Introducción a la Espectrofotometría.

Control instrumental fotométrico

Caicedo, K.1; Lara, I. 2.; Llivisaca, C.3.; Montenegro, V.4.; Pinta, C.5.; Remache, A.6.

1: Universidad Central del Ecuador, Facultad de Ciencias Químicas, Laboratorio de Química Analítica
Instrumental

Resumen

En la presente práctica se realizó una introducción a la espectrofotometría, mediante la examinación y

operación de un espectrofotómetro UV-VIS, determinando los procedimientos para evaluar un
espectrofotómetro, así como las posibles causas de una medición errónea; para lo cual se analizó una
muestra de dicromato de potasio con rojo Congo “medio ácido” y con azul de bromo timol “medio
básico”. Primero se calibró el espectrofotómetro, colocando una muestra de agua en una cubeta y
realizando la lectura de la absorbancia, y luego se realizó lecturas de la absorbancia de la muestra, tanto
para medio ácido como para básico, variando la longitud de onda únicamente. Una vez realizada la
práctica se concluye que se logró reconocer y maniobrar correctamente el espectrofotómetro,
considerando los factores que impidieron la obtención de resultados más precisos. Los datos obtenidos
una vez realizada la gráfica nos muestra que el punto donde se cortan la solución acida y alcalina es a una
longitud de onda de 425 nm, denominada punto isosbéstico.

Palabras clave: espectrofotometría, absorbancia, longitud de onda, punto isosbéstico.

Introduction to Spectrophotometry. Instrumental photometric control

Abstract

In the present practice an introduction to the spectrophotometry was made, through the examination and
operation of a UV-VIS spectrophotometer, determining the procedures for evaluating a
spectrophotometer, as well as the possible causes of an erroneous measurement; for which a sample of
potassium dichromate was analyzed with Congo red "acid medium" and with bromo thymol blue "basic
medium". First the spectrophotometer was calibrated, placing a sample of water in a cuvette and carrying
out the reading of the absorbance, and then absorbance readings of the sample were made, both for acidic
and basic medium, varying the wavelength only. Once the practice was completed, it was concluded that
the spectrophotometer could be recognized and maneuvered correctly, considering the factors that
prevented obtaining more accurate results. The data obtained after the graph shows that the point where
the acid and alkaline solution is cut is at a wavelength of 425 nm, called the isosbestic point.

Key words: spectrophotometry, absorbance, wavelength, isosbestic point.

1. Introducción rayo de luz sea atenuada desde Po hasta P,

La espectrofotometría, se basa en la
relación que existe entre la absorción de luz
por parte de un compuesto y su
concentración. Cuando se hace incidir luz
monocromática sobre un medio
homogéneo, una parte de la luz incidente es
absorbida por el medio y otra transmitida,
como consecuencia de la intensidad del
siendo Po la intensidad de la luz incidente y
P la intensidad del rayo de luz trasmitido.
Dependiendo del compuesto y el tipo de
absorción a medir la muestra puede estar en
fase líquida, sólida o gaseosa. En las
regiones visibles y ultravioleta del espectro
electromagnético la muestra es
generalmente disuelta para formar una
 solución.[ 2 ] Un espectrofotómetro opera
comparando la cantidad de luz transmitida a
través de la muestra con la cantidad de luz
del haz de referencia. Finalmente se obtiene
un gráfico de la absorbancia en función de
la longitud de onda, esta absorbancia es
proporcional a la absorción molar de la
muestra, que es particularmente útil para
determinar las concentraciones en los
medicamentos. Por lo que es de gran
importancia en la industria farmacéutica.[ 1 ]
Sección Experimental
1.1. Reactivos y materiales
En la presente práctica se utilizó un
espectrofotómetro UV – VIS, cubetas. Los
reactivos empleados comprenden: sulfato
de cobre, dicromato de potasio, agua
destilada, azul de bromotimol, rojo congo.
1.2. Proceso
Inicialmente se examinó el
espectrofotómetro, luego se colocó en una
cubeta limpia agua destilada y se registró la
lectura de la absorbancia. En la
determinación del punto isosbéstico se
sustituyó por dicromato de potasio en
medio ácido y básico en un rango de 320 a
500 nm. De la misma manera se realizó las
lecturas de la absorbancia empleando rojo
congo y dicromato de potasio para el
control fotométrico.
2. Resultados y discusión
Entre los factores que dificultaron la
adecuada realización de la práctica se puede
mencionar, la antigüedad de las cubetas y
del mismo instrumento, las distintas
lecturas realizadas en el espectrofotómetro
presenta-ban una variación con respecto al
valor real, por tanto, este aspecto se puede
eliminar utilizando cubetas que se
encuentren sin rayones y en perfecto estado
y en lo posible utilizándolas cuando son
nuevas.
La preparación de los estándares previo la
medición en el espectrofotómetro fue de
crucial importancia, puesto que de ello
dependía en alto grado el éxito
experimental, por lo tanto, se deben seguir
las especificaciones dadas en la guía de
laboratorio para facilitar el trabajo y
minimizar errores de tipo sistemático.[ 3 ]
En la gráfica N° 1 se puede observar que a
425 nm ambas soluciones, tanto la solución
básica como la solución ácida tienen la
misma absorbtividad, es decir, que tienen la
misma capacidad para absorber radiación
dado que si se prepara una serie de
soluciones, en las que la sustancia se
encuentra distribuida variamente entre sus
dos formas, permaneciendo constante su
concentración total, los gráficos de
absorbancia y función de la longitud de
onda van a exhibir este punto común. .[ 4 ]
En la gráfica N°2 se da a conocer las
longitudes de onda a las que el dicromato
de potasio es capaz de absorber energía de
una forma considerable. Esto se debe a que,
si se hace incidir, sobre la solución de la
sustancia problema, un haz luminoso de
una longitud de onda a la que esta sustancia
casi no absorbe energía, los resultados de
absorbancia medidos por el
espectrofotómetro serán siempre muy
bajos. Por tanto, serán inútiles para el
cálculo de la concentración de la sustancia.
[ 5 ] Para descubrir la capacidad de
absorción de energía de una sustancia a
distintas longitudes de onda es preciso
hacer un barrido de longitudes de onda. Por
ello se eligió al dicromato de potasio de
concentración 1.00 x 10−4 M . donde
como se muestra en la gráfica de los
resultados obtenidos en el barrido de
longitudes de onda, se estableció la longitud
máxima para una absorbancia de 0.145 para
el dicromato de potasio que fue de 435nm.
También se puede realizar la medición a
una determinada longitud de onda como se
lo realizó con el sulfato de cobre de
concentración 1.99 x 10−4 M
obteniéndose una absorbancia de 0.00262 a
una longitud de onda de 650nm.
El ruido químico e instrumental afectaron
de manera adversa en el ajuste, por lo que
al realizar cada una de las determinaciones
 se presentaron valores no verdaderos de la
muestra; por lo tanto, para minimizar su Máxi
Desviac
Coeficie
acción desfavorable se debe hacer el ajuste Media ma nte
ión
Sustancia absorva Longi de
al 0% y 100% en una sola lectura, de ncia tud de
estánda
variació
manera que la armonía y secuencia de r
onda n
medida del espectrofotómetro no se vea
alterada.[ CITATION Car17 \l 12298 ]
Sulfato de 0,00262
cobre 0,00262 650nm ± 118,3%
1.99 x 10−4 M 0,0022
Gráfica 1. Control de la longitud de onda
Dicromato
de potasio 435nm 0,145±
0,145 122.9%
PUNTO ISOSBÉSTICO 1.00 x 10−4 M 0,051

