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UNIVERSIDAD NACIONAL DE TUMBES

FACULTAD DE CIENCIAS AGRARIAS


ESCUELA DE AGROINDUSTRIAS

EVALUACIN DEL CRECIMIENTO MICROBIANO

DOCENTE:

ING. EDWIN TORRES INFANTE.

NTEGRANTES:

CARRASCO VELIZ Gresia


DIOS TINOCO Limber
DOMINGUEZ SEMBRERA, Fray
GUARNIZ CHAMPA, Carlos
MARCHN GARCS, Kenverly
OVIEDO CASARIEGO, Jos
RUEDA MARCHN Hans

EN CUMPLIMIENTO DEL TRABAJO ENCARGADO EN


LA ASIGNATURA DE BIOTECNOLOGA

TUMBES PER
2017
INTRODUCCION

Las bacterias, al igual que los dems seres vivos requieren de una serie de condiciones o
factores ambientales para el desarrollo celular y conformacin de poblaciones comunidades.
Los factores pueden diferenciarse en abiticos, referidos a aquellos relacionados con aspectos
propios del medio donde se desarrollan, como la temperatura, el pH, los gases respiratorios (O2
y CO2), las radiaciones (lumnicas, sonoras, electromagnticas), la presin (atmosfrica,
hidrosttica, osmtica) y la presencia de nutrientes y en biticos, referidos a aquellos
relacionados con las interrelaciones que se dan entre las diversas poblaciones y comunidades.
Cuando la bacteria encuentra condiciones propicias para su desarrollo o se adapta a las nuevas
condiciones del medio, ocurre inicialmente un crecimiento en masa celular y posteriormente, en
el nmero de clulas a medida que avanza el tiempo. Estos cambios pueden representarse
mediante una curva, la cual ha sido denominada curva decrecimiento

El crecimiento poblacional bacteriano puede definirse en trminos del incremento de la masa


celular o del nmero de clulas, generalmente estos dos parmetros guardan una relacin
directamente proporcional, pero puede variar segn las condiciones del cultivo.

La masa celular es expresada ya sea como peso seco, volumen celular empacado, contenido
de nitrgeno o turbidez, esta ltimas es la ms usualmente empleada pues su medicin rpida
en un fotocolormetro o espectrofotmetro permite rastrear la densidad de un cultivo mientras
est creciendo.

El tiempo de generacin se refiere al intervalo de tiempo requerido para que la clula se divida,
o lo que es lo mismo, para que la poblacin se duplique). Muchos estudios bacteriolgicos
requieren la determinacin del nmero de bacterias presentes en una unidad de volumen. Los
recuentos se pueden efectuar por diferentes mtodos, ya sea contando slo clulas vivas o
tambin vivas y muertas. La cantidad y tipo de microorganismos en una muestra dependen de
la composicin qumica de la misma y de los tratamientos a que haya sido sometida. El mtodo
de conteo elegido depende del objetivo del conteo. En esta forma se puede determinar la
presencia o ausencia de microorganismos, as como su nmero presente en el material de
estudio. Un conteo total establece el grado de contaminacin microbiana. Conociendo el nmero
se puede estandarizar la concentracin de inculos y seguir la dinmica poblacional de un
cultivo puro y muchos otros estudios.
II. OBJETIVOS:

Evaluar la forma esquemtica como se lleva a cabo el crecimiento microbiano


a travs del tiempo.

Determinar la curva de crecimiento microbiano a partir de un sustrato.

III. FUNDAMENTO TEORICO

3.1. CINETICA DE CRECIMIENTO MICROBIANO

La cintica de crecimiento microbiano constituye una de


las operaciones ms utilizadas por la ingeniera alimentaria y
la biotecnologa, por lo tanto, es menester conocer los diferentes
mecanismos de crecimiento, as como, la forma de cuantificacin de los
mismos, sus formas de aplicacin, las ventajas y desventajas de los
diferentes mtodos, y sobre todo el monto econmico de cada uno de ellos.
Por tanto, el siguiente documento trata de proporcionar
una informacin general acerca de los diferentes mecanismos
de reproduccin bacteriana, as como de dar una idea acerca de la
utilizacin de los mismos, sus caractersticas, especificaciones, y
un anlisis de las ventajas y desventajas de cada uno de ellos.

