crecimiento específica varía con la concentración de oxígeno disuelto según la cinética de saturación; por debajo de una
concentración crítica, el crecimiento o la respiración se acercan a una dependencia de la tasa de primer orden de la concentración de
oxígeno disuelto.
Encima de un concentración crítica de oxígeno, la tasa de crecimiento se vuelve independiente de la concentración de oxígeno
disuelto. La figura 6.9 muestra la variación de la tasa de crecimiento específica con la concentración de oxígeno disuelto. El oxígeno es
un factor limitante de la tasa de crecimiento cuando el

Figura 6.8. Variación típica de la tasa de crecimiento específica con el pH. Las unidades son arbitrarias. Con algunos cultivos
microbianos, es posible adaptar los cultivos a un rango más amplio de valores de pH si los cambios de pH se realizan en pequeños
incrementos desde la transferencia del cultivo hasta la transferencia.
El nivel de OD está por debajo de la concentración crítica de OD. En este caso, otro componente del medio (por ejemplo, glucosa,
amonio) se vuelve limitante del grado de crecimiento. Por ejemplo, con Azotobacter vinelandii a una DO = 0,05 mg / l, la tasa de
crecimiento es aproximadamente el 50% del máximo incluso si hay una gran cantidad de glucosa presente. Sin embargo, la cantidad
máxima de células formadas no está determinada por el OD, ya que el oxígeno se reabastece continuamente. Si la glucosa se
consumiera por completo, el crecimiento cesaría incluso si DO = 0,05 mg / l. Por tanto, el grado de crecimiento (masa de células
formadas) dependería de la glucosa, mientras que la tasa de crecimiento durante la mayor parte del período de cultivo dependería del
valor de OD.
La concentración crítica de oxígeno es aproximadamente del 5% al 10% de la concentración saturada de OD para bacterias
y levaduras y aproximadamente del 10% al 50% de la concentración saturada de OD para los cultivos de moho, dependiendo del
tamaño de la pastilla de los mohos. Concentración de OD saturado en agua a 25 ∞ C y 1 atm de presión es de aproximadamente 7 ppm.
La presencia de sales y sustancias orgánicas disueltas puede alterar el valor de saturación, mientras que las temperaturas cada vez
más altas disminuyen el valor de saturación.
El oxígeno generalmente se introduce en el caldo de fermentación rociando aire a través del caldo. La transferencia de
oxígeno de las burbujas de gas a las células suele estar limitada por la transferencia de oxígeno a través de la película líquida que
rodea las burbujas de gas. La tasa de transferencia de oxígeno de la fase gaseosa a la líquida viene dada por
norte O = k L a (C * - C L) = OTR
2 (6.21)
dónde k L es el coeficiente de transferencia de oxígeno (cm / h), un es el área interfacial gas-líquido (cm 2 / cm 3), k L un es el
coeficiente volumétrico de transferencia de oxígeno (h- 1), C* está saturado DO

9. Dependencia de la tasa de crecimiento
) Azotobacter vinelandii, un estricto

ganismo, y (b) E. coli, cual es
E. coli crece anaeróbicamente a un 70% de
su crecimiento aeróbico en medio.
m - m anaeróbico
metro
=
metro
metro
aeróbico - metro anaeróbico
metro
(Con permiso de J. Chen, AL Tannahill y ML

Shuler, Biotechnol. Bioeng. 27: 151, 1985 y John
Wiley & Sons, Inc., Nueva York).
concentración (mg / l), C L es la concentración real de OD en el caldo (mg / l), y la norte O2 es

la tasa de transferencia de oxígeno (mg O 2 / l ◊ h). Además, el término tasa de transferencia de oxígeno ( OTR).
La tasa de absorción de oxígeno se denota como NUESTRO (tasa de consumo de oxígeno) y
metro gramo X
NUESTRO = q O2 X =
Y X/ O2 (6.22)
dónde q O es la tasa específica de consumo de oxígeno (mg O 2 / g dw células ◊ h), Y X/ O es el coeficiente de rendimiento 2 ficiente en
oxígeno (g dw células / g O 2), y X es la concentración celular (g dw celular 2 s / l).
Cuando la transferencia de oxígeno es el paso que limita la velocidad, la velocidad de consumo de oxígeno es
igual a la tasa de transferencia de oxígeno. Si el requisito de mantenimiento de O 2 es insignificante en comparación con el crecimiento,
entonces
metro gramo X
= k L C.A*- L) C
Y X/ O2 (6.23)
o
dX = Y X/ O k L a (C * -C) dt
2
L (6.24)

La tasa de crecimiento varía casi linealmente con la tasa de transferencia de oxígeno bajo limitaciones de transferencia de oxígeno.
Entre los diversos métodos utilizados para superar las limitaciones de OD se encuentran el uso de aire enriquecido con oxígeno u
oxígeno puro y el funcionamiento a alta presión atmosférica (2 a 3 atm). La transferencia de oxígeno tiene un gran impacto en el diseño
del reactor (consulte el Capítulo 10).
El potencial redox es un parámetro importante que afecta la velocidad y el alcance de muchas reacciones
oxidativo-reductoras. En un medio de fermentación, el potencial redox es una función compleja de OD, pH y otras
concentraciones de iones, como agentes reductores y oxidantes. El potencial electroquímico de un medio de
fermentación se puede expresar mediante la siguiente ecuación:
2.3 RT RT +
mi h = mi 0 ¢ + Iniciar sesión
O2
P + 2.3 registro (H) (6.25)
4F F
donde el potencial electroquímico se mide en milivoltios mediante un voltímetro / pH y PAGS O está en atmósferas.
2
El potencial redox de un medio de fermentación se puede reducir pasando gas nitrógeno o

mediante la adición de agentes reductores como cisteína HCl o Na 2 S. Se puede pasar gas oxígeno o se pueden agregar algunos
agentes oxidantes al medio de fermentación para aumentar el potencial redox.
Dióxido de carbono disuelto (DCO 2) La concentración puede tener un efecto profundo en el desempeño de los organismos.
DCO muy alto 2 las concentraciones pueden ser tóxicas para algunas células. Por otro lado, las celdas requieren un cierto DCO 2 nivel
para las funciones metabólicas adecuadas. El dis-
La concentración de dióxido de carbono resuelto se puede controlar cambiando el CO 2 contenido del suministro de aire y la velocidad
de agitación.
La fuerza iónica de los medios de fermentación afecta el transporte de ciertos nutrientes dentro y fuera de las
células, las funciones metabólicas de las células y la solubilidad de ciertos nutrientes, como el oxígeno disuelto. La
fuerza iónica viene dada por la siguiente ecuación:
Yo = 1 S C yo Z 2 yo
(6,26)
2
dónde C es la concentración de un ion, Z yo es su cargo, y yo es la fuerza iónica del medio.
Las concentraciones elevadas de sustrato que están significativamente por encima de los requisitos
estequiométricos inhiben las funciones celulares. Los niveles de inhibición de los sustratos varían según el tipo de
células y el sustrato. La glucosa puede ser inhibidora a concentraciones superiores a 200 g / l (p. Ej., Fermentación
de etanol por levadura), probablemente debido a una reducción en la actividad del agua. Algunas sales, como el
NaCl, pueden ser inhibidoras a concentraciones superiores a 40 g / l debido a la alta presión osmótica. Algunos
compuestos refractarios, como el fenol, el tolueno y el metanol, son inhibidores a concentraciones mucho más bajas
(p. Ej., 1 g / l). Las concentraciones no inhibitorias máximas típicas de algunos nutrientes son glucosa, 100 g / l;
etanol, 50 g / l para levadura, mucho menos para la mayoría de organismos; amonio, 5 g / l; fosfato, 10 g / l; y
nitrato, 5 g / l.
6.2.4. Generación de calor por crecimiento microbiano
Aproximadamente del 40% al 50% de la energía almacenada en una fuente de energía y carbono se convierte en energía biológica
(ATP) durante el metabolismo aeróbico, y el resto de la energía se libera en forma de calor. Para las células en crecimiento activo, el
requisito de mantenimiento es bajo y la evolución de calor está directamente relacionada con el crecimiento.

El calor generado durante el crecimiento microbiano se puede calcular utilizando el calor de combustión
del sustrato y del material celular. En la figura 6.10 se presenta un esquema de un balance de entalpía para la
utilización microbiana del sustrato. El calor de combustión del sustrato es igual a la suma del calor metabólico y
el calor de combustión del material celular.
re H s = re H c + 1
(6.27a)
YX/S YH
dónde re H s es el calor de combustión del sustrato (kJ / g de sustrato), Y X / S es el coeficiente de rendimiento del sustrato (g de células /
g de sustrato), re H C es el calor de combustión de las células (kJ / g células),
y 1/ Y H es el calor metabólico desarrollado por gramo de masa celular producida (kJ / g de células).
La ecuación 6.27a se puede reorganizar para producir
YX/S
YH= (6.27b)
re H s - Y X / S re H C
re H s y re H C se puede determinar a partir de la combustión del sustrato y las células. Típico

re H C los valores para las células bacterianas son de 20 a 25 kJ / g de células. Valores típicos de Y H son glucosa, 0,42 g / kcal;
malato, 0,30 g / kcal; acetato, 0,21 g / kcal; etanol, 0,18 g / kcal; metanol, 0,12
g / kcal; y metano, 0,061 g / kcal. Claramente, el grado de oxidación del sustrato tiene un fuerte efecto sobre la
cantidad de calor liberado.
La tasa total de evolución de calor en una fermentación por lotes es
1
Q GR = V L metro red X (6,28)
YH
dónde V L es el volumen de líquido (l) y X es la concentración celular (g / l).

En fermentaciones aeróbicas, la tasa de evolución de calor metabólico puede correlacionarse aproximadamente
relacionado con la tasa de absorción de oxígeno, ya que el oxígeno es el aceptor final de electrones.
9)
Figura 6.10. Balance de calor sobre la utilización microbiana del sustrato.

Aquí Q GRAMO está en unidades de kcal / h, mientras que Q O está en milimoles de O 2 / h. Calor metabólico liberado durante fe 2 La irritación se
puede eliminar mediante refrigeración por circulación.
agua a través de un serpentín de enfriamiento o camisa de enfriamiento en el fermentador. A menudo, el control de la temperatura
(eliminación adecuada del calor) es una limitación importante en el diseño del reactor (véase el Capítulo 10). La capacidad de estimar
los requisitos de eliminación de calor es esencial para un diseño adecuado del reactor.
6.3. CUANTIFICACIÓN DE LA CINÉTICA DEL CRECIMIENTO
6.3.1. Introducción
En la sección anterior describimos algunos conceptos clave en el crecimiento de las culturas. Claramente, podemos pensar en la
dinámica de crecimiento en términos de descripciones cinéticas. Es fundamental recordar que la composición celular y las
capacidades biosintéticas cambian en respuesta a las nuevas condiciones de crecimiento ( crecimiento desequilibrado), aunque en
la fase de crecimiento exponencial puede predominar una composición celular constante y un crecimiento equilibrado. Si la fase de
desaceleración del crecimiento se debe al agotamiento del sustrato en lugar de a la inhibición por toxinas, la tasa de crecimiento
disminuye en relación con las concentraciones decrecientes de sustrato. En las fases estacionaria y de muerte, la distribución de
propiedades entre los individuos es importante (p. Ej., Muerte críptica). Aunque estas ideas cinéticas son evidentes en el cultivo
por lotes, son igualmente evidentes e importantes en otros modos de cultivo (por ejemplo, cultivo continuo).
Claramente, la descripción completa de la cinética de crecimiento de una cultura implicaría el reconocimiento de