Elaborado por Caicedo C. y otros

0.300
ABSORBANCIA

0.200 3. Conclusiones
Absorvancia Básica
0.100 Absorvancia ácida Se logró reconocer y maniobrar
correctamente el espectrofotómetro,
0.000
0 5 0 5 0 5 considerando los factores que
3 2 36 4 1 45 50 54
impidieron la obtención de resultados
LONGITUD DEElaborado
ONDA por Caicedo C. y otros. más precisos, los datos obtenidos una
Gráfica 2. Control de espectro de barrido vez realizada la gráfica nos muestra
que el punto donde se cortan la
solución acida y alcalina es a una
longitud de onda de 425 nm. El punto
ESPECTRO DE BARRIDO isosbestico es independiente de la
DICROMATO DE POTASIO concentración de la solución.

Se realizó un control de la capacidad

0.600 de absorción de energía máxima para el
Elaborado por Caicedo C.ESPECTRO
y otros. DE
ABSORBANCIA

0.400
Tabla 1. Resultado de punto isosbésticoBARRIDO dicromato de potasio a una
0.200 absorbancia de 0.145 es de 435 nm,
0.000 Control de longitud de onda mientras que el sulfato de cobre a una
300 350 400 450 500 550 600 absorbancia de 0.00262 presenta una
Sustancia utilizada: dicromato de potasio +
rojo LONGITUD
congo DE ONDA longitud de onda de 650nm.
Punto isosbéstico: 563 nm
Se determinó el coeficiente de
Control de la exactitud fotométrica
variación mediante el control de
Sustancia: Rojo congo exactitud fotométrica con sulfato de
Factor de corrección: 96.09% cobre y dicromato de potasio
registrando 118,3% y 122.9%, estos
Elaborado por Caicedo C. y otros valores nos muestran que no existe una
buena precisión en el equipo porque los
valores de coeficiente de variación
Tabla 2. Resultados estadísticos deben ser menores al 1%, estos
resultados pueden reflejar un bajo
rendimiento en el equipo.

Referencias
4. 5. A. Baeza, «Espectrofotometría UV/VIS y equilibrio químico ácido-base: Punto
Isosbéstico,» 04 abril 2015. [En línea]. Available:
http://microelectrochemalexbaeza.com/wp-
content/uploads/2015/04/PresentacionCLASE__Punto_Isosbesticos_2223.pdf.

6. 7. F. Rodríguez, «Barrido de longitudes de onda,» 05 octubre 2017. [En línea].

Available: https://www.franrzmn.com/barrido-de-longitudes-de-onda/. [Último
acceso: 05 junio 2018].

8. 9. C. Brunatti, «Introducción a la Espectroscopía de Absorción Molecular Ultravioleta,

Visible e Infrarrojo Cercano,» 17 marzo 2017. [En línea]. Available:
http://materias.fi.uba.ar/6305/download/Espectrofotometria.pdf. [Último acceso:
05 junio 2018].

10. 11. H. Walton, Análisis Químico e Instrumental Moderno, Barcelona: Reverté S.A,
1993.

12. 13. Wade, Métodos Espectrofomometricos, Madrid: Mc Graw Hill, 2014.