3.1.1. Crecimiento microbiano

"El crecimiento de clulas, microorganismos, clulas vegetales


y animales, puede mirarse bajo dos aspectos o tipos de crecimiento
reproductivo.

a. Clulas individuales o poblacin de clulas en crecimiento


sincronizado para estudio del ciclo de vida
celular. Procesos en laboratorio.
b. Divisin estocstica de la poblacin, o divisin al azar.
La divisin celular se efecta luego de un aumento en el tamao de la
clula, duplicacin del ncleo, divisin celular, divisin citoplasmtica
(salva los organismos centicos). De sta manera una clula da
nacimiento a dos clulas hijas de tamao idntico y conteniendo los
mismos elementos estructurales y potencialidades.

En el caso de las levaduras, y otros microorganismos, se presenta una


variante que es ka gemacin o botn. Se forma una pequea
protuberancia que aumenta progresivamente de tamao, luego se
produce la divisin en el ncleo y migra hacia el botn. Finalmente
crece hasta un tamao suficiente y posteriormente se separa
formando otra clula idntica a la madre. Las clulas hijas, sin importar
el procedimiento de divisin celular, deben heredar todo el potencial
gentico y son idnticas."

3.1.2. Medicin del crecimiento microbiano

El clculo del nmero de clulas que existen en una suspensin se


puede llevar a cabo mediante el recuento celular (microscopa, nmero
de colonias), masa celular (peso seco, medida del nitrgeno celular,
turbidimetra) o actividad celular (grado de actividad bioqumica con
relacin al tamao de la poblacin). Todos estos mtodos se clasifican
en dos apartados: mtodos directos y mtodos indirectos.

3.2. CRECIMIENTO EN CULTIVO INTERMITENTE

3.2.1 Cintica de crecimiento de un cultivo intermitente

En este apartado vamos a revisar el estudio de la cintica del


crecimiento de microorganismos que crecen en un cultivo realizado en
un volumen finito. a esto se le denomina cultivo batch y podramos
traducirlo por cultivo discontinuo por contraposicin con el cultivo
continuo que desarrollaremos ms adelante. El desarrollo de un cultivo
continuo se ajusta al representado en la siguiente figura:

Figura 01: Dsarrollo en un cultivo intermitente

Cuatro fases en el cultivo:

1. La fase lag o de adaptacin, en la que el microorganismo se adapta a


las nuevas condiciones y pone en marcha su maquinaria metablica
para poder crecer activamente. La duracin de esta fase es variable y
en general es mayor cuanto ms grande sea el cambio en las
condiciones en las que se encuentra el microorganismo.
2. La fase exponencial, donde el microorganismo empieza a multiplicarse.
3. La fase estacionaria, en la que no hay aumento neto de
microorganismos, lo que no significa que no se dividan algunos, sino
que la aparicin de nuevos individuos se compensa por la muerte de
otros.
4. En la fase de muerte decimos que el nmero de microorganismos vivos
disminuye exponencialmente. Pero qu es un microorganismo vivo en
trminos microbiolgicos? Consideramos vivo al microorganismo que
puede multiplicarse (dividirse), y muerto al que ha perdido
irreversiblemente la capacidad de dividirse.
Es importante entender este concepto porque los microorganismos
microbiolgicamente muertos no tienen por qu estar metablicamente
inactivos.

3.3. FACTORES QUE AFECTAN LA RAPIDEZ DE CRECIMIENTO

3.3.1 Efecto de la concentracin de sustrato

Si [Et] representa la concentracin total del microorganismo en una


reaccin y [ES] es la concentracin del complejo microorganismo-
sustrato, entonces [Et] - [ES] representa la concentracin de
microorganismo libre para reaccionar con el sustrato.