la estructurado naturaleza de cada celda y la segregación del cultivo en unidades individuales (células) que pueden diferir
entre sí. Los modelos pueden tener estos mismos atributos. Un modelo estructurado químicamente divide la masa
celular en componentes. Si la proporción de estos componentes puede cambiar en respuesta a perturbaciones en el
entorno extracelular, entonces el modelo se comporta de forma análoga a una célula que cambia su composición en
respuesta a cambios ambientales. Considere en el capítulo 4 nuestro análisis de la regulación celular, en particular la
inducción de vías completas. Cualquiera de estas respuestas metabólicas produce cambios en la estructura intracelular.
Además, si un modelo de cultura se construye a partir de unidades discretas, comienza a imitar la segregación
observada en culturas reales. Los modelos pueden ser estructurados y segregados, estructurados y no segregados, no
estructurados y segregados, y no estructurado y no segregado. Los modelos que contienen tanto estructura como
segregación son los más realistas, pero también son computacionalmente complejos.
El grado de realismo y complejidad requeridos en un modelo depende de lo que se describa; el modelador siempre debe
elegir el modelo más simple que pueda describir adecuadamente el sistema deseado. Un modelo no estructurado asume una
composición de celda fija, lo que equivale a suponer crecimiento equilibrado. El supuesto de crecimiento equilibrado es válido
principalmente en el cultivo continuo de estado estable de una sola etapa y en la fase exponencial del cultivo por lotes; falla
durante cualquier condición transitoria. La rapidez con la que la célula responde a las perturbaciones en su entorno y la rapidez
con que ocurren estas perturbaciones determinan si se puede suponer un crecimiento pseudobalanceado. Si la respuesta celular
es rápida en comparación con los cambios externos y si la magnitud de estos cambios no es demasiado grande (por ejemplo, una
variación del 10% o 20% de las condiciones iniciales), entonces se puede justificar el uso de modelos no estructurados, ya que la
desviación de

el crecimiento equilibrado puede ser pequeño. La respuesta del cultivo a perturbaciones grandes o rápidas no puede describirse
satisfactoriamente mediante modelos no estructurados.
Para muchos sistemas, la segregación no es un componente crítico de la respuesta cultural, por lo que los modelos no
segregados serán satisfactorios en muchas circunstancias. Una excepción importante es la predicción de las respuestas de
crecimiento de cultivos que contienen plásmidos (véase el capítulo 14).
Debido a la naturaleza introductoria de este libro, concentraremos nuestra discusión en modelos no

estructurados y no segregados. El lector debe conocer las limitaciones de estos modelos. No obstante, estos
modelos son simples y aplicables a algunas situaciones de interés práctico.
6.3.2. Uso de modelos no estructurados no segregados para predecir la tasa de crecimiento

específica
6.3.2.1. Crecimiento limitado por sustrato. Como se muestra en la figura 6.11, la relación entre la tasa de crecimiento
específico y la concentración de sustrato a menudo asume la forma de cinética de saturación. Aquí asumimos que una sola especie
química, S, limita la tasa de crecimiento (es decir, un aumento en S influye en la tasa de crecimiento, mientras que los cambios en
otras concentraciones de nutrientes no tienen ningún efecto). Estas cinéticas son similares a la cinética de Langmuir-Hinshelwood
(o Hougen-Watson) en la cinética química tradicional o la cinética de Michaelis-Menten para las reacciones enzimáticas. Cuando se
aplica a sistemas celulares, esta cinética puede describirse mediante la Ecuación de Monod:
metro metro S
metro g = (6,30)
Ks+ S
dónde metro metro es la tasa de crecimiento específica máxima cuando S >> K s. Si el metabolismo endógeno
no es importante, entonces metro neto = metro gramo. El constante K s es conocido como el constante de saturación o constante de media
velocidad y es igual a la concentración del sustrato limitante de velocidad cuando el
La tasa de crecimiento específica es igual a la mitad del máximo. Es decir, K s = S cuando metro g =
! " metro máx. En general, metro g = metro metro para S >> K s y metro g = ( metro metro/ K s) S para S <<K s. La ecuación de Monod es
semiempírica; se deriva de la premisa de que un solo sistema enzimático con
Michaelis – M d la cantidad de esa enzima
o su catalizador miting.
Figura 6.11. Efecto de la concentración de nutrientes sobre la
tasa de crecimiento específica de E. coli.
(Con permiso de RY Stanier,

M. Doudoroff y EA Adelberg, El mundo microbiano, 5ª ed.,
Pearson Education, Upper Saddle River, Nueva Jersey,
1986, pág. 192.)

Esta simple premisa rara vez, o nunca, es cierta; sin embargo, la ecuación de Monod se ajusta empíricamente a una amplia
gama de datos de manera satisfactoria y es el modelo de crecimiento microbiano no estructurado y no segregado más comúnmente
aplicado.
La ecuación de Monod describe el crecimiento limitado por sustrato solo cuando el crecimiento es lento y la densidad de
población es baja. En estas circunstancias, las condiciones ambientales pueden relacionarse simplemente con S. Si el consumo de
un sustrato de energía de carbono es rápido, es más probable la liberación de productos de desecho tóxicos (debido a reacciones
de derrame de energía). A altos niveles de población, la acumulación de subproductos metabólicos tóxicos se vuelve más
importante. Se han propuesto las siguientes expresiones de velocidad para cultivos densos de rápido crecimiento:
metro metro S
metro g = (6,31)
Ks0 S0+ S
o
metro metro S
metro g = (6,32)
Ks1+ Ks0 S0+ S
dónde S 0 es la concentración inicial del sustrato y K s 0 es adimensional.

Se han propuesto otras ecuaciones para describir la fase de crecimiento limitada por sustrato.
Dependiendo de la forma de metro - S curva, una de estas ecuaciones puede ser más plausible que las otras. Las
siguientes ecuaciones son alternativas a la ecuación de Monod:
Ecuación de Blackman: metro g = metro metro, si S ≥ 2 K s

(6,33)
= m metro S, si S < 2 K
m gramo s
2 Ks
S)
Ecuación de Tessier: metro g = metro metro( 1- mi- K
(6,34)
norte
metro metro S
Ecuación de Moser: mgramo
= n= m (+metroKl S- n) -s1 (6,35)
Ks+ S
Ecuación de Contois: = m metro S

m gramo (6,36)
K sx X + S
Aunque la ecuación de Blackman a menudo se ajusta mejor a los datos que la ecuación de Monod, la discontinuidad en la
ecuación de Blackman es problemática en muchas aplicaciones. El tessier
la ecuación tiene dos constantes ( metro metro, K), y la ecuación de Moser tiene tres constantes ( metro metro, K s,
norte). La ecuación de Moser es la forma más general de estas ecuaciones y es equivalente a
la ecuación de Monod cuando n = 1. La ecuación de Contois tiene una constante de saturación proporcional a la concentración celular
que describe el crecimiento limitado por sustrato a altas densidades celulares. De acuerdo con esta ecuación, la tasa de crecimiento
específico disminuye con la disminución de las concentraciones de sustrato y eventualmente se vuelve inversamente proporcional a
la concentración celular en
el medio (es decir, metro gramo µ X- 1).
Estas ecuaciones pueden describirse mediante una única ecuación diferencial como
re u = K tu un ( 1- u) segundo
(6,37)
dS
Segundo. 6.3 Cuantificación de la cinética del crecimiento 177

TABLA 6.2 Constantes de la ecuación de la tasa de crecimiento
específica diferencial generalizada
6.34 para diferentes modelos
un segundo K
Monod 0 2 1 / Ks
Tessier 0 1 1/K
Moser 1 - 1 / norte 1 + 1 / norte n / K ls/ n
Contois 0 2 1 / K sx
dónde u = m gramo/ metro metro, S es la concentración de sustrato que limita la velocidad, y K, a, y segundo son constantes. Los valores de
estas constantes son diferentes para cada ecuación y se enumeran en
Cuadro 6.2.
La forma de tasa correcta a utilizar en el caso en que más de un sustrato sea potencialmente limitante de la tasa de
crecimiento es una cuestión sin resolver. Sin embargo, en la mayoría de las circunstancias, el enfoque no interactivo funciona mejor:
metro g = metro g ( S 1) o metro g ( S 2) o ... metro g ( S n)

(6,38)
donde el valor más bajo de metro gramo( S yo) se utiliza.
6.3.2.2. Modelos con inhibidores del crecimiento. A altas concentraciones de sub-

estrato o producto y en presencia de sustancias inhibidoras en el medio, el crecimiento se inhibe y la velocidad de crecimiento
depende de la concentración del inhibidor. El patrón de inhibición del crecimiento microbiano es análogo a la inhibición
enzimática. Si una reacción catalizada por enzima de un solo sustrato es el paso que limita la velocidad en el crecimiento
microbiano, entonces las constantes cinéticas en la velocidad de expresión son biológicamente significativas. A menudo, el
mecanismo subyacente es complicado y las constantes cinéticas no tienen significados biológicos y se obtienen a partir de
datos experimentales mediante el ajuste de curvas.
1. Inhibición del sustrato: A altas concentraciones de sustrato, el sustrato inhibe la tasa de crecimiento microbiano. Como en
la cinética de las enzimas, la inhibición del crecimiento por sustrato puede ser competitiva o no competitiva. Si una reacción
catalizada por enzima de un solo sustrato es el paso que limita el crecimiento microbiano, entonces la inhibición de la actividad
enzimática da como resultado la inhibición del crecimiento microbiano por el mismo patrón.
Los principales patrones y expresiones de inhibición de sustrato son los siguientes:
metro metro
Inhibición del sustrato no competitivo: metro g =
MI K s MI Sˆ (6,39)
MI 1+ S UNMI1+ K ¯˜
yo
metro S
O si K yo ! Ks , entonces: mgramo
= metro
(6,40)
K s + S + S 2 / K yo

metro metro S
Para la inhibición competitiva del sustrato: mgramo
=
MI Sˆ (6,41)
UN +
K s MI 1 + S
K ¯˜
yo
Tenga en cuenta que la ecuación. 6.41 difiere de 6.39 y 6.40, y K yo en 6.40 y 6.41 difieren. La inhibición del sustrato puede aliviarse
mediante la adición lenta e intermitente del sustrato al medio de crecimiento.
2. Inhibición del producto: Las altas concentraciones de producto pueden inhibir el crecimiento microbiano. La
inhibición del producto puede ser competitiva o no competitiva y, en algunos casos, cuando se desconoce el mecanismo
subyacente, la tasa de crecimiento inhibido se aproxima a expresiones de desintegración exponencial o lineal.
Ejemplos importantes de la expresión de la tasa de inhibición del producto son los siguientes:
metro metro S
Inhibición de producto competitivo: mgramo
=
MI PAGS ˆ
K s MI + + S (6,42)
UN 1
K ¯˜
pags
metro metro
Inhibición de productos no competitivos: mgramo
=
MI K MI ˆ
PAGS
(6,43)
MI 1+ sSˆ 1¯ÁMI+ K pags ¯˜
La fermentación de etanol a partir de glucosa por levaduras es un buen ejemplo de inhibición de productos no competitivos, y el etanol
es el inhibidor en concentraciones superiores a aproximadamente el 5%. Otras expresiones de velocidad utilizadas para la inhibición
del etanol son
metro MI PAGS ˆ norte

metro g =
metro
1-
UN
MI 1 Ks ˆ Ë PAGS
metro
¯˜ (6,44)
Ë+ S ¯
dónde PAGS metro es la concentración de producto a la que se detiene el crecimiento, o
metro metro
metro g = mi- P / K pags
MI 1 Ks ˆ (6,45)
Ë+ S¯
dónde K pags es la constante de inhibición del producto.
3. Inhibición por compuestos tóxicos: Las siguientes expresiones de velocidad se utilizan para la inhibición competitiva, no
competitiva y no competitiva del crecimiento en analogía con la inhibición enzimática.
metro metro S
Inhibición competitiva: metro g =
MI yo ˆ
UN +
K s MI 1 + S (6,46)
K yo ¯˜
metro metro
Inhibición no competitiva: metro g =
MI 1 yo ˆ
(6,47)
Ë + K sSMI
UN 1+ K ˜
MI yo ¯

