ACTIVIDAD DE LABORATORIO: CINÉTICA ENZIMÁTICA

LABORATORIO DE BIOQUÍMICA

NOMBRE: María José Álvarez

NOMBRE: Jennifer Areiza

NOMBRE: Esmeralda Aristizábal López

Para realizar esa actividad tenga en cuenta los datos presentados en el documento trabajado en
clase

1. Datos

Registre en una tabla los datos suministrados en el documento trabajado en clase (0.1 punto)

Concentración de enzima (µM)  0,1 0,2 0,5

Concentración de sustrato (µM) ↓ Velocidad (µmol/min)
0,05 0,275 0,546 1,373
0,14 0,482 1,001 2,502
0,23 0,580 1,185 2,891
0,32 0,642 1,385 3,463
0,50 0,755 1,494 3,656
0,59 0,766 1,497 3,810

2. Cálculos y resultados

2.1. Complete las siguientes tablas para cada una de las concentraciones de enzima (0.9 puntos)

Concentración de enzima: 0,1 µM

Concentración de Velocidad
1/V 1/[S] V/[S] [S]/V
sustrato (µM), [S] (µmol/min), V
0,05 0,275 3,63636364 20 5,5 0,18181818
0,14 0,482 2,0746888 7,14285714 3,44285714 0,29045643
0,23 0,580 1,72413793 4,34782609 2,52173913 0,39655172
0,32 0,642 1,5576324 3,125 2,00625 0,49844237
0,50 0,755 1,32450331 2 1,51 0,66225166
0,59 0,766 1,30548303 1,69491525 1,29830508 0,77023499
 Concentración de enzima: 0,2 µM

Concentración de Velocidad
1/V 1/[S] V/[S] [S]/V
sustrato (µM), [S] (µmol/min), V

Concentración de enzima: 0,5 µM

Concentración de Velocidad
1/V 1/[S] V/[S] [S]/V
sustrato (µM), [S] (µmol/min), V
0,05 1,373 20 0,72833212 27,46 0,03641661
0,14 2,502 7,14285714 0,39968026 17,8714286 0,05595524
0,23 2,891 4,34782609 0,34590107 12,5695652 0,07955725
0,32 3,463 3,125 0,28876697 10,821875 0,09240543
0,50 3,656 2 0,27352298 7,312 0,13676149
0,59 3,810 1,69491525 0,26246719 6,45762712 0,15485564

2.2. Para cada de las concentraciones de enzima, realice las gráficas de:

A. Michaelis-Menten (0.6 puntos)

Concentración de enzima: 0,1 µM Concentración de enzima: 0,2 µM Concentración de enzima: 0,5 µM

B. Lineweaver-Burk (0.6 puntos)

Concentración de enzima: 0,1 µM Concentración de enzima: 0,2 µM Concentración de enzima: 0,5 µM
}

C. Eadie-Hofstee (0.6 puntos)

Concentración de enzima: 0,1 µM Concentración de enzima: 0,2 Concentración de enzima: 0,5 µM
µM

D. Hanes-Woolf (0.6 puntos)

Concentración de enzima: 0,1 µM Concentració Concentración de enzima: 0,5 µM
n de enzima:
0,2 µM
2.3. A partir de cada uno de los gráficos anteriores, calcule los parámetros cinéticos de la reacción
enzimática, es decir, Vmax y KM

Cálculo: (0.6 puntos)

Deje indicado el cálculo realizado para la determinación de V max y KM para cada uno de los
modelos.
 Michaelis-Menten
Enzima 1:
blob:https://web.whatsapp.com/d0c9fe5e-b845-4a67-b4e2-f1a586906b87

Enzima 2:
Enzima 3:

 Lineweaver-Burk
Enzima 1:

Enzima 2:
Enzima 3:

 Eadie-Hofstee
Enzima 1:

Enzima 2:
Enzima 3:

 Hanes-Woolf
 Enzima 1:

Enzima 2:
Enzima 3:

Tabule los resultados obtenidos (0.2 puntos):

Modelo Vmax KM
Michaelis-Menten Enzima 1: 0,766 Enzima 1: 0,9
Enzima 2: Enzima 2:
Enzima 3: 3,810 Enzima 3: 0.9
 Lineweaver-Burk Enzima 1: 0,88 Enzima 1: 0,111
Enzima 2: Enzima 2:
Enzima 3: 4.53 Enzima 3:0.1143
Eadie-Hofstee Enzima 1: 0,1171 Enzima 1: 0,9012
Enzima 2: Enzima 2:
Enzima 3: 4.5355 Enzima 3: 0,1154
Hanes-Woolf Enzima 1: 0,94 Enzima 1: 0,132
Enzima 2: Enzima 2:
Enzima 3: 4.5 Enzima 3: 0.1156

3. Análisis de resultados

3.1. ¿Qué se puede concluir sobre el valor de V max obtenidos por los cuatro modelos? (0.2 puntos)

3.2. ¿Cómo se comporta el parámetro V max al variar la concentración de enzima? Explique (0.2
puntos)

3.3. ¿Qué se puede concluir sobre el valor de K M obtenidos por los cuatro modelos? (0.2 puntos)
3.2. ¿Cómo se comporta el parámetro K M al variar la concentración de enzima? Explique (0.2
puntos)