CURVA DEL CRECIMIENTO MICROBIANO

En la figura se ilustra una curva de crecimiento de una población microbiana. Esta curva se divide en cuatro fases
denominadas fase de latencia, fase exponencial o fase logarítmica, fase estacionaria y fase de muerte. Fase de
latencia

Cuando una población bacteriana es inoculada en medio fresco, el crecimiento usualmente no comienza de
inmediato sino después de un tiempo llamado de latencia, que puede ser corto o largo dependiendo de las
condiciones.

La fase de latencia representa un periodo de transición para los microorganismos cuando son transferidos a una
nueva condición. En esta fase se producen las enzimas necesarias para que ellos puedan crecer en un nuevo medio
ambiente.

En esta fase no hay incremento en el número de células, pero hay gran actividad metabólica, aumento en el tamaño
individual de las células, en el contenido proteico, ADN y peso seco de las células.

Si un cultivo que está creciendo en fase exponencial es inoculado al mismo medio de cultivo bajo las mismas
condiciones de crecimiento, no se observa fase de latencia y el crecimiento exponencial sigue a la misma velocidad.
Si el inóculo se toma de un cultivo viejo (fase estacionaria) y se inocula en el mismo medio, generalmente se
presenta la fase de latencia esto se debe a que las células generalmente agotan una serie de coenzimas esenciales u
otros constituyentes celulares y se requiere cierto tiempo para su resíntesis.

También se observa latencia cuando el inóculo está formado por células que han sido dañadas pero no muertas,
bien sea por tratamiento con calor, radiaciones o sustancias químicas, puesto que requieren reparar dicho daño.

En el caso de que una población se transfiera de un medio de cultivo rico a un medio pobre, se observa latencia
puesto que es necesario que las células para poder seguir creciendo tengan una serie de enzimas para poder
sintetizar algunos metabolitos esenciales que no están presentes en el medio.

Fase exponencial o fase logarítmica

Es el período de la curva de crecimiento en el cual el microorganismo crece exponencialmente, es decir que cada
vez que pasa un tiempo de generación la población se duplica. Bajo condiciones apropiadas la velocidad de
crecimiento es máxima. Las condiciones ambientales (temperatura, composición del medio de cultivo, etc.) afectan
a la velocidad de crecimiento exponencial.
Fase estacionaria

En cultivos en recipientes cerrados una población no puede crecer indefinidamente en forma exponencial. Las
limitaciones del crecimiento ocurren ya sea por agotamiento de algún nutriente esencial, por acumulación de
productos tóxicos, porque se alcance un número de células elevado para el espacio disponible o por una
combinación de las causas anteriores. Este periodo durante el cual cesa el crecimiento se conoce como fase
estacionaria.

Fase de muerte

Si la incubación continúa después de que una población microbiana alcanza la fase estacionaria, las células pueden
seguir vivas y continuar metabolizando, pero va a comenzar una disminución progresiva en el número de células
viables y cuando esto ocurre se dice que la población ha entrado en fase de muerte.

MEDICIÓN DEL CRECIMIENTO MICROBIANO

El crecimiento microbiano se mide por cambios sucesivos en el número de células o por el aumento de peso de la
masa de las células. Hay varios métodos para enumerar las células o estimar la masa de éstas.

DETERMINACIÓN DEL NÚMERO DE CÉLULAS TOTALES

Recuento directo mediante contadores electrónicos

Los contadores electrónicos diseñados para contar glóbulos rojos se puede usar para este fin. Esencialmente un
contador electrónico consta de dos cámaras que están separadas por un material que no conduce la corriente, en
este material no conductor hay un orificio de un tamaño similar al de las células a ser contadas.

Cada cámara contiene un electrodo, la suspensión de células a ser contadas se coloca en una de las cámaras y se
aplica presión para que las células pasen a la otra cámara a través del orificio, cada vez que una célula pasa a través
del orificio ocasiona un cambio en la conductividad eléctrica que es registrado por un dispositivo electrónico y de
esta manera el contador indica el número de células en esa suspensión.

Las limitaciones de este método son las siguientes:

• Se cuentan células vivas y muertas.

• Las suspensiones deben estar libres de partículas diferentes a los microorganismos que estamos contando por
que el aparato no puede distinguir entre una u otra.