metro metro S
Inhibición no competitiva: metro g =
MI K s yo ˆ
UN +
+ ˆSÊ˜ Ë 1 (6,48)
ÁÊ yo ˆ K yo ¯˜
˜
AUTOMÓVIL CLUB BRITÁNICO 1+
ËË K yo ¯˜ ¯
En algunos casos, la presencia de compuestos tóxicos en el medio da como resultado la inactivación de células o la muerte.
La expresión de la tasa específica neta en presencia de muerte tiene la siguiente forma:
= m metro S - k re ¢
m gramo (6,49)
Ks+ S
dónde k ¢ re es la constante de la tasa de mortalidad (h- 1).
6.3.2.3. La ecuación logística. Cuando se traza en papel aritmético, la curva de crecimiento del lote asume una
forma sigmoidea (ver Fig. 6.3). Esta forma se puede predecir combinando la ecuación de Monod (6.30) con la ecuación de
crecimiento (6.2) y una ecuación para el rendimiento de masa celular basada en el consumo de sustrato. Combinando eq.
6.30 y 6.2a y suponiendo que no se produzca un metabolismo endógeno
dX = metro metro S
X (6,50)
dt Ks+ S
La relación entre el rendimiento del crecimiento microbiano y el consumo de sustrato es
X - X 0 = Y X / S ( S 0 - S) (6,51)
dónde X 0 y S 0 son valores iniciales y Y X / S es el rendimiento de masa celular basado en el nutriente limitante. Sustituyendo S en
eq. 6,50 produce la siguiente expresión de tasa:
dX = metro metro( Y X / S S 0 + X 0 - X)
X (6,52)
dt ( K S Y X / S + Y X / S S 0 + X 0 - X)
La forma integrada de la expresión de tasa en esta fase es
( K S Y X / S + S 0 Y X / S + X 0) MI X ˆ KS YX/S
en UN ln {( Y X / S S
0
+ X 0- X) / YS} = metro t ( metro
XS/ 0 6.53)
( Y X / S S 0 + X 0) MI X 0¯˜ - ( Y X / S S 0 + X 0)
Esta ecuación describe la curva de crecimiento del lote de forma sigmoidea y el valor de X
alcanza asintóticamente al valor de Y X / S S 0 + X 0.
La ecuación 6.52 requiere un conocimiento predeterminado de la masa celular máxima en un
entorno particular. Esta masa celular máxima la denotaremos como X •; es idéntico al concepto ecológico de capacidad
de carga. La ecuación 6.53 está implícita en su dependencia
en S.
Ecuaciones logísticas son un conjunto de ecuaciones que caracterizan el crecimiento en términos de capacidad de carga. El
enfoque habitual se basa en una formulación en la que la tasa de crecimiento específica está relacionada con la cantidad de capacidad
de carga no utilizada:

MI ˆ
k -1X
metro g =UN (6,54)
MI X • ¯˜
Así,
dX = kX 1-MI X ˆ
UN (6,55)
dt MI X ¯˜
•
La integración de eq. 6.55 con la condición de contorno X( 0) = X 0 produce la logística

curva.
X 0e kt
X=
X 0 ( 1- mi kt) (6,56)
1-
X•
La ecuación 6.56 está representada por la curva de crecimiento en la figura 6.12.
También se pueden generar ecuaciones de la forma 6.56 asumiendo que una toxina genera
atado como un subproducto de los límites de crecimiento X • ( la capacidad de carga). El ejemplo 6.2 ilustra el uso del enfoque
logístico.
Ejemplo 6.2. Ecuación logística
La formación de etanol a partir de glucosa se logra en un cultivo discontinuo de Saccharomyces cerevisiae, y se obtuvieron
los siguientes datos.
Tiempo (h) Glucosa (S), g / L Biomasa (X), g / L Etanol (P), g / L
0 100 0,5 0.0

2 95 1.0 2.5
5 85 2.1 7.5
10 58 4.8 20,0
15 30 7.7 34,0
20 12 9,6 43,0
25 5 10,4 47,5
30 2 10,7 49,0
a. Al ajustar los datos de biomasa a la ecuación logística, determine el coeficiente de capacidad de carga k.
segundo. Determinar coeficientes de rendimiento Y PD y Y X / S.
Solución
un) La ecuación 6.55 se puede reescribir como:
1 dX = k UNMI
1- X ˆ
X dt MI X ¯˜
•
Xˆ
k = 1 re X MI ∏ UN
1-
X re t MI X • ¯˜
- es la concentración media de biomasa durante re t, y X • es de aproximadamente 10,8 g / L, ya que el crecimiento es casi

X
dóndecompleto a las 30 h. Así:

Figura 6.12. Curva de crecimiento logístico.
MI Xˆ
- 1 re X / re t ( h- 1)
re t ( h) X( g / L) UN 1-
X •˜ ¯ k ( h-1)
X MI
2 0,75 0.333 0,931 0,36

3 1,55 0,236 0,856 0,28
5 3,45 0,156 0,681 0,23
5 6.25 0.093 0.416 0,22
5 8,65 0.044 0,200 0,22
5 10.00 0,016 0,074 0,22
5 10.55 0,0057 0.023 0,25
Un valor de k = 0,24 h 1 describiría la mayoría de los datos, aunque subestimaría ligeramente la tasa de crecimiento
inicial. Otro enfoque sería tomar el logaritmo de la ecuación anterior para obtener:
MI sesión UNˆ 1- X 0
1 dX = Iniciar sesión k + Iniciar
Iniciar sesión
X dt MI X •˜ ¯
y ajustar los datos a esta ecuación y estimar k desde la intersección. En este caso k sería de aproximadamente 0,25 h- 1.
segundo) Los rendimientos se estiman directamente a partir de los datos como:
gramo PAGS
Y PD = -D P = - ( 49-0) = 0,5
re S (2-100) gramo S
gramo X
Y X / S = -D X = - ( 10,7 - 0,5) = 0,104
re S (2-100) gramo S
La estimación anterior de Y X / S es sólo aproximada, ya que se han descuidado los efectos de mantenimiento y el metabolismo
endógeno.

6.3.2.4. Modelos de crecimiento para organismos filamentosos. Órgano filamentoso
ismos como los mohos a menudo forman gránulos microbianos a altas densidades celulares en cultivos en suspensión. Las células
que crecen dentro de los gránulos pueden estar sujetas a limitaciones de difusión. Los modelos de crecimiento de mohos deben
incluir la difusión y el consumo simultáneos de nutrientes dentro del pellet en tamaños grandes de pellet. Este problema es el mismo
que enfrentamos al modelar el comportamiento de bacterias o levaduras atrapadas en partículas de gel esféricas (ver Capítulo 9).
Alternativamente, las células filamentosas pueden crecer en la superficie de un sólido húmedo. Dicho crecimiento suele ser
un proceso complicado, que implica no solo la cinética del crecimiento, sino también la difusión de nutrientes y subproductos
metabólicos tóxicos. Sin embargo, para una colonia aislada que crece en un medio rico, podemos ignorar algunas de estas
complicaciones.
En ausencia de limitaciones de transferencia de masa, se ha observado que el radio de un sedimento microbiano en un
cultivo sumergido o de una colonia de mohos que crece en una superficie de agar aumenta linealmente con el tiempo.
dR = k = constante
PAGS
(6,57)
dt
En términos de tasa de crecimiento de una colonia de mohos, eq. 6.57 se puede expresar como
dM = rp 2 dR = k PAGS 4 pags R 2 r
4R (6.58a)
dt dt
o
dM = gramo METRO 2/3
(6.58b)
dt
dónde g = k PAGS( 36 pr) 1/3. Integración de eq. 6.58b rendimientos
3
/ P.ej t ˆ
M = MI gramo t ˆ 3 (6,59)
MI METRO 1 33 ¯ ª Ë3¯
0+
La biomasa inicial, METRO 0, suele ser muy pequeño en comparación con METRO, y por lo tanto METRO varía con
t 3. Este comportamiento ha sido respaldado por datos experimentales.
6.3.3. Modelos de comportamiento transitorio
En la mayoría de las aplicaciones prácticas de cultivos microbianos, las condiciones ambientales o de cultivo pueden cambiar, lo
que lleva a cambios drásticos en la composición celular y las capacidades biosintéticas. Estos cambios celulares no son
instantáneos sino que ocurren durante un período de tiempo observable. En esta sección examinamos modelos que pueden
describir o predecir tales cambios dependientes del tiempo (o transitorios).
6.3.3.1. Modelos con retrasos de tiempo. Los modelos de crecimiento no estructurado que hemos descrito hasta
ahora se limitan a condiciones de crecimiento equilibrado o pseudobalanceado. Estos modelos no estructurados se pueden
mejorar para su uso en situaciones dinámicas mediante la adición de retrasos de tiempo. El uso de retrasos de tiempo
incorpora estructura implícitamente. Se basa en la premisa de que la respuesta dinámica de una celda está dominada por un
proceso interno con un retardo de tiempo del orden del tiempo de respuesta bajo observación. Otros procesos internos

se supone que son demasiado rápidos (esencialmente siempre en un pseudoequilibrio) o demasiado lentos para influir en
gran medida en la respuesta observada. Mediante el uso de técnicas de caja negra equivalentes al enfoque tradicional para
el control de procesos químicos, es posible generar funciones de transferencia que pueden representar la respuesta
dinámica de una cultura. En la figura 6.13 se muestra un ejemplo de los resultados de este enfoque. Sin embargo, debe
reconocerse que tales enfoques se limitan a culturas con historias de crecimiento similares y sujetas a perturbaciones
cualitativamente similares.
6.3.3.2. Modelos químicamente estructurados. Un enfoque mucho más general

con un poder predictivo a priori mucho mayor es un modelo que captura las interacciones cinéticas importantes entre los
subcomponentes celulares. Inicialmente, los modelos estructurados químicamente se basaban en dos componentes, pero al
menos tres componentes parecen necesarios para dar buenos resultados. En muchos laboratorios se utilizan modelos más
sofisticados con 20 a 40 componentes. En la figura 6.14 se muestra un esquema de uno de estos modelos.
Escribir tales modelos requiere que el modelador comprenda el sistema físico a un nivel de mayor detalle que
aquel en el que está escrito el modelo, de modo que se puedan hacer los supuestos apropiados. Una discusión detallada
de tales modelos es apropiada para textos más avanzados. Sin embargo, incluso el estudiante principiante debe
comprender dos pautas importantes al escribir tales modelos. La primera es que todas las reacciones deben expresarse en
términos de intrínseco concentraciones. Un intrínseco concentración es la cantidad de un compuesto por unidad de masa
celular o volumen celular. Extrínseco concentraciones, la cantidad de un compuesto por unidad de volumen del reactor, no
se pueden utilizar en expresiones cinéticas. Aunque esto puede parecer evidente, todos los primeros modelos
estructurados tenían defectos por el uso de extrínseco
Figura 6.13. Comparación de predicciones de un modelo derivado de una perspectiva de análisis de sistemas, predicciones de
un modelo Monod y experimento. El sistema experimental fue un quimiostato para un cultivo limitado en glucosa de Saccharomyces
cerevisiae operando a una tasa de dilución de 0.20 h- 1. En este experimento en particular, el sistema fue perturbado con un
aumento gradual en la concentración de glucosa en la alimentación de 1.0 y 2.0 g l- 1. X es la concentración de biomasa, metro es
la tasa de crecimiento, y S es la concentración de sustrato. (Con permiso de TB Young III y
HR Bungay, "Análisis dinámico de un proceso microbiano: un enfoque de ingeniería de sistemas", Biotechnol.

Bioeng. 15 : 377, 1973, y JohnWiley & Sons, Inc., Nueva York).

