TINCIÓN DIFERENCIAL ACIDO RESISTENTE

1. CAPACIDAD
Identifica la presencia de endosporas bacterianas y diferencia la presencia de
endosporas bacterianas y formas vegetativas normales

2. FUNDAMENTO
La tinción ácido-resistente es una tinción diferencial que mide en células teñida la
resistencia a la decoloración mediante ácido. La propiedad de ácido resistencia en
ciertas micobacterias y actinomicetos esta correlacionada con su alto contenido
dorner. Teñir estas bacterias requiere un tratamiento de alta temperatura y la
utilización de colorantes fuertemente afines. El procedimiento consiste en teñir con
carbolfucsina caliente, decolorar con una solución de alcohol-ácido y reteñir con un
contrastante.

Las bacterias ácido resistentes se decoloran muy lentamente con la solución de

alcohol-ácido en comparación a otros microorganismos y retienen el color del
colorante inicial.

Este tipo de coloración es utilizada en el estudio y diagnóstico de enfermedades

causado por especies ácido- resistentes como los de la tuberculosis y la lepra, y
también para la diferenciación de estructuras resistentes como las endosporas
bacterianas.
Tinción de endosporas Las bacterias del genero Bacillus, Clostridium y
Desulfotomaculum producen una estructura denominada endospora. A diferencia de
la célula vegetativa, la endospora es una estructura resistente capaz de sobrevivir
por largos periodos en ambientes desfavorables, en condiciones extremas de alta
temperatura o bajo la acción de agentes químicos.
Existen variadas técnicas que se utilizan para la tinción de endosporas. Destacan entre
ellas las técnicas de Dorner y la de Schaeffer y Fulton. En la primera se emplea
carbolfucsina para teñir la espora y nigrosina como agente decolorante y de tinción
negativa; la espora se tiñe de rojo, la parte vegetativa incolora y toda la estructura
aparece sobre un fondo oscuro. La técnica de Schaeffer y Fulton emplea carbolfucsina
para teñir la espora, alcohol ácido como decolorante y verde malaquita como
colorante de contraste; la espora se tiñe de rojo y la parte vegetativa de verde.
Ambas técnicas emplean el fenol y alta temperatura como agentes coadyuvantes
para lograr la penetración de la fucsina en la estructura de la espora.
3. MATERIAL Y MÉTODO.

Cultivo de 48 horas Bacillus o Clostridium

Aceite de inmersión
Asa de Kolle
Laminas portaobjeto
Mechero de alcohol
Pinzas
Colorante base Verde malaquita
Colorante de contraste safranina
Solución decolorante : alcohol ácido
2 Procedimiento:
4. RESULTADOS Y DISCUSIÓN
5. CUESTIONARIO

a. ¿Cuál de los métodos utilizados le permitió observar mejor las endosporas

bacterianas?

¿A qué atribuye la diferencia?

b. ¿Qué efecto produciría el reemplazar el alcohol ácido por otro decolorante como el
alcohol cetona?

c. Revise otras técnicas de tinción de esporas y compárelas con las usadas en este
ejercicio. Determine ventajas y desventajas.

VIDEOS DE APOYO

https://www.youtube.com/watch?v=AVZPbzdF8fE

https://www.youtube.com/watch?v=UP4sGrGoW_8

EN INGLES

https://www.youtube.com/watch?v=JVn6ZRFtARs