Durante una reaccin el microorganismo se unir al sustrato, hasta que


todas las molculas se saturen. Usualmente la concentracin de
sustrato [S] es mayor que [ES], por lo que no resulta un factor limitante.
La razn de formacin de [ES] est definida por:

[ES] Rate = k1 ([Et] [ES]) [S] (Ec. 3.4.1.1)

Mientras que la disociacin est definida por

[ES] disociacin rate = k 1 [ES] k2 [ES] (Ec. 3.4.1.2)

Mientras haya microorganismo disponible, la razn de k 1 ir


aumentando hasta que se saturen. Si las constantes de reaccin y
disociacin son iguales, la formacin del complejo [ES] se mantiene
estable al igual que la velocidad de reaccin. O sea que la generacin
del producto se mantiene constante mientras la concentracin del
sustrato no sea limitante. Esto se definira como:

ES] = [Et] [S] (Ec. 3.4.1.3)

[S] + (k2 + k -1) / k1


La velocidad inicial de la reaccin est determinada por

v = k2 [ES] (Ec. 3.4.1.4)

Si definimos KM como (k2 + k -1) / k1 y Vmax como k2 [Et], obtenemos


que

v = Vmax [S] / KM + [S] (Ec. 3.4.1.5)

Esta es la ecuacin de Michaelis-Menten.

En un estudio de cintica microbiana se mide la actividad en trminos


de producto formado por minuto, a distintas concentraciones de
sustrato. Si la actividad es graficada en trminos de la concentracin
inicial del sustrato versus el producto generado en un lapso de tiempo
(velocidad de reaccin), la curva generada es una hiprbole rectangular.

La ecuacin que describe todos los puntos en esa lnea viene dada por
v. Esta ecuacin expresa la velocidad para la reaccin de un solo
sustrato y se conoce como la ecuacin de Michaelis-Menten:

V max v = Vmax [S] / (Km + [S]) (Ec. 3.4.1.6)

v = actividad microbiana

V max/2 [S] = concentracin de sustrato

KMVmax = actividad a [S] infinito

KM = el valor de [S] que da actividad

[S] igual a Vmax


Figura 02: grafica ecuacin Michaelis-
Menten

3.3.2. Efecto de la temperatura

Todos los microorganismos tienen una temperatura ptima de


crecimiento. Esto significa que a determinada temperatura la velocidad
de duplicacin (o la velocidad de crecimiento poblacional) de los
microorganismos es mayor. Hay que tener en cuenta que no todos los
microorganismos crecen en el mismo rango de temperaturas:

Clasificacin Rango Optima


Termfilos 25 80 C 50 60 C Tabla 01: Tabla de temperatura
Mesfilos 10 45 C 20 40 C optima de crecimiento

Psicrfilo -5 30 C 10 20 C

Figura 04: Efecto de la temperatura en el crecimiento microbiano


La temperatura afecta la estabilidad de las protenas celulares porque
induce cambios conformacionales que alteran la actividad biolgica de
estos compuestos, especialmente la de enzimas.

IV. MATERIALES, INSUMO Y EQUIPOS

4.1. Insumos

Levadura fresca
Azcar
Agua destilada

4.2. Materiales

Probeta
Fiola
Matraz
Pipeta
Tubo de ensayo

4.3. Equipos

Biorreactor
Espectrofotmetro
Balanza
Termmetro

V. PROCEDIMIENTO
1. Pesar 400 gramos de azcar e introducirlo en una fiola.
2. Medir 400 mL de agua destilada e introducirlo en la fiola con azcar y
homogenizar.
3. Pesar la levadura fresca (0.01%)
4. Obtenemos una muestra base de agua y azcar.
5. Introducimos la mezcla de agua con azcar y la levadura fresca al birreactor y
homogenizamos.
6. Obtenemos 10 muestras y las introducimos en los tubos de ensayo y luego
observamos en el espectrofotmetro.