Figura 6.14. Un boceto idealizado del modelo. E. coli B / rA crece en un medio de sales de glucosa y amonio con glucosa o amoníaco como
nutriente limitante. En el momento que se muestra, la célula acaba de completar una ronda de replicación del ADN e inició la formación de
paredes cruzadas y una nueva ronda de replicación del ADN. Las líneas continuas indican el flujo de material, mientras que las líneas
discontinuas indican el flujo de información. los
los símbolos son: A 1, ion amonio; UN 2, glucosa (y compuestos asociados en la célula); W, productos de desecho (CO 2, H 2 O y acetato) formado a partir
del metabolismo energético durante el crecimiento aeróbico; PAGS 1, aminoácidos; PAGS 2, ribonucleótidos; PAGS 3, desoxirribonucleótidos; PAGS 4, precursores
de la envoltura celular; METRO 1, proteína (tanto citoplásmica como de envoltura); METRO 2RTI, ARN inmaduro "estable"; METRO 2RTM, ARN maduro
"estable" ( r- ARN y t- ARN: suponga 85% r- ARN en todo); METRO 2M, ARN mensajero; METRO 3, ADN; METRO 4, parte no proteica de la envoltura celular
(suponga el 16,7% de peptidoglicano, el 47,6% de lípidos y el 35,7% de polisacárido); METRO 5,
glucógeno; PG, ppGpp; mi 1, enzimas en la conversión de P 2 parte superior 3; mi 2, mi 3, moléculas implicadas en di-
corregir la formación de paredes cruzadas y la síntesis de la envoltura celular; GLN, glutamina; mi 4, glutamina sintetasa;
* indica que el material está presente en el entorno externo. (Con permiso de ML

Shuler y MM Domach, en Fundamentos de la Ingeniería Bioquímica, HW Blanch, ET Papoutsakis y G. Stephanopoulos,
ed., ACS Symposium Series 207, American Chemical Society, Washington, DC, 1983, p. 93.)
concentraciones. Una segunda consideración, estrechamente relacionada con la primera, es que la dilución de
intrínseco debe considerarse la concentración por crecimiento.

La ecuación apropiada para usar en un reactor sin flujo es
d [V R C yo ]
= VR X ¥ r fi
dt
tasa de cambio total tasa de
en cantidad de yo biomasa formación
(6,60)
en el reactor en reactor de yo por
unidad de biomasa
basado en intrínseco
concentraciones
dónde V R es el volumen total en el reactor, X es la concentración de biomasa extrínseca, y

C yo es la concentración extrínseca del componente yo.

La ecuación 6.60 también puede reescribirse en términos de concentraciones intrínsecas. Por simplicidad usaremos
fracciones de masa (por ejemplo, C yo/ X). Tenga en cuenta que
dX / dtyo ˆˆÊ
corriente continua yo / X) = MI 1 corriente continua
(6,61)
dt MI X dt ¯ - C /MI
X yo X¯
Recordando
m = 1 dX (6.2a)
X dt
tenemos
corriente continua yo / X) = MI 1 corriente continua yo ˆ

(6,62)
dt MI X dt ¯ - m C yo / X
y sustituyendo eq. 6.60 para (1 / X) (dC yo / dt) después de dividir la ecuación. 6.60 por V R X y asumiendo V R
es una constante,
corriente continua yo / X) = metro

r fi -red C yo
(6,63)
dt X
En eq. 6.63, el r fi El término debe estar en términos de concentraciones intrínsecas y el término metro red C yo / X
representa dilución por crecimiento. Estos conceptos se ilustran en el ejemplo 6.3.
El modelo indicado en la figura 6.14 es el de una sola celda. La respuesta del modelo unicelular puede relacionarse
directamente con la respuesta del cultivo si se supone que todas las células se comportan de manera idéntica. En este caso,
cada celda tiene el mismo ciclo de división. Una población tendrá, en estado estacionario, el doble de células en el "nacimiento"
que en la división. Las concentraciones promedio en el cultivo estarán en la media geométrica (un tiempo igual a 2 multiplicado por
el tiempo de división) para cada componente de la celda. Usado de esta manera, el modelo es un modelo estructurado, no
segregado. Sin embargo, si una población celular se divide en subpoblaciones, con cada subpoblación representada por un
modelo unicelular separado, entonces se puede construir un modelo de población que contenga un alto nivel de estructura, así
como aspectos de segregación. Esta técnica de representación finita se ha utilizado y es capaz de realizar buenas predicciones a
priori de la respuesta dinámica en las culturas (véase la figura 6.15). Cuando se utiliza en este contexto, debe incluirse al menos
un elemento aleatorio en el ciclo celular para llevar a una predicción realista de las distribuciones. Algunos ejemplos de dicha
aleatoriedad incluyen la colocación de la pared transversal celular, el momento del inicio de la síntesis de cromosomas o la
síntesis de la pared transversal y la distribución de plásmidos en la división.
Con esta sección, el lector debe tener una buena visión general de los conceptos básicos de modelado y algunas
herramientas simples para describir el crecimiento microbiano. Necesitamos estas herramientas para discutir adecuadamente el
cultivo de células en cultivo continuo. El ejemplo 6.3 ilustra cómo se puede desarrollar un modelo estructurado.
Ejemplo 6.3.
Escribe las ecuaciones que describen el siguiente sistema. Un organismo consta de biomasa activa y un componente de
almacenamiento. El componente de almacenamiento se fabrica cuando la concentración interna de las fuentes de energía de carbono
es alta y se degrada cuando es baja. Usa los símbolos A = biomasa activa, P = compuesto de almacenamiento polimérico, S * = concentración
externa de S, y S = concentración interna de S. Asumir que S es el nutriente que limita la tasa de crecimiento.

Figura 6.15. Predicción de la respuesta transitoria en un sistema de
flujo continuo a las perturbaciones que limitan la concentración de
sustrato o el caudal. Tenga en cuenta que las predicciones no se
ajustan a los datos; Las predicciones son completamente a priori.
(a) Concentración transitoria de glucosa en respuesta al cambio
escalonado en la concentración de glucosa en la alimentación de
1.0 a 1.88 g / l en cultivo continuo anaeróbico de E. coli B / r a una
tasa de dilución de 0,38 h- 1; ! y #, resultados de dos corridas
experimentales duplicadas; línea continua, predicción por
computadora. (b) Concentración transitoria de glucosa en respuesta
al cambio escalonado en la tasa de dilución de D = 0,16 hasta D = 0,55
h 1;
! y $, resultados de dos corridas experimentales duplicadas;

línea continua, predicción por computadora. (Con permiso
de M. M. Ataai y
ML Shuler, Biotechnol. Bioeng. 27: 1051,
1985 y John Wiley & Sons, Inc., Nueva York).
Solución Al medir la concentración de A, P, y S *, las unidades naturales son gramos por litro de volumen del reactor.
Estas son concentraciones extrínsecas. La concentración de biomasa total será
X=A+P+SªA+P (un)
ya que la concentración interna de S será bajo [<0.001 ( A + P)]. Considerando S * y S

por separado, transitorios en S puede ser capturado. Sin embargo, estos transitorios serán rápidos en comparación con los
cambios en UN y pags. El Monod y otros modelos no estructurados asumen un equilibrio instantáneo entre S * y S.
Sería defendible una serie de descripciones cinéticas. Sin embargo, supongamos las siguientes ecuaciones
pseudoquímicas:
A + un 1 S + ◊ ◊ ◊ Æ 2 A + ◊ ◊ ◊ (segundo)
dónde un 1 g de S se consume para hacer 1 g de UN más subproductos; la reacción requiere tanto UN

como "catalizador" y S para bloques de construcción. Del mismo modo, para PAGS,
A + un 2 S + ◊ ◊ ◊ segundo P + A + ◊ ◊ ◊ (C)
dónde PAGS se forma reversiblemente en esta reacción paralela que requiere UN como catalizador, y un 2 es un coeficiente estequiométrico
entre el monómero S y el polímero PAGS ( gramo ◊ S consumidos / g ◊ PAGS

formado).

Los mecanismos de reacción reales implicados en estas reacciones son probablemente muy complejos. La mayoría de las
reacciones en una célula son saturables y están sujetas a control de retroalimentación. Para estas reacciones, el nivel intracelular de S es la
principal variable de control. Por tanto, un conjunto razonable de ecuaciones basadas
en eq. 6.60 para constante V R es
dS * = X kl S *
(re)
dt K XS * + S *
dónde k 1 es la tasa de absorción por unidad de masa celular (g S transportado / g X- h) y K XS * es el parámetro de saturación para la absorción. Ya
que S * no es un componente celular, las concentraciones extrínsecas pueden ser
utilizado en la expresión de tasa. Xa S nosotros escribimos
dS = X YO YO k l S * k 2S / X
- un l K AS + S / X ( HACHA)
dt Ó K XS * + S *
tasa de tasa de S usado
consumo formar UN (mi)
MI
X k 4KPSd ˘¸Ô
- kS
a Í2 YO 3/
( A / X) - ( P / X) ˙˝
YO K PSf + S / X K PSd + S / X
˚˙˛Ǫ̂
tasa neta de S
consumo para formar PAGS
dónde k 2 es g UN formado / g ◊ UN presente-h, k 3 es g PAGS formado / g ◊ UN presente-h, y k 4 es una tasa de degradación de primer orden para PAGS
( h- 1). Los parametros un 1 y un 2 se definen en ecs. (b) y (c), mientras
K COMO, K PSf, y K PSd son parámetros de saturación en unidades de fracción de masa. Similar,
K k SX
dA = X YOMI 2/
˘
( A / X) - k 5 ( HACHA) ˙
dt YO AS + S/X ˚
(F)
tasa de descomposición
formación de UN Para proveer
de UN energía de mantenimiento
dónde k 5 es un coeficiente de primer orden (h- 1) y
dP = X MI k 4KPSd ˘
YO k 3 S / X ( HACHA)- ( P / X) ˙ (gramo)
dt K PSd + S / X
YO K PSf + S / X
YO ˚˙
Las ecuaciones fyg describen la tasa de formación de UN y pags.

El valor de k 1 podría determinarse mediante la absorción de un análogo no metabolizable del sustrato, el uso de vesículas o
la información del balance de materiales en células en crecimiento exponencial.
Valores de k 2 y k 3 puede estimarse a partir de mediciones de biomasa total y polímero bajo
condiciones donde S / X debe ser grande (por ejemplo, crecimiento exponencial), mientras que k 4 y k 5 puede estimarse a partir de mediciones
dependientes del tiempo de la composición celular en la fase estacionaria, donde
S / X debe ser bajo. Si los valores experimentales de S / X están disponibles en varios momentos, luego más recursos
estimaciones multadas de k 2, k 3, k 4, y k 5 se pueden realizar, así como estimaciones de los parámetros de saturación. La forma de tasa elegida en
la ecuación. (g) requiere que K PSd << K PSf, de modo que PAGS se hace solo cuando
S / X está en exceso y degradado sólo cuando S / X es bajo. Los valores para un 1 y un 2 son esencialmente

recíproco de los coeficientes de rendimiento y se puede estimar fácilmente a partir de experimentos de crecimiento y datos de composición
en pags.
Los formularios de tarifas utilizados aquí no son de ninguna manera la única solución correcta. Se necesitaría una base más
extensa de observaciones experimentales para eliminar otras posibles formulaciones.
6.3.4. Modelos cibernéticos
Se ha desarrollado otro enfoque de modelado principalmente para predecir el crecimiento en condiciones en las
que hay varios sustratos disponibles. Estos sustratos pueden ser complementarios (por ejemplo, carbono o
nitrógeno) o sustituibles. Por ejemplo, la glucosa y la lactosa serían sustituibles, ya que estos compuestos aportan
carbono y energía. Como recordará el lector, en el Capítulo 4 discutimos el fenómeno de la diáuxica para el uso
secuencial de glucosa y lactosa. Esa observación experimental nos llevó a comprender la regulación de la laca represión
de operones y catabolitos. Esta regulación metabólica era necesaria para la transición de una vía primaria a otra. El
lector podría inferir que la cultura tenía como función objetivo la maximización de su tasa de crecimiento.
Un enfoque para modelar el crecimiento en múltiples sustratos es un cibernético Acercarse.