Recuento directo al microscopio

Se determina directamente el número de células contándolas al microscopio con la ayuda de cámaras especiales
que albergan un volumen conocido de liquido (Hemocitómetros, Cámara de Petroff- Hausser).
El recuento directo al microscopio es tedioso, pero es una forma rápida de estimar el número de células
microbianas. Sin embargo, presenta algunas limitaciones:
• No se pueden distinguir las células vivas de las células muertas.
• Las células muy pequeñas son difíciles de contar.
• La precisión es difícil de lograr
• El método no es adecuado para suspensiones celulares de baja densidad, es decir las soluciones deben contener
aproximadamente 107 células/mL o más.
A continuación se desarrolla, como ejemplo, el recuento directo al microscopio utilizando la cámara de Petroff-
Hausser. En este método la suspensión de la muestra se coloca en la cavidad cuadriculada de dimensiones
conocidas de la cámara, y se tapa con el cubre objetos. Como se conoce el área de las cuadrículas y la altura de la
cámara de recuento, el volumen ocupado por la suspensión en cada cuadrículas queda determinado. Por tanto,
para obtener el número de bacterias por mililitro de suspensión, todo lo que se requiere es contar el número de
microorganismos en varias cuadriculas, calcular el promedio de recuento por cuadrícula y multiplicar este
promedio por el factor correspondiente.

Determinación de células viables

En los métodos anteriores se determina el número de células totales, pero en muchos casos únicamente interesa
contar células viables.

Se define como célula viable, aquella célula que es capaz de dividirse y forma una progenie y la manera usual para
realizar un recuento de células viables es determinando el número de células en la muestra, capaces de formar
colonias sobre un medio de cultivo sólido (agar) y esto se conoce como recuento en placa.

En este procedimiento se realizan diluciones seriadas de la muestra y se inoculan pequeños volúmenes conocidos,
de cada una de las diluciones, en placas de Petri conteniendo un medio sólido adecuado estéril y se extiende con
una varilla de vidrio (método de siembra en placa por extensión o diseminación) o en placas de Petri estériles a las
cuales se les adiciona un medio sólido fundido y enfriado a 45ºC y se mezclan bien (método de siembra por
incorporación o de vertido en placa), luego se incuban en las condiciones optimas hasta que aparezcan las colonias
correspondientes. Se asume que cada colonia proviene de la división sucesiva de una sola célula, conociendo el
volumen sembrado y la dilución de la cual proviene y contando el número de colonias en la placa correspondiente
se puede calcular el número de células viables en la muestra. Debido a que es difícil saber si una sola bacteria dio
origen a una colonia, se expresa usualmente el número de células viables como unidades formadoras de colonias
(UFC). Para realizar el recuento se seleccionan las placas de la que contengan entre 25 y 250 colonias.

A pesar de las deficiencias que pueda presentar la técnica del recuento en placas, se usa frecuentemente, y con
resultados satisfactorios, para la estimación de las poblaciones bacterianas en la leche, agua, y otros productos. Es
fácil de realizar y se adapta a la medición de poblaciones de cualquier densidad.

En el siguiente esquema se presenta un ejemplo de un recuento en placa haciendo diluciones seriadas con un factor
de dilución de 100, para ello se toma 1 mL de la muestra, la cual puede ser un cultivo de bacterias o cualquier otra
muestra que contenga bacterias en suspensión, se añade a un frasco de dilución que contiene 99 mL del diluente
adecuado, se agita y se toma de esta primera dilución (1:100 ó 10-2) 1 mL y se transfiere a un segundo frasco de
dilución que contiene 99 mL del diluente adecuado, se agita y se toma de esta segunda dilución (1:10.000 ó 10-4) 1
mL y se transfiere a un tercer frasco de dilución que contiene 99 mL del diluente adecuado (esa corresponde a la
dilución 1:1.000.000 ó 10-6).

De cada se siembran por triplicado muestras de 1 mL y se incuban en posición invertida por 24 horas o más y se
cuentan las colonias.
Determinación de la masa microbiana

Para muchos estudios especialmente aquellos relacionados con la bioquímica de los procesos de crecimiento, se
prefiere determinar la masa de la población más que el número de células presentes. La masa se puede
determinar directamente determinando el peso seco o húmedo de la muestra. También se puede determinar el
contenido de nitrógeno o el contenido de proteínas o de ADN.

Otra forma de estimar la masa celular de una manera indirecta es determinando la actividad metabólica de la
célula por ejemplo determinando el consumo de oxígeno o producción de dióxido de carbono. Asumiendo que la
cantidad del producto metabólico está en proporción directa al número de bacterias presentes en la población.

Un método más sencillo y útil para obtener la estimación relativa de la masa bacteriana es utilizar métodos
ópticos (turbidimétricos) que consisten en medir la turbidez, ya que, dentro de ciertos límites, las suspensiones
bacterianas dispersan la luz proporcionalmente a su concentración.

