NOMBRE: ANA SOFIA ROPERO VERJEL

CODIGO: 1611863
MATERIA: MICROBIOLOGIA GENERAL
FECHA: 10/05/23

METABOLISMO MICROBIANO
En cualquier sistema biológico el crecimiento se define como el aumento ordenado
de todos los constituyentes que conforman el organismo. No implica
necesariamente aumento de masa, porque puede deberse simplemente a la
síntesis de inclusiones de reserva, puede deberse también a que los biopolímeros
esenciales de la célula se estén sintetizando.

En un medio definido una población bacteriana experimenta un crecimiento

equilibrado en el cual la duplicación de biomasa implica la duplicación de todos
componentes, por lo tanto podemos medir la velocidad de crecimiento como la
velocidad de síntesis de cualquier componente esencial. De aquí se deduce un
parámetro muy importante que es el llamado tiempo de generación (g) que es el
tiempo que una población microbiana tarda en duplicarse o que una célula tarda
en dividirse. En general, el crecimiento en microbiología lo vamos a considerar
como un crecimiento poblacional, es decir, como el incremento en el número de
células que componen la población. Ese incremento implica división por fisión
binaria.

Curva de crecimiento microbiano

Si partimos de un cultivo microbiano en un medio nutritivo cerrado (la composición
de nutrientes es fija y no hay renovación de nutrientes ni tampoco cambio en las
condiciones ambientales de cultivo) obtendremos una cinética de crecimiento en la
que distinguimos 4 fases:
1. Fase lag o fase de latencia. Es una fase de adaptación de los
microorganismos al medio. Aunque no hay crecimiento neto (no hay
aumento de células), esta fase es metabólicamente muy activa. Las células
reconocen los nutrientes disponibles y  comienzan a transcribir los mRNA
necesarios para utilizarlos. Al mismo tiempo las células bloquean la
expresión de aquellas enzimas que no necesitan. La duración varía según
el microorganismo y según el medio. Inmediatamente después el cultivo
entra en una fase exponencial.
2. Fase exponencial. El cultivo empieza a dividirse a su máxima capacidad
genética. Las células se duplican ‘’todo lo que pueden’’. Esta fase también
se llama de crecimiento equilibrado, donde la división celular se
correlaciona con la duplicación de todos los componentes celulares. La
pendiente de esta fase exponencial viene definida por µ. No es un
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parámetro fijo para cada microorganismo: depende del medio y las

condiciones de cultivo. Por lo tanto, la pendiente será distinta. Llega un
momento en el que el crecimiento exponencial se agota y el cultivo entra en
una fase estacionaria.
3. Fase estacionaria. En esta fase el crecimiento es desequilibrado: hay unas
células que se están dividiendo, otras que se están muriendo, y los
componentes celulares se sintetizan a distinta velocidad. El incremento del
número de células con respecto al tiempo es cero (dN/dt=0). Las células
estacionarias son en su estructura y composición química distintas a las
exponenciales: las células estacionarias son más pequeñas, han perdido
refringencia y son mucho más resistentes a las agresiones ambientales del
medio (calor, oxidantes, antibióticos,…). Es más interesante que la
exponencial porque la mayor parte de los productos y sustancias de interés
clínico y comercial son los metabolitos secundarios que se sintetizan en
esta fase.  Los cultivos que van a endosporular, la diferenciación a
endospora ocurre siempre al final de esta fase. Entra aquí por dos razones:
 Porque se agota algún nutriente esencial, que de alguna manera es
el limitante del crecimiento.
 Porque empiezan a liberarse al medio productos de desecho (tóxicos
a veces).
4. Muerte celular. El agotamiento de nutrientes es máximo y la acumulación
de productos de desecho se hace demasiado tóxica: la mayor parte del
cultivo comienza a morirse. Es también una fase exponencial de pendiente
negativa.
Fases del crecimiento microbiano
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Métodos para valorar el crecimiento microbiano

Vamos a medir el crecimiento poblacional a partir del crecimiento celular. Vamos a
seguir dos parámetros:
 Número de células. Distinguimos entre el recuento de células
totales, donde no se diferencia entre células vivas y células muertas, y el
recuento de células viables, donde solo se cuentan las células vivas.
Definimos que una célula está muerta cuando pierde la capacidad de
dividirse. Definimos una célula viable aquella que aún puede dividirse. Para
ello medimos el recuento total de células con un hemocitómetro que son
unos portas especiales que llevan en el centro una cuadrícula graduada. Es
un método directo e inmediato y rápido. Inconvenientes: no distinguimos si
las células están vivas o muertas, hablamos de células totales. También se
puede usar una cámara de recuento o con un contador electrónico (o de
Coulter).
El contador de Coulter es electrónico y cuando una célula pasa por el
contador la detecta y emite una señal eléctrica y así las va contado.
Tampoco distingue células vivas de células muertas. Para hacer recuento
de viables se usa el recuento en placa por método de extensión en placa,
vertido en placa o recuento en filtros de membrana (todos estos métodos
son sólo de células vivas). Se cuentan unidades formadoras de colonias por
ml. El inconveniente es que no es un método inmediato: hay que incubar y
generalmente esperar 24h para poder hacer la observación. El número de
unidades formadoras por placas debe de estar entre 30-300. El recuento en
filtros se aplica a grandes volúmenes. Se pasa el volumen que se va a filtrar
y se recoge el medio estéril porque todas las células bacterianas se quedan
en el filtro. Se coge el filtro y se lleva a una placa de petri, se incuba y al día
siguiente empiezan a crecer colonias.