VI. RESULTADOS

a) Dilucin al 40%

Tiempo Absorbancia pH T

= : 0.122 5.24 26.5

= : 1.279 4.40 27.7

= : 1.230 4.36 27.5

= : 1.180 4.06 21.2

= : 1.138 3.80 26.7

= : 1.120 3.73 27.0

= : 1.108 3.66 26.9

Curva de crecieminto
1.4
1.279
1.2 1.23
1.18
1.138 1.12 1.108
1

0.8

0.6

0.4

0.2
0.122
0
Mb = 10:30 T0= 11.00 T1= 11:30 T2 = 12:00 T3= 12:30 T4= 01: 00 T5 = 01:30
am am am pm pm pm pm
absorbancia 0.122 1.279 1.23 1.18 1.138 1.12 1.108
b) Dilucin al 50%

Tiempo Absorbancia pH T

= : 1.433 5.36 25

= : 1.651 6.17 28

= : 1.53 5.7 29

= : 1.53 6.97 26

= : 1.498 5.78 26

= : 1.353 5.58 29

= : 0.531 6.18 26.9

Curva de crecimiento
1.8

1.6

1.4

1.2

0.8

0.6

0.4

0.2

0
T1 = 10:35 T2 = 11:05 T3 = 11.35 T4 = 12: 05 T5 = 12:37 T6 = 12:50 T7 = 01:07
am am am pm pm pm pm
absorbancia 1.433 1.651 1.53 1.53 1.498 1.353 0.531
VII. DISCUSIONES

Al comparar los resultados de las diluciones (30% y 40 %) nos damos cuenta que
la curva de crecimiento es diferente.

En la dilucin de 30 % nuestro grupo tuvo como referencia una muestra madre


donde podemos observar la diferentes fases del crecimiento microbiano: fase Lag
en donde el microorganismo (levadura) se adapta a las nuevas condiciones y pone
en marcha su maquinaria metablica para poder crecer activamente, luego pasa por
la fase exponencial en donde el microorganismo empieza a multiplicarse; finalmente
la fase de muerte donde nmero de microorganismos vivos disminuye y
observamos que la curva tiene un pequeo descenso.

VIII. CONCLUSIONES

El crecimiento bacteriano puede tomarse como el crecimiento de poblaciones de


muchos millones de clulas cuyas caractersticas son esencialmente estadsticas, y
el comportamiento de la clula individual es tomado como una frecuencia.

La curva de crecimiento microbiano resulta de la representacin grfica de la


determinacin peridica del nmero de clulas viables por millones que existen en
el lquido inoculado con clulas microbianas provenientes de un cultivo que ha
crecido previamente hasta saturacin.

Es importante resaltar que la curva de crecimiento microbiano tiene una gran utilidad,
ya que permite conocer el ciclo de vida de una bacteria que da origen a otras, adems
que muestra el crecimiento en todas las etapas de vida de la bacteria.

Para obtener un crecimiento adecuado es necesario preparar un cultivo


correctamente para evitar la presencia de bacterias indeseadas.
IX. BIBLIOGRAFIA:

1. McGee, Harold (2004). On Food and Cooking: The Science and Lore of the
Kitchen (en ingls) (ed. rev. edicin). Nueva York: Scribner.
p. 896.ISBN 0684800012.

2. E. McGovern, Patrick (2003). Ancient Wine: The Search for the Origins of
Viniculture (en ingls)(primera edicin). Princeton University Press. pp. 400
p.p. ISBN 0691070806. intro de Robert G. Mondavi.

3. 8,000-year-old wine unearthed in Georgia.The Independent. Consultado el 28


de diciembre de 2008.

4. World's Earliest Wine. Archeology, vol. 49 (1996), Consultado 13 de diciembre


de 2008.

5. Verango, Dan (29 de mayo de 2006). White wine turns up in King


Tutankhamen's tomb. USA Today(en ingls). Consultado el 14 de diciembre de
2008.
X. ANEXOS