Cibernético significa que un proceso busca metas (por ejemplo, maximización de la tasa de
crecimiento). Si bien este enfoque fue inicialmente motivado por el deseo de predecir la respuesta de
un cultivo microbiano al crecimiento en un conjunto de fuentes de carbono sustituibles, se ha
ampliado para proporcionar un método alternativo de identificación de la estructura reguladora de una
compleja red de reacciones bioquímicas (como metabolismo celular) de forma sencilla. Normalmente
se elige un único objetivo, como la tasa máxima de crecimiento, y se emplea un análisis matemático
orientado a objetivos. Este análisis es similar a muchos análisis económicos para la distribución de
recursos. Para muchas situaciones prácticas, este enfoque describe satisfactoriamente el crecimiento
de una cultura en un medio complejo. Sin embargo,
Este enfoque tiene limitaciones, ya que la función objetivo de cualquier organismo es maximizar su supervivencia a largo
plazo como especie. La maximización de la tasa de crecimiento o del rendimiento del crecimiento son realmente subobjetivos que
pueden dominar en algunas condiciones ambientales; estas condiciones son a menudo de gran interés para el ingeniero de
bioprocesos. En consecuencia, el enfoque cibernético es a menudo una herramienta valiosa. Es demasiado complejo para nosotros
describirlo en detalle en este libro; el lector interesado puede consultar las referencias al final de este capítulo.
6.4. CÓMO CRECEN LAS CÉLULAS EN CULTURA CONTINUA
6.4.1. Introducción
El entorno de cultivo cambia continuamente en un cultivo por lotes. El crecimiento, la formación del producto y la utilización del
sustrato terminan después de un cierto intervalo de tiempo, mientras que, en cultivo continuo, se suministra continuamente
medio nutriente fresco a un cultivo bien agitado, y los productos y las células se retiran simultáneamente. El crecimiento y la
formación de productos se pueden mantener durante períodos prolongados en cultivo continuo. Después de un cierto período de
tiempo, el

El sistema generalmente alcanza un estado estable donde las concentraciones de células, productos y sustratos permanecen
constantes. El cultivo continuo proporciona condiciones ambientales constantes para el crecimiento y la formación del
producto y proporciona un producto de calidad uniforme. El cultivo continuo es una herramienta importante para determinar la
respuesta de los microorganismos a su entorno y producir los productos deseados en condiciones ambientales óptimas. En el
Capítulo 9 compararemos el cultivo continuo y por lotes en términos de su idoneidad para la operación a gran escala.
6.4.2. Algunos dispositivos específicos para cultivo continuo
Los principales tipos de dispositivos de cultivo continuo son los quimiostato y turbidostato, aunque se utilizan reactores de flujo
pistón (PFR). En algunos casos, estas unidades se modifican mediante el reciclaje de células.
La figura 6.16 es un esquema de un dispositivo de cultivo continuo (quimiostato). El crecimiento celular suele estar
limitado por un nutriente esencial y hay un exceso de otros nutrientes. Como mostraremos, cuando un quimiostato está en estado
estable, las concentraciones de nutrientes, productos y células son constantes. Por esta razón, el nombre quimiostato se refiere al
entorno químico constante.
La figura 6.17 es un esquema de un turbidostato en el que la concentración de células en el recipiente de cultivo
controlador
Figura 6.16. Una configuración de laboratorio de cultivo continuo (quimiostato). (Con permiso de
DIC Wang y otros, Tecnología de fermentación y enzimas, JohnWiley & Sons, Inc., Nueva York, 1979, pág. 99.)

Figura 6.17. Configuración de laboratorio típica para un turbidostato. (Con permiso de DIC Wang y otros, Tecnología
de fermentación y enzimas, John Wiley & Sons, Inc., Nueva York, 1979, pág. 100.)
se activa la bomba y se agrega medio fresco. El volumen de cultivo se mantiene constante eliminando una cantidad
igual de líquido de cultivo. El turbidostato se utiliza menos que el quimiostato, ya que es más elaborado que un
quimiostato y porque el entorno es dinámico. Los turbidostatos pueden ser muy útiles para seleccionar
subpoblaciones capaces de resistir un estrés ambiental deseado (por ejemplo, altas concentraciones de etanol),
porque la concentración celular se mantiene constante. La selección de variantes o mutantes con propiedades
deseables es muy importante (ver Capítulo 8).
También se puede utilizar un reactor de flujo pistón (PFR) para fines de cultivo continuo. Dado que no hay retromezclado en
un PFR ideal, los elementos fluidos que contienen células activas no pueden inocular otros elementos fluidos en diferentes posiciones
axiales. Se requiere reciclaje de líquido para la inoculación continua de medios nutritivos. En un PFR, las concentraciones de sustrato y
células varían con la posición axial en el vaso. Un PFR ideal se asemeja a un reactor discontinuo en el que la distancia a lo largo del
fermentador reemplaza el tiempo de incubación en un reactor discontinuo. En el tratamiento de residuos, algunas unidades se acercan
al comportamiento de la RFP y los quimiostatos de etapas múltiples tienden a acercarse a la dinámica de la RFP si el número de
etapas es grande (cinco o más).
6.4.3. El quimiostato ideal
Un quimiostato ideal es lo mismo que un reactor de tanque agitado de flujo continuo perfectamente mezclado (CFSTR). La mayoría
de los quimiostatos requieren algunos elementos de control, como unidades de control de oxígeno disuelto y pH, para ser útiles. Se
alimenta medio estéril fresco al reactor completamente mezclado y aireado (si se requiere), y la suspensión celular se elimina a la
misma velocidad. El volumen de líquido en el reactor se mantiene constante.
La figura 6.18 es un esquema de un quimiostato simplificado. Un balance de materia en la concentración celular alrededor
del quimiostato produce
dX
FX 0 - FX + V R gramo X metro
- V R k re X = V R dt (6,64)
Segundo. 6.4 Cómo crecen las células en cultivo continuo 191

Figura 6.18. Esquema simplificado de un quimiostato.
dónde F es el caudal de solución nutritiva (l / h), V R es el volumen de cultivo (l) (asumido

constante), X es la concentración celular (g / l), y metro gramo y k re son constantes de tasa de crecimiento y endógeno (o muerte),
respectivamente (h- 1). El lector debe tener en cuenta que si la masa celular es la principal
Mary, es difícil diferenciar la muerte celular del metabolismo endógeno.

Cuando usamos k re, implicamos que el metabolismo endógeno es el mecanismo principal para la célula
disminución de masa. Con k ¢ re, implicamos que la muerte celular y la lisis son los principales mecanismos de disminución de masa. El
lector también debe tener en cuenta que, si eq. 6.64 había sido escrito en términos de
numero de celular, k re solo podría ser una tasa de muerte celular. Cuando los balances se escriben en términos de número de células, la
influencia del metabolismo endógeno solo puede aparecer en el balance del sustrato.
ecuación. Dado que la mayoría de los experimentos se realizan midiendo la masa celular total en lugar del número, escribimos
nuestros ejemplos basados en X. Sin embargo, el lector debe ser consciente de la ambigüedad que se introduce cuando las
ecuaciones se escriben en términos de X.
La ecuación 6.64 se puede reorganizar como
dX = DX 0 + ( metro g - k - D) X dt
re
(6,65)
dónde re es tasa de dilución y D = F / V R. re es el recíproco del tiempo de residencia.

Por lo general, los medios de alimentación son estériles, X 0 = 0, y si el metabolismo endógeno o
la tasa de mortalidad es insignificante en comparación con la tasa de crecimiento ( k d << metro gramo) y si el sistema está en estado estable ( dX
/ dt = 0), luego
metro g = D ( Si k d = 0) (6,66)
En un quimiostato, las células se eliminan a una tasa igual a su tasa de crecimiento y la tasa de crecimiento de las células es igual a
la tasa de dilución. Esta propiedad permite al investigador manipular la tasa de crecimiento como un parámetro independiente y
convierte al quimiostato en una poderosa herramienta experimental.

Dado que la tasa de crecimiento está limitada por al menos un sustrato en un quimiostato, se puede hacer una
descripción simple del desempeño del quimiostato sustituyendo la ecuación de Monod (eq.
6.30) para metro gramo en eq. 6.66:
metro metro S
=D=
mgramo (6,67)
Ks+ S
dónde S es la concentración de sustrato limitante en estado estacionario (g / l). Si re se fija en un valor mayor
que metro metro, la cultura no puede reproducirse lo suficientemente rápido para mantenerse y es lavado.
La ecuación 6.67 es idéntica a la de la cinética de Michaelis-Menten y, como discutimos en
Capítulo 3, una trama de 1 / metro gramo versus 1 / S se puede utilizar para estimar valores para metro metro y K s.
Usando eq. 6.67, podemos relacionar la concentración de sustrato efluente con la tasa de dilución para D < metro metro.
S = KD s
(6,68)
metro m - re
Un balance de materia sobre el sustrato limitante en ausencia de metabolismo endógeno produce
1 - V R q PAGS X 1 = V R dt dS
FS 0 - FS -V R metro gramo X METRO (6,69)
YX/S Y PD
dónde S 0 y S son las concentraciones de alimento y sustrato efluente (g / l), q PAGS es la tasa específica
de formación de producto extracelular (g PAGS/ metro gramo celdas h), y Y METRO X/S y Y PD son coeficientes de rendimiento
(g celda / g S y G P / g S). El uso del superíndice METRO en Y X / S denota un valor máximo del coeficiente de
rendimiento; tal superíndice será importante para discutir los efectos de
energía de mantenimiento.
Cuando la formación de productos extracelulares es insignificante y el sistema está en estado estable ( dS / dt = 0),
metro
gramo
X
D (S 0 - S) = (6,70)
Y YMETRO
/S
Ya que metro g = re en estado estacionario si k d = 0,
X = Y METRO
X/S( S 0 - S) (6,71)
Usando eq. 6.68, la concentración celular en estado estable se puede expresar como
MI KDs ˆ
X = Y METRO S-
Y / SUN (6,72)
MI 0 metro m - re ¯˜
En ecs. 6.71 y 6.72, el coeficiente de rendimiento ( Y X / S) se supone que es constante, que es

una aproximación, ya que se ha descuidado el metabolismo endógeno. Generalmente, Y X / S varía con el nutriente limitante y
la tasa de crecimiento. Considere el efecto de la inclusión de endógenos
el metabolismo tendrá; eq. 6.66 se convierte en
D = metro g - k d = metro red (6.73a)
metro g = D + k re (6.73b)

Sustituyendo la ecuación. 6.73b en el equilibrio del sustrato en estado estacionario, asumiendo que no hay formación de producto
extracelular (ecuación 6.70), encontramos
D (S 0 - S) - 1 / Y METRO X/S( D + k d) X = 0 (6.73c)
dónde Y METROX / S denota el coeficiente de rendimiento máximo (sin metabolismo endógeno o mantenimiento
energía financiera). Y METRO

X / S tiene un único valor constante independiente de la tasa de crecimiento. Este enfoque
no permite la conversión directa de S en energía de mantenimiento. Más bien, S primero debe incorporarse a la masa
celular, donde es degradada por el metabolismo endógeno. Este punto de vista es el adecuado cuando se trabaja con un
modelo no estructurado. Con un modelo estructurado, que reconoce explícitamente intracelular S como subcomponente
de la biomasa, el consumo directo de S para las funciones de mantenimiento se podría modelar. Sin embargo, con los
modelos no estructurados, el sustrato que ya no es extracelular pasa a formar parte de la biomasa.
La ecuación 6.73c se puede reorganizar para
MI S 0 - S ˆ
re MI X X/S( D + k)re= 0 (6,74)
¯ - 1 / Y METRO
o
MI 1 ˆ re k re
re UN (6.75a)
˜- M- M= 0
MI YXAP
/S ¯
YX/S YX/S
1+ k re 1
METRO
= (6.75b)
Y METRO
XS/ Y X◊/ re
S
Y XAP/ S
1 1 metro s
(6,76)
YXAP
/S
= Y XM/ S+ re
dónde
k re
m s= (6,77)
Y METRO
X/S
dónde metro s es el coeficiente de mantenimiento basado en sustrato S. Y AP X/S es el rendimiento aparente.