FACTORES FISICOS Y QUÍMICOS QUE ALTERAN EL CRECIMIENTO MICROBIANO.

Efecto de la temperatura sobre el crecimiento

La temperatura es uno de los factores más importantes que afectan al crecimiento y a la supervivencia de los
microorganismos. A temperaturas muy frías o muy calientes los microorganismos no crecerán. Pero los valores
absolutos de estas temperaturas mínimas o máximas varían mucho entre los microorganismos diferentes y por lo
general reflejan el rango de temperatura media de su hábitat natural.
Temperaturas cardinales

La temperatura ejerce dos tipos de efectos opuestos sobre los organismos vivos. A medida que se eleva la
temperatura, las reacciones químicas y enzimáticos de la célula son más rápidas y el crecimiento se acelera.

En consecuencia dentro de un cierto margen, un aumento de temperatura supone un incremento en el crecimiento

y en el metabolismo hasta un punto que tienen lugar las reacciones de inactivasión. Por encima de tal punto, las
reacciones celulares caen rápidamente a cero. Así para cada organismo existe una temperatura mínima por debajo
de la cual no es posible el crecimiento, una tempera optima a la que se produce el crecimiento más rápido y una
temperatura máxima por encima de la cual no es posible el crecimiento. La temperatura optima esta siempre mas
cerca de la máxima que de la mínima. Estas tres temperaturas que se llaman temperaturas cardinales o
fundamentales, generalmente son características de cada tipo de organismos, pero no son complementamente fijas,
pues pueden ser ligeramente modificados por otros factores del ambiente, en particular por la composición del
medio.

La temperatura máxima de crecimiento de un organismo determinado refleja probablemente la inactivación de

una o más proteínas en la célula.

Las temperaturas cardinales o fundamentales de diferentes microorganismos difieren muchos entre sí; algunos
muestran temperaturas optimas tan bajas como 4ºC y otros tan altas como más de 100ºC, no hay ningun
microorganismos que tenga todo este intervalo de temperaturas que para el caso de unos organismos determinado
suele ser de unos 30ºC aunque algunos presentas margenes de temperatura más amplios que otros.

Clases de microorganismos según la temperatura

Cuatro grupos de microorganismos con relación a su temperatura optima: psicrofilos con temperatura optimas
bajas; mesofilos con temperaturas optimas moderadas; termofilos con altas temperaturas optimas; e
hipertermofilos con temperas optimas muy elevadas. Los mesofilos se encuentran en animales de sangre caliente y
en medios acuáticos y terrestres de latitudes templadas y tropicales. Los psicrofilos y los termofilos se encuentran
en ambientes muy fríos o calientes respectivamente. Los hipertermofilos son típicos de ambientes concretos
extremadamente calientes como fuentes termales, geisers y fuentes hidrotermales submarinas.

Crecimiento microbiano a bajas temperaturas

Los hábitat normales de muchos microorganismos puede ser extremadamente calientes o extremadamente fríos.
Tales microorganismos se conocen como extremofilos y han evolucionado hasta crecer de modo optimo en esas
condiciones.

Ambientes fríos

Estos ambientes fríos son raramente estériles y se encuentran microorganismos vivios creciendo a cualquier
temperatura baja en la que aun exista agua liquida. Incluso en muchos materiales congelados existen normalmente
pequeñas zonas microscopias con agua liquida donde los microorganismos pueden metabolizar y crecer.

Microorganismos psicrofilos y psicotolerantes

Un psicrofilo puede definirse como un organismo que tiene una temperatura optima de crecimiento de 15ºC o
inferior, una temperatura máxima 20ºC y una temperatura mínima de 0ºC pero tiene temperaturas optimas de 20
– 40ºC se llaman psicrotolerantes.

Los psicrofilos se encuentran en ambientes permanentemente fríos como regiones polares y sus sedimentos
marinos y mueren rápidamente si se exponen a temperatura ambiente normal.

Los microorganismos psicrotolerantes tienen una distribución mucho más amplia que los psicrofilos y se pueden
aislar de suelos y aguas en climas templados así como de carnes, leche y productos derivados, sidra y vegetales y
fruta almacena bajo refrigeración (4ºC). Los psicrotolerantes crecen mejor a temperaturas 20 – 40ºC.

Congelación

A pesar de la capacidad de algunos organismos para crecer a bajas temperaturas, existe un limite por debajo del
cual es imposible la reproducción. El agua pura se congela a 0ºC y el agua de mar a –25ºC, pero la congelación no es
un proceso homogéneo e incluso a temperaturas mas bajas existen depósitos microscópicos de agua no congelada.
Aunque la congelación evite el crecimiento microbiano no causa necesariamente la muerte celular, el medio de
suspensión de las células afecta su sensibilidad al frió.