Conteo de número de células

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 Otro tipo de medir es a través de la masa celular, por turbidimetría

(fotómetro, espectofotómetro, nefelómetro). Se mide la turbidez: a mayor
turbidez=mayor absorbancia=mayor número de microorganismos. Es un
método inmediato, podemos hacer una relación entre la absorbancia de las
células y la masa.  Otro método es por peso seco. Tenemos un volumen
celular que se filtra y, en lugar de incubarlo, se va evaporando el agua y se
pesa hasta que el peso es constante (agua evaporada) y sólo queda el
peso celular.

Expresión matemática del crecimiento microbiano

En un medio determinado, una población inicial de células (N 0) que se divide en un

tiempo t alcanzará un tamaño N. N0=1.  
En la generación 1 el tamaño de la población será N=2 o N=1x2 1
En la generación 2 el tamaño de la población será N=4 o N=1x2 2
En la generación 3 el tamaño de la población será N=8 o N=1x2 3
En la generación ‘n’ el tamaño de la población será N=2 n
En una generación N=N0x2n siendo n el número de generaciones, n=
N= N0·2n
N= N0 ·2t/g
Log N= log N0 + log2t/g
Log N= log N0 + t/g·log 2
t/g x log 2= log N – log N0
g  (Horas o min)                            *g siempre va en unidad de tiempo.

En microbiología usamos el concepto de crecimiento poblacional, no crecimiento

individual. Nos guiamos por el crecimiento de la población. El crecimiento
microbiano es una función exponencial. El incremento del número de células que
forman la población es siempre proporcional al número de células de partida. Esta
es la expresión:
dN/dt= µ*N
µ. Constante especifica de crecimiento. Nos indica la constante de crecimiento de
un cultivo exponencial.

Cultivo continuo

En el cultivo continuo hay un parámetro clave que se denomina velocidad de

dilución que es directamente proporcional al flujo de entrada en un volumen de
medio de un determinado tiempo e inversamente proporcional al volumen de la
vasija. También se expresa como horas a la menos 1.
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Hay dos modalidades:

El turbidostato: Se fija para el cultivo una determinada absorbancia o turbidez

celular. El sistema esta acoplado a un espectrofotómetro, el cultivo deber estar
autocontrolado. Las células se dividen con mucha rapidez y aumenta el valor fiado
por el espectrofotómetro, la sonda avisa y cierra la entrada de nutrientes, entonces
entran menos nutrientes y el cultivo empieza a dividirse más lentamente. El tiempo
de generación aumenta y la densidad óptica baja hasta igualarse al valor
requerido. Apenas se usa. El rendimiento en producto obtenido en función del
sustrato suministrado es bajo ya que estamos perdiendo una parte de las células y
del medio sin transformar. Para que el rendimiento aumente se ha inventado el
quimiostato.
El quimiostato. La velocidad de crecimiento del cultivo depende de un nutriente
esencial que generalmente no es la fuente de carbono. Este nutriente suele ser y
es en muchos casos un aminoácido, que se añade a una concentración baja pero
suficiente para permitir el crecimiento, de tal manera que la velocidad de
crecimiento es proporcional a la concentración de ese nutriente y se obtiene un
rendimiento optimo. El rendimiento en euros o dólares por biomasa celular es
óptimo porque siempre hay un nutriente que se añade a una concentración
limitante y es esencial. Se asegura todo lo que invierte le sacan la máxima
rentabilidad.

Cultivo sincrónico
Aquel en el cual todas las células se están dividiendo a la vez y se encuentran en
la misma fase del ciclo celular. Cuando las células se inoculan en un medio nuevo,
al principio las divisiones son sincrónicas; esta sincronía se tiende a perder con el
tiempo. Cuando llegamos a la fase estacionaria la asincronía es total.
Percepción del quórum o quórum sensing
Normalmente, los estudios sobre crecimiento microbiano han asumido que las
células ‘’van por libre’’, es decir, que en una población en crecimiento se asume
que las células actúan independientemente unas de otras (no se comunican entre
ellas).
No obstante, en el estudio llevado a cabo por J. W. Hastings y colaboradores en
1966, descubrieron esta característica en Vibrio fischeri. Es un fenómeno de
regulación, o control, de multicelularidad. Las células se comunican y coordinan
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sus actividades para actuar como una unidad, lo que implica una ventaja
adaptativa.
Intervienen una serie de moléculas sensoras, denominas moléculas
autoinductoras o de quórum, que solamente alcanzan un nivel crítico (quorum)
cuando hay un número suficiente de células. En ese momento se activa la
expresión génica.
Se cree que hay una cantidad de actividades fisiológicas microbianas que
dependen de la percepción de quórum (producción de enzimas extracelulares,
producción de antibióticos, la esporulación, la virulencia,...).
En GRAM negativas hay producción del auto-inductor acilo homoserina lactona
(AHL) que provoca:
 Emisión de luminiscencia (Vibrio fischeri)
 Secreción de sustancias viscosas (biofilms, Pseudomonas aeruginosa)
 Inicio de formación de nódulos radicales (Rhizobium)
 Transferencia de material genético (Agrobacterium tumefaciens)
 Producción de factores de virulencia (Erwinia carotovora)
Mientras, en GRAM positivas se producen oligopéptidos que generan:
 Conjugación (Enterococcus faecalis)
 Inducción del estado de competencia, recepción de ADN (Streptococcus
pneumoniae)
 Estimulación de la esporulación (Bacilllus subtilis)
 Producción de exotoxinas y otros factores de virulencia (Staphylococcus
aureus)
 Estimulación del desarrollo micelial (Streptomyces griseus). La γ-
butirolactona sirve de señal intercelular.
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