Cuando Y X / S está escrito, debe interpretarse como Y AP X / S. Mientras Y METRO
X / S es una constante, Y AP X/S varía
con condiciones de crecimiento si k d> 0.
Valores de Y METRO X/S y metro s puede obtenerse de experimentos de quimiostato trazando

1 / Y XAP/ S contra 1 / RE. La pendiente es metro s y la intersección es 1 / Y METRO X/S( ver Fig. 6.19).
En presencia de metabolismo endógeno ( metro neto = metro metro S / (K s + S) - k re), también podemos mostrar que
S = K s ( D + k d) (6,78)
metro m - D- k re
re
X = Y METRO
X/S[ S 0 - S] ◊ (6,79)
D + k re
Además de los efectos del mantenimiento, a menudo es apropiado considerar la conversión de

sustrato extracelular en producto extracelular. Con un desestructurado

Figura 6.19. Enfoque gráfico para estimar Y METRO X/S y metro s para datos de quimiostato para E. coli
creciendo con glucosa como nutriente limitante.
modelo, debemos ver esta conversión como instantánea. De lo contrario, un período perceptible de absorción del
sustrato, antes de la conversión en producto, provocaría un cambio en la X.
Esto es diferente al mantenimiento, ya que el período entre la absorción del sustrato y el uso para las funciones de
mantenimiento puede ser largo, por lo que permitimos S incorporarse a X y X luego se degrada cuando es necesario; las
siguientes ecuaciones suponen la conversión instantánea de sustrato en producto extracelular, con la célula actuando como
catalizador. El saldo en la formación del producto es
DP = q PAGS X (6,80)
dónde q PAGS se describe mediante las ecuaciones. 6.16, 6.17 o 6.18. Para productos no asociados al crecimiento
mación q PAGS es una constante segundo), mientras que para los productos asociados al crecimiento es una función de metro gramo.
Para el equilibrio del sustrato, eq. 6.69 se convierte en
1 1
D (S 0 - S) = M ( D k d) X++ q PAGS
X (6,81)
YX/S Y PD
El balance de biomasa no cambia con respecto al caso con metabolismo endógeno y rendimientos.

S = K s ( D + k d) (6,78)
metro m - D- k re
La ecuación 6.81 se puede resolver para X:
MI re ˆ
XY=XMETRO
/ S ( 0S- S) UN
Y METRO
X/S ˜
˜
(6,82)
UN D + k +re q PAGS Y PD ¯
MI
La productividad de un quimiostato para producto y biomasa (Pr X) se puede encontrar en DP y

DX, respectivamente. La tasa de dilución que maximiza la productividad se encuentra diferenciando
DP o DX con respecto a re y establecer la derivada igual a cero. El valor óptimo de
D (D optar) dependerá de si el metabolismo endógeno y / o la formación de productos son
considerado. Cuando k d = 0 y q P = 0, ecs. Se aplican 6.71 y 6.68. Entonces re optar para la producción de biomasa ( DX) se convierte en
MI Ks ˆ
re opt = metro metro UN 1-
˜¯ (6,83)
MI Ks+ S0
Ya que S 0 suele ser mucho mayor que K s, re optar se acercará D = metro metro o el punto de lavado.
Funcionamiento estable del quimiostato con re ª m metro es muy difícil, a menos que el caudal y el volumen de líquido puedan mantenerse
exactamente constantes. En consecuencia, un valor de re un poco menos que
re optar puede ser un buen compromiso entre la estabilidad y la productividad de la biomasa. También debería
ser evidente que re optar para la formación de biomasa no será necesariamente óptimo para la formación de productos.
Los ejemplos 6.4 y 6.5 ilustran el uso de estas ecuaciones para caracterizar el desempeño de los quimiostatos.
Ejemplo 6.4.
Se está considerando una nueva cepa de levadura para la producción de biomasa. Los siguientes datos se obtuvieron usando un
quimiostato. Una concentración de sustrato afluente de 800 mg / ly un exceso de
se utilizaron oxígeno a un pH de 5,5 y T = 35 ∞ C. Usando los siguientes datos, calcule metro metro, K s, X / S, k re, y metro s, asumiendo metro neto = metro
metro S / (K s + S) - k re.
Y METRO
Sustrato de carbono Celda
Tasa de dilución (h- 1) concentración (mg / l) concentración (mg / l)
0,1 16,7 366

0,2 33,5 407
0,3 59,4 408
0.4 101 404
0,5 169 371
0,6 298 299
0,7 702 59
Solución El primer paso es trazar 1 / Y AP X/S versus 1 / D. Y AP X/S se calcula a partir de X / (S 0 - S). El en
tercept es 1 / Y METRO X / S = 1,58 o Y METRO X/S= 0,633 g X/ gramo S. La pendiente es de 0.06 g S / gramo X- h, que es el valor
para metro s. Recordar metro s = k d / YX /METRO
S; entonces k d = metro s Y / S = 0,06 g S / gramo X- h
X METRO ◊ 0,633 g X/ gramo S = 0,038 h 1.

Para el segundo paso, recuerde que
Smetro
metro -k
D = m gramo
- kd= re
Ks+ S
(un)
Entonces
1
= 1 + Ks 1
D + k re metro metrometro metro S
(segundo)
Ahora graficamos 1 / ( D + k re) versus 1 / S. La intersección es 1.25 ho metro m = 0,8 h 1. La pendiente es de 100 h / (mg / l). Así, K s / metro m = 100
o K s = 80 mg / l.
Ejemplo 6.5.
La tasa de crecimiento específica para el crecimiento inhibido en un quimiostato viene dada por la siguiente ecuación:
metro
metro
S
metro g =
K s + S + IK s / K yo
(un)
dónde
células g
S 0 = 10 g / l Ks= 1 g / l Yo = 0,05 g / l Y METRO
X/S= 0,1
g subs
X0= 0 K Yo = 0,01 g / l metro m = 0,5 h –1 kd= 0
a. Determinar X y S como una función de re cuando Yo = 0.

segundo. Con el inhibidor agregado a un quimiostato, determine la concentración de sustrato efluente
y X como una función de RE.

C. Determine la productividad celular, DX, en función de la tasa de dilución.
Solución
KD
s
= re
un) S=
metro m - re 0,5- re
re ˆ
X = Y METRO
XS/ ( S0- S) = 0,1 MI 0
MI 1 - 0,5- re ¯
segundo) En presencia de inhibidor
metro metro S
metro g = = re
K MI +
UN 1+ yo ˆ ˜ S
s MI
K yo¯
K MI 1+ yo ˆ re Yo 1+ MI 0,05 ˆ re
s MI
UN
K ¯˜ 0,01 ¯
=Ë
yo
S=
metro m - re 0,5- re
S = 6 re
0,5- re
6 re ˆ
XY=MX(/ S
S 0 - S) = 0,1 MI
MI 10 - 0,5- re ¯

6 re ˆ
C) Pr x = DX = DY X / S ( S - S) =0 0,1 re MI
MI 10 - 0,5- re ¯
6.4.4. El quimiostato como herramienta
El quimiostato se puede utilizar como herramienta para estudiar la mutación y selección de cultivos y también para estudiar el
efecto de los cambios en el medio ambiente sobre la fisiología celular. Los aspectos moleculares de la mutación y la selección se
analizarán en el capítulo 8.
Natural o inducido mutaciones puede tener lugar en un cultivo de quimiostato. Los errores en la replicación del ADN
ocurren con una frecuencia promedio de alrededor de 10 –6 a 10 –8 gen por generación. Con una concentración celular de 10 9 células
/ ml en cultivo, la probabilidad es alta en un quimiostato de que se forme una amplia variedad de células mutantes. La gran
mayoría de las mutaciones naturales en un quimiostato son de poca importancia, a menos que la mutación altere la función de
una proteína involucrada en el crecimiento en el entorno del quimiostato. Si la tasa de crecimiento específica del mutante es
mayor que la del tipo salvaje, entonces el mutante supera al tipo salvaje en un quimiostato. Esta selección para un tipo de
célula variante se puede lograr creando un entorno más favorable para el crecimiento del organismo mutante.
Se puede utilizar un cultivo de quimiostato para la selección de organismos especiales. Es necesario utilizar medios de
selección o enriquecimiento de nutrientes para este propósito. Por ejemplo, si se desea seleccionar un organismo que crece en
etanol, se usa un medio nutritivo que contiene etanol y sales minerales como alimentación para un cultivo de quimiostato. Se
puede seleccionar un organismo capaz de oxidar algunos compuestos refractarios tóxicos de un cultivo mixto alimentando
lentamente este compuesto en un quimiostato. Se puede seleccionar un organismo termófilo de una población natural operando
un quimiostato a una temperatura elevada (p. Ej., 50ºC). ∞ hasta 60 ∞ C). La selección en quimiostatos también presenta
problemas importantes en el cultivo de células que contienen ADN recombinante. Las células más productivas a menudo crecen
más lentamente y son desplazadas por células menos productivas. Discutiremos este problema con más detalle en el Capítulo
14.
6.4.5. Desviaciones de la idealidad
En fermentaciones tales como la utilización o producción de polisacáridos o fermentaciones miceliales, el caldo de

fermentación puede ser muy viscoso y puede resultar difícil mantener una mezcla completa. Además, ciertas células tienden
a crecer en forma de película sobre superficies sólidas en fermentadores, como en paredes de fermentadores o superficies
de sondas. La mezcla incompleta es la regla en los fermentadores a escala industrial. Es común la presencia de regiones
mezcladas de forma incompleta en un cultivo de "quimiostato". El término "quimiostato" es aplicable sólo a recipientes
perfectamente mezclados. Aquí denotamos la no idealidad poniendo quimiostato entre comillas. Se puede utilizar un modelo
de reactor segregado para analizar un fermentador de flujo continuo mezclado de forma incompleta.
En la figura 6.20 se muestra un modelo simple de dos compartimentos de un cultivo "quimiostato", donde el reactor se
divide en dos regiones: una región bien mezclada y una región estancada. Las corrientes de alimentación y efluentes pasan a
través de la región 1 bien mezclada y se produce un intercambio de masa entre las dos regiones. Los balances de biomasa y
sustrato para ambas regiones en estado estacionario son los siguientes:

Figura 6.20. Simple dos
modelo compartimental para un "quimiostato"
mezclado de forma incompleta.
Balance de sustrato Balance de biomasa
S1
Región 1 X 1 = Y (S 0 - S 1) X 2 + un re ¢ m metro K s + S 1 X 1 = ( 1+ DD ¢) X 1
S2
Región 2 X 2 - X 1 = Y (S 1 - S 2) X 1 + ( 1- un) re ¢ m metro K + S 2 X2= X2
s
En un quimiostato mezclado imperfectamente con una fase biótica estancada, la tasa de dilución puede
exceder metro metro sin lavado. La tasa de dilución de lavado se obtiene configurando S 0 = S 1 = S 2
y es
YO S 0
(1- un) 2 metrometro ˘
re wo = m metro S MI + 1˙
0
K m + S 0 YO K s + S 0 - ( 1- un) re ¢ m S metro 0 ˚
dónde re wo es la tasa de dilución por lavado.
6.5. RESUMEN
Durante el cultivo por lotes, una población de células típicamente exhibe varias fases de crecimiento diferentes. Durante la fase de
retraso, la célula construye las rutas biosintéticas necesarias para las tasas de crecimiento máximas en el medio fresco. Durante crecimiento
exponencial, la replicación celular es máxima y la composición química de la población celular es casi constante (por ejemplo,
crecimiento equilibrado). Cuando el sustrato está casi agotado o cuando los subproductos metabólicos tóxicos se han acumulado
a un nivel crítico, la tasa de crecimiento comienza a caer rápidamente, lo que provoca cambios significativos en las vías
biosintéticas. En el fase estacionaria, no hay crecimiento neto; las células ahora reorientan su maquinaria metabólica para
aumentar la probabilidad de supervivencia a largo plazo. En algún momento, algunas células ya no pueden obtener suficiente
energía de sus reservas o suficiente de otro recurso crítico, y el cultivo entra en el fase de muerte. Las células muertas no tienen
una membrana energizada y con frecuencia se lisan (o se rompen). Los supervivientes pueden utilizar los nutrientes liberados por
las células lisadas, lo que permite un crecimiento críptico.
Los productos formados por células pueden relacionarse con este ciclo de crecimiento de cultivo por lotes. Los productos
primarios están asociados al crecimiento. Los productos secundarios no están asociados al crecimiento y se fabrican en la fase
estacionaria. Algunos productos tienen componentes asociados al crecimiento y no asociados al crecimiento.
Se puede modelar la cinética del crecimiento celular. Modelos que son estructurado dividir la población en distintos
subcomponentes. No estructurado Los modelos cuantifican la masa celular como un
Segundo. 6.5 Resumen 199

componente. Los modelos no estructurados no pueden describir muy bien el comportamiento transitorio. Algunos modelos
son aislado; reconocen que no todos los miembros de la población son idénticos y que la distribución de propiedades entre
las células individuales es importante. Modelos no segregados ignore estas distribuciones y asuma que los parámetros
promedio de la población son adecuados.
Estos modelos se aplican no solo al cultivo por lotes sino también al cultivo continuo. La forma primaria de cultivo
continuo es un CFSTR en estado estacionario o quimiostato. Un quimiostato asegura un entorno de crecimiento invariable en el
tiempo. La tasa de crecimiento neto es igual a la tasa de dilución, que está determinada por la tasa de flujo al quimiostato. Por
tanto, el investigador puede manipular la tasa de crecimiento. UN turbidostato ajusta el caudal para mantener una densidad
celular constante. Un turbidostato funciona bien a velocidades de flujo altas (cerca del punto de lavado) y es útil para
seleccionar subpoblaciones celulares que se han adaptado a un estrés particular.
SUGERIR I ONS PARA MÁS INFORMACIÓN
UN IBA, S., AE H UMPHREY, Y NF M ILLIS, Ingeniería Bioquímica, 2a ed., Academic Press,

Nueva York, 1973.
segundo AILEY, JE, Modelización y análisis matemáticos en ingeniería bioquímica: logros pasados y oportunidades
futuras, Biotechnol. Prog. 14: 8 de 1998.
segundo AILEY, JE, Y DF O LLIS, Fundamentos de la ingeniería bioquímica, 2d ed., Libro de Mc-Graw-Hill
Co., Nueva York, 1986.
segundo LANCH, HW, Y DS C ALONDRA. Ingeniería bioquímica. Marcel Dekker, Inc., Nueva York, 1996.
F REDERICKSON, AG, RD M EGEE III, Y HM T SUCHIYA, Modelos matemáticos para fermenta-
Procesos de Adv. Apl. Microbiol. 23: 419, 1970.
GRAMO ADEN, EL, J R., Cinética de fermentación y productividad, Chem. Rev. Ind. ( Londres), 1955, pág. 154.
H ERBERT, D., R. E LLSWORTH Y RC T ELLING, El cultivo continuo de bacterias: una teoría

y estudio experimental, J. Gen. Microbiol. 14: 601, 1956.
S HULER, ML, Sobre el uso de modelos químicamente estructurados para biorreactores, Chem. Ing. Comun.
36: 161–189, 1985.
S TRAIGHT, JV, Y DR AMKRISHNA, Modelado cibernético y regulación de vías metabólicas,
Crecimiento de nutrientes complementarios, Biotechnol. Prog. 10: 574, 1994.
PROBLEMAS
6.1. Una simple fermentación por lotes de una bacteria aeróbica que crece en metanol dio los resultados
se muestra en la tabla. Calcular:
a. Tasa máxima de crecimiento ( metro máx.)
segundo. Rendimiento en sustrato ( Y X / S)
C. Tiempo de duplicación de masa ( t re)
re. Constante de saturación ( K s)
mi. Tasa de crecimiento específica ( metro red) a t = 10 h

Tiempo (h) X ( g / l) S ( g / l)
0 0,2 9.23
2 0,211 9.21
4 0.305 9.07
8 0,98 8.03
10 1,77 6,8
12 3.2 4.6
14 5.6 0,92
dieciséis 6.15 0.077
18 6.2 0
6.2. El crecimiento de una población microbiana es una función del pH y viene dado por el siguiente
ecuación:
metro
metro
S
metro g = 1 dX =
X dt MI H+ˆ
K s UN 1+ + S
MI k 1 ¯˜
a. Con un conjunto dado de datos experimentales ( X y S versus t), Describe cómo determinarías
mía las constantes metro metro, K s, y k 1.
segundo. ¿Cómo sería la gráfica doble recíproca 1 / metro gramo versus 1 / S cambiar con el pH (o H +)
centration?
6.3. Los siguientes datos se obtuvieron para el efecto de la temperatura en la producción fermentativa
ción de ácido láctico por una cepa de Lactobacillus delbrueckii. A partir de estos datos, calcule el valor de la energía de
activación para este proceso. ¿Es el valor de la energía de activación típico de este tipo de conversión biológica? (Vea el
Capítulo 3.)
Temperatura (˚C) Constante de tasa (mol / lh)
40,4 0.0140
36,8 0.0112
33,1 0,0074
30,0 0,0051
25,1 0,0036
[Cortesía de AE Humphrey de "Problemas de trabajo de curso recopilados en ingeniería bioquímica", compilado por
HW Blanch para 1977 Am. Soc. Ing. Educ. Escuela de Verano.]
6.4. Se desea modelar el crecimiento de una individual bacteria. La celda transporta S 1 en el

celular enzimáticamente, y la permeasa está sujeta a inhibición del producto. S 1 se convierte en precursores, PAGS, que se
convierten finalmente en la porción macromolecular de la célula, METRO. El cata-
La lista de todas las reacciones es METRO.
(1) S * 1 ææÆ S 1 ( por unidad de superficie)

METRO
dónde S * = concentración exterior de S
(2) S 1 ææÆ PAGS

METRO
Problemas 201
Energía + PAGS ææÆ METRO ¸
(3a) S
METRO
˝ reacción acoplada
1 ææÆ energía
METRO ˛
o
(3b) S 1 + PAGS ææÆ METRO
METRO
El peso seco de la celda es T y es igual a

(4) T = S 1 + P + M l = r V
dónde r = densidad celular y V = volumen celular
Escriba las ecuaciones y defina todos los símbolos necesarios para describir los cambios en S 1, PM, y
T dentro de la celda. Recuerde que el volumen de la celda siempre está cambiando.
6.5. Un ingeniero bioquímico ha determinado en su laboratorio que la productividad óptima de un valioso

El tibiótico se logra cuando el nutriente de carbono, en este caso la melaza, se dosifica en el fermentador a una tasa proporcional a la
tasa de crecimiento. Sin embargo, no puede implementar su descubrimiento en la planta antibiótica, ya que no existe una forma
confiable de medir la tasa de crecimiento ( dX / dt) o concentración de biomasa ( X) durante el transcurso de la fermentación. Se sugiere
que se instale un analizador de oxígeno en los fermentadores de la planta para poder medir el OUR (tasa de absorción de oxígeno, g /
lh).
a. Derivar expresiones que pueden usarse para estimar X y dX / dt de NUESTROS datos de tiempo,
asumiendo que se puede usar un modelo simple de rendimiento y mantenimiento para describir la tasa de consumo de
oxígeno por el cultivo.
segundo. Calcular valores para el rendimiento ( Y X / O2) y mantenimiento ( metro O2) parámetros de los siguientes
ing datos:
NUESTRO X
Hora (g / h) (g / l)
0 0,011 0,60
1 0,008 0,63
2 0.084 0,63
3 0,153 0,76
4 0,198 1.06
5 0,273 1,56
6 0.393 2.23
7 0.493 2,85
8 0,642 4.15
9 0,915 5.37
10 1.031 7.59
11 1.12 9.40
12 1,37 11.40
13 1,58 12.22
14 1,26 13.00
15 1,58 13.37
dieciséis 1,26 14.47
17 1.12 15.37
18 1,20 16.12
19 0,99 16.18
20 0,86 16,67
21 0,90 17.01
[Cortesía de D. Zabriskie de "Collected Coursework Problems in Biochemical Engineering", compilado por HW Blanch para
1977 Am. Soc. Ing. Educ. Escuela de Verano.]

6.6. Pseudomonas sp. tiene un tiempo de duplicación de masa de 2,4 h cuando se cultiva en acetato. La saturación
constante usando este sustrato es de 1.3 g / l (que es inusualmente alto), y el rendimiento celular en acetato es
0,46 g de células / g de acetato. Si operamos un quimiostato en una corriente de alimentación que contiene 38 g / l de acetato, encuentre lo
siguiente:
a. Concentración celular cuando la tasa de dilución es la mitad del máximo

segundo. Concentración de sustrato cuando la tasa de dilución es 0.8 re max
C. Tasa de dilución máxima
re. Productividad celular a 0.8 re max
[Cortesía de E. Dunlop de "Collected Coursework Problems in Biochemical Engineering", compilado por HW Blanch
para 1977 Am. Soc. Ing. Educ. Escuela de Verano.]
6.7. Los siguientes datos se obtuvieron en un quimiostato para el crecimiento de E. aerogenes en un
medio de crecimiento limitado en glicerol.
X,
RE, h- 1 S, mg / ml
dilución mg / ml, celda
Velocidad 1 / re glicerol 1/S conc. re S re S / X re S / X · D
0,05 20 0,012 83,3 3.2 9.988 3.12 0,156