Crecimiento microbiano a altas temperaturas

La vida microbiana crece bien en ambientes con elevada temperatura incluso en el agua hirviendo. Por encima
de 65ºC solo viven las formas procariotas de vida pero en esas condiciones existe una enorme diversidad de
microorganismos pertenecientes a Bacteris y Archea.

Ambientes con temperaturas altas

Los microorganismos cuya temperatura optima esta por encima de 45ºC se llaman termofilos y aquellos que esta
por encima de 80ºC son los hipertermolfilos.

Muchas fuentes termales tienen temperaturas próximas a la ebullición y las fuentes hidrotermales
submarinas pueden alcanzar los 150 – 500ºC. Las fuentes hidrotermales del fondo de los océanos tienen
temperaturas de 350ºC o superiores. Aunque en algunas fuentes termales es variable en otras es muy constante
con variaciones de 1 – 2ºC en varios años, además estas fuentes tienen composiciones químicas y valores de pH
diversos y en general contienen niveles suficientes de nutrientes que permitan el crecimiento de poblaciones de
quimioorganotrofos y quimiolitrofos.

Hipetermofilos en fuentes termales

Los estudios ecológicos de estos organismos que viven en fuentes termales en ebullición demuestran que las
velocidades de crecimiento son notablemente rápidas y con tiempo de generación inferiores a 1 hora.. algunos de
estos hipertermofilostos presentas temperaturas optimas superiores a100ºC.

Termofilos
Muchos termofilos tempera optima de 45 – 80ºC se presentan en fuentes termales y otros ambientes cálidos.

En fuentes termales a medida que el agua hirviendo emerge se desborda de las orillas y se aleja de la fuente se
enfría gradualmente de temperatura, a lo largo de este gradiente crecen varios microorganismos con diferentes
especies que crecen en los diferentes rangos de temperatura. Estudiando la distribución de las especies en tales
gradientes y examinando las fuentes termales y otros ambientes termales a diferentes temperaturas en distintas
partes del mundo es posible determinar los limites superiores de temperatura para cada clase de organismo. A
partir de esta información se ha llegado a la conclusión de que:

1. en general los organismos procariontes son capaces de crecer a temperaturas mas elevadas que los
eucariontes.
2. los mas termofilos de todos los procariontes son algunas especies de Archea.
3. los organismos no fototrópicos son capaces de crecer a temperaturas mas elevadas que las formas
fototrópicas.

Crecimiento microbiano a pH alto y a pH bajo

La acidez o alcalinidad de una solucion se expresa por su pp. en una escala en que la neutralidad es pH. 7. los
valores de pH por debajo de 7 son ácidos y os mayores de 7 son alcalinos.

pH. y crecimiento microbiano

Cada organismo tiene un rango de pH dentro del cual es posible el crecimiento y normalmente posee un pH optimo
bien definido.. la mayoría crece en un margen de pH de 2- 3 unidades. La mayoria de los amientes naturales tien un
valor de pH entre 5 y 9 y los microorganismos con pH obtimo de esten orden son los mas comunes.

Los organismos que crecen mejor a bajo pH constituyen un tipo de extremofilos llamdos acilofilos. El grupo de los
hongos son mas acidofilos que las bacterias, muchos hongos crcen en forma obtima a pH 5 o inferior e incluso
algunos crecen bien a pH 2.

Algunas bacterias son acidofilas. De hecho algunas bacterias son acidofilas estrictas incapaces de crecer a pH
neutro. Entre las bacterias acidofilas estrictas se encuentran varias especies de Thiobacillus algunos generos de
Archea como Sulfolobus, Thermoplasma y Ferroplasma.

El factor cítrico mas importante para el carácter acidofilo es la estabilidad de la membrana citoplasmática. Cuando
el pH es neutro la membrana citoplasmática de las bacterias muy acidofilas se disuelve y las celulas se lisan lo que
sugiere que para que la membrana citopliasmatica sea estable se requiern altas concentraciones de iones
hidrógeno.

Unos cuantos extremofilos presentan un pH obtimo de crecimiento muy elevado a veces tan alto como pH 10 se
denominan alcalofilos. Los microorganismos alcalofilos se encuentran por lo general en hábitat muy básicos como
lagos sodicos y suelos muy carbonatados.

Algunos microorganismos alcaloficos extremos son tambien halofilos y la mayor parte de estos pertenen al
dominio Archea.

Algunos alcaloficos tienen aplicación industrial porque producen enzimas hidroliticas como proteasas y lipasas que
funcionan bien a pH alcalino y se usan como aditivos de los detergentes domesticos.
pH intracelular

El pH intracelular debe permanecer proximo a la neutralidad para evitar la destrucción de las macromoleculas
cellulares que son sensibles al acido o al alcali. En los acidofilicos o alcolofilicos extremos el pH intracelular puede
variar algunas unidades respecto a la neutralidad, pero en la mayoria de los microorganismos cuyo pH optimo para
el crecimiento esta entre 6 y 8 (neutrofilios), el citoplasma o permanece neutro o muy próximo a la neutralidad.

En el acidofilo el pH intracelular es 4.6 y en los alcalofilos extremos se ha logrado medir un pH intracelular de hasta
9.5.

Tampones

Se añaden con frecuencia a los medios de cultivo microbianos sustancias amortiguadoras denominas tampones a
fin de mantener el pH relativamente constante, para valores de pH próximos a la neutralidad (pH 6- 7.5).

Efectos osmóticos sobre el crecimiento microbiano

La disponibilidad del agua se expresa en teminos fisicos como la actividad del agua.

La actividad del agua abreviadamente aw es el cociente entre la presion del vapor de aire en equilibrio con una
sustancia o solucion y la presion de vapor de agua pura a la misma temperatura. Los valores de aw varian entre 0y
1. la actividad de agua de terrenos agrícolas oscila generalmente entre 0.90 y 1.

El agua difunde desde una region con alta concentración de agua hasta una region con menor concentración de
agua por el proceso denomina osmosis. En la mayoria de los dos casos el citoplasma de una celula tiene euna
concentración de soljutos mayor que el medio por lo que el agua tiende a entrar dentro de la celula diciéndose
entonces que existe un balence de positivo. Cuando una celula esta en un medio de baja actividad de agua, existe
una tendencia de agua a salir de la celula.

En la naturaleza los efectos osmoticos tiene interes principalmente en habitat con altas concentraciones de sales. El
agua de mar contiene un 3% de NaCl ademas de pequeñas cantidades de otros minerales y elementos. Los
microorganismos marinos generalmente tienen una dependencia especifica del ion sodio ademas de tener un
crecimiento optimo al valor de actividad de agua propio del agua de mar, tales microorganismos se llaman
halofilos. El crecimiento de los halofilos requiere almenos de algo de NaCl, pero el optimo varia con el organismo;
asi se usan los terminos halofilos discretos y halofilos moderados para describir a los halofilos con requerimientos
bajos (1.6%) y moderados (6- 15%) de NaCl respectivamente.

Los organismos halotolerantes pueden soportar alguna reducción en el valor aw del medio pero generalmente
crecen mejor en ausencia de solutos añadidos.

Los organismos capaces de crecer en ambientes muy salinos se llaman halofilicos extremos y según las especies
requieren 15 – 30% de NaCl para su crecimiento optimo.

Los organismos capaces de crecer en ambientes con alta concentración de azucares se denominas osmofilos y
aquellos capaces de crecer en ambientes muy secos se llaman xerófilos.

Clase de microorganismos en relación al oxigeno

Los microorganismos son muy variados en cuanto a la necesidad y tolerancia del oxigeno, se puede dividir en
varios grupos dependiendo del efecto del oxigeno.

Los aerobios son especies capaces de crecer a tensiones de oxigeno normales (el 21% del aire es O 2) y muchos
incluso pueden tolerar concentraciones mas elevadas de oxigeno.

Los microaerofilos por el contrario son aerobios que pueden usar el O2 solo cuando esta presente a niveles mas
bajos que en el aire, normalmente a causa de su limitada capacidad para respirar o porque contiene alguna
molécula sensible al oxigeno.

Muchos aerobios son facultativos lo que significa que en condiciones nutritivas y de cultivo aporopiadas pueden
crecer tanto en condicines aeróbicas como anaeróbicas.

Algunos microorganismos no pueden respirar O2; tales organismos se llaman anaerobios.

Existen dos clases de anaerobios:

Las anaerobios aerotolerantes, que toleran el oxigeno y crecen en su presencia aunque no pueden usarlo.

Los anaerobios estrictos; que son inhibidos o incluso mueren en presencia del oxigeno. Puede deberse que son
incapaces de eliminar algunos productos tóxicos que se originan en el metabolismo del oxigeno.

La anaerobiosis estricta ocurre en tres clases de microorganismos: una amplia variedad de procariotas, unos
cuantos hongos y unos cuantos protozoos.