0,10 10 0,028 35,7 3,7 9.972 2,7 0,270
0,20 5,0 0,05 20 4.0 9,95 2,49 0,498
0.40 2.5 0,10 10 4.4 9,90 2,25 0,90
0,60 1,67 0,15 6,67 4,75 9,85 2.075 1,245
0,70 1,43 0,176 5,68 4.9 9.824 2.005 1.405
0,80 1,25 0,80 1,25 4.5 9,20 2.045 1.635
0,84 1,19 9.00 0,11 0,5 - - -
Nota: S 0 = 10 mg / ml.
Para este sistema, estime los valores de:

a. K s, mg de glicerol / ml
segundo. metro metro, h- 1
C. Y X / S, mg de células / mg de glicerol
re. metro s, mg de glicerol / mg celular-h
[Cortesía de AE Humphrey de "Problemas de trabajo de curso recopilados en ingeniería bioquímica", compilado por
HW Blanch para 1977 Am. Soc. Ing. Educ. Escuela de Verano.]
6.8. La cinética del crecimiento microbiano, el consumo de sustrato y la producción asociada al crecimiento mixto
La formación de uct para un cultivo de quimiostato viene dada por las siguientes ecuaciones:
dX = metro metro S
X
dt Ks+ S
dS = metro metro S
X
dt ( K s + S) Y X / S
dP = un dX + segundo X = ( a.m g + segundo) X
dt dt
Los valores de los parámetros cinéticos son metro m = 0,7 h –1, K s = 20 mg / l, Y X / S = 0,5 g de peso seco / g de sustrato, Y P / X
= 0,15 gP / g ◊ dw, a = 0,1, b = 0,02 h –1, y S 0 = 1 g / l.
Problemas 203
a. Determinar la tasa de dilución óptima maximizando la productividad de la formación del producto.
( PD).
segundo. Determine la tasa de dilución óptima maximizando la productividad de la formación de células (biomasa)
ción DS).
[Problema adaptado de uno sugerido por L. Erickson.]
6,9. El etanol se utilizará como sustrato para la producción de proteínas unicelulares en un quimiostato. los
El equipo disponible puede alcanzar una tasa de transferencia de oxígeno de 10 g O 2 / l de líquido por hora. Suponga que la cinética
del crecimiento celular en etanol es del tipo Monod, con metro m = 0,5 h –1, K s = 30
mg / l, Y X / S = 0,5 células / g de etanol, y Y O2 / S = 2 g O 2 / g EtOH. Deseamos operar el quimiostato con una concentración de etanol
en la alimentación de 22 g / L. También deseamos maximizar la biomasa
productividad y minimizar la pérdida de etanol no utilizado en el efluente. Determine la tasa de dilución requerida y si se
puede proporcionar suficiente oxígeno.
6.10. Grafique la respuesta de un cultivo al crecimiento diauxico en glucosa y lactosa en base a lo siguiente:
En g: metro glucosa = 1.0 h 1; metro lactosa = 0,6 h –1; Y glucosa = Y lactosa = 0,5; la inducción enzimática requiere 30 minutos para completarse. Grafique la
masa celular, las concentraciones de glucosa y lactosa, asumiendo valores iniciales
cantidades de 2 g / l de glucosa, 3 g / l de lactosa y 0,10 g / l de células.
6.11. Los siguientes datos se obtienen en la oxidación de plaguicidas presentes en aguas residuales mediante una mezcla
cultivo de microorganismos en un tanque de aireación de funcionamiento continuo.
S ( Plaguicidas),
D ( h- 1) mg / l X ( mg / l)
0,05 15 162
0,11 25 210
0,24 50 250
0,39 100 235
0,52 140 220
0,7 180 205
0,82 240 170
Suponiendo que la concentración de plaguicida en la corriente de aguas residuales de alimentación es S 0 = 500 mg / l, detergente
mía Y METRO X / S, k re, metro metro, y K s.
6.12. En un quimiostato se sabe que si un cultivo obedece a la ecuación de Monod, el sustrato residual es
independiente de la concentración del sustrato de alimentación. Observa que en su quimiostato una
pliegue en S 0 provoca un aumento en la concentración de sustrato residual. Tu amigo sugiere que consideres si la
ecuación de Contois puede describir mejor la situación. Los Contois
ecuación (ecuación 6.36) es:
m = m metro S
K sx X + S
a. Derivar una expresión para S en términos de RE, metro metro, K sx, y X para un CFSTR de estado estacionario
(quimiostato).
segundo. Derivar una ecuación para S como una función de S 0, D, K sx, Y METRO X / S, y metro metro.
C. Si S 0 aumenta al doble, en cuánto S ¿incrementar?
6.13. Pseudomonas putida con metro m = 0,5 h 1 se cultiva en un cultivo continuo bajo aerobio
condiciones donde D = 0,28 h 1. La fuente de carbono y energía en la alimentación es lactosa con un

concentración de S 0 = 2 g / l. Se desea que la concentración de lactosa efluente sea S = 0,1 g / l. Si la tasa de crecimiento está limitada
por la transferencia de oxígeno, utilice la siguiente información:
Y METRO
X / S = 0.45 gX / gS, Y METRO X/O= 0,25 gX / gO 2 y C * = 8 mg / l
2
a. Determine la concentración de biomasa en estado estacionario ( X) y la tasa específica de oxígeno
consumo q O2).
segundo. ¿Cuál debería ser el coeficiente de transferencia de oxígeno ( k L un) para superar el oxígeno
limitación de transferencia (es decir, C L = 2 mg / l)?
6.14. El coeficiente de rendimiento de crecimiento máximo para Bacillus subtilis creciendo en metanol es de 0,4 g X/ gramo
S. El calor de combustión de las células es de 21 kJ / gy para el sustrato es de 7,3 kcal / g. Determine el calor metabólico
generado por las células por unidad de masa de consumo de metanol.
6.15. Calcule la productividad (es decir, DP) de un quimiostato en las siguientes condiciones:
1. Suponga que se aplica la cinética de Monod. Suponga que se deben reducir cantidades insignificantes de biomasa.
vertido al producto (<1%).

2. Suponga que se aplica la ecuación de Luedeking-Piert para la formación de productos (ecuación 6.18).
3. Suponga un estado estable:
D = 0.8 metro metro Y METRO

X / S = 0,5 g X/ gramo S
metro m = 1.0 h 1 S 0 = 1000 mg / l

K s = 10 mg / l b = 0,5 h 1 mg PAGS/ gramo X
a = 0,4 mg PAGS/ gramo X
6.16. Considere un quimiostato. Desea conocer el número de células en el reactor y el fracción de

las células que son viables (es decir, vivas según lo determinado por la capacidad de dividirse).
a. Escribe una ecuación para el número de células viables ( norte v). Asumir que
metro m, rep S
metro neto, rep. = - k re ¢
K s, rep + S
dónde metro neto, rep = tasa de replicación específica neta, metro metro, rep = tasa máxima de replicación específica,
y k ¢ d = índice de mortalidad. K s, reps es el parámetro de saturación.
segundo. Derivar una expresión para el valor de S en estado estacionario.
C. Escriba el saldo numérico en el quimiostato de células muertas ( norte re).
re. Derive una expresión para la fracción de la población total que son células muertas.
6.17. E. coli se cultiva en cultivo continuo en condiciones aeróbicas con limitación de glucosa.
Cuando el sistema se opera en D = 0,2 h 1, determinar el contenido de glucosa y biomasa efluente
centraciones utilizando las siguientes ecuaciones ( S 0 = 5 g / l):
a. Ecuación de Monod: metro m = 0,25 h 1, K s = 100 mg / l.
segundo. Ecuación de Tessier: metro m = 0,25 h 1, K = 0,005 (mg / l) - 1.
C. Ecuación de Moser: metro m = 0,25 h 1, K s = 100 mg / l, n = 1.5.
re. Ecuación de Contois: metro m = 0,25 h 1, K sx = 0,04, Y METRO X/S= 0,4 g X/ gramo S.
S0= 5 g / l
Compare y comente los resultados.

6.18. Considere el funcionamiento en estado estable de un quimiostato. Suponga que el crecimiento está inhibido por el sustrato y
que el metabolismo endógeno puede ignorarse de manera que:
metro metro S
mred=
K S + S + S 2 / K yo
Problemas 205
a. Derivar una expresión para la concentración de sustrato residual (es decir, S) en función de la dilución
velocidad de aceleración y los parámetros cinéticos ( metro metro, K S, K YO).
segundo. ¿Cuáles son las implicaciones para el funcionamiento de un quimiostato cuando el organismo se somete a
inhibición del sustrato?
6.19. La formación de ácido láctico a partir de glucosa se realiza en un cultivo continuo mediante Estreptococo
lactis. La siguiente información se obtuvo de estudios experimentales.
S 0 = 5 g / l, metro m = 0,2 h 1, K S = 200 mg / l, k d = 0,002 h 1, Y METRO X/S= 0,4 g X/ gramo S, Y P / S = 0,2 g PAGS/ gramo S,
q P = 0,1 g PAGS/ gramo X- h.
a. Trace las variaciones de S, X, P, DX y DP con tasa de dilución.

segundo. Determine (gráficamente) la tasa de dilución óptima maximizando las productividades de bio-
masa (DX) y el producto (DP).

Cap. 6 How Cells Grow - M.schuler F.kargi - 2002.en - Es

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6

Cómo crecen las células

sustratos + células –– Æ productos extracelulares + más células

así como X. En ese caso

6.2. CRECIMIENTO DE LOTES

6.2.1. Cuantificación de la concentración celular

La cuantificación de la concentración celular en un medio de cultivo es fundamental para la determinación de la cinética y

6.2.1.1. Determinación de la densidad del número de células. Un tobogán de Petroff-Hausser o un

156 Cómo crecen las células Cap. 6

algunas células que son metabólicamente activas pueden no formar colonias.

El número de partículas en solución se puede determinar a partir de la medición de lig dispersos

Figura 6.1. Diagrama de un contador de partículas que utiliza el

Segundo. 6.2 Crecimiento por lotes 157

6.2.1.2. Determinación de la concentración de masa celular. Métodos directos. Determi-

158 Cómo crecen las células Cap. 6

Segundo. 6.2 Crecimiento por lotes 159

microbiano. En algunos casos, cambios en el pH o adición ácido-base para controlar el pH

6.2.2. Patrones de crecimiento y cinética en cultivo por lotes

160 Cómo crecen las células Cap. 6

eficiente, particularmente con un pequeño inóculo.

Segundo. 6.2 Crecimiento por lotes 161

debe ser lo más corto posible.

que todos los componentes de una célula crecen al mismo ritmo.

la celda permanece aproximadamente

constante durante , la tasa de crecimiento específica neta

Figura 6.4. Influencia del Mg 2+ concentración en la

162 Cómo crecen las células Cap. 6

Integración de eq. 6.5 rendimientos

dónde X y X 0 son concentraciones de células en el tiempo t y t = 0.

dónde t re es el tiempo de duplicación de la masa celular.

tasa específica de replicación. Así

dónde t ¢ re es el tiempo de duplicación basado en la tasa de replicación. Durante un crecimiento equilibrado t re

Segundo. 6.2 Crecimiento por lotes 163

La tasa de muerte generalmente sigue una cinética de primer orden:

dónde norte s es la concentración de células al final de la fase estacionaria y k ¢ re es el primero-

164 Cómo crecen las células Cap. 6

crecimiento en una fermentación es

carbono como de energía, el sustrato se puede consumir como:

re S = re S asimilación + re S asimilado + re S energía de crecimiento + re S mantenimiento

YP/S= - D PAGS (6,14)

Segundo. 6.2 Crecimiento por lotes 165

1. Los productos asociados al crecimiento se producen simultáneamente con el crecimiento microbiano.

endógeno es distinto de cero.

La producción de una enzima constitutiva es un ejemplo de un producto asociado al crecimiento.

2. La formación de producto no asociada al crecimiento tiene lugar durante la fase estacionaria

166 Cómo crecen las células Cap. 6

Organismo Sustrato g/g g / mol g / gC g/g

Enterobacter aerogenes Maltosa 0.46 149,2 1.03 1,50

Segundo. 6.2 Crecimiento por lotes 167

Luedeking – Piret ecuación. Si a = 0, el producto solo está asociado al no crecimiento, y si b = 0, el producto

a. Calcule la tasa de crecimiento específica neta máxima.

C) X max = X 0 + YS 0 = 1,25+ 0,4 (150) = 60,25 g células / l

168 Cómo crecen las células Cap. 6

m ¢ R = Ae- mi un / RT, k re ¢ = UN ¢ mi- mi d / RT (6,20)

como la producción de proteínas unicelulares, la optimización de la temperatura

Segundo. 6.2 Crecimiento por lotes 169

/ r. Los puntos de datos individuales están marcados con los

grados Celsius correspondientes.

E. coli B / r se cultivó en un medio complejo rico (!) Y un

mantener el pH intracelular a un nivel relativamente constante en presencia de fluctuaciones en el pH ambiental.

En la mayoría de las fermentaciones, el pH puede variar sustancialmente. A menudo, la naturaleza de la fuente de

en la Fig. 6.8, lo que indica un pH óptimo.

un factor limitante de la tasa de crecimiento cuando el